染料木黄酮对油酸诱导脂肪变HepG2细胞PPARα表达和糖脂水平的影响

目的研究染料木黄酮(genistein,Gen)对油酸(oleic acid,OA)诱导脂肪变HepG2细胞的过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferators-activated receptorα,PPARα)蛋白表达和糖、脂代谢水平的影响。方法将HepG2细胞在含有0⁵0?mol/L的Gen,0.5mmol/L的OA的培养基内,且设置对照组,培养24h后收集细胞,分别采用蛋白质印迹法(Western blotting)、酶法、选择性沉淀法测定PPARα、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量;收集培养基上清液,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定葡萄糖消耗量。结果浓度为1050?mol/L的Gen,0.5mmol/L的OA的培养基内,且设置对照组,培养24h后收集细胞,分别采用蛋白质印迹法(Western blotting)、酶法、选择性沉淀法测定PPARα、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量;收集培养基上清液,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定葡萄糖消耗量。结果浓度为10⁵0?mol/L的Gen可以减轻HepG2细胞脂肪变的程度,总体上呈现剂量效应关系。Gen各组与模型组比较,高浓度的Gen(50?mol/L)可有效提高OA诱导脂肪变HepG2细胞内PPARα和HDL-C含量,降低TC和葡萄糖消耗量,但低浓度的Gen(1050?mol/L的Gen可以减轻HepG2细胞脂肪变的程度,总体上呈现剂量效应关系。Gen各组与模型组比较,高浓度的Gen(50?mol/L)可有效提高OA诱导脂肪变HepG2细胞内PPARα和HDL-C含量,降低TC和葡萄糖消耗量,但低浓度的Gen(10³0?mol/L)对细胞内TC和HDL-C作用不明显。结论高浓度Gen能改善OA诱导的脂肪变HepG2细胞内的糖脂代谢情况,并可能与PPARα表达有关。[营养学报,2014,36(1):49-52]     

染料木黄酮对脂肪变HepG2细胞甘油三酯水平和Lipin 1表达的影响

目的 研究染料木黄酮(genistein,Gen)对油酸(oleic acid,OA)诱导的脂肪变HepG2细胞胞核内Lipin1水平以及培养基和胞浆内甘油三酯水平的影响.方法 在HepG2细胞中分别或联合加入0～640μmol/L的Gen,0～2.0 mmol/L的OA干预,用MTT法测定细胞活性,以确定适宜的OA建模和Gen的干预浓度.之后,采用OA建立HepG2细胞脂肪变模型,用Gen干预24h,收集培养基上清和细胞分别测定甘油三酯水平,Western blot检测胞核Lipin1的表达.结果0.5 mmol/L OA为造模最佳干预浓度,可同时提高培养基和细胞中甘油三酯的含量,10～50 μmol/L的Gen可以减轻HepG2细胞脂肪变的状态,并且呈现剂量效应关系(P＜0.05),同时,胞核内Lipin1水平增加(P＜0.05).结论 Gen能抑制OA诱导的HepG2细胞脂肪变,并可能与Lipin1的核转移有关.     

染料木黄酮对HepG2细胞胆固醇代谢和SREBP-2通路的调控作用

目的探讨染料木黄酮（Gen）对HepG2人肝癌细胞胆固醇代谢和SREBP-2通路的调节作用。方法体外培养HepG2细胞,将HepG2细胞在含有0、0．01、0．10、1．00、10．00、50．00、100．00μmol／LGen的培养液内分别培养24、48、72h后,用MTT法检测细胞增殖活性。用分别含0、0．01、1．00、10．00、50．00μmol／LGen的完全培养液培养HepG2细胞24h,收集细胞,分别进行细胞内总胆固醇（TC）含量检测、实时荧光定量PCR检测细胞低密度脂蛋白受体（ldlr）、3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（hmgcr）基因的mRNA表达和蛋白印迹法检测核转录因子SREBP-2的表达。结果0．01、0．10、1．00、10．00、50．00、100．00μmol／LGen分别作用于HepG2细胞24h,0．01、0．10、1．00μmol／LGen组细胞增殖率高于溶剂对照组（均P〈0．05）;作用48、72h,1．00、10．00、50．00、100．00μmol／LGen组细胞增殖率均低于溶剂对照组（均P〈0．05）。1.00、10．00、50．00μmoL／LGen与HepG2细胞共同孵育24h,HepG2细胞内TC水平分别为（1．81±0．15）、（2．29±0．17）、（2．88±0．08）mmol／L,均高于对照组[（1．44±0．17）mmol／L],且随着Gen浓度升高,呈增加趋势（R2=0．48,P〈0．01）;各Gen实验组的hmgcr和ldlr基因的mRNA表达水平随着Gen浓度升高而升高（R2分别为0．53、0．79,均P〈0．01）。1．00、10．00、50．00μmol／LGen组蛋白表达灰度值均高于对照组（均P〈0．01）。结论染料木黄酮能够调节细胞内胆固醇的代谢,其作用机制可能与调控SREBP-2通路有关。     

