沉默Sp5对mEPMCs中Wnt信号通路相关因子及增殖能力的影响

目的 探讨沉默转录因子特异蛋白5(Sp5)对小鼠胚胎腭突间充质细胞（m EPMCs）中Wnt信号通路相关因子及增殖能力的影响。方法 体外分离并培养孕14.5 d C57BL/6J小鼠的mEPMCs，细胞免疫荧光染色鉴定细胞来源；利用慢病毒转染技术沉默mEPMCs中Sp5基因的表达，Western blot验证转染效率。后续实验设空白对照组、空载病毒组、沉默组（Sp5-shRNA组）。各组细胞转染72 h后，采用Western blot及RT-qPCR法分别检测β-连环蛋白（β-catenin）、丝氨酸/苏氨酸激酶（GSK-3β）、Wnt家族成员3a(Wnt3a)、特异性周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白及m RNA的表达；CCK-8法检测细胞增殖能力；免疫荧光法检测5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）阳性细胞增殖率；流式细胞术检测细胞周期。结果 成功分离mEPMCs并沉默Sp5的表达。Western blot及RT-qPCR结果显示，Sp5-shRNA组β-catenin、GSK-3β、Wnt3a、CyclinD1蛋白及mRNA表达水平均高于空白对照组和空载病毒组（P<0....     

慢病毒介导的siRNA沉默结肠癌HCT116细胞中Slug基因表达的影响

目的探讨慢病毒载体介导RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体在结肠癌HCT116细胞中的沉默效应。方法构建Slug基因特异性siRNA慢病毒载体,感染结肠癌HCT116细胞,设立空白对照组、阴性对照组及Slug siRNA三组,应用qRT-PRC和Western blot方法分别从基因和蛋白水平检测各组干扰质粒对Slug基因的干扰效果。结果转染Slug siRNA后,结肠癌HCT116细胞中Slug基因mRNA和蛋白表达明显受到抑制(P<0.05)。结论 Slug siRNA能明显沉默靶基因Slug的表达,并且可能成为潜在治疗肿瘤的新靶点。     

慢病毒介导的PRL-3 shRNA对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响

目的 观察慢病毒介导的 shRNA 沉默肝再生磷酸酶-3（PRL-3）基因对结肠癌 SW480 细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法 实验分组为空白对照组、阴性对照组、转染组。将携带 PRL-3 shRNA 的慢病毒载体转染结肠癌SW480 细胞,建立稳定沉默 PRL-3 的细胞株,real-time PCR 检测转染后 PRL-3 mRNA 的相对表达水平。采用 MTT法、平板克隆形成实验检测转染后细胞增殖能力;采用 Transwell 侵袭实验、侵袭小室法检测转染后细胞迁移及侵袭能力;采用流式细胞术检测转染后细胞凋亡率变化。结果 稳定沉默 PRL-3 的细胞株构建成功,转染组 PRL-3mRNA 的相对表达水平低于空白对照组、阴性对照组（P＜0.05）,空白对照组、阴性对照组比较差异无统计学意义。PRL-3 shRNA 转染 SW480 细胞 72 h 后,转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞增殖能力受到抑制,转染 120 h时最明显（P＜0.05）。转染组克隆形成能力较空白对照组、阴性对照组下降（P＜0.05）。转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞迁移、侵袭能力下降,凋亡率增加（P＜0.05）。结论 结肠癌 SW480 细胞转染 PRL-3 shRNA 可减少 PRL-3 的表达,有效抑制 SW480 细胞增殖,促进其凋亡,PRL-3 可能成为治疗结肠癌的靶基因。     

TMPRSS4基因沉默对甲状腺滤泡状癌细胞侵袭能力的影响

目的 观察TMPRSS4基因沉默在甲状腺癌WRO细胞体外侵袭能力的影响.方法 构建慢病毒载体转染甲状腺癌WRO细胞,分为三组:空白对照组(正常WRO细胞),NC-ShRNA阴性对照组,TMPRSS4-ShRNA组.使用Western Blot方法检测转染后细胞的TMPRSS4表达,确定转染效果.采用Transwell法观察细胞体外侵袭力的改变.结果 Western Blot结果显示转染组TMPRSS4蛋白表达显著低于阴性转染组及空白对照组.侵袭实验结果提示TMPRSS4基因沉默组相比于空白对照组和阴性对照组侵袭穿膜细胞数显著减少(P＜ 0.05).结论 下调TMPRSS4表达可有效减少甲状腺癌WRO细胞的侵袭能力.     

