中国人遗传性高铁血红蛋白血症NADH—细胞色素b5还原酶基因L …

目的：鉴定导致中国人遗传性高铁血红蛋白血症（ＲＣＭ）的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）基因突变类型，探讨ＲＣＭ发病的分子基础。方法：逆转录－聚合酶链反应产物直接测序和ｃＤＮＡ克隆测定分析先证者的ｂ５Ｒ编码基因，限制性酶切分析其基因组ＤＮＡ。结果；发现一例ＲＣＭ患者ｂ５Ｒ基因第７２密码子存在新的错义突变（ＣＴＣ→ＣＣＣ）。结论：该突变导致ｂ５Ｒ蛋白第７２位亮氨酸被脯氨酸替换（Ｌ７２Ｐ）是该先证     

中国人遗传性高铁血红蛋白血症NADH-细胞色素b5还原酶基因L72P突变

目的：鉴定导致中国人遗传性高铁血红蛋白血症（ＲＣＭ）的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）基因突变类型，探讨ＲＣＭ发病的分子基础。方法：逆转录－聚合酶链反应产物直接测序和ｃＤＮＡ克隆测序分析先证者的ｂ５Ｒ编码基因；限制性酶切分析其基因组ＤＮＡ。结果：发现一例ＲＣＭ患者ｂ５Ｒ基因第７２密码子存在新的错义突变（ＣＴＣ→ＣＣＣ）。结论：该突变导致ｂ５Ｒ蛋白第７２位亮氨酸被脯氨酸替换（Ｌ７２Ｐ）是该先证者致病的分子基础；进一步证实Ⅰ型ＲＣＭ患者的ｂ５Ｒ基因突变多发生在近５′端部分。     

一种新的NADH-细胞色素b5还原酶基因点突变

目的　为了查明中国人遗传性高铁血红蛋白血症（ＲＣＭ） 患者的ＮＡＤＨ细胞色素ｂ５ 还原酶（ｂ５Ｒ） 基因突变类型,探讨ＲＣＭ 发生的分子机制。方法　从已报道的１ 例ＲＣＭⅠ型患者的外周血白细胞中提取ＲＮＡ,应用逆转录聚合酶链反应法（ＲＴＰＣＲ） 扩增了ｂ５ＲｃＤＮＡ（９２１ ｂｐ）,测定其ｂ５ＲｃＤＮＡ的全部编码序列。结果　ｂ５ＲｃＤＮＡ基因的第２０３ 位密码子存在（ＴＧＣ→ＴＡＣ）Ｃｙｓ→Ｔｙｒ 的错义突变。经基因组ＰＣＲ限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ） 分析证实该突变并非ＰＣＲ过程中的错配。结论　Ｃｙｓ２０３ →Ｔｙｒ 是ＲＣＭ 的一种新的基因突变类型     

多基因单链构象多态性技术在大肠癌多基因突变联合测定中的应用

多基因单链构象多态性（ＭＳＳＣＰ）是一种与多基因聚合酶链反应（ＰＣＲ）联合应用，一次性快速测定多基因突变的方法［１］。本研究建立了测定ＡＰＣ基因突变聚集区域（ＭＣＲ）和Ｋｒａｓ第１２／１３密码子突变的ＭＳＳＣＰ技术。一、材料与方法１样本收集：收集...     

非同位素银染单链构象多态性技术筛查葡萄糖激酶基因突变

目的建立银染单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术筛查葡萄糖激酶基因点突变。方法收集１０个ＮＩＤＤＭ家系的１１２例基因组（ＤＮＡ），经多聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增葡萄糖激酶基因第２～１０号外显子，ＳＳＣＰ电泳，硝酸银染色筛查点突变。结果发现３个家系，９例受试者第５，６号外显子出现异常ＤＮＡ片段条带，经顺序分析证实为第５号内含子１２位碱基Ｃ→Ｇ突变。结论非同位素ＳＳＣＰ技术是一种简便、经济、快速、准确和有效的筛查基因点突变的方法。     

中国人遗传性高铁血红蛋白血症二个家系所见Gytb5R基因Arg^57…

目的：探明遗传性高铁血红蛋白血症ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（Ｃｙｔｂ５Ｒ）缺陷的分子机制。方法：用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，克隆３个遗传性高铁血红蛋白血症家系Ｃｙｔｂ５Ｒ９２１ｂｐ的ｃＤＮＡ编码序列，并用限制性酶切ＰＣＲ产物分析３个家系的基因组ＤＮＡ。结果：２个家系存在Ａｒｇ＾５７→Ｇｌｎ突变，３个家系均未发现Ｇｌｕ＾２２２→ｇｌｙ突变。结论：Ａｒｇ＾２２２→Ｇｌｎ突变是中国人民     

