不同淋巴细胞分离液对小鼠骨髓单个核细胞生物学活性的影响

目的:探讨不同淋巴细胞分离液对小鼠骨髓单个核细胞生物学活性的影响.方法:使用Ficoll、Percoll和小鼠淋巴细胞分离液分离小鼠骨髓单个核细胞,分别在显微镜下观察细胞形态,胎盘蓝染色法计数细胞数量并检测细胞活力,MTT法检测细胞增殖能力,采用流式细胞仪检测细胞周期,并分别计数三种淋巴细胞分离液分离出的小鼠骨髓单个核...     

从保存血液中分离淋巴细胞的某些条件观察

保存后的血液,经淋巴细胞分离液密度梯度离心分离所获得的单形核细胞中,粒细胞和红细胞污染严重。室温保存48h 血液分离所得淋巴细胞,较之4℃保存所分离的粒细胞污染较轻,而红细胞污染较重。降低淋巴细胞分离液密度,有助于改善粒细胞和红细胞的污染,但同时伴有细胞收获量的减少。室温保存48h 血液,其淋巴细胞 HLA 抗原特异性的表达和新鲜淋巴细胞一致。     

无菌塑料袋分离单个核细胞

目的:研究适合用于人体的利用无菌塑料袋分离单个核细胞(MNC)的方法。方法:随机抽查20份样本,单份采集量65～400ml,分为2组,15～58岁为第1组(n=15),59～76岁为第2组(n=5)。将Ficoll淋巴细胞分离液加入一次性无菌塑料袋内,将采集的血液或骨髓样本缓慢加入淋巴细胞分离液的液面上,离心,收集MNC层,然后洗去Ficoll淋巴细胞分离液,根据临床需要调整MNC的液体悬浮量。结果:第1组分离后MNC的细胞数为(4.90±2.69)×108,回收率为(71.96±12.43)%,CD34+细胞占MNC的比率为(2.31±0.93)%。第2组分离后MNC的细胞数为(1.11±0.74)×108,回收率为(69.98±2.23)%,CD34+细胞占MNC的平均比率为(0.98±0.04)%。结论:利用无菌塑料袋分离MNC,分离效果和MNC、CD34+回收率均能满足临床需要。     

淋巴细胞分层液在人绒毛膜滋养层细胞分离纯化中的应用

目的建立一种简便易行、经济有效的纯化培养滋养层细胞的方法。方法取妊娠6～8周的正常绒毛组织10例,采用胰蛋白酶消化法分离细胞,将细胞随机分为两组(各5例),一组用淋巴细胞分层液进行纯化,另一组未纯化,最后用含15%的胎牛血清的培养基培养细胞。用免疫细胞化学法进行细胞纯度鉴定。结果未纯化的细胞阳性率为(68.62±2.69)%,纯化后的细胞阳性率为(91.60±1.55)%,两者之间的差异具有极显著性意义(P<0.01)。结论应用淋巴细胞分层液可获得纯度较高、合乎试验要求的细胞滋养层细胞。     

应用DispaseⅡ与淋巴细胞分层液获取高纯度基底细胞

目的　尝试应用DispaseⅡ分离酶获得含有完整基底细胞的表皮 ,再经淋巴细胞分层液收集活性强、生长快的基底细胞。探讨这样的细胞能否加快生长 ,缩短培养周期。方法　取植皮术后所剩中厚皮 ,经Dis paseⅡ处理后 ,用镊子分开表皮与真皮 ,表皮经胰酶进一步消化后 ,把细胞悬液通过淋巴细胞分层液将收集到的细胞作为实验组。以Tr法分离的表皮细胞作为对照组 ,两组间就细胞数、生长速度 ,克隆形成率与成膜时间进行比较。结果　所得数据经统计学处理显示 :实验组细胞的生长速度、克隆形成率与成膜时间比对照组明显加快。两组间有显著差异 (P <0 0 0 1)。结论　应用DispaseⅡ与淋巴细胞分层液能获得纯度高、活性强、增殖快的基底细胞。可以缩短培养周期 ,具有重要的临床意义。     

