不同浓度表儿茶素没食子酸酯对体外培养成骨细胞的影响

目的研究不同浓度表儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)对体外培养成骨细胞的影响,确定最大作用浓度(最大抑制浓度或促进浓度)。方法取新生SD大鼠的颅骨进行成骨细胞诱导培养,第3代细胞中分别加入浓度为0、1、10、20、30和40μmol/L的EGCG+含10%胎牛血清DMEM培养基培养。应用CCK-8法、茜素红染色和硝酸银染色法、ELISA法观察并测定EGCG对体外培养成骨细胞的增殖、矿化结节形成及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。结果与0μmol/L浓度组比较,EGCG(10~20)μmol/L浓度组具有明显促进增殖的作用;30μmol/L及以上浓度组表现出对大鼠成骨细胞的抑制作用;在不同浓度EGCG中培养7 d或14 d,可以清晰观察到矿化组织形成,(10~20)μmol/L EGCG培养的细胞矿化结节形成数量显著多于对照组;血管内皮生长因子(VEGF)检测显示EGCG(10~20)μmol/L浓度组促进成骨细胞分泌VEGF的作用最强,30μmol/L及以上浓度对VEGF的分泌具有抑制作用。结论 EGCG(10~20)μmol/L浓度组对体外培养的成骨细胞有明显的促进增殖作用,30μmol/L及以上浓度组表现出对成骨细胞的抑制作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对6-OHDA导致的多巴胺能神经细胞损伤的保护作用

目的 探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)在神经毒素6-OHDA损伤中的作用及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)预处理的影响,阐明EGCG对神经元的保护作用机制.方法 应用100μmol/L 6-OHDA处理的多巴胺能神经细胞SH-SY5Y细胞作为体外细胞模型,用不同浓度的EGCG预处理该细胞模型后,应用MTT和3H-TdR掺入实验来检测EGCG对多巴胺能细胞活性的影响.应用Western Blot方法检测EGCG对SH-SY5Y细胞内STAT3蛋白表达的影响.结果 100μmol/L 6-OHDA引起SH-SY5Y细胞生存率下降(对照组的50%),预先应用EGCG(0.1～400 μmol/L)处理细胞1 h,低浓度EGCG(0.1～10 μmol/L)浓度依赖性的对抗6-OHDA引起的SH-SY5Y细胞生存率下降(对照组的54%～75.4%),但高浓度EGCG(20～400 μmol/L)加重了6-OHDA的损害作用,引起细胞生存率(对照组的15.3%～21.4%)进一步下降.100μmol/L 6-OHDA处理细胞2h引起SH-SY5Y细胞胞浆STAT3活性(STAT3磷酸化水平)明显下降,1μmol/L EGCG预处理15 min有效地阻止了STAT3活性的下降.6-OHDA单独作用组STAT3条带相对密度为0.60±0.01,低于1μmol/L EGCG预处理组0.84±0.01,差异具有显著性(P＜0.05).结论 6-OHDA抑制SH-SY5Y细胞STAT3活性,低浓度EGCG(0.1～10μmol/L)对多巴胺能细胞有神经保护作用,EGCG可能通过增加胞浆STAT3磷酸化水平来发挥保护作用.     

EGCG联合顺铂对乏氧人肺腺癌A549细胞凋亡的促进作用

目的探讨EGCG联合顺铂对乏氧人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法采用氯化钴(Co Cl2)建立人肺腺癌A549细胞体外化学乏氧模型,分为乏氧组、EGCG+乏氧组及常氧组。MTT法、光镜下Hoechst染色法、Annexin VFITC/PI双染法测定EGCG单独或联合顺铂时对乏氧A549细胞生长、细胞核形态及凋亡率的影响。结果 200μmol/L Co Cl2乏氧条件下,加入0、25、50、100、150、200 mg/L EGCG作用48 h后,以50 mg/L EGCG为拐点,A549细胞生长抑制率呈EGCG浓度依赖性增加。与0 mg/L EGCG相比,50 mg/L EGCG作用时,部分乏氧A549细胞核形态不规则,染色质固缩、致密浓染,凋亡率由(0.41%±0.14%)增加至(3.15%±0.28%)(P<0.05);顺铂IC50由(107.01±10.19)μmol/L降低至(41.28±3.85)μmol/L(P<0.05);与10μmol/L顺铂联合时,A549细胞凋亡率由(8.12%±0.67%)增加至(13.28%±3.11%)(P<0.05)。结论 EGCG联合顺铂对乏氧A549细胞的凋亡起促进作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对6-OHDA导致的多巴胺能神经细胞损伤的保护作用

