应用差别PCR检测肿瘤组织中癌基因的扩增

差别PCR（differentialPCR，D-PCR）是一种半定量PCR技术，用以检测基因拷贝数改变的、快速敏感的非同位素技术，其特点是在PCR系统中检测靶基因的同时设立一个单拷贝参照基因，从而确定靶基因扩增或缺失的程度。目前多用于石蜡包埋、新鲜癌组织中癌基因扩增的检测。现以检测乳腺癌组织中c－erbB－2（HER－2／neu）扩增为例，具体说明D－PCR的检测程序．引物设计是根据靶基因HER－2／neu及参照基因γ-IFNG序列分别设立一对引物：HER－2／neu（5'-CCTCTGACGTCCATCATCTC－3'；3'－ATCTTCTGCTGCCGTCGCTT－5'）；…     

一种检测肿瘤癌基因扩增的新技术一差别PCR技术

一种检测肿瘤癌基因扩增的新技术一差别ＰＣＲ技术方刚，于泽平，刘复坤（南京军区总医院肿瘤室，南京２１０００２）差别ＰＣＲ技术，快速、敏感无同位素污染，该技术的检测原理是在一定的ＰＣＲ反应条件下，ＰＣＲ产物的量与ＰＣＲ模板的拷贝数是正相关，反映了模板拷贝...     

差异PCR技术检测乳腺癌C－erbB_2癌基因扩增的研究

为探讨癌基因扩增在乳腺癌中的临床意义，应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２基因在７５例人乳腺癌中扩增情况。结果：３４．７％（２６／７５）的乳腺癌存在该基因扩增，且以ＥＲ阴性或腋淋巴结转移＞３枚者明显，而与其它因素关系不大。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交对原样本再次检测，结果与上述基本一致，并发现一例基因重排。表明应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２扩增具有快速、简单、可靠、无放射性污染，有助于乳腺癌预后及转移潜力之判断，临床应用价值较大。     

差异PCR技术检测乳腺癌C—erbB2癌基因扩增的研究

为探讨癌基因扩增在乳腺癌中的临床意义，应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２基因在７５例人乳腺癌中扩增情况。结果：３４．７％的乳腺癌存在该基因扩增，且以ＥＲ阴性或腋淋巴结转移〉３枚者明显，而与其它因素关系不大。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交对原样本再次检测，结果与上述基本一致，并发现一例基因重排，表明应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２ｘ扩增具有快速，简单，可靠，无放射性污染，有助于乳腺癌预后及转移潜     

胃癌c-erbB-2基因扩增的荧光原位杂交检测

目的：研究胃癌ｃｅｒｂＢ２ 基因扩增。方法：使用荧光原位杂交技术（ＦＩＳＨ） 检测５５ 例胃癌。结果：胃癌肿瘤区ｃｅｒｂＢ２基因扩增阳性率为３６－４％ 。在胃癌移行区内阳性率为１０－９％ ,在正常粘膜区阳性率为３－６ ％ ,相互比较,三个区域之间差异有高度显著性（ Ｐ＜ ０－０１）。在肠型和弥漫型胃癌,ｃｅｒｂＢ２ 基因扩增阳性率为５１－６％ 和１６－７％ ,两者差异有显著性（ Ｐ＜０－０５）。ｃｅｒｂＢ２ 基因扩增阳性与淋巴结内胃癌转移有明显相关性（ Ｐ＜ ０－０５）。结论：ｃｅｒｂＢ２ 基因扩增与胃癌的发生,发展有明显关联,有助于判断胃癌预后。     

双色荧光原位杂交检测c-erbB-2基因扩增及应用

ｃｅｒｂＢ2(ＨＥＲ2ｎｅｕ)癌基因编码一种跨膜酪氨酸激酶受体蛋白,该蛋白与表皮生长因子受体家族有广泛的同源性。有研究表明,ｃｅｒｂＢ2蛋白与某些实体肿瘤细胞间的信号传递有关。ｃｅｒｂＢ2基因的过度表达可影响细胞受体的激酶活性,从而影响或改变细胞的生长、增殖特性。经研究发现,ｃｅｒｂＢ2原癌基因的过度扩增或蛋白异常表达与乳腺癌、胃癌等实体瘤的发生、发展及预后密切相关,而且具有ｃｅｒｂＢ2基因过度表达的乳腺癌可对一种人源化的重组抗ｃｅｒｂＢ2抗体(Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ)有较好的治疗反应[1,2]。因此,ｃｅｒｂＢ2基因过…     