大鼠骨髓来源树突状细胞的体外培养与鉴定

目的建立体外培养、诱导和扩增大鼠骨髓来源的树突状细胞的方法。方法实验通过运用大鼠淋巴细胞分离液和培养过程的手法筛选相结合,培养、诱导和扩增大鼠骨髓来源的树突状细胞,通过形态学和免疫表型进行鉴定。结果成功建立了体外大量培养、诱导及扩增大鼠骨髓来源树突状细胞的方法;经倒置相差显微镜、透射电镜及流式细胞仪鉴定,证实所培养细胞为树突状细胞。结论通过运用大鼠淋巴细胞分离液和培养过程的手法筛选相结合能培养、诱导、扩增大量的树突状细胞。     

应用淋巴细胞分离液纯化大鼠胰岛的实验研究

目的：建立一种简便、易行和高效的胰岛分离纯化方法，以减少对胰岛细胞的损伤，获得高质量的胰岛组织。方法：选用SD大鼠经胆总管原位灌注胶原酶液，分离消化胰腺组织，用淋巴细胞分离液(histopaque-1077)纯化胰岛细胞。结果：可收获大量的高纯度胰岛，纯度达95％以上，体外葡萄糖刺激实验表明胰岛对刺激反应良好，将胰岛移植于糖尿病小鼠体内可短期纠正其高血糖状态。结论：应用单一密度淋巴细胞分离液纯化大鼠胰岛的方法是一种操作简单、价格低廉、重复性好的大鼠胰岛纯化方法。     

分离T淋巴细胞的反选择方法

从前,大多数学者采用E玫瑰花形成的方法分离T淋巴细胞。作者在本文中介绍了一个简便快速高效能分离T淋巴细胞的方法,也就是利用除T细胞外的各种细胞的表面特征来分离T细胞。 用聚蔗糖-泛影葡胺梯度离心法分离人外周血淋巴细胞。将淋巴细胞悬液(内含15％小牛血清)置塑料培养瓶中,37℃温育1小时,除去单核细胞。取该瓶中的细胞悬液0.4毫升加于McCoy’s培养基中,使     

小儿特发性血小板减少性紫癜外周血T、B淋巴细胞观察

目的：检测ＩＴＰ患儿Ｔ淋巴细胞亚群及Ｂ细胞的比值变化。方法：采用荧光免疫法用淋巴细胞分离液配制单个细胞,温育后加入抗体,计算阳性百分率。结果：患儿组 Ｔ３、Ｔ４与健康组差异不显著,ＴＳ及 Ｂ细胞患儿组与健康组差异有显著性。结论：ＩＴＰ患儿可出现细胞免疫及体液免疫功能紊乱。     

不同分离纯化法建立人早孕滋养细胞模型的效果比较

目的：对4种建立滋养细胞的方法进行比较,以期寻求一种简便高效的人早孕滋养细胞的体外培养方法,为相关研究提供基础。方法早孕绒毛通过胰酶联合胶原酶消化分离后,分别采用直接接种、差速贴壁联合差速消化法、人外周血淋巴细胞分离液分离纯化法、完整绒毛消化联合简化的 percoll 密度梯度分离法4种方法纯化培养,倒置显微镜观察细胞形态,应用 HE 染色、免疫组化和免疫细胞化学法检测细胞纯度。结果直接接种、差速贴壁联合差速消化法、人外周血淋巴细胞分离液分离纯化法得到的细胞细胞角蛋白7（CK －7）表达阳性率不足60％;简化的 percoll 密度梯度分离法得到的细胞 CK －7表达阳性率达90％以上。结论完整绒毛消化联合简化的 percoll 密度梯度分离纯化可以得到大量较高纯度的滋养细胞以供后期实验。     

