可溶性CD100蛋白促进糖尿病小鼠创面愈合的实验研究

目的研究外源性CD100分子对糖尿病小鼠创面愈合的影响。方法在BKS糖尿病小鼠背部制备直径5 mm的圆形创面,术后当天CD100组在每个创面局部皮下注射CD100 250 ng(50滋l),对照组注射PBS,两组均隔天注射直至创面完全愈合。术后隔天拍照,计算创面面积占原始面积比率。HE和Masson染色行组织学检查,CD34免疫组化染色并标记新生血管,CD68染色并标记巨噬细胞。结果由于血痂的影响,CD100组与PBS组相比创面面积无显著差异。组织学结果表明,第7、13、21天CD100组新生表皮与真皮的新生评分显著优于PBS组(P0.05);肉芽组织厚度评分在第7、13天大于PBS组,第21天小于PBS组(P0.05),胶原重塑优于PBS组。在各个时间点CD100组血管化程度优于PBS组(P0.05);炎症状态轻于PBS组(P0.05)。结论局部应用外源性CD100分子,能够通过促进创面的血管化,减轻炎症反应促进糖尿病小鼠创面愈合。     

复方紫归膏促进大鼠创面愈合的实验研究

目的：探讨外用中药复方紫归膏（Compound-ZiGui Cream,CZGC）促进大鼠皮肤创面愈合的作用及机制。方法：取SD大鼠125只,建立大鼠创伤模型。实验分成A、B、C、D、E共5组,每组25只。A组为模型组,B组为京万红对照组,C、D、E组分别为复方紫归膏高、中、低药物浓度剂量组。分别于伤后3、7、10、14天时间点观测创面愈合率、HE常规染色显微镜下新生肉芽组织厚度及其形态学改变情况,最后观测创面平均愈合时间等。结果：B、C、D、E组第7、10、14天创面愈合率均优于A组（P〈0.01）,C、D组第7、10天创面愈合率优于B组（P〈0.05）;B组第7、14天创面愈合率较E组优（P〈0.01）;B、C、D、E创面愈合时间均优于A组（P〈0.01）;C、D组优于B组（P〈0.01）;B组和E组间创面愈合时间无差异（P〉0.05）。伤后第7、10天,B、C、D组肉芽组织厚度均较A组厚（P〈0.01）,E组第7、14天较A组厚（P〈0.05）,B组较E组厚（P〈0.01）。组织病理图像分析,伤后第7天,B、C、D、E组新生毛细血管数、毛细血管总面积、面密度、数密度和周密度较A组均有明显提高（P〈0.05或0.01）,且C、D组作用优于B组（P〈0.05或0.01）。B组优于E组（P〈0.05）。结论：外用中药复方紫归膏能促进皮肤创面愈合,其可能机制是促进新生毛细血管的增殖,促进肉芽组织生长。     

海藻酸钙敷料对大鼠创面愈合影响的组织学研究

目的：探讨海藻酸钙敷料对大鼠创面愈合的影响。方法：48只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组24只。制作大鼠背部全层皮肤缺损模型,在创面局部以海藻酸钙敷料（实验组）或干棉纱布（对照组）包扎,观察伤后3、7、14 d创面愈合率的变化;于伤后3、7、14 d取创面组织,石蜡包埋、切片、分别行HE和Masson染色,计算血管横断面面积与肉芽组织面积的比值、肉芽组织厚度和胶原蛋白含量（胶原面积与创面面积比值）。结果：术后第3天时实验组大鼠较对照组创面愈合率明显增加（P〈0.05）。术后第3天实验组与对照组肉芽组织厚度[分别为（1 540.0±118.5）μm和（1 504.6±131.8）μm,P〉0.05]和新生肉芽组织血管面积与肉芽组织面积之比[分别为0.118±0.007和0.113±0.007,P〉0.05）差异均无显著性,但术后3 d实验组胶原蛋白面积较对照组明显增多[分别为（45.7±5.3）%和（11.6±2.5）%,P〈0.05];术后第7天实验组以上指标均高于对照组（P〈0.05）,第14天时这种趋势依然存在（P〈0.05）。结论：海藻酸钙能提高伤口皮肤组织内的胶原蛋白含量,加速创面肉芽组织形成,促进伤口的愈合。     