染料木黄酮对MDA-MB-453乳腺癌细胞VEGF表达的影响

目的:观察染料木黄酮(genistein,Gen)对MDA-MB-453乳腺癌细胞血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响,探讨Gen抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法:5×10-5mol/LGen处理MDA-MB-453细胞24、48、72h后,应用免疫组织化学、Westernblot及RT-PCR法检测MDA-MB-453乳腺癌细胞VEGF的表达变化。结果:Gen处理MDA-MB-453细胞24、48、72h后,VEGF的mRNA和蛋白表达量随着处理时间的延长逐渐下降。结论:Gen能在转录和翻译水平下调HER-2/neu高表达乳腺癌细胞VEGF的表达,这可能是Gen抑制HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的机制之一。     

染料木黄酮对MCF-7细胞肿瘤相关基因表达的影响

目的:用基因芯片技术观察染料木黄酮(genistein,GS)对雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7肿瘤相关基因表达的影响。方法:75×10-6mol/LGS对MCF-7细胞处理72h,收集细胞并提取总mRNA,用Cy5和Cy3两种荧光染料通过逆转录反应将mRNA分别标记成两种探针,与载有一组靶基因的人肿瘤相关基因表达谱芯片杂交、经计算机扫描分析得出GS处理后的差异表达基因。结果:筛选出包括与细胞增殖、细胞凋亡、雌激素反应等相关的差异表达基因共22条(7.3%,22/300)。18个下调基因(占81.8%)主要是促进细胞增殖活力的原癌基因和与肿瘤细胞逃逸、扩散有关的肿瘤细胞表面抗原基因;4个上调基因均为雌激素反应性基因。结论:GS所影响的基因多与细胞增殖和肿瘤细胞免疫逃逸调节有关,调节此类基因的表达可能是GS发挥抗癌防癌作用的主要机制;GS上调的4个基因均属于雌激素上调基因,表明GS与雌激素受体结合后,除产生抗雌激素样效应外,还能激活雌激素反应元件而表现一定的雌激素效应。     

染料木黄酮对成骨细胞活性的影响

目的研究染料木黄酮对成骨细胞活性的影响,探索预防骨质疏松的机制。方法胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分步消化法获得乳鼠颅盖骨成骨细胞,二代细胞用于实验。在成骨细胞培养基中加入染料木黄酮(×10-5、×10-6、×10-7mol/L)培养48 h和72 h后,采用MTT和3H-TdR测定成骨细胞增殖,原位杂交方法测定c-fos表达。结果培养48 h后,×10-5、×10-6、×107mol/L染料木黄酮组MTT吸光度值与对照组比较,分别增加了105%、136%、143%;培养72 h后,染料木黄酮3个剂量组与对照组比较,分别增加了93%、113%、146%,差异均有显著性(P<0.05)。同时3H-TdR掺入量均显著增加(P<0.05),各组c-fos表达差异无显著性。结论染料木黄酮可促进成骨细胞的增殖与分化。     

染料木黄酮对人成骨细胞凋亡的影响

目的: 观察染料木黄酮(Gen)对人成骨细胞凋亡的影响。方法: 将体外分离到的人骨膜成骨细胞在高糖DMEM(含10 %小牛血清)中进行纯化扩增至第三代,然后接种于无酚红高糖DMEM培养液中(含10 %经活性碳-葡聚糖苷处理的胎牛血清,CDT-FBS),4 d后用0.25 %的胰蛋白酶消化、收集细胞,用PBS洗涤2次后,用于各项实验。指标包括:流式细胞仪分析细胞凋亡比例,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂条带,免疫组化观察Gen对Bax、Bcl-2及caspase-3表达的影响。结果: 无雌激素(E2)血清培养可诱导成骨细胞发生凋亡(45.7 %),加入10-8 mol/L E2、10-6 mol/L 和10-5 mol/L Gen对细胞处理48 h,成骨细胞凋亡率分别降低到15.3 %、36.3 %及28.4 %(P<0.05)免疫组化结果表明,同E2类似,Gen可抑制Bax和capsase-3的表达,而促进Bcl-2蛋白的表达。结论: 染料木黄酮可能是通过影响雌激素受体途径而发挥其骨保护作用的。     

