NLRP3、IL-33在LPS诱导的巨噬细胞中的表达及格列本脲对其表达的影响

目的研究NLRP3、IL．33在脂多糖（LPS）诱导的RAW264．7巨噬细胞炎症模型中的表达及格列本脲对其表达的影响。方法培养RAW264．7巨噬细胞,将其分为空白对照（A）组、NLRP3抑制剂格列本脲预处理＋LPS（B）组,LPS模型（C）组;B、C组采用LPS刺激RAW264．7巨噬细胞建立炎症模型,B组在LPS刺激前30rain给予格列本脲处理．空白对照组只给予培养基培养。采用蛋白免疫印迹法（Western．Mot）检测细胞中NLRP3蛋白的表达;酶联免疫吸附试验（EUSA）检测细胞培养上清中1L．33的含量;四氮唑盐（MYr）法测定各组细胞的增殖能力。结果C组中NLRP3蛋白表达均高于A组、B组（均P〈0．05）,B组NLRP3蛋白表达高于A组（P〈O．05）。C组IL-33含量比A、B组高（P〈0．05）,A组和B组之间差异无统计学意义。M1T试验中C组细胞增殖率高于A组、B组（P〈0．05）,而A、B组差异无统计学意义。结论NLRP3、IL．33在LPS诱导RAW264．7的巨噬细胞中表达升高,而格列本脲干预后可抑制NLRP3的表达及IL-33的分泌。     

槐定碱对小鼠巨噬细胞TLR4及JNK/c-jun mRNA表达的影响

目的观察槐定碱预处理对LPS刺激RAW 264.7巨噬细胞表达TLR4、JNK和c-jun mRNA及分泌TNF-α的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW 264.7巨噬细胞,实验分为4组：空白对照组、槐定碱对照组、LPS组、槐定碱预处理组,用RT-PCR技术检测RAW 264.7细胞TLR4、JNK和c-jun的mR-NA表达量,放免法检测细胞培养液TNF-α分泌量。结果槐定碱对RAW 264.7巨噬细胞TLR4、JNK、c-jun的mRNA及细胞培养液中TNF-α基础表达无影响,但对经LPS激活的巨噬细胞的TLR4、JNK mRNA表达有显著抑制作用（均P〈0.01）,c-jun mRNA表达亦降低,但与LPS模型组比较差异尚无统计学意义。槐定碱预处理组细胞液中TNF-α含量显著低于LPS模型组（P〈0.01）。结论槐定碱抗内毒素机制与其抑制LPS引起的TLR4、JNK的mRNA高表达,并减少TNF-α分泌有关。     

脂氧素对巨噬细胞表面免疫抑制分子和共刺激分子表达的影响

目的 研究脂氧素A4（LXA4）对RAW264．7巨噬细胞免疫功能的影响。方法体外培养小鼠RAW264．7巨噬细胞，分为空白对照组、脂多糖（LPS）组和LXAt组。各组处理预设时间后，RT-PCR检测PIR-A和PIR-B基因表达水平，总一氧化氮检测试剂盒检测一氧化氮含量，流式细胞仪检测细胞表面MHC-Ⅱ分子、CD80（B7-1）、CD86（B7-2）的表达量。结果 LXA4显著上调PIR-B，而几乎不影响PIR-A的基因表达水平；明显促进一氧化氮分泌（P〈0．01）；抑制LPS活化巨噬细胞表达MHC-Ⅱ和CD86（P〈0．05），但对CD80的表达无明显影响（P〉0．05）。结论 LXA4促进巨噬细胞表达免疫抑制分子PIR-B和一氧化氮，抑制巨噬细胞的抗原提呈能力。     