目的探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)在神经毒素6-OHDA损伤中的作用及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)预处理的影响,阐明EGCG对神经元的保护作用机制。方法应用100μmol/L6-OHDA处理的多巴胺能神经细胞SH-SY5Y细胞作为体外细胞模型,用不同浓度的EGCG预处理该细胞模型后,应用MTT和3H-TdR掺入实验来检测EGCG对多巴胺能细胞活性的影响。应用West-ern Blot方法检测EGCG对SH-SY5Y细胞内STAT3蛋白表达的影响。结果100μmol/L6-OHDA引起SH-SY5Y细胞生存率下降(对照组的50%),预先应用EGCG(0.1～400μmol/L)处理细胞1h,低浓度EGCG(0.1～10μmol/L)浓度依赖性的对抗6-OHDA引起的SH-SY5Y细胞生存率下降(对照组的54%～75.4%),但高浓度EGCG(20～400μmol/L)加重了6-OHDA的损害作用,引起细胞生存率(对照组的15.3%～21.4%)进一步下降。100μmol/L6-OHDA处理细胞2h引起SH-SY5Y细胞胞浆STAT3活性(STAT3磷酸化水平)明显下降,1μmol/LEGCG预处理15min有效地阻止了STAT3活性的下降。6-OHDA单独作用组STAT3条带相对密度为0.60±0.01,低于1μmol/LEGCG预处理组0.84±0.01,差异具有显著性(P<0.05)。结论6-OHDA抑制SH-SY5Y细胞STAT3活性,低浓度EGCG(0.1～10μmol/L)对多巴胺能细胞有神经保护作用,EGCG可能通过增加胞浆STAT3磷酸化水平来发挥保护作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯乙基化衍生物Y6对耐阿霉素人肝癌细胞丝裂原活化蛋白激酶通路的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)乙基化衍生物Y₆在逆转耐阿霉素(DOX)人肝癌细胞耐药过程中对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)途径的影响。方法 将对数生长期的耐DOX人肝癌细胞BEL-7404/DOX随机分为空白对照组、DOX组、DOX+维拉帕米(VER)组、DOX+EGCG组、DOX+低剂量Y₆组和DOX+高剂量Y₆组,空白对照组不加任何药物,DOX组加入终浓度为10μmol·L^-1的DOX,DOX+VER组加入终浓度为10μmol·L^-1的DOX和10μmol·L^-1的VER,DOX+EGCG组加入终浓度为10μmol·L^-1的DOX和10μmol·L^-1的EGCG,DOX+低剂量Y₆组加入终浓度为10μmol·L^-1的DOX和10μm...     

EGCG对丙烯酰胺致小脑颗粒神经元损伤影响的析因分析

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对丙烯酰胺(ACR)致小脑颗粒神经元(CGNs)损伤的影响。方法:采用体外细胞培养的方法,培养的CGNs经不同浓度EGCG(5、10、25、50、100、200μmol/L)分别预处理0、24、48 h后,加入ACR(5 mmol/L)染毒24 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,采用析因方差分析判断不同剂量、不同时间的EGCG在拮抗ACR毒性上是否存在交互作用。结果:与正常对照组比较,ACR损伤组细胞存活率明显下降,差异有统计学意义;在EGCG 6个剂量拮抗组中,25、50μmol/L组有较好的拮抗ACR毒性的效果,其细胞存活率较其余组差异有统计学意义;EGCG拮抗ACR所致CGNs损伤没有时间、剂量的交互作用。结论:EGCG拮抗ACR的毒性没有剂量、时间上的交互作用,在一定浓度范围内EGCG对ACR诱导CGNs的损伤具有保护作用。     