白杨素通过调控miR 199a 3p/ZHX1抑制食管鳞癌细胞增殖和侵袭

摘 要 目的：探究白杨素（Chrysin,CR）对食管鳞癌细胞增殖和侵袭的影响及其潜在的分子机制。方法: 将食管鳞癌细胞分为对照组（未转染、未CR处理细胞常规培养）、miR NC组（稳定转染的miR 199a 3p NC用等量DSMO培养）、miR mimic组（稳定转染的miR 199a 3p mimic用等量DSMO培养）、CR miR NC组（稳定转染的miR 199a 3p NC用终浓度100 μmol·L-1 CR培养）、CR miR mimic组（稳定转染的miR 199a 3p mimic用终浓度100 μmol·L-1CR培养）,48 h后,采用流式细胞仪检测转染效率,采用实时荧光定量PCR（qRT PCR）检测EC9706细胞中miR 199a 3p和锌指和同源框蛋白1（Zinc fingers and homeoboxes protein 1,ZHX1）表达情况,采用荧光素活性和蛋白免疫印迹（Western blot）检测miR 199a 3p对ZHX1的调控作用,分别采用MTT和transwell小室实验检测EC9706细胞增殖和侵袭能力。结果: 流式细胞仪检测结果显示转染效率达到80%以上;CR miR NC组miR 199a 3p的表达水平显著低于miR NC组（P＜0.05）;CR miR mimic组miR 199a 3p的表达水平显著低于miR mimic组（P＜0.05）,CR miR NC组ZHX1的表达水平显著高于miR NC组（P＜0.05）;CR miR mimic组ZHX1的表达水平显著高于miR mimic组（P＜0.05）。荧光素酶活性测定显示,在转染ZHX1 3’UTR的细胞中,与miR 199a 3p NC组相比,miR 199a 3p mimic组荧光素酶活性显著降低（P＜0.05）,而在转染ZHX13’UTR Mut的细胞中,miR 199a 3p mimic组与miR 199a 3p NC组的荧光素酶活性差异无统计学意义（P＞0.05）,CR miR NC组EC9706细胞增殖和侵袭能力显著低于miR NC组（P＜0.05）,CR miR mimic组EC9706细胞增殖和侵袭能力显著低于miR mimic组（P＜0.05）。结论: CR通过调控miR 199a 3p/ZHX1抑制食管鳞癌细胞增殖和侵袭,为食管鳞癌的靶向治疗提供一定的理论依据。     

携带LMO3基因逆转录病毒载体的构建及其在NIH/3 T3细胞中的表达

目的：构建单纯LIM蛋白3（LMO3）的逆转录表达载体,并观察其在 NIH/3T3细胞中的表达情况。方法重组载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定后,脂质体法转染到pA317包装细胞,G418筛选稳定的病毒产生细胞株。重组逆转录病毒体外感染NIH/3T3,并对其进行病毒滴度检测,NIH/3T3细胞分为3组：以pLXSN-LMO3转染为实验组,以pLXSN转染为阴性对照组,正常细胞为空白对照组。采用免疫荧光组化染色和蛋白印迹（ Western blot）法鉴定NIH/3T3细胞中LMO3的表达。结果重组逆转录病毒载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定构建正确,其病毒滴度平均可达4.04×106 cfu/ml,各组NIH/3T3细胞免疫荧光组化染色及Western blot检测均有LMO3蛋白表达,其中实验组高表达LMO3,与阴性对照组、空白对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论成功构建了携带LMO3基因逆转录病毒载体,并能在NIH/3T3细胞中高表达LMO3蛋白,为下一步开展基因治疗奠定了基础。     