白藜芦醇对脂多糖诱导的巨噬细胞极化改变的影响

目的：探讨白藜芦醇对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞极化表型改变的影响。方法体外培养的RAW264．7小鼠巨噬细胞在六孔板孵育12 h ,分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、LPS（100 ng／mL）组、LPS（100 ng／mL）＋白藜芦醇（30μmol／L）组,LPS＋白藜芦醇组在加入LPS前预先加入白藜芦醇孵育12 h;上述细胞在LPS刺激12 h后分别收集细胞和培养上清液;实时定量PCR（RT‐qPCR）检测经典的炎症活化型巨噬细胞（M1）型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA表达,以及替代活化巨噬细胞（M2）型相关基因IL‐10、PPARγ和Arg‐1 mRNA表达,Western blot检测细胞iNOS、Arg‐1蛋白表达,ELISA检测培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、IL‐10和 TNF‐α的水平。结果 RT‐qPCR检测结果显示,与LPS组相比,M1型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA较LPS＋白藜芦醇组显著上升（P＜0．05）,而M2型相关基因IL‐10、PPARγ、Arg‐1 mRNA表达显著下调（P＜0．05）。Western blot检测发现,LPS组iNOS蛋白水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而Arg‐1蛋白水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。ELISA检测发现,LPS组培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、TNF‐α水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而IL‐10和水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。结论白藜芦醇可能促进了LPS刺激的RAW264．7巨噬细胞向M2型极化改变。     

槐定碱对小鼠巨噬细胞TLR4及JNK/c-jun mRNA表达的影响

目的观察槐定碱预处理对LPS刺激RAW 264.7巨噬细胞表达TLR4、JNK和c-jun mRNA及分泌TNF-α的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW 264.7巨噬细胞,实验分为4组:空白对照组、槐定碱对照组、LPS组、槐定碱预处理组,用RT-PCR技术检测RAW 264.7细胞TLR4、JNK和c-jun的mR-NA表达量,放免法检测细胞培养液TNF-α分泌量。结果槐定碱对RAW 264.7巨噬细胞TLR4、JNK、c-jun的mRNA及细胞培养液中TNF-α基础表达无影响,但对经LPS激活的巨噬细胞的TLR4、JNK mRNA表达有显著抑制作用(均P<0.01),c-jun mRNA表达亦降低,但与LPS模型组比较差异尚无统计学意义。槐定碱预处理组细胞液中TNF-α含量显著低于LPS模型组(P<0.01)。结论槐定碱抗内毒素机制与其抑制LPS引起的TLR4、JNK的mRNA高表达,并减少TNF-α分泌有关。     

内毒素休克大鼠肾组织TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达

目的 探讨内毒素休克大鼠肾组织Toll样受体2（TLR2） mRNA和TLR4 mRNA的表达变化,以及血管活性肠肽（VIP）和甲基泼尼松龙（MP）的作用及可能机制。方法 采用大肠杆菌脂多糖（LPS）（E coli O55:B5）10 mg/kg静脉注射,建立大鼠内毒素休克模型(LPS组,n=16);LPS+VIP组(n=16)建模后注射VIP（5 nmol/kg）,LPS+VIP+MP组（n=16）注射VIP（5 nmol/kg）和MP（3 mg/kg）;另设生理盐水对照组（n=8）。透射电子显微镜观察LPS注射6 h和24 h大鼠肾组织病理学变化;RT-PCR测定肾组织TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达。结果 建模后6 h,电子显微镜下见LPS组肾小球毛细血管内皮细胞肿胀,线粒体空泡变性;建模后24 h,可见LPS组肾小管细胞线粒体肿胀、空泡变性,细胞核轻度固缩;LPS+VIP组及LPS+VIP+MP组肾组织病变轻于同期LPS组。LPS注射6 h,LPS组、LPS+VIP组及LPS+VIP+MP组肾组织TLR2 mRNA和TLR4 mRNA表达均高于对照组（P<0.01）;LPS注射24 h,LPS组TLR2 mRNA和TLR4 mRNA表达高于其他组（P<0.01）。结论 内毒素休克大鼠肾组织TLR2 mRNA和TLR4 mRNA表达增强;VIP和MP干预可减轻肾脏损伤,可能与其下调TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达有关。     