染料木黄酮对ox-LDL诱导人静脉平滑肌细胞MCP-1表达的影响

目的: 研究染料木黄酮(Gen)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉血管平滑肌细胞(hUVSMC)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA和蛋白表达的影响。方法: 以hUVSMC为对象,采用逆转录聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验观察不同浓度Gen(1.0×10-5、3.0×10-5、9.0×10-5 mol/L)对ox-LDL诱导的MCP-1 mRNA和蛋白表达的影响。结果:三种浓度的Gen均能明显降低ox-LDL诱导的hUVSMC MCP-1mRNA 和蛋白的表达,且高剂量与生理浓度的17b-雌二醇有相近的作用。结论:染料木黄酮能下调ox-LDL诱导的hUVSMC MCP-1mRNA和蛋白的表达,这可能是染料木黄酮抗动脉粥样硬化的重要机制之一。     

染料木黄酮对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子、腺苷酸激活蛋白激酶磷酸化的影响

目的研究染料木黄酮(genistein,Gen)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症因子产生和腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)磷酸化的影响。方法体外培养RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞,加入1、5、10、50、100 mol/L的Gen共同培养,MTT法检测其对细胞活性的影响。将RAW264.7细胞随机分为4组:空白对照组不加任何药物,模型组加入终浓度为1 g/ml的LPS进行刺激,Gen高、低剂量组分别加入终浓度为10、5 mol/L的Gen预处理1h后,再加入终浓度为1 g/ml的LPS刺激,24h后收取细胞上清用酶联免疫(ELISA)方法检测TNF-α、IL-6含量,Westernblot检测AMPKα蛋白及其磷酸化的表达水平。结果 100 mol/L的Gen对体外培养RAW264.7细胞的增殖有影响,而其他浓度则无。LPS处理的RAW 264.7细胞与对照组比较,TNF-α、IL-6生成显著增多(P<0.01)、AMPKα磷酸化水平显著降低(P<0.01),而AMPKα总蛋白表达水平无差异(P>0.05)。Gen干预可减少LPS诱导的TNF-α、IL-6生成,上调AMPKα磷酸化水平的表达,与LPS组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 Gen能抑制LPS诱导巨噬细胞的炎症反应,减少TNF-α、IL-6生成,这可能与Gen促进AMPKα磷酸化,从而激活AMPKα有关。     

染料木黄酮的诱变性研究

目的检测和评价染料木黄酮的诱变性,为其安全应用提供毒理学依据。方法采用小鼠淋巴瘤细胞实验(微孔板法)评价染料木黄酮的诱变性,诱变性检测采用3h和24h染毒两种处理方式观察受试物对L5178Y细胞的诱变性。结果在染料木黄酮诱变性检测中,3h染毒时,随着剂量增加,tk位点总突变频率升高,5、10和20μg/mL剂量组tk位点总突变频率与溶剂对照组比较差异有统计学意义(P0.01);24h染毒时,随着剂量增加,tk位点总突变频率升高,与溶剂对照组比较,5、10μg/mL剂量组tk位点总突变频率高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P0.01);3h染毒和24h染毒相同剂量组间比较,tk位点总突变频率差异无统计学意义(P0.05)。结论在此实验条件下,染料木黄酮(5~20)μg/mL能诱导L5178Y细胞TK基因突变,并呈良好的剂量反应关系,但3h和24h处理的突变频率差异无统计学意义(P0.05)。     

