甲泼尼龙对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的探讨甲泼尼龙(MP)对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及机制。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型20只,随机分为对照组、MP小剂量组、MP大剂量组。用药4周后观察裸鼠重量、肿瘤体积和重量、肿瘤组织切片透射电镜检查、放射免疫法测定血AFP浓度、荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达。结果MP大剂量组肿瘤重量(1.62±0.12)Vs(1.33±0.19)g、体积(0.63±0.05)Vs (0.56±0.05)cm3大于对照组,该组裸鼠血AFP浓度高于对照组(7.5±1.14 Vs(5.98±0.78)μg/L,VEGF mRNA、MMP-2 mRNA表达显著增加。结论MP大剂量可以上调VEGF mRNA、MMP- 2 mRNA的表达,促进肝癌细胞生长、转移,小剂量无影响。     

雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及机制.方法 建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型24只,随机分为对照组、RAPA小剂量组(每日1 mg/kg体重)、RAPA大剂量组(每日5 mg/kg体重).用药4周后观察肿瘤体积和重量、肿瘤组织切片行透射电镜检查、荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测肿瘤的血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)mRNA的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定裸鼠血VEGF、MMP-2浓度.结果 与对照组比较,雷帕霉素小剂量组和大剂量组均能抑制肿瘤生长[(0.42±0.17)cm3和(0.38±0.21)cm3比(0.78±0.25)cm3,P＜0.05];VEGF mRNA、MMP-2 mRNA的转录和翻译显著减少(P＜0.01).结论 雷帕霉素可以通过抑制肝癌细胞VEGF和MMP-2的mRNA转录和蛋白表达,抑制肿瘤生长,但不呈剂量依赖性.     

血管内皮生长因子反义核酸对肝癌生长的抑制作用

目的　探讨血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在实体肿瘤中的作用。方法　应用分子克隆技术构建人全长ＶＥＧＦｃＤＮＡ反义基因真核表达载体,并用脂质体法转入人肝癌细胞系（ＨｅｐＧ２） ,观察转染后肝癌细胞在裸鼠体内的生长及瘤体内微血管的通透性。结果　各组细胞在裸鼠体内的成瘤时间无明显差别,但反义核酸转染组肿瘤的生长速度及瘤体的重量均明显落后于其他组,肿瘤内血管的通透性也显著降低。结论　ＶＥＧＦ在实体肿瘤的生长过程中起着十分重要的作用。     

血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9在肝细胞癌中的表达及其意义

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在肝细胞癌中的表达,并探讨其与肝细胞癌复发、转移的关系.方法采用免疫组化ABC法对50例肝细胞癌组织和30例正常肝组织中VEGF及MMP-9蛋白的表达进行检测.结果VEGF和MMP-9在肝细胞癌组织中的表达阳性率分别为86.0%(43/50)和68.0%(34/50),明显高于正常肝组织中的表达阳性率53.3%(16/30)和33.3%(10/30).差异有统计学意义(P＜0.05);VEGF的表达与MMP-9的表达呈显著正相关(r＝0.98,P＜0.01),二者的协同表达与肝细胞癌的淋巴结转移及包膜形成有关(P＜0.05).结论VEGF和MMP-9在肝细胞癌的生长、侵袭和转移过程中起着重要作用,对预测肝细胞癌复发、转移有一定意义.     

抗血管内皮生长因子抗体对实验性肝癌的生长抑制作用

目的了解抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体对人肝癌的生长抑制作用.方法在已建立的人肝癌裸鼠皮下种植瘤的瘤灶旁,注射抗VEGF抗体,观察肿瘤生长情况,用CD31的免疫组化方法检测肿瘤内部的微血管密度(iMVD),用原位末端转移酶标记技术检测凋亡的肿瘤细胞.结果实验结束后1周,实验组和对照组肿瘤大小(长×宽)是(26.46±19.81) mm2和(105.77±17.40) mm2(P<0.001),2周后是(45.20±23.02) mm2和(150.77±77.41) mm2(P<0.05),而此时肿瘤的iMVD是(2 311±120)个/mm2和(3 900±328)个/mm2 (P<0.001); 肿瘤细胞凋亡指数是15.31% 和 6.83%(P<0.005).结论抗VEGF抗体能通过抑制肿瘤微血管的生长,抑制实验性人肝癌的生长,其实质是增加了肿瘤细胞凋亡.     