氯胺酮对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的影响及其机制

目的探讨不同剂量氯胺酮对内毒素（LPS）诱导大鼠肺损伤的影响和作用机理。方法48只雄性Wistar大鼠随机分为4组：对照组,LPS组（5mg／kg）,低剂量氯胺酮治疗组（5mg／kg）,高剂量氯胺酮治疗组（10mg／kg）,每组12只。建立内毒素诱导的大鼠急性肺损伤模型,于注射LPS后4h处死大鼠,测肺湿／干重比,观察支气管肺泡灌洗液（BALF）中性粒细胞计数比、蛋白浓度,测肺组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-8（IL-8）、NO水平。RT．PCR测肺组织中．NOSmRNA表达,Western-blot测肺组织中NF-κB蛋白表达。结果LPS组大鼠肺湿／干重比、BALF中性粒细胞计数比、蛋白浓度均明显增加（P〈0．01）,肺组织中TNF-α、IL-8、NO水平显著性升高（P〈0.01）,同时肺组织中iNOSmRNA和核因子-κB（NF-κB）蛋白表达均增加。而氯胺酮治疗组的各项指标均较LPS组减轻,大剂量组作用更明显。结论氯胺酮通过抑制NF-κB表达,减少炎症性细胞因子的产生,从而对内毒素（LPS）诱导的大鼠肺损伤有一定保护作用。     

谷氨酰胺对RAW264.7细胞HSP 72表达和TNF-α释放的影响

目的探讨不同条件下谷氨酰胺（Gln）对小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264．7热休克蛋白（HSP）72表达和肿瘤坏死因子（TNF）-α释放的影响。方法将RAW264．7细胞与含Gin（0、0．5和8mmol／L）的培养液分别进行下列处理：①共同培养165min后,加入脂多糖（LPS）刺激0、1、4、12和24h;②共同培养的同时行热应激预处理45min,370C培养2h后加入LPS刺激4h;③共同培养的同时行DON预处理,165min后加入LPS刺激4h;④两者与含LPS的培养液共同培养1h,改用含0．5mmol／L Gln和LPS的培养液继续培养4h。ELISA法检测细胞上清液TNF-α的浓度,Western blotting检测细胞HSP 72蛋白表达。结果①LPS刺激后4h,RAW264．7细胞均有HSP 72表达,经8mmol／L Gln培养者较经0和0．5mmol／L Gln培养者HSP 72表达显著增加（P〈0．01）,而24h时三者HSP 72表达差异无统计学意义（P〉0．05）;Gln促进TNF-α释放,与Gln呈时间和浓度依赖关系。②热应激显著促进Gln诱导的HSP72表达（P〈0．01）,抑制Gln诱导的TNF—α释放,但TNF—α释放仍随Gln浓度增加而增加。③DON预处理不影响HSP 72的表达,但显著抑制TNF—α释放（P〈0．01）。④短时间不同浓度Gln处理,与0．5和8mmol／L Gln共同培养者较与0mmol／L Gln共同培养者HSP72表达显著增加（P〈0．01）;TNF—α的释放随Gln浓度增加有升高趋势,但三者间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Gln可诱导RAW264．7细胞表达HSP 72,但并不足以抑制其TNF—α释放。除诱导HSP 72表达外,Gln在脓毒症时调节机体炎症反应还可能存在其他机制。     

巴马汀对LPS诱导的RAW264．7巨噬细胞NO分泌及iNOS表达的影响

目的：观察巴马汀对脂多糖（LPS）诱导的RAW264．7小鼠巨噬细胞一氧化氮（NO）的分泌及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的作用。方法：采用LPS诱导RAW264．7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,加入不同浓度的巴马汀,采用Griess法测定NO的分泌量;采用Westernblot法检测iNOS蛋白的表达。结果：巴马汀能明显抑制LPS诱导的RAW264．7巨噬细胞NO的分泌,以及iNOS蛋白的表达,并呈现出浓度依赖性。结论：巴马汀可通过抑制LPS诱导的RAW264．7巨噬细胞NO的分泌及iNOS的表达,从而发挥抗炎作用。     

