LPS急性肺损伤老年大鼠肺巨噬细胞TLR4与IL-18 mRNA表达变化的对比研究

目的　观察脂多糖 (LPS)致急性肺损伤 (ALI)老年大鼠肺巨噬细胞Toll样受体 4(TLR4)及IL -18mRNA表达的变化 ,探讨TLR4与IL -18在ALI时老年鼠与青年鼠的作用差别。方法　运用RT -PCR与ELISA检测TLR4和IL-18mRNA的表达及肺巨噬细胞培养液上清TNF -α浓度。结果　老年鼠LPS急性肺损伤组TLR4与IL -18mRNA表达显著高于青年鼠组 ( 0 63± 0 0 7vs 0 2 5± 0 0 3 ,0 5 8± 0 0 2vs 0 2 6± 0 0 3 ) ,TNF -α分泌显著多于青壮年鼠组 ( 0 67±0 0 6vs 0 45± 0 0 2 )ng/ml。结论　LPS急性肺损伤时老年鼠肺巨噬细胞TLR4功能及其介导的信号转导作用加强 ,IL -18分泌增加 ,表明两者在急性肺损伤中起重要作用 ,也可能是老年患者肺部感染时症状相对严重和难治的原因之一。     

LPS信号转导分子TLR4表达与小鼠肝损伤的关系

目的：探讨脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)信号转导分子，TLR4(Toil-like receptor 4,TLR4)与肝脏损伤的关系。方法：小鼠腹腔注射LPS后不同时间点取肝脏组织，HE染色观察病理改变，RT-PCR法检测肝组织，TLR4 mRNA的表达。结果：腹腔注射LPS后24h小鼠肝脏出现明显炎性浸润、坏死，肝组织TLR4 mRNA的表达在注射LPS后6，12h明显抑制，24h则基本恢复。结论：LPS致肝损伤呈时间依从性；LPS信号转导分子TLR4在介导LPS肝损伤中起重要作用。。     

A族链球菌感染巨噬细胞激活TLR2及TLR4表达的研究

目的通过分析A族链球菌(GAS)感染巨噬细胞后TLR2及TLR4的活化情况,以此来研究GAS感染后产生炎症反应的信号通路,为GAS感染巨噬细胞的预防及治疗奠定基础。方法 GAS及热灭活GAS以感染复数(MOI)为100∶1感染小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞后1,2,4,6 h,提取总RNA采用real-time PCR技术检测TLR2/4的表达情况;同时GAS及热灭活的GAS注射C57小鼠腹腔,24 h后分离腹腔巨噬细胞并提取蛋白,利用Western blot及免疫荧光技术对TLR2和TLR4的表达量进行分析。结果巨噬细胞表面TLR2及TLR4在GAS感染后1 h活化不明显,但作用2 h后TLR2及TLR4表达明显升高(P<0.05),4 h时达到高峰,6 h后开始降低。热灭活GAS感染巨噬细胞TLR2的表达与GAS感染比较未见到统计学差异(P>0.05),但巨噬细胞表面TLR4的表达与GAS组具有明显的差异(P<0.05)。结论 GAS感染小鼠巨噬细胞可同时激活TLR2及TLR4受体,其中TLR4受体主要通过位于GAS表面及其分泌的活性蛋白成分激活,TLR2受体则主要由其菌体成分进行活化。     

SIGIRR对LPS诱导的H292细胞TLR4表达的影响

目的通过上调SIGIRR（single Ig IL-1R-related molecule）在人气道上皮细胞株H292中的表达,研究SI-GIRR对LPS诱导的H292细胞TLR4表达的影响。方法构建SIGIRR-EGFP融和蛋白的真核表达载体,运用脂质体转染的方法转染人气道上皮细胞株H292,经LPS刺激后,ELISA检测转染前后上皮细胞TNF-α分泌水平的差异,Westernblot（WB）检测TLR4表达的变化。结果构建的融和蛋白表达载体SIGIRR-EGFP经EcoRI和BamHI双酶切后,电泳显示其条带大小为4．7kb和1．23kb左右,经测序证实SIGIRR的序列与GenBank公布的人cDNA序列完全一致。SIGIRR-EGFP转染细胞与pEGFP-N1转染细胞和对照组细胞相比,TNF-α产生明显下降,而TLR4表达无明显变化。结论SIGIRR上调表达可抑制LPS诱导的H292细胞TNF-α的产生,对TLR4表达无影响,提示SIGIRR在该信号通路中起“刹车”作用可能是通过抑制其下游通路中某个或某些调节蛋白的表达完成的。     

