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中国人遗传性高铁血红蛋白血症NADH—细胞色素b5还原酶基因L … 总被引:3,自引:1,他引:3
目的:鉴定导致中国人遗传性高铁血红蛋白血症(RCM)的NADH-细胞色素b5还原酶(b5R)基因突变类型,探讨RCM发病的分子基础。方法:逆转录-聚合酶链反应产物直接测序和cDNA克隆测定分析先证者的b5R编码基因,限制性酶切分析其基因组DNA。结果;发现一例RCM患者b5R基因第72密码子存在新的错义突变(CTC→CCC)。结论:该突变导致b5R蛋白第72位亮氨酸被脯氨酸替换(L72P)是该先证 相似文献
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目的:鉴定导致中国人遗传性高铁血红蛋白血症(RCM)的NADH-细胞色素b5还原酶(b5R)基因突变类型,探讨RCM发病的分子基础。方法:逆转录-聚合酶链反应产物直接测序和cDNA克隆测序分析先证者的b5R编码基因;限制性酶切分析其基因组DNA。结果:发现一例RCM患者b5R基因第72密码子存在新的错义突变(CTC→CCC)。结论:该突变导致b5R蛋白第72位亮氨酸被脯氨酸替换(L72P)是该先证者致病的分子基础;进一步证实Ⅰ型RCM患者的b5R基因突变多发生在近5′端部分。 相似文献
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一种新的NADH-细胞色素b5还原酶基因点突变 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 为了查明中国人遗传性高铁血红蛋白血症(RCM) 患者的NADH细胞色素b5 还原酶(b5R) 基因突变类型,探讨RCM 发生的分子机制。方法 从已报道的1 例RCMⅠ型患者的外周血白细胞中提取RNA,应用逆转录聚合酶链反应法(RTPCR) 扩增了b5RcDNA(921 bp),测定其b5RcDNA的全部编码序列。结果 b5RcDNA基因的第203 位密码子存在(TGC→TAC)Cys→Tyr 的错义突变。经基因组PCR限制性片段长度多态性(RFLP) 分析证实该突变并非PCR过程中的错配。结论 Cys203 →Tyr 是RCM 的一种新的基因突变类型 相似文献
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多基因单链构象多态性(MSSCP)是一种与多基因聚合酶链反应(PCR)联合应用,一次性快速测定多基因突变的方法[1]。本研究建立了测定APC基因突变聚集区域(MCR)和Kras第12/13密码子突变的MSSCP技术。一、材料与方法1样本收集:收集... 相似文献
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目的建立银染单链构象多态性(SSCP)技术筛查葡萄糖激酶基因点突变。方法收集10个NIDDM家系的112例基因组(DNA),经多聚合酶链反应(PCR)扩增葡萄糖激酶基因第2~10号外显子,SSCP电泳,硝酸银染色筛查点突变。结果发现3个家系,9例受试者第5,6号外显子出现异常DNA片段条带,经顺序分析证实为第5号内含子12位碱基C→G突变。结论非同位素SSCP技术是一种简便、经济、快速、准确和有效的筛查基因点突变的方法。 相似文献
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中国人遗传性高铁血红蛋白血症二个家系所见Gytb5R基因Arg^57… 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探明遗传性高铁血红蛋白血症NADH-细胞色素b5还原酶(Cytb5R)缺陷的分子机制。方法:用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,克隆3个遗传性高铁血红蛋白血症家系Cytb5R921bp的cDNA编码序列,并用限制性酶切PCR产物分析3个家系的基因组DNA。结果:2个家系存在Arg^57→Gln突变,3个家系均未发现Glu^222→gly突变。结论:Arg^222→Gln突变是中国人民 相似文献
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非同位素银染单链构象多态性技术筛查葡萄糖激酶基因突变 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 建立银染单链构象多态性(SSCP)技术筛查葡萄糖激酶基因点突变,方法 收集10个NIDDM家系的112例基因组(DNA),经多聚合酶链反应(PCR)扩增葡萄糖激酶基因第2~10号外显子,SSCP电泳,硝酸银染色筛查点突变,结果 发现3个家系,9例受试者第5,6号外显子出现异常DNA片段条带,经顺序分析证实为第5号内含子12位碱基C→G突变,结论 非同位素SSCP技术是一种简便,经济,快速,准 相似文献
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石宁 《国外医学:输血及血液学分册》1997,20(5):286-289
本文介绍了ABO血型系统的分子基础及在此基础上对ABO血型系统的基因分型的几种主要方法:PCR-DNA测序法、PCR-限制性内切酶酶切法、PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)、PCR-序列特异性引物(SSP)、PCR-单链构象多态性(SSCP)等。另外还介绍了基因分型技术在ABO亚型研究中的应用。 相似文献
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中国人遗传性高铁血红蛋白血症二个家系所见 Cytb5R 基因 Arg~(57)→Gln 突变 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:探明遗传性高铁血红蛋白血症NADH-细胞色素b5还原酶(Cytb5R)缺陷的分子机制。方法:用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,克隆3个遗传性高铁血红蛋白血症家系Cytb5R921bp的cDNA编码序列,并用限制性酶切PCR产物分析3个家系的基因组DNA。结果:2个家系存在Arg57→Gln突变,3个家系均未发现Glu222→Gly突变。结论:Arg57→Gln突变是中国人遗传性高铁血红蛋白血症的致病原因之一。 相似文献