RNA干扰对活化的小鼠巨噬细胞肿瘤坏死因子α表达的影响

目的：观察靶向小鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）基因的小干扰RNA（siRNA）在体外对小鼠巨噬细胞系RAW264．7表达TNF-α的抑制作用。方法：采用化学法合成针对TNF-α mRNA不同位点设计的3条siRNA序列（siRNA1～3）和1条带有荧光标记的BLOCK—IT^TM荧光Oligo（修饰的荧光标记的dsRNA,siRNA4）通过脂质体包裹后将其分别转染至小鼠巨噬细胞系RAW264．7,同时设立1个无任何靶基因的siRNA作为阴性对照（siRNA4）。荧光显微镜下观察siRNA的转染效率;用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附实验（ELISA）法分别检测siRNA对TNF-α的mRNA和蛋白表达的抑制作用。结果：内毒素刺激后6h,巨噬细胞表达TNF-α mRNA和合成分泌的TNF-α量均增加,于9～12h达高峰。利用荧光标记的Oligo观察到siRNA转染效率达72％～80％。siRNA1～4转染巨噬细胞后,siRNA2、3可见内毒素刺激的TNF-α mRNA（0．158±0．030、0．114±0．028）和TNF-α蛋白表达[（1355±348）pg／ml、（817±138）pg／m1]均明显少于未转染组[TNF-α mRNA0．294±0．147,蛋白（2104±32）pg／ml,均P〈0．05],其中siRNA3的抑制率非常显著,达61．2％（P〈0．01）。阴性对照siRNA4对细胞基因及蛋白表达无影响。结论：内毒素可刺激小鼠巨噬细胞TNF-α的合成。化学合成siRNA转染小鼠巨噬细胞能有效抑制TNF-α mRNA及蛋白的表达。     

氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264.7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响

目的：观察氧化苦参碱（OMT））对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮（NO）释放量及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。实验分组：空白对照组、LPS组（1μg/mL）、OMT组（100μmol/L）、LPS＋OMT小剂量组（20μmol/L）、LPS＋OMT中剂量组（50μmol/L）、LPS＋OMT大剂量组（100μmol/L）。采用Griess试剂法测定细胞培养液中NO释放量。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达。结果：OMT显著减少LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放（P〈0.05,P〈0.01）;同时减少LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论：OMT可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达,减少NO的释放量而发挥抗炎作用。     

脂氧素对脂多糖诱导巨噬细胞炎症相关因子的影响及机制

目的：研究脂氧素（1ipoxin A4）对脂多糖（1ipopo-lysaccharide,LPS）诱导的小鼠巨噬细胞株RAW264.7中相关炎症因子如肿瘤坏死因子（TNF-α）、环加氧酶-2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）、血红素氧化酶-1（HO-1）和白介素-10（IL-10）的影响,并进一步探讨其内在分子机制。方法：以1mg／L LPS刺激体外培养的RAW264.7细胞作为炎症模型,分别用脂氧素A4或脂氧素A4和ZnPPIX干预LPS刺激的RAW264.7细胞24h后,收集培养上清并提取细胞总蛋白,酶联免疫法测定上清中TNF-α,IL-10和PGE2浓度,免疫印迹法检测细胞COX-2和HO-1的蛋白表达量,分光光度计分析HO-1的活性。结果：1mg／L LPS明显诱导TNF-α,COX-2和PGE,的生成,也适度增加IL-10及HO-1的产生;脂氧素A4可抑制LPS诱导的TNF-α（P〈0.01雠LPS组）,COX-2和PGE2（P〈0.01伽LPS组）的生成,却进一步增加IL-10（P〈0.01 vs LPS组）和HO-1表达量和活性（P〈0.01 vs LPS组）;ZnPPIX可减弱脂氧素A。对LPS诱导TNF-α（P〈0.05 vs LPS＋脂氧素A4组）,COX-2和PGE2（P〈0.05 vs LPS＋脂氧素A4组）的生成抑制作用,同时也下调IL-10的生成量。结论：脂氧素A4可抑制LPS诱导的巨噬细胞中致炎介质TNF-α,COX-2及PGE2的生成,同时也促进IL-10的产生,这种效应在一定程度上是通过上调HO-1表达和活性实现。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原诱导小鼠巨噬细胞增殖及TNF-α、TGF-β1的表达