膜联蛋白A-10与基质金属蛋白酶-9、血管内皮生长因子在人肝细胞癌组织中表达的相关性及与临床病理特征的关系

目的 探讨膜联蛋白A10(ANXA10)在人肝细胞癌发生发展中的作用,及这些作用是否与已知的肝细胞癌侵袭转移相关的细胞因子基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)有关.方法 应用免疫组织化学二步法检测80例患者肝细胞癌(HCC)和癌旁正常组织中ANXA10、MMP-9、VEGF的表达,分析ANXA10与MMP-9、VEGF之间相关性及ANXA10与肝癌临床病理特征的关系.结果 ANXA10在HCC中阳性率为65.0%(52/80);在癌旁肝组织中阳性率为91.3%(73/80),前者明显低于后者.ANXA10表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤位置、肝硬化、临床T分期无明显相关(P>0.05),与分化程度显著相关(P<0.05).ANXA10与MMP-9之间显著相关(P<0.05);ANXA10与VEGF之间无明显相关(P>0.05).结论 ANXA10表达缺失或失活可能是恶变的人肝细胞的重要特征之一.     

VEGF、KDR的表达对肝癌的血管生成、生长、转移的影响

目的　研究血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体KDR(kinaseinsertdomaincontainingre ceptor)对肝细胞肝癌的血管生成、生长、转移等方面的影响。　方法　对 45例肝癌、2 1例肝硬化、8例正常肝标本进行了免疫组化、原位杂交染色 ,然后行图像分析 ,观察VEGF、KDR的表达与肝癌病理特点之间的关系 ,并进行统计学分析。　结果　肝细胞肝癌中VEGF高表达 ;并与肝癌的血管生成相关 ;VEGF的表达强度与表达率均与肝癌的转移、包膜形成相关 ;KDR不仅表达于血管内皮细胞 ,还表达于部分肝癌细胞。　结论　VEGF在肝癌的血管生成、癌细胞转移、包膜形成中可能起到重要作用 ,KDR在肝癌细胞的表达可能是一种自分泌行为。     

肝癌肝移植术后肝癌复发大鼠模型的建立

目的通过在大鼠肝癌肝移植后免疫抑制状态下接种肿瘤组织块来模拟临床中同种异体肝移植后肝癌复发的进程,建立稳定的肝移植后肝癌复发模型。方法应用Wistar大鼠肝癌细胞系CBRH-7919经过培养传代、皮下成瘤、肝内接种等过程建立大鼠的种植性肝癌模型。行SD→Wistar的大鼠移植,免疫抑制状态下肝内植入瘤块。A组(n=15),以免疫抑制状态下的未行肝移植的Wistar大鼠肝内植瘤,作为对照组;B组(n=15),为肝移植术中植瘤组;C组(n=15),为术后1周植瘤组。观察各组大鼠的成瘤率,在B超下观察肿瘤生长情况,绘制生长曲线。结果肝移植术中植瘤组(B组)大鼠仅6只成瘤,成瘤率为40.0%,而对照组(A组)和术后植瘤组(C组)大鼠各有13只成瘤,成瘤率为86.7%。术中植瘤组大鼠肿瘤生长速度明显降低。结论肝移植术后1周在免疫抑制状态下肝内接种瘤块成瘤,建立了安全、可靠的肝移植术后肝癌复发的大鼠模型。     