非同位素银染单链构象多态性技术筛查葡萄糖激酶基因突变

目的 建立银染单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术筛查葡萄糖激酶基因点突变，方法 收集１０个ＮＩＤＤＭ家系的１１２例基因组（ＤＮＡ），经多聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增葡萄糖激酶基因第２～１０号外显子，ＳＳＣＰ电泳，硝酸银染色筛查点突变，结果 发现３个家系，９例受试者第５，６号外显子出现异常ＤＮＡ片段条带，经顺序分析证实为第５号内含子１２位碱基Ｃ→Ｇ突变，结论 非同位素ＳＳＣＰ技术是一种简便，经济，快速，准     

ABO血型系统的基因分型

本文介绍了ＡＢＯ血型系统的分子基础及在此基础上对ＡＢＯ血型系统的基因分型的几种主要方法：ＰＣＲ－ＤＮＡ测序法、ＰＣＲ－限制性内切酶酶切法、ＰＣＲ－限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、ＰＣＲ－序列特异性引物（ＳＳＰ）、ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）等。另外还介绍了基因分型技术在ＡＢＯ亚型研究中的应用。     

中国人遗传性高铁血红蛋白血症二个家系所见 Cytb5R 基因 Arg~(57)→Gln 突变

目的：探明遗传性高铁血红蛋白血症ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（Ｃｙｔｂ５Ｒ）缺陷的分子机制。方法：用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，克隆３个遗传性高铁血红蛋白血症家系Ｃｙｔｂ５Ｒ９２１ｂｐ的ｃＤＮＡ编码序列，并用限制性酶切ＰＣＲ产物分析３个家系的基因组ＤＮＡ。结果：２个家系存在Ａｒｇ５７→Ｇｌｎ突变，３个家系均未发现Ｇｌｕ２２２→Ｇｌｙ突变。结论：Ａｒｇ５７→Ｇｌｎ突变是中国人遗传性高铁血红蛋白血症的致病原因之一。     

对142例β地中海贫血基因携带者进行缺失型α地中海贫血1基因分析

目的了解广东地区常见的β地中海贫血（地贫）与α地贫１复合存在的发生率。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１４２例经筛查确定为轻型β地贫的成人血样ＤＮＡ进行α地贫１基因检测,阳性者又应用突变引物ＰＣＲ特异扩增或用等位基因特异寡核苷酸探针反向点杂交（ＡＳＯ／ＲＤＢ）技术,确定其β地贫基因突变类型。结果１４２例中有１３例轻型β地贫样本同时合并有α地贫１基因,占总数的９１５％,其β地贫基因的突变类型分别是：ＣＤ４１４２（－ＴＣＴＴ）突变５例,ＩＶＳ２６５４（Ｃ→Ｔ）突变３例,ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）突变２例,ＣＤ７１７２（＋Ａ）、ＣＤ４３（Ｇ→Ｔ）和－２８（Ａ→Ｇ）突变各１例。结论β地贫复合α地贫１的双重杂合子在轻型β地贫个体中的发生率较高,是该地区在地贫的遗传咨询和产前诊断工作中值得重视的一个问题。     

非同位素方法检测卵巢癌组织p53基因的改变

为解决常规ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）使用放射性同位素及操作繁杂等问题，应用溴化乙锭（ＥＢ）染色的非同位素检测方法对１６例卵巢癌及５例正常胎盘组织中ｐ５３基因的第５、６外显子（Ｅｘｏｎ５、６）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物进行了分析，并结合ＤＮＡ测序技术进行验证。正常组织未发现异常，１６例卵巢癌ＳＳＣＰ分析显示３例异常，ＤＮＡ测序证实其中２例为核苷酸突变，１例为核苷酸插入。采用ＥＢ染色的非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ，方法简便、省时、准确，具有良好的实用性和广泛的使用价值。     

PCR－RFLP法在鉴别脊髓灰质炎野毒和疫苗株的应用

ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法在鉴别脊髓灰质炎野毒和疫苗株的应用中国预防医学科学院病毒学研究所（１０００５２）张礼璧，李杰，原稔，郑红，侯晓辉，陆群，方勇ＢＡＬＡＮＡＮＴ［１］设计了用一对引物扩增脊髓灰质炎（简称脊灰）病毒基因ＶＰ１片段中的约４８０个核苷酸片段，...     

应用限制性内切酶分析PCR产物快速诊断Hb CS基因突变

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）选择性扩增包括ＨｂＣＳ突变（ＴＡＡ→ＣＡＡ）位点在内的ａ２珠蛋白基因片段，利用与该点突变密切相关的天然Ｔｒｕ９１位点和由ＰＣＲ引物介导出和人工ＨｉｎｆＩ位点的变化可识别ＨｂＣＳ突变等位基因和野生型等位基因。ＰＣＲ产物直接经Ｔｒｕ９１或ＨｉｎｆＩ消化及电泳分析后即可对样品ＤＮＡ中是否存在ＨｂＣＳ空变及其基因型作出诊断。此法简便、省时，可用于基因筛查和产前诊断。     