升降散对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB信号的影响

目的?研究升降散对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)TLR4表达及其下游NF-κB信号通路的影响。方法?用不同浓度LPS（0、2、10?μg/mL）诱导NR8383细胞,采用Real-time PCR和Western Blotting分别检测TLR4的mRNA和蛋白表达水平。用带有NF-κB的质粒转染NR8383细胞,双荧光素酶报告基因检测NF-κB活性,Western Blotting检测磷酸化p65表达水平,Real-time PCR检测细胞因子TNF-α、A20、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平,ELISA检测细胞上清液中TNF-α、IL-6和IL-1β的含量。将升降散作用于LPS成功诱导NF-κB上调的NR8383细胞,Real-time PCR、Western Blotting、双荧光报告基因检测和ELISA实验检测升降散在NR8383细胞中对LPS诱导NF-κB信号通路的影响。结果?LPS成功诱导NR8383细胞中NF-κB上调,在蛋白表达和mRNA表达水平均证实,LPS能梯度诱导TLR4高表达,且与LPS浓度呈正相关;同时,LPS能够诱导TLR4下游NF-κB的激活,增加下游靶基因编码细胞因子的合成与分泌,且与LPS浓度呈正相关。10?μg/mL升降散作用NR8383细胞后,能抑制LPS诱导TLR4的高表达和下游NF-κB的激活。结论?LPS能梯度诱导NR8383细胞中TLR4的高表达及其下游NF-κB的激活,升降散能够显著抑制该诱导作用。      

地塞米松对肺损伤小鼠肺巨噬细胞TLR4原位表达的影响

目的:探讨地塞米松(DEX)对失血性休克诱导的急性肺损伤小鼠肺巨噬细胞TLR4原位表达的影响.方法:C57BL/6雄性小鼠45只,复制失血性休克诱导的急性肺损伤模型前经鼻分别滴入PBS、PBS+20ug DEX,阴性空白对照组经鼻滴入PBS后仅与予心脏穿刺,分别于0h、1h、2h、4h和6h时取出小鼠的肺组织.通过HE染色法检测肺组织病理,免疫荧光双染检测肺巨噬细胞TLR4表达.结果:失血性休克后6h内肺巨噬细胞TLR4的表达呈上升趋势并于6h时达到峰值,DEX干预组可见显著抑制肺巨噬细胞TLR4表达.结论:地塞米松能显著抑制失血性休克诱导的急性肺损伤小鼠肺巨噬细胞TLR4原位表达,改善肺部病理改变.     

平喘颗粒对哮喘小鼠肺组织TLR2和TLR4表达的影响

目的:观察平喘颗粒对哮喘小鼠肺组织Toll样受体2(toll-like receptor2,TLR2)和TLR4表达的影响.方法:将30只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、平喘颗粒(31.2 g·kg-1)组,每组10只.除对照组外,采用腹腔注射加雾化卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏液[100μgOVA...     

TLR4对脑缺血再灌注小鼠海马TRIF表达的影响

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)对脑缺血再灌注小鼠海马TRIF表达的影响.方法 采用TLR4抗体封闭阻断TLR4,Western blot和RT-PCR 检测海马TLR4蛋白、IFN-β蛋白和TLR4 mRNA表达量,免疫组化方法检测TRIF袁达变化.小鼠随机分为3组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(I组)、TLR4阻断组(T组),各组又分1、2、3及4d 4个时间点组.结果 缺血再灌注组 TLR4 蛋白、TLR4 mRNA、IFN-β和TRIF表达水平明显高于假手术组表达水平(P<0.05),而TLR4阻断组TLR4蛋白、TLR4 mRNA、IFN-β和TRIF表达水平明显少于缺血再灌注组(P<0.05).结论 缺血再灌注可激活TLR4,并引起TRIF和IFN-β表达量增加,而采用TLR4抗体封闭阻断TLR4后,TRIF和IFN-β表达量减少.本研究提示,TLR4通过上调TRIF表达参与脑缺血再灌注的反应机制.     