绿脓杆菌制剂对人肝癌MHCC97L细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨绿脓杆菌制剂(pseudomonas aeruginosa vaccine,PA)对有转移潜能的人肝癌MHCC97L细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用不同浓度的PA分别作用于MHCC97L细胞,观察细胞增殖、生长曲线、克隆形成率、流式细胞术分析(FCM)、侵袭、运动、迁移、VEGF和MMP2蛋白表达(ELISA法).结果 PA明显抑制MHCC97L细胞增殖和克隆形成,呈良好的剂量-效应关系.PA 48 h和72 h的IC50分别为3.1×108/ml和1. 9×108/ml.PA浓度为0.5×108/ml、1×108/ml和2×108/ml时,其细胞倍增时间依次增加,克隆形成率依次降低(P均＜0.01);FCM显示,G1期细胞比例随PA浓度增加而增加,S+G2期细胞比例随PA浓度增加而降低(P均＜0.01).PA浓度为1×108/ml时,穿过人工基底膜(侵袭实验)和上室底膜(运动实验)的细胞数(分别为4.8±1.3和8.8±2.2)明显低于对照组(8.6±2.1和15.6±1.2)(P均＜0.01);细胞经72 h培养后,对照组划痕逐渐愈合,1×108/ml的PA组细胞划痕依然明显.ELISA法检测发现,1×108/ml的PA组其VEGF蛋白和MMP2蛋白含量和对照组相比均无明显差异(P均＞0.05).结论 在一定条件下,绿脓杆菌制剂可抑制人肝癌MHCC97L细胞增殖和克隆形成,其作用部分是通过使细胞周期阻滞在G1期实现的;绿脓杆菌制剂可以明显抑制MHCC97L细胞的侵袭、运动和迁移能力,其作用和VEGF、MMP2蛋白分泌关系不明显.     

加热联合吲哚美辛对人肝癌MHCC97L细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 观察水浴加热联合吲哚美辛对人肝癌MHCC97L细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 42℃水浴加热前2h加入0.2 mmol/L吲哚美辛,加热组不加药,对照组不加热、不加药,其他处理相同并在同一时间点观察.在不同的时间观察细胞增殖、生长曲线、克隆形成率、流式细胞术(FCM)分析细胞周期、侵袭、运动、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达[酶联免疫吸附试验(ELISA)法].结果 与对照组比较,加热+吲哚美辛明显抑制MHCC97L细胞增殖(P＜0.01),其最大抑制效应为加热后48 h(53.6％),细胞倍增时间延长了2.07倍;加热+吲哚美辛组48、96 h的细胞集落形成率均明显降低(P ＜0.01);FCM显示,吲哚美辛能逆转加热对细胞周期的影响,加热+吲哚美辛组48 h和96 h的G1期细胞比例均明显升高,S+G2期细胞比例均明显降低(P＜0.05).加热+吲哚美辛组48 h和96 h相同数量的细胞穿过人工基底膜到达Transwell小室膜背面的细胞平均数(侵袭实验)和穿过Transwell小室膜到达背面的MHCC97L细胞平均数(运动实验)均明显低于加热组(P＜0.01);ELISA法检测发现,加热+吲哚美辛组48、96 h的分泌量均明显低于加热组(P＜0.05).结论 吲哚美辛抑制体外加热后肝癌细胞的增殖,其作用和抑制细胞进入DNA合成期和分裂期有关;进一步抑制其侵袭运动能力,其作用和MMP-2、VEGF表达降低有关.     

TSP-1和VEGF在肝细胞癌新生血管生成中的作用

目的　研究血小板反应蛋白 1(TSP 1)和血管内皮生长因子(VEGF)的平衡在肝细胞 癌(HCC)新生血管生成中的作用。方法　采用免疫组织化学SABC法检测37例HCC及其癌旁肝 组织和6例正常肝组织中TSP 1、VEGF和CD34的表达情况,研究TSP 1和VEGF的表达与HCC 的临床病理资料及新生血管生成的关系。结果　37例HCC中TSP 1阳性率为62.2%(23/37),低 于相应的癌旁肝组织和正常肝组织(P<0.05)。HCC中VEGF的阳性率为97.3%(36/37),高于相 应的癌旁肝组织和正常肝组织(P<0.05)。有镜下静脉浸润的HCC组织中TSP 1的表达低于无镜 下静脉浸润者,而VEGF的表达则高于无镜下静脉浸润者(P<0.05)。等级相关分析显示,HCC中 VEGF的表达与CD34的表达呈正相关关系,(rs=0.333,P<0.05),而TSP 1的表达与CD34的表达 则呈负相关关系,相关系数(rs=-0.393,P<0.05)。结论　TSP 1低表达与VEGF过表达之间的 不平衡性是决定HCC组织中新生血管生成的关键因素之一。     