PGE2-EP1信号转导通路在肝细胞癌中的作用及表没食子儿茶素没食子酸酯对其的影响

目的观察肝细胞癌(HCC)患者血清中前列腺素E2(PGE2)水平及前列腺素E受体(EP1)在HCC细胞和人肝细胞中的表达,分析PGE2及EP1激动剂ONO-DI-004对HCC增殖和移行的相关性,研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对PGE2或ONO-DI-004刺激的HCC的抑制作用及对HCC细胞周期、凋亡、PGE2、EP1和Bcl-2表达的影响,初步探讨EGCG抗HCC的作用靶点和机制。方法HepG2细胞设置组别为:对照组、PGE2(0、4、40、400、4 000、40 000 nmol/L)组、EGCG(12.5、25、50、100μg/ml)组、PGE2(4、40、400、4 000)+EGCG(100μg/ml)组、ONO-DI-004(4、40、400、4 000nmol/L)组、ONO-DI-004+EGCG(100μg/ml)组、ONO-8711(210 nmol/L,1、5、10μmol/L)组。MTT法检测HepG2的增殖;细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测HepG2的移行;Western blot法和免疫荧光实验检测HepG2中EP1、Gq和Bcl-2蛋白的表达;酶联免疫分析法检测HCC患者血清PGE2及HepG2产生PGE2和血管内皮生长因子(VEGF)的水平;流式细胞技术检测HepG2细胞周期和凋亡。结果与正常志愿者血清中的PGE2水平比较,HCC患者的血浆中PGE2的水平呈高表达。与对照组相比,EGCG(12.5、25、50、100μg/ml)显著降低HepG2中PGE2和VEGF水平。EP1在肝癌细胞株MHCC-97L和HepG2中的表达明显高于在人肝细胞株L02中的表达。EGCG(100μg/ml)能显著抑制EP1受体以及ONO-DI-004诱导的Bcl-2的表达(P<0.01)。观察EGCG(12.5、25、50、100μg/ml)作用于HepG2后对细胞的增殖作用,100μg/mlEGCG对HepG2作用24 h后可显著抑制HepG2的生长(P<0.01),细胞的平均抑制率为41%。24 h的药物浓度与抑制率具有相关性(r=0.8,P=0.02)。EGCG对HepG2具有显著抑制作用。细胞划痕实验和Transwell侵袭实验观察PGE2(4μmol/L)和ONO-DI-004(400 nmol/L)刺激后,HepG2移行较对照组明显增加,EGCG和ONO-8711均能显著抑制HepG2移行,且给予EGCG(100μg/ml)后可显著降低PGE2和ONO-DI-004刺激的HepG2的移行(P<0.01)。流式细胞术检测细胞凋亡率,HepG2经ONO-DI-004(400 nmol/L)、PGE2(4μmol/L)、EGCG(100μg/ml)、EGCG(100μg/ml)+ONO-DI-004(400 nmol/L)以及EGCG(100μg/mL)+PGE2(4μmol/L)作用24 h,对照组的细胞凋亡率为(2.36±2.51)%,EGCG(100μg/ml)处理组的凋亡率为(16.8±1.73)%,EGCG(100μg/ml)处理组与对照组的细胞凋亡率相比差异有显著性(P<0.01)。ONO-DI-004(400 nmol/L)处理组的凋亡率为(0.6±1.86)%,EGCG(100μg/ml)+ONO-DI-004(400 nmol/L)处理组的凋亡率为(12.25±2.64)%,两组间的差异具有显著性(P<0.01)。EGCG(100μg/ml)可显著诱导HepG2细胞的凋亡,对PGE2、ONO-DI-004刺激的HepG2细胞也有明显的促凋亡作用。结论①HCC患者血清中PGE2表达异常升高,提示PGE2在HCC患者中发挥重要作用;②HCC细胞株中EP1表达较正常肝细胞异常升高,PGE2可能通过EP1发挥促HCC作用;③EGCG呈浓度依赖性抑制由PGE2和ONO-DI-004刺激引起的HepG2的增殖和转移,抑制HCC异常增殖、移行、细胞周期,诱导凋亡是EGCG的重要作用;④EGCG抑制HepG2产生VEGF和PGE2,降低EP1及ONO-DI-004刺激的Bcl-2的表达,但对Gq蛋白的表达没有影响,降低PGE2和VEGF水平、下调EP1和Bcl-2的表达是EGCG抑制HCC增殖和移行、诱导凋亡的重要机制之一。     