木黄酮对MCF-7/HER-2细胞uPA表达影响

目的探讨植物化学物质染料木黄酮(genistein)抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法采用基因转染技术建立HER-2/neu高表达MCF-7乳腺癌细胞(命名为MCF-7/HER-2),5×10-5mol/L染料木黄酮处理MCF-7/HER-2细胞24,48,72 h后,应用western bolt、免疫沉淀、RT-PCR及激酶活性分析法检测genistein对MCF-7/HER-2乳腺癌细胞尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)表达、HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平及蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性变化。结果MCF-7/HER-2细胞uPA的mRNA和蛋白表达量比MCF-7细胞uPA的mRNA和蛋白表达量高,HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平和PTK活性增加,染料木黄酮处理MCF-7/HER-2细胞后,uPA的mRNA和蛋白表达量下调,HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平降低,PTK活性下降,且这种作用具有时效性。结论染料木黄酮能下调MCF-7/HER-2细胞HER-2/neu受体的PTK活性和蛋白磷酸化水平,抑制uPA表达,这可能是染料木黄酮抗乳腺癌血管生成的分子机制之一。     

染料木黄酮对去势大鼠骨代谢的影响

目的:研究染料木黄酮(Gen)对去势大鼠骨代谢的影响。方法:雌性Wistar大鼠47只,随机分为假手术组,去势对照组、去势+雌激素组[己烯雌酚20μg/(kgbw?d)]、去势+Gen组[剂量分别为25、50、100mg/(kgbw?d)]。饲养3个月后处死,测定骨密度(BMD)、股骨形态学参数和血清骨钙素(BGP)及尿中羟脯氨酸(HYPRO)和吡啶酚(PYR)含量。结果:大鼠去势后,股骨BMD降低,骨小梁体积减少、密度降低、间隙增加。与假手术组比均有显著差异,血清BGP与尿中PYR排出量明显高于假手术组,尿中HYPRO含量也有所增加;补充Gen后,股骨BMD有改善的趋势,骨小梁体积增加、厚度和密度增大,BGP含量降低、尿中HYPRO有降低的趋势,而尿中PYR含量明显降低。结论:染料木黄酮可通过抑制骨转换和破骨细胞活性,减少去势大鼠骨量丢失,预防骨质疏松的发生。     

染料木黄酮对γ射线损伤小鼠免疫功能的影响

目的研究染料木黄酮（Genistein，Gen）对^137Cs γ射线照射提高小鼠的免疫功能。方法雄性昆明小鼠补充不同剂量的Gen饲料2周前后经4．0Gy^137Cs γ射线照射，测定其细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫功能指标的变化。结果辐射小鼠的免疫功能明显低于正常小鼠，补充0．8％。Gen可以提高辐射小鼠免疫功能，与照射对照组比，耳廓肿胀率提高49．3％；淋巴细胞增殖指数提高86．8％；血清溶血素提高90．9％；脾脏指数提高23．6％；脾结节数提高32．1％，以上差异均有统计学意义（P〈0．05）。补充Gen可以提高辐射小鼠碳粒廓清指数，但差异不显著；对胸腺指数的影响亦不明显。结论染料木黄酮可以提高辐射小鼠免疫功能。     

维生素K_2和染料木黄酮对去势大鼠骨代谢的作用比较

目的维生素K2和染料木黄酮对去势大鼠的骨代谢作用比较。方法将雌性Wistar大鼠40只随机分为5组:假手术组,去势对照组、去势+雌激素组(己烯雌酚,20μg/kg.d)、去势+维生素K2(25 mg/kg.d)组、去势+染料木黄酮(25 mg/kg.d)组,每组8只。饲养3个月后处死,进行骨密度、骨组织形态学参数、血清骨钙素和尿脱氧吡啶啉含量的测定。结果与假手术组相比,去势组大鼠股骨骨密度显著降低、骨小梁体积和密度减少、骨小梁间隙增大,血清骨钙素和尿脱氧吡啶啉含量明显增高;与去势组相比,维生素K2和染料木黄酮组骨小梁体积和密度增加,股骨骨密度无显著变化;维生素K2组骨小梁间隙减少,而染料木黄酮组无显著变化;维生素K2和染料木黄酮组尿脱氧吡啶啉含量明显降低。结论维生素K2和染料木黄酮通过抑制骨吸收,减少去势大鼠骨小梁骨量丢失,预防骨质疏松的发生。但维生素K2可减少骨小梁间隙,而染料木黄酮无此作用。因此,维生素K2预防骨质疏松作用强于染料木黄酮。     