桔梗提取物木犀草素联合磺胺嘧啶银治疗浅Ⅱ度烫伤作用研究

探讨桔梗成分木犀草素与磺胺嘧啶银联合治疗浅Ⅱ度烫伤的协同作用，为优化治疗方案 提供新的理论基础。方法 构建SD大鼠浅Ⅱ度烫伤模型，依据给药情况分为五组：A组为模型组，B组为 磺胺嘧啶银组，C组为木犀草素组，D组为磺胺嘧啶银和木犀草素联用组，N组为正常对照组。根据给药 第4天和第7天的创面愈合率评价不同给药组的疗效。通过测量大鼠烫伤区域伤口直径，采用苏木精-伊 红（HE）染色观察创面皮肤组织的病理变化，采用Western blot检测大鼠创面皮肤组织血管内皮生长因子 （VEGF）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和Ⅰ型胶原蛋白（Coll-Ⅰ）表达，采用ELISA检测大鼠的肿瘤 坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）水平。结果 B组、C组第7天烫伤创面愈合率均高于A组 （P＜0.05）；D组第7天烫伤创面愈合率均高于A组、B组、C组（P ＜0.05）。D组皮肤层完整，角质层、表 皮和真皮结构正常，皮肤毛囊及附属结构基本完整，恢复程度优于B组和C组。B组、C组VEGF、Coll-Ⅰ 水平高于A组，MMP-2水平低于A组（P ＜0.05）；B组和C组VEGF、Coll-Ⅰ、MMP-2水平比较，差异 无统计学意义（P ＞0.05）；D组VEGF、Coll-Ⅰ水平均高于A组、B组、C组，MMP-2水平均低于A组、B 组、C组（P ＜0.05）。B组、C组TNF-α水平均低于A组（P ＜0.05）；B组、C组TNF-α水平比较，差异 无统计学意义（P＞0.05）；A组、B组、C组IL-10水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；D组TNF-α 水平均低于A组、B组、C组，IL-10水平均高于A组、B组、C组（P ＜0.05）。结论 磺胺嘧啶银联合木犀 草素治疗浅Ⅱ度烫伤的效果优于单独用药，其潜在机制之一可能是通过下调MMP-2表达，上调VEGF、 Coll-Ⅰ和IL-10表达，抑制TNF-α等因子的表达，以减轻组织炎症，改善烫伤创面皮肤组织环境，促进 愈合。     

积雪草酸葡糖胺盐凝胶通过调节巨噬细胞迁移和极化促进创面愈合及表皮再生

目的探索水溶性积雪草酸葡糖胺盐(AAGS,凝胶形式)对大鼠皮肤缺损创面的作用及其机制。方法选取14只5周龄SD大鼠,每只大鼠背部两侧均建立相同的创面模型,一侧设为实验组,一侧设为对照组。实验组每天外用AAGS凝胶(30 mg/mL溶于PBS);对照组每天外用凝胶敷料(清得佳)。分别在第0、3、7、10和14天进行大体观并测量创面面积。分别在第3天(n=4)、第7天(n=4)和第14天(n=6)取材,HE染色观察并测定表皮厚度和表皮嵴数量,半定量分析炎性细胞聚集情况;免疫组化染色观察创面愈合处巨噬细胞向M1型、M2型极化的情况。小鼠单核巨噬细胞(RAW 264.7)培养过程中加入梯度浓度AAGS,Q-PCR检测M1、M2型巨噬细胞标记基因的表达情况。结果第0、3、7、10和14天大体观可见实验组相对愈合较快,定量分析显示在第10天实验组创面面积明显小于对照组(P0.05)。实验组表皮嵴数量明显多于对照组(第14天,P0.05),表皮厚度明显低于对照组(第14天,P0.05)。实验组早期(第3天和第7天)的炎症细胞数量明显多于对照组(P0.05)。此外,经过14 d的治疗,实验组巨噬细胞向M2型极化,体外细胞学研究也证实AAGS可诱导巨噬细胞向M2型的极化。结论 AAGS凝胶具有增强局部表皮结构再生的潜力,可作为局部使用药物来促进创面愈合。AAGS凝胶在创面早期促进炎症过程以增强新生组织形成,并在创面晚期诱导巨噬细胞M2型极化以达到重塑和再生皮肤结构的作用。     