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对142例β地中海贫血基因携带者进行缺失型α地中海贫血1基因分析 总被引:22,自引:2,他引:22
目的了解广东地区常见的β地中海贫血(地贫)与α地贫1复合存在的发生率。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术对142例经筛查确定为轻型β地贫的成人血样DNA进行α地贫1基因检测,阳性者又应用突变引物PCR特异扩增或用等位基因特异寡核苷酸探针反向点杂交(ASO/RDB)技术,确定其β地贫基因突变类型。结果142例中有13例轻型β地贫样本同时合并有α地贫1基因,占总数的915%,其β地贫基因的突变类型分别是:CD4142(-TCTT)突变5例,IVS2654(C→T)突变3例,CD17(A→T)突变2例,CD7172(+A)、CD43(G→T)和-28(A→G)突变各1例。结论β地贫复合α地贫1的双重杂合子在轻型β地贫个体中的发生率较高,是该地区在地贫的遗传咨询和产前诊断工作中值得重视的一个问题。 相似文献
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为解决常规DNA单链构象多态性分析(SSCP)使用放射性同位素及操作繁杂等问题,应用溴化乙锭(EB)染色的非同位素检测方法对16例卵巢癌及5例正常胎盘组织中p53基因的第5、6外显子(Exon5、6)的聚合酶链反应(PCR)扩增产物进行了分析,并结合DNA测序技术进行验证。正常组织未发现异常,16例卵巢癌SSCP分析显示3例异常,DNA测序证实其中2例为核苷酸突变,1例为核苷酸插入。采用EB染色的非同位素PCR-SSCP,方法简便、省时、准确,具有良好的实用性和广泛的使用价值。 相似文献
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应用限制性内切酶分析PCR产物快速诊断Hb CS基因突变 总被引:2,自引:0,他引:2
用聚合酶链反应(PCR)选择性扩增包括HbCS突变(TAA→CAA)位点在内的a2珠蛋白基因片段,利用与该点突变密切相关的天然Tru91位点和由PCR引物介导出和人工HinfI位点的变化可识别HbCS突变等位基因和野生型等位基因。PCR产物直接经Tru91或HinfI消化及电泳分析后即可对样品DNA中是否存在HbCS空变及其基因型作出诊断。此法简便、省时,可用于基因筛查和产前诊断。 相似文献
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目的:揭示胆囊结石病与遗传因素的关系。方法:运用多聚酶链反应技术(PCR)和基因限制性片段长度多态性分析法(RFLPs)对104例胆囊结石病人和68例健康人进行调查研究。结果:发现胆囊结石组B1等位基因,B1B1基因型,B2等位基因,B2B2基因型频率与对照组相应等位基因及基因型频率比较有差异(05230vs0346002880vs0117604770vs0654002420vs04264P<001)。B1B1基因型HDLch和HDL2ch水平降低,与B2B2基因型的HDLch、HDL2ch比较有差异(P<001)。结论:B1等位基因和B1B1基因型与低HDLch、HDL2ch水平相关。B1等位基因是部分中国汉族人胆囊结石病人的遗传易感因素。 相似文献
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目的:建立一个能表达人βIVS-Ⅱ-nt654C→T突变基因(β654基因)的HeLa细胞模型。方法:应用长片段多聚酶链反应(PCR)技术从一例β654突变基因纯合子的基因组DNA中扩增出β654基因全长片段,重组进pcDNA3.1真核表达载体质粒中。经DNA测序证明序列中确实含有β654突变后,将重组表达质粒用脂质体方法转化HeLa细胞,用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测β654突变基因在转染细胞中表达的mRNA。结果:该重组表达质粒能在HeLa细胞中转录β654突变基因,并剪接成正常和异常两种mRNA(对应于183bp和256bp两种RT-PCR产物),而对照组无扩增条带出现。结论:重组表达质粒转化的HeLa细胞能表达β654基因。 相似文献
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为解决常规DNA单链构象多态性分析(SSCP)使用放射性同位素及操作繁杂等问题,应用溴化乙锭(EB)染色的非同位素检测方法对16例卵巢癌及5例正常胎盘组织中p53基因的第5、6外显子(Exon5、6)的聚合酶链反应(PCR)扩增产物进行了分析,并结合DNA测序技术进行验证。正常组织未发现异常,16例卵巢癌SSCP分析显示3例异常,DNA测序证实其中2例为核苷酸突变,1例为核苷酸插入。采用EB染色的 相似文献
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短串联重复序列(STR)又称微卫星DNA,它是由2~7个碱基对作为核心单位串联重复形成的一类DNA序列。STR出现的数目和频率的变化构成了STR遗传多态性。LDL受体基因第18外显子3′末端非翻译区上一段短串联重复序列(dTA)n在人类存在多态性[1]。我们应用聚合酶链反应(PCR),结合聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)建立了检测相差2bpDNA碱基对的银染方法。一、材料和方法1-材料:PCR缓冲液,Taq酶,dNTP,引物,PCR仪,电泳仪,垂直电泳槽及电泳板。银染试剂为国产分析纯,试剂均用去离… 相似文献
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聚合酶链反应检测结核杆菌DNA实验研究的近况 总被引:3,自引:0,他引:3
聚合酶链反应检测结核杆菌DNA实验研究的近况上海医科大学华山医院传染病教研室(200040)陈一平,翁心华,徐肇h聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)又称体外基因扩增法,是八十年代中期Mullis[1]提出的一种新的... 相似文献