染料木甙对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的研究染料木甙（Genistin）对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法用H2O2处理诱导体外培养的PC12细胞损伤，并用染料木甙进行保护，显微镜观察细胞形态的改变，LDH法和MTT法检测细胞膜的损伤情况。结果保护组细胞数比损伤组显著增多，受损变圆的细胞数较少，细胞形态明显改善，保护组上清液LDH活性显著低于损伤组（P〈0．01），MTT值显著高于损伤组（P〈0．01）。结论染料木甙对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有显著的保护作用。     

染料木黄酮对去势大鼠骨密度、生物力学和形态学参数的影响

目的　研究染料木黄酮对去势大鼠骨密度、生物力学和形态学参数的影响。方法　将 4 7只雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、去势对照组、去势 +雌激素组 (己烯雌酚每天 2 0 μg kgBW)、去势 +染料木黄酮组 (剂量分别为每天 2 5、5 0、1 0 0mg kgBW )。饲养 3个月后处死 ,测定骨密度、生物力学参数和形态学参数。结果　去势后大鼠骨小梁体积减少 ,平均骨小梁板密度降低 ,平均骨小梁板间隙增加 ,股骨骨密度降低 ,与假手术组相比均有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,但最大应力只有降低的趋势。补充染料木黄酮后 ,骨小梁体积增加 ,平均骨小梁板厚度和密度增大 ;股骨骨密度和最大应力有改善的趋势。结论　染料木黄酮可以减少去势大鼠骨量的丢失 ,预防骨质疏松的发生     

染料木黄酮对体外细胞增殖的抑制作用研究

目的　研究染料木黄酮的抗癌作用及其对正常细胞的毒性大小。方法　观察染料木黄酮对肺癌YTMLC -90、胃低分化腺癌SGC - 790 1、中国仓鼠卵巢CHO细胞株体外增殖和正常人外周血淋巴细胞活性和功能状态的影响。结果　染料木黄酮对正常人外周血淋巴细胞基本无抑制作用 ,而对YTMLC - 90、SGC - 790 1均有抑制作用 ,且随着剂量的增加和时间的延长 ,抑制作用也相应增强 ,其最低有效抑制浓度为 18 5 μmol/L。 结论　染料木黄酮可抑制肿瘤细胞增殖 ,可作为一种较好的防癌抗癌物质在肿瘤的治疗和预防过程中发挥重要的作用。但本研究还发现染料木黄酮对CHO细胞也有一定的抑制作用 ,故对其生物学作用的全面评价有待进一步深入研究     

染料木黄酮的雌激素活性对辐照小鼠免疫功能的影响

目的研究染料木黄酮(genistein,Gen)的雌激素效应对辐射损伤的防护作用,为抗辐射功能食品的开发和对原有辐射防护剂的改进提供实验依据。方法观察应用他莫西芬(ERα阻断剂)和Faslodex(ERβ阻断剂)阻断受照小鼠雌激素受体(ER)活化情况下,Gen对接受4Gy全身照射小鼠血白细胞和淋巴细胞计数、血清溶血素及迟发型变态反应的影响。结果Gen可以降低辐照小鼠的血白细胞和淋巴细胞的减少幅度,增强免疫功能;他莫西芬与Gen合用对小鼠血白细胞和淋巴细胞计数及免疫功能无明显影响,表明他莫西芬不能阻断Gen对辐照的保护作用。Faslodex与Gen合用则仍降低受照小鼠血白细胞和淋巴细胞数量,也抑制免疫功能。表明Faslodex能阻断Gen的保护作用。结论Gen通过激活ERβ途径,增强辐射小鼠的免疫功能。     

叶酸配伍染料木黄酮对神经细胞早期凋亡的影响

目的:观察叶酸和染料木黄酮的单独及联合作用下对神经细胞早期凋亡的影响,并对其可能机制进行探讨。方法:在原代培养的神经细胞中加入环磷酰胺8μg/ml诱导其发生凋亡,在早期凋亡阶段以高、中、低三个浓度的叶酸和染料木黄酮进行单独及联合干预。用流式细胞仪和扫描电镜对凋亡的情况进行观察。结果:1.流式细胞仪检测结果提示:叶酸和染料木黄酮在一定浓度下均可对神经细胞的凋亡产生明显的抑制作用,且在一定的配伍下二者进行联合干预的效果要优于单独干预;2.由扫描电镜对神经细胞早期凋亡阶段所发生膜变化的观察也支持流式细胞仪检测的结果。结论:染料木黄酮可能通过增强叶酸对神经细胞早期凋亡的抑制作用而达到增强叶酸对神经管畸形的预防作用。