小儿特发性血小板减少性紫癜外周血T、B淋马细胞观察

目的：检测ＩＴＰ患儿Ｔ淋巴细胞亚群及Ｂ细胞的比值变化。方法：采用荧光免疫法用淋巴细胞分离液配制单个细胞，温育后加入抗体，计算阳性百分率。结果：患儿组Ｔ３、Ｔ４与健康组差异不显著，Ｔ８及Ｂ细胞患儿组与健康组差异有显著性。结论：ＩＴＰ患儿可出现细胞免疫及体液免疫功能紊乱。     

外周血细胞DNA、RNA及血红蛋白同时提取法

采用淋巴细胞分离液分离外周血中的有核细胞,经细胞裂解液处理,上清提取RNA,沉淀提取DNA,用分离液分离所得红细胞沉淀制备血红蛋白溶液。经对抽提物质量进行评价,发现3种提取物质量均高。本法能从少量外周血中同时分离DNA、RNA及血红蛋白,高效易操作,值得推广。     

犬纤维化肝贮脂细胞的分离,培养和鉴定

改良一种分离肝贮脂细胞的方法。结扎犬胆总管，制备肝纤维化模型；用６０ｇ／Ｌ聚蔗糖校 比重为１．０７７的淋巴细胞分离液，使其比重为１．０５３，采用单层密度梯度离心法分离犬纤维化肝贮脂细胞。结果：所获得的该种细胞在３２８ｎｍ紫外光激发下出现自发荧光，呈ｄｅｓｍｉｎ免疫组化阳性染色，电镜观察显示其胞质中有较多的脂滴，细胞核形状极不规则。     

脐带血有核细胞不同提取和保存方法的比较

目的:通过对脐带血有核细胞(CBNC)的提取和保存方法探讨,为脐带血有核细胞分离、储存和应用提供科学依据.方法:采用3种方法(Ficoll-Paque分离液法、1%甲基纤维素法、红细胞裂解法)分离CBNC,并应用不同储存液在不同时间对细胞进行冷冻和复苏培养.结果:红细胞裂解液法分离所获得的有核细胞数分别是Ficoll-Paque分离液方法的2.9倍(P＜0.05)和1%甲基纤维素分离方法的10倍(P＜0.01);且红细胞裂解液法所得有核细胞种类(包括淋巴细胞、中性粒细胞和单核细胞)也明显增多;细胞集落形成率与前两种方法比较亦有显著性差异.H3-TdR掺入的细胞活力观察发现,在4℃和20℃条件下存放24h,不同温度下细胞活力没有明显改变.以人脐血血清 DMSO为保护液在液氮储存CBNC 1年,复苏后仍有很强的细胞集落形成能力.结论:应用红细胞裂解液分离提取CBNC获得的细胞数量和种类优于其他两种方法.CBNC冻存时适当加入人脐血清,复苏后克隆形成能力明显增强.     

人外周血树突状细胞的分离培养及鉴定

目的从外周血中分离单个核细胞 ,经体外诱导培养获取高纯度的树突状细胞。方法淋巴细胞分离液分离外周血的单个核细胞 ,经贴壁 2h后加入GM CSF、IL 4诱导 7天 ,观察细胞形态 ,用流式细胞仪检测其表面标志 ,采用混合淋巴细胞培养法检测其刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结果经诱导生成的细胞具有典型的DCs形态特征 ,高表达CD83 、CD86和MHCⅠ、Ⅱ类分子 ,在体外能诱导强烈的同种异体淋巴细胞增殖反应。结论本研究所建立的经济、简便的从外周血获取大量成熟DCs的方法 ,为DCs的进一步研究奠定了基础。     