Survivin在肝癌中的表达和意义及其与血管内皮生长因子的相关性

目的　检测肝细胞癌中凋亡抑制蛋白Survivin的表达 ,研究其与肝癌临床特征的关系 ;同时研究Survivin与血管内皮生长因子 (VEGF)表达的相关性 ,探讨Survivin在肝细胞癌发生发展及转移中的作用及机制。方法　采用免疫组织化学技术和蛋白印迹技术 ,检测 3 8例肝癌组织及癌旁非癌组织中Survivin和VEGF蛋白的表达。结果　 3 8例肝癌组织中 2 3例表达Survivin蛋白 ,其中 18例VEGF表达阳性 ,5例VEGF表达呈阴性或弱阳性 ;15例不表达Survivin蛋白者VEGF的表达 3例阳性 ,12例阴性或弱阳性。而在癌周非癌组织未检测到Survivin蛋白的表达。Survivin的表达与肝癌的发病年龄、性别、肿瘤大小、分化程度无关 (均为P >0 .0 5 ) ,而与肝癌的转移有关 (P <0 .0 5 )。结论　Survivin在肝细胞癌中的表达能促进肝癌的发生发展 ,并可能通过上调VEGF的表达而促进肝癌转移。     

血管内皮生长因子和血小板衍化内皮生长因子的表达在甲胎蛋白阴性肝细胞癌根治性切除术后预后预测中的作用

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)和血小板衍化内皮生长因子(PD-ECGF)在甲胎蛋白(AFP)阴性肝细胞癌切除术后预后预测中的作用.方法 利用组织微阵列技术(tissue mi-croarray)和免疫组织化学方法回顾性研究200例AFP阴性肝癌患者肿瘤中VEGF及PD-ECGF的表达情况,分析其与肝细胞癌切除术后预后的关系.结果 V EGF及PD-ECGF表达阳性组与相应阴性组患者之间的生存率和无瘤生存率差异无统计学意义(P>0.05),而VEGF及PD-ECGF表达阳性组的术后复发率比相应阴性组显著增高(P<0.05).VEGF和PD.ECGF同时阳性表达组其复发率更显著高于同时阴性组(P<0.01),其生存率和无瘤生存率亦显著降低(P<0.05).结论 对于甲胎蛋白阴性肝癌患者,VEGF和PD-ECGF同时表达阳性提示术后易发生复发,预后不佳.     

血管内皮生长因子和促血管生成素及其受体Tie2在肝细胞癌发生发展中的作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)和促血管生成素(Angiopietin)及其受体Tie2在启动肝细胞癌(HCC)血管生成中的调控机制及在HCC发生发展中的作用。方法新鲜HCC标本及癌旁肝组织38例,用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测Ang-1、Ang-2、Tie2和VEGF在各组织标本中的表达,以CD34标记新生血管内皮并计数微血管密度(MVD),分析上述因子在HCC组织和非癌肝组织中的表达差异、相互作用及其与MVD、临床病理特征之间的关系。结果Ang-1、Tie2在HCC和非癌肝组织中的表达差异无统计学意义(0．194 7±0．086 2比0．232 6±0．109 8,1．601 6±0．900 7比1．340 0±0．703 7,P均>0．05),而VEGF和Ang-2在HCC组织的表达高于非癌肝组织(1．038 0±0．572 0比0.832 3±0．182 4,0．621 3±0.417 6比0．442 9±0．330 1,P均<0．05);VEGF、Ang-2、Ang-2／1都与MVD和临床病理特征相关(P<0．01),但与组织分化程度无关(P>0．05)。结论Ang-2／1的失衡表达及其与VEGF和Tie2的共同作用是启动肝组织血管生成并诱发HCC发生、发展的重要因素;这种因素在HCC中的持续作用进一步促进了肿瘤血管生成和恶性生物学行为。     