血管紧张素Ⅱ受体2型对创面愈合过程中微血管形成的影响

目的：观察血管紧张素Ⅱ受体2型（AT2R）在创面肉芽组织微血管形成中的作用,探讨其影响新血管形成的可能机制.方法：用打孔器在小鼠背部制成直径6.0 mm全层皮肤缺损创面模型,将24只C57BL/6J小鼠分成两组（n=12）：PD123319处理组腹腔注射特异性AT2R阻断剂PD123319（10 mg·kg-1·d-1）,对照组腹腔注射等量生理盐水.分别在创面形成后第3、5、7、和14天取创面组织标本,每个时间点3只小鼠.另有6只作为正常对照.采用HE染色观察肉芽组织和新血管形成的情况,应用ELISA法检测创面愈合过程中创面局部组织血管内皮生长因子受体1（VEGFR1）的变化,免疫组织化学方法检测正常小鼠皮肤与创面愈合过程中创面局部组织AT2R的表达情况.结果：正常小鼠皮肤AT2R在整个表皮层均有阳性表达,在真皮层,AT2R主在微血管内皮细胞,皮肤附件如毛囊、汗腺、皮脂腺有阳性表达.在小鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中,创面局部组织AT2R产生逐渐增加,第7天达到峰值,以后逐渐下降.在伤后第5天和第7天,对照组创面肉芽组织的面积分别为（9.37±0.53）mm2和（7.15±0.42）mm2,PD123319处理组创面肉芽组织面积分别为（11.51±0.98）mm2和（9.32±0.67）mm2,两组间差异有统计学意义（P〈0.05）.PD123319可随时间的延长明显增加肉芽组织中VEGFR1的表达和血管形成的组织学评分,在第7天达到峰值,两组间差异有显著性（P〈0.05）,然后均逐渐下降.结论：在创面愈合过程中,AT2R可能参与创面的愈合及其后期的塑性改建,并通过调节VEGFR1水平影响肉芽组织中微血管的形成.     

脂肪干细胞来源外泌体促进糖尿病小鼠创面愈合的实验研究

目的探讨脂肪干细胞来源外泌体(adipose-derived stem cell released exosomes,ADSC-Exos)对糖尿病小鼠创面愈合的影响。方法取患者自愿捐赠脂肪组织,采用酶消化法分离培养ADSCs,并于第3代细胞上清液提取Exos(ADSC-Exos);透射电镜观察ADSC-Exos形态,Western blot检测膜表面标志性蛋白Alix、CD63,纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径分布。取患者自愿捐赠皮肤组织,采用酶消化法分离培养成纤维细胞。将PKH26标记的ADSC-Exos与第5代成纤维细胞培养,共聚焦荧光显微镜观察其能否进入细胞,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)及划痕法观察ADSC-Exos对成纤维细胞增殖及迁移的影响。取24只8周龄Balb/c雄性小鼠制备糖尿病模型后,背部制备直径8 mm全层皮肤缺损创面,实验组(n=12)及对照组(n=12)创面真皮层分别注射0.2 mL ADSC-Exos及PBS。第1、4、7、11、16、21天大体观察创面愈合情况,计算创面愈合率;第7、14、21天取材,行组织学(HE及Masson)及CD31免疫组织化学染色,观察创面结构、胶原纤维及新生血管情况。结果ADSC-Exos为边缘清晰、大小分布均匀的膜性囊泡;粒径为40~200 nm,平均102.1 nm;膜表面标志性蛋白Alix、CD63均呈阳性。ADSC-Exos与成纤维细胞复合培养观察示,ADSC-Exos可进入成纤维细胞胞内,并能促进成纤维细胞增殖及迁移。动物实验显示,实验组小鼠背部创面愈合明显快于对照组,各时间点创面愈合率差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,实验组创面结构愈合更好,愈合前期新生微血管更多,愈合后期胶原纤维沉积更多;其中,第7、14、21天创面缺损长度,第7、14天微血管数量,第14、21天胶原纤维沉积百分比,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ADSC-Exos通过促进创面血管新生以及成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成来促进糖尿病小鼠创面愈合。     