目的探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）对小鼠巨噬细胞株RAW264.7增殖及TNF-α、TGF-β1表达的影响。方法实验分三组：RAW264.7对照组、SEA组和细菌脂多糖（LPS）对照组。培养巨噬细胞株RAW264.7,用20μg/ml SEA分别作用巨噬细胞3、6、9、12和15 h后,荧光定量PCR检测炎症因子TNF-αmRNA和TGF-β1 mRNA的表达;倒置显微镜观察SEA作用12 h后巨噬细胞的形态;Western blot检测炎症相关蛋白TNF-α和TGF-β1的表达;MTT比色法检测SEA对细胞增殖的影响。结果 SEA作用RAW264.7细胞3 h起,TNF-αmR-NA和TGF-β1 mRNA的表达逐渐增高,在第12 h时,其相对表达倍数分别达23.07±3.172和9.83±1.45,与其他各时间点比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）;SEA作用12 h巨噬细胞体积明显增大,细胞拉长且形态不规则;SEA作用巨噬细胞24、48、72 h时,A_（490）值分别与RAW264.7对照组相比,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）,而与LPS组的差异无统计学意义（P〉0.05）;在SEA作用RAW264.7细胞12 h时,TNF-α和TGF-β1蛋白表达均高于RAW264.7对照组（均P〈0.05）。结论 SEA能促进巨噬细胞的增殖并诱导TNF-α和TGF-ββ1的表达。     

多壁碳纳米管抑制RAW264.7巨噬细胞的吞噬功能

目的 观察多壁碳纳米管（MWCNT）对巨噬细胞吞噬功能的影响.方法 采用常规细胞培养技术培养RAW264.7巨噬细胞;用流式细胞术定量检测RAW264.7巨噬细胞吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌（FITC-tagged E.coli k-12）的情况.结果 MWCNT剂量依赖性地抑制RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌,随着MWCNT浓度的增加,RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的量（用平均荧光强度表示）降低.此外,MWCNT抑制RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌亦呈时间依赖性：用MWCNT（75 μg/ml）孵育RAW264.7细胞12h后,RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的量与对照组相比降低了约70.4％ （P ＜0.01）,同时参与吞噬活动的RAW264.7细胞的百分比也从对照组的98.6％降低到了92.4％ （P＜0.05）.即使用低剂量的MWCNT（25 μg/ml）孵育RAW264.7细胞较长时间（24h）后,RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的量与对照组相比仍降低了约77.1％ （P ＜0.01）,同时参与吞噬活动的RAW264.7细胞的百分比也从71.2％降低到了43.4％ （P ＜0.01）.用脂多糖（LPS,10μg/ml）激活RAW264.7细胞后,其吞噬能力明显增强,而MWCNT仍可剂量依赖性地抑制LPS激活的RAW264.7细胞的吞噬能力,与LPS组相比,MWCNT（75 μg/ml）和LPS共孵育组吞噬大肠杆菌的量降低了70.9％ （P ＜0.01）.结论 MWCNT可明显抑制RAW264.7巨噬细胞的吞噬功能.     

伊马替尼抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症表型

【目的】探讨伊马替尼（Ima）在体外对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症表型的影响。【方法】RAW264.7细胞在LPS（0.1μg/mL）或/和Ima（1μmol/L,5μmol/L）处理后,通过Q-PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-10、CCL2、iNOS、TNF-α和Arg1的mRNA表达变化;采用Western Blot检测iNOS蛋白表达变化以及NF-κB和MAPK信号通路活化情况;利用ELISA法检测细胞上清IL-1β、CCL2、IL-10和TNFα的蛋白表达情况。【结果】与对照组相比较,LPS刺激8h后,RAW264.7细胞内的炎症指标IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA水平显著升高（P<0.001）以及抗炎指标IL-10的mRNA水平也明显升高（P<0.001）;LPS刺激24h后,细胞上清中IL-1β、IL-10、CCL2和TNF-α的蛋白水平显著上升（P<0.001）,细胞内iNOS蛋白表达以及p65,p38,ERK和AKT的磷酸化水平显著增加。和LPS组相比,Ima提前处理后,IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA及蛋白水平显著下降（P<0.01,P<0.001）而IL-10的mRNA及蛋白水平显著升高（P<0.001）,这种抑制作用具有剂量依赖性。Ima的预处理抑制了LPS诱导的p65,p38,ERK和AKT磷酸化。单独用Ima处理RAW264.7细胞后,细胞的功能状态未见明显的改变。【结论】伊马替尼可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症表型,这种作用与抑制NF-κB和MAPK信号通路的过度激活有关。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对巨噬细胞中铁死亡相关因子表达水平的影响