差别PCR及在癌相关基因扩增和缺失研究中的进展

基因的扩增与缺失是癌基因等活化、抑制基因等失活的常见机制之一，差别－ｄ－ＰＣＲ为上述遗传学改变了提供了简便并较敏感的非同位数技术，本文简述了近年严ｄ－ＰＣＲ方法学和用于肿瘤研究的进展。     

差别PCR及在癌相关基因扩增和缺失研究中的进展

基因的扩增与缺失是癌基因等活化、抑癌基因等失活的常见机制之一，差别（differentiald）－d－PCR为上述遗传学改变提供了简便并较敏感的非同位数技术．本文简述了近年来在d-PCR方法学和用于肿瘤研究的进展．     

实时荧光PCR法检测HER2基因扩增方法的建立

目的探讨应用双标准曲线的实时荧光PCR法检测原癌基因人类表皮生长因子受体2（HER2）基因扩增在临床乳腺癌诊治中的可行性。方法收集500例乳腺癌术后新鲜组织标本,抽提组织DNA进行实时荧光PCR检测,采用双标准曲线法定量,通过计算目的基因浓度和内标基因浓度的比值来判断HER2基因的扩增情况。选择灵敏度和特异度均较高的荧光原位杂交方法作为对照方法。结果检测阳性标本72例,阴性样本419例。该方法检测的灵敏度为85.9%,特异度为98.79%,准确度为96.74。与荧光原位杂交法（FISH）检测结果相比,二者具有较好的一致性。结论双标准曲线的实时荧光PCR法用于检测HER2基因扩增相对准确可靠,有较好的临床应用前景。     

乳腺癌c-erbB-2、nm23基因扩增及产物表达

目的：探讨乳腺癌癌基因和抑癌基因表达与预后的关系。方法：应用组织原位杂交及免疫组化技术对２５例新鲜乳腺癌标本的ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｎｍ２３基因扩增及产物表达进行了检测。结果：ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｍＲＮＡ杂交信号主要位于癌细胞胞浆中，杂交颗粒的多少不均，阳性细胞呈异质性分布，ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白在该组表达率为４０％（１０／２５），ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白阳性颗粒分布于癌细胞膜上，随着肿瘤恶性程度的增加，ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增及蛋白表达都增加（Ｐ＜０．０５）。ｎｍ２３基因扩增及产物表达却随肿瘤恶性程度的增加而减少（Ｐ＜０．０５），ｎｍ２３ｍＲＮＡ杂交颗粒位于胞浆中，蛋白的表达可见于胞浆中，少数见核中阳性，该组ｎｍ２３蛋白表达率为４４％（１１／２５）。结论：ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｎｍ２３基因扩增及产物表达呈负相关关系（Ｐ＜０．０５），且与乳腺癌临床病理特征密切相关     

应用PCR扩增检测解脲脲原体

应用ＰＣＲ扩增检测解脲脲原体俞婉芳，滕葵，李牧尧，沈大为，李厚钧解脲脲原体是泌尿生殖道感染的主要致病菌之一。１９９０年Ｂｌａｎｃｈａｒｄ首先克隆了尿素酶基因并分析了核苷酸序列，为应用ＰＣＲ技术检测解脲脲原体奠定了基础。我们应用Ｂｕｒｄｏｎ等（１９９１...     

细针穿刺乳腺癌检测c-erbB-2蛋白

ｃｅｒｂＢ２蛋白是近年被认为与乳腺癌预后有关的一项指标［１，２］。本研究探讨细针穿刺乳腺癌检测ｃｅｒｂＢ２蛋白的可行性。一、材料和方法１穿刺、涂片：用２０ｍｌ注射器、７号针头对３０例乳腺肿物进行穿刺，将抽出的组织推入盛有１６４０培养液的ＥＰ...     