人脐带MSCs-海藻酸盐凝胶敷料的实验研究

目的观察人脐带MSCs(human umbilical cord MSCs,hUCMSCs)在海藻酸盐凝胶支架中的生长特性,探讨hUCMSCs-海藻酸盐敷料修复创面的可行性。方法取人脐带标本体外分离培养hUCMSCs,取第4代细胞与海藻酸钙凝胶支架复合培养(实验组)。倒置相差显微镜下观察细胞在凝胶支架中的生长特征,培养第0、3、6、9天检测细胞上清液VEGF含量并行细胞计数,并检测细胞迁移能力;以正常培养hUCMSCs作为对照组。取32只8周龄Balb/c雄性小鼠,制备全层皮肤缺损模型,随机分为4组(n=8);创面分别以hUCMSCs-海藻酸钙凝胶复合物(MSC-凝胶组)、细胞上清液-海藻酸钙凝胶复合物(CS-凝胶组)、10%FBS-海藻酸钙凝胶复合物(FBS-凝胶组)及0.01 mol/L PBS-海藻酸钙凝胶复合物(PBS-凝胶组)修复。观察创面愈合情况,计算第5、10、15天创面愈合率;于第15天切取创面组织行组织学及免疫组织化学染色,评估新生皮肤情况。结果 hUCMSCs在凝胶支架中可生长增殖达1周以上,形似葡萄样;细胞迁移实验示7 d内未见细胞从凝胶支架中迁移出。培养第3天实验组细胞数及VEGF表达量均明显少于对照组(P0.05),之后逐渐增加,至第9天时均明显多于对照组(P0.05)。动物实验显示,与FBS-凝胶组及PBS-凝胶组相比,MSC-凝胶组及CS-凝胶组第5、10、15天创面愈合率均显著增高(P0.05),新生皮肤鳞状上皮、成纤维细胞、皮脂腺及毛细血管均增多,第15天时VEGF表达量也显著增加(P0.05);而MSC-凝胶组及CS-凝胶组观察情况相似。结论 hUCMSCs能在海藻酸钙凝胶中持续表达创面愈合所必需的VEGF,hUCMSCs-海藻酸钙凝胶复合物能促进小鼠创面愈合,有望成为理想的创面敷料。     

猪内脏膜生物敷料促进兔皮肤创面愈合的实验研究

目的 观察一种用猪内脏膜制成的新型生物敷料对兔皮肤创面愈合的影响.方法 制做兔背全层创伤模型,分成实验组和对照组,创面分别外用新型生物敷料及无菌凡士林敷料.伤后3、5、7、10、14、17、21 d观察两组创面愈合情况和创面愈合率;并分别取创面组织进行病理组织学、羟脯氨酸含量测定及成纤维细胞周期分析等检查,评估创面的修复质量,进行观察比较.两组数据的比较采用t检验,两组间组织病理结构评价采用秩和检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 实验组术后7、10、14、17、21 d创面愈合率分别比对照组高,差异具有统计学意义(P＜0.05);术后第14天进行两组间组织病理等级评价,发现实验组在组织结构、表皮层、基底细胞层及真皮层评价中等级占+++的百分比分别比对照组高.两组之间对比采用秩和检验,差异具有统计学意义(P＜0.05);实验组与对照组平均愈合时间分别为(12.36±2.03)d、(16.82±2.12)d,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组在3、5、7、10、14、17及21 d时,组织羟脯氨酸的含量分别比对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05);创面组织成纤维细胞细胞周期分析结果显示:实验组每时相S期细胞百分比均高于对照组.结论 用猪内脏膜制成的新型生物敷料可加速皮肤创面上皮化过程,使伤口愈合时间提前.可提高皮肤创面愈合质量,促进胶原生成的作用.     