LPS诱导鼠肝脏和腹腔巨噬细胞TLR4表达和肝损伤的动态分析

目的观察LPS刺激后不同时间点肝脏和腹腔巨噬细胞的TLR4表达,以及分析TLR4动态变化规律.方法以BALB/c小鼠为模型,腹腔注射LPS后不同时间取肝脏和腹腔巨噬细胞抽提RNA,逆转录-聚合酶链式反应半定量分析TLR4mRNA各时相的表达.体外培养的腹腔巨噬细胞不同剂量LPS刺激后观察TLR4mRNA的表达规律.结果注射LPS 3 h后肝脏和腹腔巨噬细胞TLR4mRNA开始明显下降,第6、12 h基本检测不到,24 h后逐渐恢复,30 h小鼠死亡时基本恢复到正常.不同浓度LPS均下调腹腔巨噬细胞TLR4mRNA的表达,剂量之间差异无显著性.血中ALT在3h开始升高,6h达高峰,肝细胞病理变化出现在12 h,随时间的延长而加重.结论LPS可直接损伤肝细胞,这种损伤与TLR4无关.LPS可能通过TLR4介导肝组织的病理改变.     

戊乙奎醚预处理对内毒素性脑损伤大鼠CD14和TLR4mRNA的影响

【摘要】 目的 探讨盐酸戊乙奎醚预处理对内毒素性脑损伤大鼠CD14和TLR4mRNA的影响。方法 将40只Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组（NS组）,内毒素性脑损伤模型组（LPS组）,低剂量戊乙奎醚干预组（PL组）,高剂量戊乙奎醚干预组（PH组）4组,每组各10只,实验大鼠注射内毒素4h后处死,留取脑组织标本。光镜下观察脑组织病理变化,RT PCR法检测CD 14和TLR4 mRNA表达,ELISA法测定TNF a的含量。结果 光镜下LPS组脑细胞损伤严重,PL组、PH组与LPS组对比脑损伤减轻。与NS组相比较,LPS组、PL组及PL组脑组织TLR4和CD14 mRNA表达水平均升高（P＜005）;与LPS组比较,PL组和PH组脑组织TLR4和CD14 mRNA表达水平均降低（P＜005）;与PL组比较,PH组TLR4和CD14 mRNA表达水平降低（P＜005）。与NS组相比较,TNF α含量升高（P＜005）;与LPS组比较,PL组和PH组脑组织TNF α含量降低（P＜005）;与PL组比较,PH组TNF α降低（P＜005）。结论 盐酸戊乙奎醚预处理可减轻大鼠内毒素的脑损伤,机制可能与降低CD14及TLR4mRNA的表达,阻断炎症信号传导通路,减轻炎症介质的释放有关。     

TLR2与TLR4在大肠癌组织中的表达特点

目的 观察Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在大肠癌组织和大肠癌细胞株上的表达特点.方法 采用SP免疫组化法检测70例大肠癌组织和配对癌旁相对正常组织TLR2,TL4的表达,采用免疫荧光流式细胞术检测TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480细胞上表达的平均荧光强度及阳性细胞率.结果 TLR2在大肠癌组织上的表达明显强于癌旁组织(X2=13.629,P=0.003),而TLR4的表达在大肠癌组织与癌旁组织差异元显著性(P＞0.05).根据平均荧光强度及阳性细胞率,TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480上基本无表达.结论 TLR2可能与大肠癌的疾病过程密切相关.     

姜黄素通过抑制TLR4信号通路下调脂多糖诱导的肺巨噬细胞分泌TNF-a、IL-6和IL-8

目的：研究姜黄素对原代培养的肺巨噬细胞表达TLR4mRNA及分泌TNF-a、IL-6和IL-8的影响。方法用脂多糖（LPS）建立体外肺巨噬细胞体外炎症损伤模型,用ELISA观察肺巨噬细胞分泌TNF-a、IL-6和IL-8和用RT-PCR、western blot观察肺巨噬细胞TLR4的表达。结果 LPS明显诱导肺巨噬细胞分泌TNF-a、IL-6和IL-8增加及TLR4的增量表达（P〈0.01）,姜黄素可抑制这种作用（P〈0.05）,且与姜黄素药物浓度有关（P〉0.05）。结论姜黄素对肺巨噬细胞的抗炎机制可能是通过抑制TLR4的表达,通过脂多糖-TLR4信号传导通路,从而减少炎性细胞因子的释放;姜黄素有可能作为一种有研究潜力的抗感染治疗的中药。     