芝麻酚对体外培养人结肠癌HCT-8细胞的影响及其机制

目的：探讨芝麻酚对体外培养人结肠癌HCT-8细胞的影响及其机制。方法：体外培养人结肠癌HCT-8细胞,分为对照组、芝麻酚50μmol/L组、芝麻酚100μmol/L组和芝麻酚250μmol/L组共4组,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测各组不同作用时间细胞增殖率,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测各组Janus激酶2/信号转导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路相关蛋白、增殖相关蛋白和凋亡相关蛋白表达水平。结果：经芝麻酚处理24、48、72 h后,HCT-8细胞的OD值从高到低依次为对照组>芝麻酚50μmol/L组>芝麻酚100μmol/L组>芝麻酚250μmol/L组,HCT-8细胞的抑制率从低到高依次为对照组<芝麻酚50μmol/L组<芝麻酚100μmol/L组<芝麻酚250μmol/L组,差异有统计学意义（P<0.05）;经芝麻酚处理后HCT-8细胞凋亡率从低到高依次为对照组<芝麻酚50μmol/L组<芝麻酚100μmol/L组<芝麻酚250μmo...     

二氮嗪干预氧化应激介导的INS-1细胞KATP通道作用机制的研究

目的研究二氮嗪(diazoxide,DIZ)干预氧化应激对INS-1细胞ATP敏感性钾通道(Adenosine triphosphate-sensitive potassium channels,KATP channels)SUR1亚基基因的表达影响。方法将INS-1细胞株分为:①氧化应激组:将50、100、200、400μmol/L H2O2分别加入各瓶细胞中培养3 h;②二氮嗪干预组:加入50μmol/L二氮嗪培养INS-1细胞30 min后,加入400μmol/L H2O2,继续培养3 h;③牛磺酸干预组:加入1 mmol/L牛磺酸培养INS-1细胞30 min后,加入400μmol/L H2O2,继续培养3 h;④空白对照组:不加二氮嗪、牛磺酸及H2O2,其他培养条件相同。MTT检测氧化应激组细胞存活率、Elisa检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)、Western blot分别检测3组各SUR1亚基蛋白的表达。结果 H2O2处理INS-1细胞3 h与对照组相比较后50μmol/L组细胞存活率(105.27±3.83)%稍升高(P<0.05),200μmol/L组、400μmol/L组细胞存活率分别为68.66%和51.67%均显著降低(P<0.05、P<0.01);与对照组(112.87±9.28)mU/L相比较,50μmol/L H2O2组GSIS量(118.47±10.15)mU/L升高(P<0.05);200μmol/L组(85.79±7.03)mU/L、400μmol/L组(64.59±4.53)mU/L细胞均显著降低(P<0.05,P<0.01);不同浓度H2O2培养INS-1细胞3 h后SUR1亚基蛋白的表达50μmol/L组较正常组有升高(P<0.05),100μmol/L H2O2组较正常组无统计学差异,200、400μmol/L组比对照组明显升高(P<0.05);二氮嗪干预组SUR1亚基蛋白表达比对照组显著升高(P<0.01),牛磺酸干预组与对照组比较无明显升高(P>0.05)。结论低浓度H2O2可以促进细胞增殖与胰岛素分泌,中、高浓度H2O2抑制细胞增殖与胰岛素分泌,二氮嗪抑制细胞KATP通道SUR1亚基的表达,可能是通过抑制线粒体呼吸链电子转运抑制ROS的释放,减轻细胞氧化应激的程度。     

溶血卵磷酯对人内皮细胞CD73的调节

【目的】探讨溶血卵磷脂（LPC）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）胞外5′-外核苷酸酶CD73的调节作用。【方法】将已汇聚HUVEC的细胞培养皿分为3组：①对照组：培养皿中仅加入乙烯-单磷酸腺苷（eAMP,5μmol/L）;②LPC组：培养皿中在加入eAMP（5μmol/L）前加入LPC10μmol/L;③AOPCP组：培养皿中加入eAMP（5μmol/L）前加入胞外5′-外核苷酸酶抑制剂α,β-甲基腺苷-5′-二磷酸（AOPCP,50μmol/L）及LPC10μmol/L。在试验第15、30、45min时以高性能液相色谱仪（HPLC）测定各培养皿中乙烯-腺苷（eAD）含量。【结果】在上述3个时间点LPC组eAD生成较对照组显著增高（P〈0.05）,而AOPCP组较对照组显著减少（P〈0.001）。【结论】①HUVEC细胞外存在腺苷分泌;②采用eAMP的细胞培养皿试验模型可很好地观察CD73活性,可用于CD73活性研究;③LPC可兴奋HUVEC细胞外5′-核苷酸酶,增加腺苷的分泌。     