石蜡包埋乳腺癌组织中用荧光差别多聚酸链反应检测erbB2基因扩增

作者基于差别多聚酶键反应（D－PCR）和荧光DNA技术已发展了一种迅速的非放射性方法，为了在人类肿瘤标本库中定量检测ERBβ2基因扩增。来自ERBβ2基因和来自单拷贝参照基因序列同时用PCR扩增，其中每对引物中有一个用荧光标记。PCR产物在自动荧光DNA测序仪上，在激光激活发光后用适当的软件扫描直接定量。这种荧光差别多聚酶链反应（FD－PCR）法被用来定量检测195列甲醛固定、石腊包理乳腺癌组织中的ERBβ2基因扩增，其中52例（26％）发现有ERBβ2基因扩增，并与肿瘤大小、缺乏雌激素受体（ER）和PS2表达有显著相关，但与孕…     

p53、c-erbB-2癌基因蛋白表达与胃癌生物学行为的关系

目的：探讨ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２表达与胃癌生物学行为的关系。方法：利用微波免疫组化方法研究７０例胃癌及２０例胃癌前病变ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的表达。结果：正常胃粘膜和肠化生上皮ｐ５３及ｃ－ｅｒｂＢ－２均阴性，中、重度异型增生及胃癌组织中ｐ５３阳性率分别为１５．０％和５１．４％。ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性率分别为１０．０％和４０．０％。ｐ５３与胃癌组织学类型、组织发生及分化程度等有关（Ｐ＜０．０５），而ｃ－ｅｒｂＢ－２则与胃癌分化程度、胃癌浸润深度等有关（Ｐ＜０．０５）。在低分化腺癌癌巢边缘部，硬癌内呈浸润性生长的细胞以及脉管内转移性癌栓等处，除了癌细胞核内ｐ５３表达较强外，胞浆也呈弥漫性染色，表明胞浆阳性的癌细胞具有更强的侵袭性。在非浸润进展组或随患者生存期的延长，胃癌组织内ｐ５３及ｃ－ｅｒｂＢ－２的阳性率有下降的趋向。结论：ｐ５３可作为临床筛选胃癌、癌前期病变以及进行早期诊断的有用指标，ｐ５３与ｃ－ｅｒｂＢ－２一起可用于判断胃癌预后，监测病情     

癌基因c—erbB—2与肿瘤

癌基因ｃ┐ｅｒｂＢ┐２与肿瘤朱武凌李钦选综述杜华贞和瑞芝审校作者单位：河南省新乡医学院病理学教研室４５３００３作者简介：朱武凌，男，２７岁，硕士。研究方向：消化道恶性肿瘤基因表达及癌的阻断和瑞芝，女，５７岁，教授，享受国务院特殊津贴。研究方向：食管癌...     

从HER-2/neu癌基因扩增推测乳腺癌之预后

最近,分子生物学家们通过对肿瘤实体标本的研究,已在特异性人类肿瘤组织中发现某些原癌基因的扩增现象及其它一些特异性原癌基因的过量表达。1984年Seeger等首先发现在人类神经母细胞瘤组织中存在N-myc的重复拷贝,并证实N-myc的扩增和该肿瘤的临床分期相关联。他们的实验研究表明N-myc扩增可作为一项独立的预后指标,而且肿瘤细胞中N-myc的拷贝数越多,则神经母细胞瘤患者预后越差。临床观察发现伴有N-myc扩增的Ⅱ期神经母细胞瘤患者和Ⅲ、Ⅳ期患者的预后无显著性差     

PCR技术与癌基因、抗癌基因研究的进展

肿瘤的发生与演进是一个多阶段过程,其中包括了多种癌基因的激活和抗癌基因的灭活,引起上述改变的遗传学事件主要是基因的点突变、重排、扩增和缺失等。常规及各种改良PCR技术,为检测这些DNA异常改变提供了敏感、快速和特异性的方法,这促进了肿瘤分子遗传学的发展,并为过渡到临床应用架起了桥梁。本文描述了PCR的一般程序,并讨论了PCR技术的特点与局限性。