TLR2和TLR4在原因不明复发性流产绒毛和蜕膜中的表达及其意义

目的本实验通过检测原因不明复发性流产(URSA)患者和健康早孕者TLR2和TLR4在子宫绒毛和蜕膜中的表达,及外周血清中TNF-α及IL-10的水平,初步探讨TLR2和TLR4与URSA存在相关性,以及在URSA发生发展中的可能途径。方法前瞻性研究2008~2009年在浙江大学医学院附属妇产科医院和杭州市第一人民医院门诊患者。年龄在25~35周岁,孕龄<12周。将有≥3次自然流产的URSA患者作为研究组;将曾有正常生育史,本次要求行人工流产终止妊娠的早孕健康妇女作为对照组,分别选择20例。免疫组化检测TLR2和TLR4在两组绒毛和蜕膜中的表达;用ELISA法检测血清TNF-α及IL-10的水平,比较是否存在差异性。结果①TLR2在两组绒毛、蜕膜中表达差异无统计学意义(P>0.05);②TLR4在研究组绒毛、蜕膜表达明显增强,有显著统计学意义(P<0.05);③TNF-α在研究组中的水平明显增高,有显著统计学意义(P<0.05);IL-10在两组中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR4可能是通过释放过量的Th1型细胞因子,导致Th1/Th2失衡,从而极可能参与URSA的发病。     

强的松对脂多糖致大鼠急性肺损伤时TLR4表达的影响

目的 观察糖皮质激素对急性肺损伤时呼吸道上皮内Toll样受体4（TLR4）表达的影响。方法 健康雄性SD大鼠气管内滴注LPS溶液制作急性肺损伤模型,并给予强的松治疗,72小时后,观察支气管肺泡灌洗液白细胞总数、组织病理学的改变和免疫组化的特点及其强的松的影响。结果 模型组支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数高于正常组（P〈0.05）,强的松治疗组白细胞总数低于模型组（P〈0.05）。病理学检查：模型组肺部炎症程度较正常组及强的松治疗组严重（P〈0.05）。免疫组化检查：光镜下可见TLR4表达,模型组强于正常组及强的松治疗组;半定量分析显示强的松治疗组主支气管及肺内细支气管上皮细胞内TLR4表达的吸光度值与模型组比显著降低。结论 LPS刺激可引起大鼠急性肺损伤,TLR4的表达量增加,强的松治疗后TLR4的表达较模型组降低。强的松对急性肺损伤有治疗作用。     

半定量RT-PCR法检测TLR4在人大肠癌中的表达

目的研究TLR4 mRNA在人大肠癌组织和正常肠道组织之间的差异性表达,探讨TLR4同肠道肿瘤之间的关联性。方法以GAPDH为内参,运用半定量RT-PCR技术检测24例正常大肠组织标本和24例新鲜大肠癌组织标本中TLR4、CD14、MD2、TGF-β和VEGF因子表达水平,应用多媒体图象分析软件进行分析和比较。结果TLR4、MD2、CD14、TGF-β和VEGF在肿瘤组织中的表达量均比在正常组织中的表达量增强,并且TLR4与TGF-β、VEGF之间表达存在较强的关联性（r〉0.838,P〈0.01）。结论人大肠组织中TLR4表达量与肿瘤的发生具有一定的相关性,推测可能诱导肿瘤相关细胞因子和趋化因子的产生。     

TLR4信号转导通路中胞外分子之间的相互作用

细菌脂多糖(LPS)介导的炎症信号主要通过一种跨膜蛋白toll样受体4(toll-likereceptor4,TLR4)传入胞内,引起一系列相应的细胞效应。近年来对该信号通路的研究取得了一些新的进展,本文综述了该信号通路中胞外的主要分子LPS、脂多糖结合蛋白(LBP)、CD14、TLR4和髓样分化蛋白-2(MD-2),及其各分子之间的相互作用。通过这些分子之间的相互作用激活TLR4并触发信号转导。