胆固醇酯转移蛋白基因taqIB多态性与胆囊结石病关系的临床实验研究

目的：揭示胆囊结石病与遗传因素的关系。方法：运用多聚酶链反应技术（ＰＣＲ）和基因限制性片段长度多态性分析法（ＲＦＬＰｓ）对１０４例胆囊结石病人和６８例健康人进行调查研究。结果：发现胆囊结石组Ｂ１等位基因，Ｂ１Ｂ１基因型，Ｂ２等位基因，Ｂ２Ｂ２基因型频率与对照组相应等位基因及基因型频率比较有差异（０５２３０ｖｓ０３４６００２８８０ｖｓ０１１７６０４７７０ｖｓ０６５４００２４２０ｖｓ０４２６４Ｐ＜００１）。Ｂ１Ｂ１基因型ＨＤＬｃｈ和ＨＤＬ２ｃｈ水平降低，与Ｂ２Ｂ２基因型的ＨＤＬｃｈ、ＨＤＬ２ｃｈ比较有差异（Ｐ＜００１）。结论：Ｂ１等位基因和Ｂ１Ｂ１基因型与低ＨＤＬｃｈ、ＨＤＬ２ｃｈ水平相关。Ｂ１等位基因是部分中国汉族人胆囊结石病人的遗传易感因素。     

一种新的NADH-细胞色素b5还原酶基因C203Y突变

我中心从９０年代初起共对５个家庭的１５例遗传性高铁血红蛋白血症（ＲＣＭ）患者的ＮＡＤＨ细胞色素ｂ５还原酶（Ｃｙｔｂ５Ｒ）进行了生化、免疫学测试，并对其ｂ５ＲｃＤＮＡ基因进行了序列分析和限制性片段长度多态性分析，已发现并报道了两种基因突变类型（Ｒ５７...     

在HeLa细胞中表达人βIVS-Ⅱ-nt 654C→T突变基因

目的：建立一个能表达人βＩＶＳ－Ⅱ－ｎｔ６５４Ｃ→Ｔ突变基因（β６５４基因）的ＨｅＬａ细胞模型。方法：应用长片段多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术从一例β６５４突变基因纯合子的基因组ＤＮＡ中扩增出β６５４基因全长片段，重组进ｐｃＤＮＡ３．１真核表达载体质粒中。经ＤＮＡ测序证明序列中确实含有β６５４突变后，将重组表达质粒用脂质体方法转化ＨｅＬａ细胞，用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测β６５４突变基因在转染细胞中表达的ｍＲＮＡ。结果：该重组表达质粒能在ＨｅＬａ细胞中转录β６５４突变基因，并剪接成正常和异常两种ｍＲＮＡ（对应于１８３ｂｐ和２５６ｂｐ两种ＲＴ－ＰＣＲ产物），而对照组无扩增条带出现。结论：重组表达质粒转化的ＨｅＬａ细胞能表达β６５４基因。     

非同位素方法检测卵巢癌组织p53基因的改变

为解决常规ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）使用放射性同位素及操作繁杂等问题，应用溴化乙锭（ＥＢ）染色的非同位素检测方法对１６例卵巢癌及５例正常胎盘组织中ｐ５３基因的第５、６外显子（Ｅｘｏｎ５、６）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物进行了分析，并结合ＤＮＡ测序技术进行验证。正常组织未发现异常，１６例卵巢癌ＳＳＣＰ分析显示３例异常，ＤＮＡ测序证实其中２例为核苷酸突变，１例为核苷酸插入。采用ＥＢ染色的     

银染色法检测短串联重复序列

短串联重复序列（ＳＴＲ）又称微卫星ＤＮＡ,它是由２～７个碱基对作为核心单位串联重复形成的一类ＤＮＡ序列。ＳＴＲ出现的数目和频率的变化构成了ＳＴＲ遗传多态性。ＬＤＬ受体基因第１８外显子３′末端非翻译区上一段短串联重复序列（ｄＴＡ）ｎ在人类存在多态性［１］。我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）,结合聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）建立了检测相差２ｂｐＤＮＡ碱基对的银染方法。一、材料和方法１－材料：ＰＣＲ缓冲液,Ｔａｑ酶,ｄＮＴＰ,引物,ＰＣＲ仪,电泳仪,垂直电泳槽及电泳板。银染试剂为国产分析纯,试剂均用去离…     

聚合酶链反应检测结核杆菌DNA实验研究的近况

聚合酶链反应检测结核杆菌ＤＮＡ实验研究的近况上海医科大学华山医院传染病教研室（２０００４０）陈一平，翁心华，徐肇ｈ聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）又称体外基因扩增法，是八十年代中期Ｍｕｌｌｉｓ［１］提出的一种新的...     

首次发现国人先天性双侧输精管缺如CFTR基因突变

目的：探讨囊性纤维化跨膜转运调节物（ＣＦＴＲ）基因在国人先天性双侧输精管缺如患者中的突变频率及热点。方法：应用ＰＣＲ－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）及ＤＮＡ邓技术,对３２例先天性双侧输精管缺如患者ＣＦＴＲ匪帮经２,３,４,５,６ａ,８,１０,１１,１２,１３,１５Ａ,１７ｂ,１９Ａ,２０,２１,２３外显子区域上的突变进行筛查,结果：１例患者在１０号外显子第１６５３至１６５５位三个碱基ＴＴＴ缺失,