HCV Core基因真核表达载体构建及其对HeLa细胞自噬的影响

目的 构建丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白（Core）真核表达载体,并研究其对人宫颈癌 HeLa细胞自噬功能的影响。方法 以 HCV复制子质粒 pJFH1为模板,PCR法扩增 HCV Core 基因片段,经纯化回收后与 PLVX-IRESZsGreen1载体用同源重组法相连,构建 PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,并经测序验证其序列的正确性。转染宫颈癌 HeLa细胞,并设 PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒转染组、PLVX-IRES-ZsGreen1空载体转染对照组以及未转染质粒空白对照组,通过免疫印迹法验证 HCV Core蛋白在 HeLa细胞中的表达,并用免疫荧光（IF）和免疫印迹检测自噬生物标记物微管相关蛋白 1轻链 3（LC3）的表达水平。结果 获得 PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,测序结果表明构建的重组质粒序列完全正确,HCV Core重组蛋白可在 HeLa细胞中有效表达;免疫荧光和免疫印迹结果表明,HCV Core过表达细胞 LC3焦点和 LC3 Ⅱ蛋白表达水平明显增多,PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒转染组的细胞 LC3 Ⅱ水平（1.069±0.049）高于 PLVX-IRES-ZsGreen1空载体转染对照组（0.776±0.047）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 成功构建了 PLVX-IRES-ZsGreen1-Core 重组质粒,HCV Core 蛋白过表达可诱导 HeLa 细胞自噬。     

Notch1(NICD)过表达真核载体构建及对大鼠BMSCs增殖分化的影响

目的 构建Notch1(NICD)过表达真核载体,探讨其对大鼠骨髓间充质干细胞（bone mesenehymal stem cells,BMSCs）增殖分化的影响。方法 以大鼠BMSCs为研究对象,构建Notch1(NICD)过表达真核载体,将pEGFP-N1-NICD质粒转染BMSCs,实验分为空白对照CON组、空载体组和转染组,转染48h后观察细胞一般形态,Realtime PCR和Western blotting检测NSE、GFAP 和Notch1基因和蛋白表达,流式检测转染后细胞凋亡和细胞周期情况;MTT检测增殖情况。结果 经DNA测序结果,重组质粒pEGFP-N1-NICD编码序列与设计完全一致,转染48h后转染组和空载体组的BMSCs均可表达绿色荧光。转染组Notch1、GFAP基因相对表达量显著高于空载体组和CON组（P＜0.05）,Western blotting检测结果与之类似。转染48h后,转染组活细胞比率及早期凋亡率、晚期凋亡率与CON组和空载体组比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）;空载体组与CON组晚期凋亡率比较差异具有统计学意义（P＜0.05）,转染组细胞处于G1/G0细胞比例显著高于CON组和空载体组（P＜0.01）,而处于S和G2/M期细胞比例显著低于CON组和空载体组（P＜0.01）,转染组增殖曲线值随时间逐渐低于CON组和空载体组,到第4d时显著低于CON组和空载体组（P＜0.05）。结论Notch1(NICD)过表达真核载体构建成功,高表达Notch1(NICD)基因可能在一定程度上诱导BMSCs凋亡、抑制其增殖,且表现诱导向神经胶质样细胞分化。     

肝癌患者锌指蛋白281的表达水平及其对肝癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨肝癌患者锌指蛋白281（ZNF 281）的表达水平,并分析其对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法 收集河南大学第一附属医院2014年1月至2017年1月经手术切除后病理切片证实的肝癌标本82例及癌旁正常组织标本50例,采用免疫组化法检测肝癌和癌旁正常肝组织标本中ZNF 281蛋白表达情况,并分析ZNF 281阳性表达与临床病理参数[性别、年龄、肿瘤直径、国际恶性肿瘤分期(TNM分期)、淋巴结转移、甲胎蛋白(AFP)]的关系;采用荧光定量PCR检测上述组织中ZNF 281 mRNA的表达情况;采用沉默RNA （siRNA） ZNF 281转染人肝癌细胞HepG2,根据转染情况分为空白对照组（正常培养的HepG2）、阴性对照组、siRNA ZNF 281组[转染ZNF 281基因特异性siRNA干扰组],并用荧光定量PCR检测转染后HepG2细胞中ZNF 281 mRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测转染后细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 肝癌组织中ZNF 281 mRNA的相对表达量高于正常肝组织（P<0.05）;肝癌组织ZNF 281蛋白阳性表达率为74.39%,高于癌旁正常肝组织的18.0%（P<0.05）,且ZNF 281蛋白阳性表达患者肿瘤直径>5 cm,TNM为Ⅲ~Ⅳ期,淋巴结转移比例分别为65.57%、73.77%、45.90%,高于ZNF 281蛋白表达阴性的38.10%、38.10%、14.29%（P<0.05）。siRNA ZNF 281组HepG2细胞中ZNF 281 mRAN表达量低于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）;siRNA ZNF 281组细胞生长抑制率和细胞凋亡率均高于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）;空白对照组和阴性对照组HepG2细胞中ZNF 281 mRAN表达量及细胞生长抑制率和细胞凋亡率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 肝癌组织中ZNF 281蛋白及其RNA均呈高表达;沉默ZNF 281基因可抑制人肝癌细胞HepG2增殖,诱导其凋亡。     