Sema4D蛋白高表达与结直肠癌血管形成和临床进展的相关性

目的：探讨轴突导向因子4D（Semaphorin4D,Sema4D）在结直肠癌组织中的表达及结肠癌细胞分泌Sema4D对血管形成的影响。方法：采用免疫组织化学SP法检测86例结直肠癌组织和52例正常结直肠组织中Sema4D的表达,并分析其与临床病理特征的关系;单纯血管内皮细咆组为空白对照组,结肠癌Lovo细胞和血管内皮细胞共培养组为实验组,应用ELISA检测2组Sema4D蛋白的表达,并观察其对内皮细胞成管的影响。结果：Sema4D蛋白在结直肠癌组织阳性表达率为60％,在正常结直肠组织中阳性表达率为12％,差异有统计学意义（P〈0．05）,且Sema4D蛋白表达与组织分化类型、TNM分期和淋巴结转移明显相关（P〈0．05）,而与年龄、肿瘤大小无关（P〉0．05）;ELISA检测结果显示,对照组和实验组Sema4D蛋白分别为（663．54±21,59）pg／mL、（1320．99±28．42）pg／mL（P〈0．05）;内皮细胞管形成实验显示,对照组和实验组小管数目分别为7．25±1．26、15．25±0．96（P〈0．05）。结论：Sema4D蛋白表达与结直肠癌组织分化类型、TNM分期和淋巴结转移相关;Sema4D蛋白促进内皮细胞管形成。     

2015年乳腺癌辅助化疗进展

【摘要】〓乳腺癌是危害我国女性健康的头号杀手,尽管近年来辅助化疗的研究进展突飞猛进,但临床中仍有不少问题未能明确,如辅助化疗的合适人群、化疗的开始时间、蒽环及紫杉类的地位和用法、强化维持治疗的作用、疗效及预后的生物标志物等。本文结合乳腺癌辅助化疗在临床上的常见问题和2015年各大乳腺癌会议阐述乳腺癌辅助化疗的最新进展。     

Alterations in T-Cell Subset Frequency in Peripheral Blood in Obesity

Background: Obesity affects the regulation of immune and inflammatory responses. This study characterizes differences in peripheral blood lymphocyte phenotype in obese humans. Methods: Frequencies of lymphocyte subsets among peripheral blood mononuclear cells were compared between 10 obese (BMI ≥35) and 10 lean subjects, as determined by antibodies directed against cluster differentiation (CD) markers. Results: Obese patients demonstrated an increased frequency of CD3+CD4+ T-cells (mean difference 12%, P=0.004), a decreased frequency of CD3+CD8+ T-cells (mean difference 9.4%, P=0.016) and an increased frequency of CD3+CD8+CD95+ T-cells (mean difference 13.3%, P=0.032). No other differences among T-cell or monocyte subsets were noted. Conclusions: Obesity is associated with alterations in frequencies of peripheral CD4+ and CD8+ T-cells and aberrations in the expression of CD95 among CD8+ T-cells. These data suggest both CD4+ and CD8+ T-cell compartments, as well as the regulation of CD95 expression on CD8+ T-cells, as targets for further study into obesity's effects on the immune system.     

西宁地区烧伤病人动脉血气分析观察

对高海拔地区的27例烧伤病人动脉血气变化进行了分析和观察。结果证明:无论是存活病人还是死亡病人伤后均存在有低氧血症问题。并且在死亡病人和烧伤合并吸入性损伤病人其低氧血症的发生早于单纯烧伤病人。提示:吸入性损伤病人应立即行气管切开术以保障氧气供给,单纯烧伤病人可常规吸氧以维持正常血 PaO_2,ARDS 均发生在合并吸入性损伤的病人,高频喷射通气技术对纠正低氧血症有一定效果。     

Controversies in Fistula in Ano

Managing a complex fistula in ano can be a daunting task for most surgeons; largely due to the two major dreaded complications—recurrence & fecal incontinence. It is important to understand the anatomy of the anal sphincters & the aetiopathological process of the disease to provide better patient care. There are quite a few controversies associated with fistula in ano & its management, which compound the difficulty in treating fistula in ano. This article attempts to clear some of those major controversies.     