EGCG对体外培养胚鼠皮层神经细胞的保护作用

目的观察表没食子儿茶酚没食子酸酯(EGCG)对体外培养的胚鼠皮层神经细胞生长的影响。方法离体培养昆明种小鼠胚鼠大脑皮层神经细胞,至第5天加入不同浓度的EGCG(1、5、10、20、40、60、80和100μmol/L),通过倒置相差显微镜和NSE免疫细胞化学染色法进行神经元形态观察,应用中性红比色法和MTT法测定神经细胞的存活数和细胞活性。结果EGCG实验组培养48h后,与对照组比较,能明显促进神经细胞存活及突起生长,可增加神经细胞的存活数,提高神经细胞内酶的活性,尤其在10～40μmol/L的浓度范围内差异较显著(P<0.01)。结论在5～100μmol/L的浓度范围内,EGCG均有一定的促细胞生长作用,可增加神经细胞的存活数,提高神经细胞内酶的活性。     

氯化两面针碱促进骨髓瘤细胞凋亡的机制研究

目的 探究氯化两面针碱促进骨髓瘤细胞凋亡的机制。方法 将人多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI 8226培养至对数生长期,采用CCK-8法检测细胞活性并测定半数抑制浓度(IC₅₀)。将MM细胞株RPMI8226随机分为空白组、硼替佐米(BTZ)组、氯化两面针碱(NCe)组和BTZ+NCe组。BTZ组加入500μL10 nmol/L BTZ溶液,参照IC₅₀在NCe组加入500μL 4.5μmol/L NCe,BTZ+NCe组加入250μL 10 nmol/L BTZ和250μL 4.5μmol/L NCe,继续培养24 h。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting检测各组细胞STK4、YAP1、Cl-caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果 与空白孔相比,其余各孔的细胞存活率均降低(P <0.05);与0μmol/L NCe孔比较,1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L NCe孔的细胞存活率均降低(P <0.05)。孵育24 h的IC_50<...     

5-羟色胺对人胎盘滋养细胞L-型钙通道的影响

目的探讨5-羟色胺对胎盘滋养细胞钙通道的影响。方法将体外培养的胎盘滋养细胞分为对照组和低(1.0μmol/L)、高(10.0μmol/L)浓度5-羟色胺组。采用全细胞膜片钳实验方法,在待测胎盘滋养细胞外液中分别加入Nimodpine(10μmol/L)、Flunarizne(10μmol/L)和替曲朵辛(TTX10μmol/L),进行电流检测;同样的实验条件和方法,在待测胎盘滋养细胞外液中分别加入5-TH(1μmol/L和10μmol/L),测试电流值;在细胞外液中分别加入5-TH(1μmol/L)和Nimodpine(10μmol/L)、5-TH(10μmol/L)和Nimodpine(10μmol/L)后再检测电流。结果胎盘滋养细胞L-型钙通道开放在-60～-50mV之间,最大峰值电流在-40～-30mV为82.31±6.46(pA)。加入Nimodpine(10μmol/L),可阻断此电流大部分成份。Flunarizne(10μmol/L)和TTX(10μmol/L)不能抑制该电流成份。加入5-TH(1μmol/L和10μmol/L)峰值电流明分别为104.77±10.84(pA)和117.16±9.67(pA),与对照组相比有显著差异(P0.05);加入5-TH(1μmol/L)和Nimodpine(10μmol/L)、5-TH(10μmol/L)和Nimodpine(10μmol/L)后,峰值电流分别为85.35±6.54(pA)、89.42±7.62(pA),与对照组相比无显著差异(P0.05)。结论5-TH可激动胎盘滋养细胞L-型钙通道,促使钙电流值增加。     

右美托咪定对氧糖剥夺再复氧下Huvecs的保护机制

目的 探讨右美托咪定(DEX)预处理对氧糖剥夺再复氧条件下人脐静脉内皮细胞(Huvecs)的保护机制.方法 人工培养Huvecs,实验分为2部分,氧糖剥夺前细胞分3组:对照组(NC组)、DEX组、DEX+育亨宾(YHB)组.DEX组、DEX+YHB组加入50μmol/L的DEX和100μmol/L的YHB处理细胞2 h...     