Percoll密度离心富集慢性粒细胞白血病DC前体细胞

目的：建立一种有效、费用低的富集慢性粒细胞白血病树突状细胞(DC)前体细胞的方法。方法：Ficoll-Hypaque液常规分离慢性粒细胞白血病（CML）外周血单个核细胞,55%Percoll密度离心,比较Percoll分离后的低密度层细胞（B组）、高密度层细胞（C组）及未经Percoll分离细胞（A组）的细胞分类、诱导后CD1a、CD86表达。结果：55%Percoll混悬液分离后的B组细胞中早幼粒和中幼粒细胞所占百分比高于A组(P<0.05)和C组细胞（P<0.01）,而淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的百分比明显少于C组,较A组也有所减少。B组细胞经诱导14 d后CD1a、CD86阳性细胞百分率明显高于C组细胞和A组细胞(P<0.01)。结论：经55%Percoll混悬液分离外周血单个核细胞可提高DC诱导的比率,且该方法无毒、费用低、易操作、分离细胞数量大,可充分满足临床DC的回输需要。     

两种检测方法对地塞米松诱导小鼠淋巴细胞凋亡的观察

目的 探讨地塞米松体外诱导小鼠脾淋巴细胞凋亡的实验方法,为进一步研究淋巴细胞凋亡对机体免疫调节作用机理及其临床应用提供实验依据.方法 取昆明小鼠,分离其脾脏淋巴细胞制成单细胞悬液,实验组加入地塞米松(DEX)使终浓度为10-5 mol/L,培养24 h后,采用瑞氏染色法光镜下观察凋亡细胞形态,用凝胶电泳法观察其DNA ladder;同时设立不加DEX的对照组及新鲜淋巴细胞对照组.结果光镜观察,淋巴细胞在DEX作用下,可见典型的凋亡形态特征变化,主要表现为细胞核边聚、浓缩,以"齿轮状"细胞改变多见;DNA凝胶电泳图谱呈现典型的凋亡DNA ladder,两种方法结果相符.而未加DEX对照组凋亡细胞明显偏少,新鲜淋巴细胞对照组未见凋亡改变.结论 体外条件下用DEX可高效诱导小鼠脾淋巴细胞凋亡,用瑞氏染色法及DNA凝胶电泳法能准确、快速鉴定凋亡淋巴细胞.     

一种简便经济的肝星状细胞分离方法

目的　介绍一种简易、经济、高产的肝星状细胞 (HSC)分离方法 ,为肝纤维化的研究提供细胞模型。方法　参照国内外方法加以改良 ,应用D hanks液校正淋巴细胞分离液 ,使其为 1 0 53 ,采用单层一步梯度离心法分离HSC。结果　细胞获得量为 (3 5± 0 5)× 1 0 7/只 ,存活率、纯度均在 95 %以上。结论　本方法简便、实用、高产 ,不需特殊设备 ,便于推广应用     

低剂量照射的淋巴细胞外液对淋巴细胞亚群功能的影响

应用单克隆抗体，通过ｐａｎｎｉｎｇ直接法分离入外周血淋巴细胞亚群，研究了不同低剂量照射的淋巴细胞外液对ＣＤ＋４、ＣＣＤ＋８细胞的刺激效应。结果表明，照射剂量分别为０．５～８ｃＧｙ、１～４ｃＧｙ的淋巴细胞外液能显著刺激ＣＤ＋４、ＣＤ＋８细胞ＤＮＡ合成增多，两种细胞均在４ｃＧｙ剂量点表现最强的免疫增强效应。     

犬纤维化肝贮脂细胞的分离、培养和鉴定

改良一种分离肝贮脂细胞（Ｉｔｏ）的方法。结扎犬胆总管，制备肝纤维化模型；用 ６０ ｇ／ Ｌ聚蔗糖校正比重为１．０７７的淋巴细胞分离液，使其比重为１．０５３，采用单层密度梯度离心法分离犬纤维化肝贮脂细胞。结果：所获得的该种细胞在３２８ ｎｍ紫外光激发下出现自发荧光，呈ｄｅｓｍｉｎ免疫组化阳性染色，电镜观察显示其胞质中有较多脂滴，细胞核形状极不规则。结论：分离所得的细胞为贮脂细胞；本工作简化了贮脂细胞的分离方法，使其既方便又经济实用，分离效率也较高。