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖（P.g-LPS）对巨噬细胞中铁死亡相关因子表达水平的影响,阐明铁死亡相关因子在牙周炎发病机制中的作用。 方法 培养小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞,分为实验组和对照组,实验组加入10 mg·L^－1P.g-LPS 分别处理6 、12 和24 h,对照组不做任何处理。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测2组RAW264.7细胞中长链酯酰辅酶A合成酶4（ACSL4）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和转铁蛋白受体1（TfR1）mRNA表达水平,2',7'-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针法检测2组RAW264.7细胞中活性氧（ROS）水平,硫代巴比妥酸（TBA）法检测2组RAW264.7细胞中丙二醛（MDA）水平,亚铁离子荧光探针（FeRhonox-1）法检测2组RAW264.7细胞中亚铁离子（Fe²⁺）水平,Western blotting法检测2组RAW264.7细胞中ACSL4、GPX4和TfR1蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,处理6、12和24 h后,实验组RAW264.7细胞中GPX4 mRNA表达水平降低（P<0.05）,处理12和24 h后ACSL4和TfR1 mRNA表达水平升高（P<0.05）;处理12和24 h后,实验组RAW264.7细胞中ACSL4和TfR1蛋白表达水平升高（P<0.05）,GPX4蛋白表达水平降低（P<0.05）。与对照组比较,实验组RAW264.7细胞中ROS、MDA和Fe²⁺水平升高（P<0.05）,且随时间增加呈上升趋势。 结论 P.g-LPS诱导下RAW264.7细胞中铁死亡相关因子ACSL4和TfR1表达水平升高,而GPX4表达水平降低,并且呈时间依赖性,提示上述铁死亡相关因子的变化可能与牙周炎发病机制有关。     

下瘀血汤含药血清对脂多糖诱导活化的RAW264.7细胞表达MMP2,9/TIMP1,2的调控作用

目的:观察下瘀血汤药物血清对脂多糖(LPS)诱导活化后RAW 264.7细胞表达基质金属蛋白酶(MMP-2,9)及基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-1,2)的影响,以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:100 g/L LPS刺激RAW264.7细胞,ELISA法分别测定0.5 h,1 h,2 h,4 h,6 h,12 h细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,选择模型时间点;生化法测定RAW264.7细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量,分析10%和20%的正常大鼠血清和下瘀血汤药物血清的细胞毒性;Western blot法检测RAW 264.7细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的蛋白表达。结果:与10%浓度的正常大鼠血清相比,10%下瘀血汤药物血清对RAW264.7细胞的无毒性作用。LPS刺激细胞培养1 h时,细胞培养上清中TNF-α含量开始增加;4 h时达到最高;6 h时开始下降。与相应时间点正常组相比,4 h、6 h模型组RAW 264.7细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达均显著升高(P0.01);与相应时间点模型组相比,4 h、6 h下瘀血汤药物血清组上述指标均降低,其中6 h组RAW 264.7细胞MMP-2蛋白表达、4 h与6 h细胞MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:下瘀血汤可能通过抑制枯否细胞(KCs)活化,抑制其MMP2,9/TIMP1,2的表达而发挥抗肝纤维化的作用。     

2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇对内毒素刺激巨噬细胞ST2 mRNA表达的影响

目的检测2’,5,6’,7-四羟基二氢黄酮醇（THF）对内毒素（LPS）刺激巨噬细胞ST2 mRNA表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）分别检测不同浓度LPS刺激对RAW264.7细胞ST2 mRNA表达的影响及不同浓度THF对100μg/LLPS诱导的RAW264.7细胞ST2 mRNA表达的影响。结果LPS（10、100、1000μg/L）可显著上调RAW264.7细胞ST2 mRNA的表达,依LPS浓度升高ST2 mRNA表达增强,呈剂量-效应关系;而以20～160mg/LTHF干预后,则可显著下调LPS（100μg/L）上调的ST2 mRNA表达。结论THF可在基因水平上拮抗LPS对巨噬细胞ST2 mRNA表达的诱导效应。