表没食子儿茶素没食子酸酯对丙烯酰胺致小脑颗粒神经元凋亡的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对丙烯酰胺(ACR)致小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的保护作用。方法:体外培养的CGNs经不同浓度EGCG(5,10,25,50,100μmol/L)预处理48h后,加入ACR(5mmol/L)染毒24 h,用四甲基偶氮唑盐(M)比色法检测细胞存活率,测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)的含量,Hochst33342荧光显微镜染色观察凋亡时细胞核形态的变化,RT-PCR检测细胞bcl-2 mRNA与bax mRNA表达情况。结果:同ACR损伤组比较,终浓度为10,25,50μmol/L的EGCG能减轻ACR引起的CGNs的损伤,明显提高细胞的存活率(P<0.05),SOD活性增高,MDA含量降低。Hoechst33342染色发现细胞核固缩、致密浓染现象较ACR损伤组改善明显,bcl-2mRNA表达增强,bax mRNA表达减弱,bcl-2/bax比值降低(P<0.05),25μmol/LEGCG组保护效果最佳(P<0.01),而终浓度为100μmol/LEGCG组无明显保护作用。结论:EGCG在一定剂量范围内对ACR引起的CGNs凋亡有保护作用。     

辣椒素通过上调MTSS1表达抑制结肠癌细胞侵袭、迁移的实验研究

目的 探究辣椒素通过上调肿瘤转移抑制因子1(MTSS1)抑制结肠癌细胞侵袭、迁移的机制。方法 实验1:10、25、50、100μmol/L辣椒素组分别加入终浓度为10、25、50、100μmol/L辣椒素,对照组不添加辣椒素,恒温箱中培养24 h;实验2:对照组正常培养,100μmol/L辣椒素组添加终浓度为100μmol/L辣椒素,100μmol/L辣椒素+对照siRNA组、100μmol/L辣椒素+MTSS1 siRNA组在100μmol/L辣椒素组的基础上分别添加终浓度为50 nmol/L对照siRNA、MTSS1 siRNA,转染4 h更换为终浓度100μmol/L辣椒素培养液。CCK8检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭情况;划痕实验检测细胞迁移情况;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中辣椒素受体(TRPV1)、MTSS1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白水平。结果 不同浓度辣椒素处理细胞发现,与对照组相比,25、50、100μmol/L辣椒素组细胞增殖抑制率升高,10、25、50、100μmol/L辣椒素组细胞中TRPV1、MTSS1...     

EGCG拮抗鱼藤酮致PC12细胞凋亡的研究

目的:探讨表没食子儿茶素(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对PC12细胞的保护作用及机制。方法:采用鱼藤酮(1μmol/L)处理PC12细胞24 h,建立帕金森病细胞模型;EGCG(5μmol/L)预处理PC12细胞30 min。采用CCK-8测定细胞活力;Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测细胞凋亡率;检测Caspase-3酶活性和线粒体膜电位,并检测Bcl-2表达。结果:1μmol/L鱼藤酮处理后,细胞活力为(38.5±4.3)%,细胞凋亡率为37.7%,DHE和DHR123荧光强度均明显增加,分别为正常组的231%和335%,线粒体膜电位为正常组的45%,caspase-3活性为正常组的145%,Bcl-2表达显著下调。而5μmol/L EGCG预处理后,细胞活力为(69.6±5.6)%,细胞凋亡率降至21.4%,DHE和DHR123荧光强度分别为正常组的178%和287%,线粒体膜电位为正常组的57%,caspase-3活性为正常组的120%,Bcl-2表达上调,与鱼藤酮组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:EGCG对PC12细胞具有保护作用,保护机制与其抗氧化活性及抗凋亡有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对稳定表达淀粉样前体蛋白的SH-SY5Y细胞抗炎抗凋亡作用研究