β-半乳糖苷酶在体内外成骨细胞中的表达

目的 研究β—半乳糖苷酶(β—gal)在成骨细胞中的表达状况，为阐明MorquioB综合征的发病机制提供依据。方法 裸鼠各器官和骨组织标本行X-gal染色检测。抽取羊和人骨髓行骨髓基质细胞(BMSCs)培养，分为4组：I：Adv-hBMP-2转染组；Ⅱ：Adv—β—gal转染组；Ⅲ：未转染组；Ⅳ：地塞米松诱导组。分别行X-gal染色和RT-PCR检测β—gal的表达。结果 裸鼠骺板两侧、骨膜内面及松质骨的成骨细胞和破骨细胞可见多量β—gal的表达。未转染BMSCs组有少量β—gal的表达，其他3组细胞的β—gal表达增高。结论成骨细胞和破骨细胞可表达多量β—gal，该两种细胞的β—gal缺乏可能是MorquioB综合征骨骼异常的直接原因。     

Smoking-Attributable mortality in Spain in 2016

IntroductionSmoking-attributable mortality (SAM) is a valuable indicator that can be used to characterize the course and health burden of the smoking epidemic. The aim of this paper was to estimate SAM in Spain in 2016 in the population aged 35 and over, using the best available evidence.MethodsA smoking prevalence-dependent analysis based on the estimation of population-attributable fractions was performed. Smoking prevalence (never, former, and current smokers) was calculated from a combination of the Spanish Health Survey (2016) and the European Health Survey (2014); the relative risk of death among current and former smokers was taken from the follow-up of various cohorts; and mortality rates were obtained from National Center for Statistics data. SAM estimates are presented globally, and by sex, age groups, and major disease categories: cancer, cardiometabolic diseases and respiratory diseases.ResultsIn 2016, 56,124 deaths were attributed to tobacco consumption, 84% in men (47,000), and 50% in the population aged over 74 (27,795). Overall, 50% of SAM was due to cancer (28,281), 65% of which was lung cancer. One in 4 attributable deaths (13,849) occurred before the age of 65.ConclusionsOne in 7 deaths in Spain in 2016 were attributable to smoking. This estimation of SAM clearly highlights the great impact of smoking on mortality in Spain, mainly due to lung cancer and chronic obstructive pulmonary disease.     

MicroRNAs in hepatic pathophysiology in diabetes

MicroRNAs(miRNAs or miRs) are small approximately 22 nucleotide RNA species that are believed to regulate diverse metabolic and physiological processes.In the recent past,several reports have surfaced that demonstrate the role of miRNAs in various biological processes and numerous disease states.For a disease as complex as diabetes,the emergence of miRNAs as key regulators leading to the disease phenotype has added a novel dimension to the area of diabetes research.On the other hand,the liver,a metabolic hub,contributes in a major way towards maintaining normal glucose levels in the body as it can both stimulate and inhibit hepatic glucose output.This equilibrium is frequently disturbed in diabetes and hence,the liver assumes special significance considering the correlation between altered hepatic physiology and diabetes.While the understanding of the mechanisms behind this altered hepatic behavior is not yet completely understood,recent reports on the status and role of miRNAs in the diabetic liver have further added to the complexities of the knowledge of hepatic pathophysiology in diabetes.Here,we bring together the various miRNAs that play a role in the altered hepatic behavior during diabetes.     

Fluid-phase transcytosis in the primate epididymis in vitro and in vivo

Ligated tubules from the corpus epididymidis of men and monkeys were incubated in medium containing horseradish peroxidase (HRP) as a marker for fluid-phase endocytosis. HRP was localized by light and electron microscopy after 0, 15, 30 and 60 min of incubation. Movement between the cells was prevented by tight junctions, but bypass of this barrier was apparently achieved by an intracellular vesicular mechanism leading to a time-dependent appearance of HRP in the lumen. Uptake of HRP into basal cells and capture by the lysosomal apparatus of principal cells were also observed. HRP-filled vesicles also appeared in the basal, mid and apical cytoplasm of epithelial cells in the caput 1 h after injection of the tracer into the epididymal circulation of the monkey, suggesting that this pathway also operates in vivo.