肝癌组织中缺氧与血管内皮生长因子过度表达的关系

目的　研究肝细胞癌 (HCC)中血管内皮生长因子 (VEGF)过度表达与HCC组织中缺氧的关系。方法　通过免疫组织化学链霉亲合素 生物素 过氧化物酶复合体 (SABC)法检测 3 6例HCC组织及其相应癌旁肝组织和 6例正常肝组织中缺氧诱生因子 1α(HIF 1α)、VEGF和微血管密度(MVD)的表达 ,并对这些指标进行相关分析。离体实验中用缺氧诱导剂氯化钴刺激人肝癌细胞系HepG2 ,采用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和免疫组织化学检测VEGF的表达情况。结果　 3 6例HCC组织中HIF 1α强阳性 3例 (8.3 % )、弱阳性 2 1例 (5 8.3 % )、阴性 12例 (3 3 .3 % ) ;VEGF强阳性 16例 (4 4 .4% )、弱阳性 16例 (4 4 .4% )、阴性 4例 (12 .2 % )。等级相关分析显示HCC中VEGF的表达与MVD的表达、HIF 1α的表达与VEGF的表达均具有正相关关系 (P <0 .0 1)。氯化钴可以以浓度和时间依赖性的方式诱导HepG2细胞中VEGF的转录。结论　HCC中存在的缺氧是HCC组织中VEGF过度表达的始动因素之一。     

环氧合酶-2和血管内皮生长因子共表达与肝细胞癌血管形成的关系

目的　探讨环氧合酶 (COX) 2与肝细胞癌血管形成的关系。方法　利用免疫组织化学、Westernblot方法检测 48例肝癌组织中COX 2和血管内皮生长因子 (VEGF)蛋白及逆转录 聚合酶链反应法 (RT PCR)检测COX 2和VEGFmRNA的共表达 ,对共表达COX 2和VEGF蛋白和mRNA的肝癌组织进行微血管记数。结果　免疫组织化学检测中 ,48例肝癌组织 3 6例共表达COX 2和VEGF蛋白。类似结果见于蛋白电泳分析。RT PCR显示 ,48例肝癌组织 3 6例共表达COX 2mRNA和VEGFmRNA。两者之间的表达明显相关 (γ =0 .845 )。共表达COX 2和VEGF蛋白和mRNA的肝癌组织中 ,平均微血管数 (5 6.8± 17.5 )个 ,明显高于阴性表达组。结论　COX 2可能与肝细胞癌的血管形成有关 ,且其作用之一可能是通过上调VEGF通道来发挥的     

巨噬细胞移动抑制因子小干扰RNA对肝癌细胞表达血管内皮生长因子的抑制效应

目的 观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)小干扰RNA(siRNA)对肝癌细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 Western blot检测MIF和VEGF在肝癌和癌旁组织的表达情况;人工化学合成MIF siRNA和对照siRNA,将其转染PLC、HepG2肝癌细胞株,定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测MIF和VEGF mRNA及其蛋白的表达.结果 MIF、VEGF mRNA和蛋白在肝癌组织中高表达.MIF siRNA(50、100 nmol/L)转染肝癌细胞株后,PLC细胞MIF和VEGFmRNA水平分别下调(78.8±7.2)%、(90.4±2.9)%和(60.6±2.6)%、(79.8±1.2)%;HepG2细胞MIF和VEGF mRNA水平分别下调(74.3±8.9)%、(88.4±4.6)%和(65.6±4.6)%、(80.7 ±2.2)%.MIF蛋白分别下调(57.3±3.4)%、(78.7±1.2)%和(54.8±6.8)%、(77.9±2.3)%,并呈剂量依赖关系;伴随MIF mRNA和蛋白的表达下调VEGF蛋白分别下调(52.6±12.9)%、(87.4±2.3)%和(52.4±11.1)%、(68.5±2.8)%,亦呈剂量依赖关系,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),两干预组间的差异也有统计学意义(P<0.05).结论 MIF siRNA能特异性阻断PLC及HepG2细胞MIF mRNA和MIF蛋白的表达,并且同时有效下调VEGF mRNA及其蛋白的表达,MIF可能通过调控VEGF基因和蛋白的表达,参与肿瘤血管的生成和促进肿瘤细胞的转移.