茶多酚通过miR-33a-5p/RUNX2介导人牙槽骨成骨细胞增殖和凋亡

摘要：目的:探讨茶多酚对人牙槽骨成骨细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法:分离培养人牙槽骨成骨细胞,用含0.000 1～100μg·ml-1茶多酚的DMEM培养基培养人牙槽骨成骨细胞,记为不同浓度茶多酚处理组,用不含茶多酚的正常培养基培养的细胞作为对照组;将pcDNA3.1-NC、pcDNA3.1-RUNX2、anti-NC、anti-miR-33a-5p、mimics-NC、miR-33a-5p分别转染至人牙槽骨成骨细胞中,记为pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-RUNX2组、anti-NC组、anti-miR-33a-5p组、mimics-NC组、miR-33a-5p组。细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞增殖核抗原Ki67（Ki-67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、B细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、runt相关转录因子2（RUNX2）蛋白表达;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-33a-5p和RUNX2 m RNA表达;荧光素酶报告实验检测miR-33a-5p对RUNX2的靶向调控。结果:各浓度茶多酚处理的人牙槽骨成骨细胞的细胞活力显著升高,凋亡率显著降低（P<0.05）,其中茶多酚浓度为1μg·ml-1处细胞活力和凋亡率达到极值;1μg·ml-1茶多酚处理的成骨细胞中Ki-67、PCNA、Bcl-2水平及RUNX2 m RNA和蛋白表达水平显著升高,Bax和miR-33a-5p水平显著降低（P<0.05）。过表达RUNX2或抑制miR-33a-5p表达,细胞活力及Ki-67、PCNA、Bcl-2水平显著升高,细胞凋亡率和Bax水平显著降低（P<0.05）。miR-33a-5p靶向负调控RUNX2。结论:茶多酚可能通过miR-33a-5p/RUNX2轴促进人牙槽骨成骨细胞增殖,抑制细胞凋亡。     

沉默KLF4表达对人肝星状细胞HSC-LX2生物学行为的影响

目的 筛选有效沉默KLF4基因表达的siRNA,观察KLF4基因沉默对人肝星状细胞HSC-LX2生物学行为的影响.方法 设计并化学合成针对人KLF4基因的3对siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3),转染人肝星状细胞HSC-LX2,以转染非特异siRNA作为阴性对照.采用实时荧光定量RT-PCR(Real-time RT-PCR)和Western blot方法分析KLF4 mRNA和蛋白的表达情况,筛选出沉默KLF4效果最好的1个siRNA,将其转染入HSC-LX2后,用MTT法检测KLF4沉默对HSC-LX2增殖的影响.采用ELISA法检测细胞培养上清中的转化生长因子1(transforming growth factor,TGF-1)、白介素1(interleukin-1,IL-1)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达情况.结果 Real-time RT-PCR和western blot均显示siRNA3沉默效果最好.故后续试验均采用siRNA3沉默KLF4的表达.MTT实验结果 显示,在转染siRNA3,12 h、24 h和48 h后,细胞活力出现明显下降.ELISA结果 显示,转染siRNA3,48 h以后,TGF-β1、TNF-α、IL-1β表达量也明显降低.结论 siRNA3可有效沉默KLF4基因表达,KLF4基因沉默可以抑制HSC-LX2的增殖,影响其生物学行为,使细胞中的促进胶原表达的三种细胞因子TGF-1、TNF-α以及IL-1表达量下降.     

Galectin-3 和β-catenin 在子宫内膜异位症中的表达及二者的相关性

目的探讨半乳糖凝集素-3（Galectin-3）和β连环素（β-catenin）在子宫内膜异位症（EMs）患者的异位内膜和在位内膜中的表达及其在EMs 发病中的作用及关系。方法应用免疫组织化学法检测34 例EMs 患者（EMs 组）的异位内膜和在位内膜及30 例非子宫内膜异位症（正常对照组）的在位子宫内膜中的半乳糖凝集素-3 和β连环素的表达情况,并分析二者的相关性。结果半乳糖凝集素-3 在EMs 组异位内膜、在位内膜及正常对照组在位内膜的阳性表达率分别为88.2%、85.3%、50.0%;β连环素在上述3 组的异常表达率分别为55.9%、52.9%、26.7%。EMs 异位内膜组、在位内膜组的半乳糖凝集素-3 的阳性表达率和β连环素的异常表达率均高于正常对照组（P＜0.05）。EMs 组异位内膜、在位内膜中的半乳糖凝集素-3 的阳性表达和β连环素的异常表达呈正相关（rs 分别为0.512、0.428,P＜ 0.01）。结论半乳糖凝集素-3 和β连环素可能在EMs 的发病中共同起着重要作用。     