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)对稳定表达淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)的SH-SY5Y细胞抗炎抗凋亡的保护作用.方法 将SH-SY5Y细胞分为对照组、模型组(稳定表达APP的细胞)和EGCG组(APP+10、20、30 μmol/L的EGCG).免疫荧光细胞化学法观察APP在各组细胞中表达;MTT法检测细胞存活能力;TUNEL法检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测Bax、Bcl-2和Caspase-3表达;ELISA法测定IL-6和TNF-α浓度.结果 模型组中,APP高表达;与模型组比较,给予20 μmol/L EGCG的EGCG组明显提高SH-SY5Y细胞的存活率,减少细胞凋亡数目,下调Bax/Bcl-2比例及Caspase-3 mRNA表达,减少IL-6和TNF-α浓度.结论 EGCG对稳定表达APP的SH-SY5Y细胞有一定保护作用,可能是通过抗炎以及减少细胞凋亡发挥治疗作用.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞T型钙通道及其信号转导通路的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞Cav3.1表达的影响及其作用机制.方法 酶消化法原代培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,应用第5代传代细胞,实验随机分为7组:对照组(不加任何药物)、AngⅡ组[加入AngⅡ(0.1μmol/L)培养24 h]、AngⅡ+氯沙坦钾组[加入氯沙坦钾(1μmol/L)培养1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、AngⅡ+PD98059组[加入PD98059(10 μmol/L)预刺激1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、PD98059组[加入PD98059(10 μmol/L)培养1h]、AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组[先加入氯沙坦钾(1μmol/L),PD98059(10 μmol/L)培养1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、氯沙坦钾组[加入氯沙坦钾(1μmol/L)培养4h].RT-PCR、Western blot方法测定各组T型钙通道的表达.结果 PCR结果显示:与对照组(1.000±0.315)比较,AngⅡ组Cav3.1表达量(17.930±0.954)明显增加(P＜0.01);PD98059组、氯沙坦钾组Cav3.1表达量为0.928±0.262、0.978±0.292,与对照组比较差异无统计学意义(P＞ 0.05);AngⅡ+氯沙坦钾组、AngⅡ+PD98059组、AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组的Cav3.1表达量分别为0.125±0.007、0.066±0.015、0.109±0.018,明显低于AngⅡ组(P＜0.01).Western blot结果显示:与对照组比较,AngⅡ+氯沙坦钾组、AngⅡ+PD98059组及AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组Cav3.1蛋白表达明显降低(P＜0.05);而PD98059组及氯沙坦钾组Cav3.1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AngⅡ通过Ras/PKCξ/MEK/ERK 1/2路径增加血管平滑肌细胞Cav3.1的表达.     

金属铬离子及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸对人成骨样细胞MG63形态学的影响

目的 研究金属铬离子(Cr6 )对人成骨样细胞MG63形态学的影响以及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对Cr6 作用的拮抗效应.方法 分别用含5μmol/L Cr6 、10μmol/L Cr6 、20μmol/L Cr6 、2mmol/L NAC以及2mmol/L NAC 10μmol/L Cr6 的F12培养基培养人成骨样细胞MG63 24h.其中,2mmol/L NAC 10μmol/L Cr6 组为2mmol/L NAC预处理细胞30min后再用含10μmol/L Cr6 的F12培养基继续培养24 h.另设空白对照组,即用不含Cr6 和NAC的F12培养基培养MG63细胞.倒置相差显微镜和透射电镜分别观察各组细胞形态和细胞超微结构的改变.结果 低浓度Cr6 处理组(5μmol/L Cr6 )MG63细胞伪足回缩,细胞间隙增大,细胞线粒体肿胀,粗面内质网扩张,胞浆出现少量空泡;随着Cr6 浓度的增高(10μmol/L Cr6 ),细胞逐渐变圆,脱壁,细胞内出现大量空泡,细胞核异形性大,染色质固缩,出现假包涵体;高浓度Cr6 处理组(20μmol/L Cr6 )MG63细胞大部分脱壁,细胞超微结构改变更明显,胞膜不完整,细胞出现崩解,可见细胞碎片;NAC单独处理组与NAC Cr6 处理组细胞形态结构与对照组相比均无明显改变.结论 Cr6 对人成骨样细胞MG63形态结构有明显的破坏,且随着Cr6 浓度的增高,破坏程度加剧;NAC可抑制Cr6 引起的MG63细胞形态学改变.