Smad6信号干扰对MSCs骨向分化中Smad5及Smurf1基因表达的影响

目的研究在骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导的骨髓间充质干细胞(MSCs)骨向分化中Smad6信号干扰对Smad5、Smurf1基因表达的影响。方法培养小鼠骨髓MSCs,并分为3组:A组为对照细胞;B组细胞用携带绿色荧光蛋白(GFP)的空白载体病毒转染+BMP-2骨向诱导;C组细胞用Smad6重组RNA干扰载体转染+BMP-2诱导。结果病毒转染后GFP在MSCs中有效表达,病毒转染效率接近100%。与A组比较,BMP-2诱导24h显著提高了B组Smurf1 mRNA水平(P<0.01);而Smad6信号干扰在两个时间点则进一步提高了C组Smurf1 mRNA水平,并显著高于B组(P<0.01)。C组磷酸化的Smad5(pSmad5)和Smurf1水平在两个时间点也显著高于B组(P<0.01),而Smad5蛋白水平则未受影响。结论在BMP-2诱导的MSCs骨向分化中,Smad6 RNA干扰可促进Smad5磷酸化,并引起Smurf1基因表达代偿性增高。     

MACC1基因下调对胃腺癌细胞的生长抑制作用

目的研究下调MACC1 表达对胃腺癌细胞株MGC-803 生长作用的影响。方法设计并合成RNAi 干扰片段,脂质体介导MACC1-siRNA1（MACC1-siRNA1 组）和MACC1-siRNA2（MACC1-siRNA2 组）转染MGC-803 细胞,同时设非特异性干扰片段为对照组。应用qRT-PCR 检测转染后各组MACC1 的mRNA 表达,噻唑蓝比色实验、平板克隆形成实验和流式细胞周期实验检测RNAi 转染后MGC-803 细胞增殖能力的变化,Western blot 检测转染后MACC1、P21、CDK4、CCND1 和c-myc 蛋白的表达,并进行比较分析。结果与对照组相比,MACC1-siRNA1 组和MACC1-siRNA2 组MACC1 表达在mRNA 及蛋白水平下降,细胞的增殖速度变慢,单克隆形成数量减少,细胞周期中G1 期细胞的比例显著升高,P21 的表达增加,MACC1、CDK4、CCND1 和c-myc 的表达减少。结论下调 MACC1 能使MGC-803 细胞的细胞周期进程受阻,抑制细胞的增殖,MACC1 可以作为治疗胃癌的有效靶点。     

气道上皮细胞紧密连接在小鼠哮喘中的病理学改变

摘要： 目的 探讨小鼠支气管哮喘 （哮喘） 中气道上皮紧密连接的病理学改变。方法 10 只小鼠随机分为对照组和哮喘组, 每组 5 只。哮喘组于第 0、 7 天腹腔注射鸡卵清蛋白 （OVA） 溶液, 在第 14、 15、 16 天以雾化的 OVA 熏诱小鼠, 1 h/次、 1 次/d; 对照组用 PBS 溶液替代 OVA; 2 组小鼠在第 18 天回收肺组织, 采用免疫荧光染色法评价小鼠哮喘模型的有效性, 荧光定量 PCR检测紧密连接相关蛋白基因Claudin 1、 Claudin 3、 Claudin 4、 Claudin 5、 Claudin 7、 Clau⁃ din 10在肺组织中的表达。结果 哮喘组 Claudin 3、 Claudin 4、 Claudin 10 mRNA 水平较对照组低 （P＜0.05）, 而 Clau⁃ din 1、 Claudin 5、 Claudin 7 mRNA 水平与对照组比较差异无统计学意义 （P＞0.05）。结论 哮喘病理过程中气道上皮细胞紧密连接松散, 提示气道上皮屏障破坏。     

香烟提取物对气道平滑肌细胞增殖作用的研究

摘要： 目的 探讨香烟提取物 （CSE） 对人气道平滑肌细胞 （ASMCs） 增殖以及钙网织蛋白 （CRT）、 CCAAT 增强子结合蛋白α （CEBPα） 表达的影响及机制。方法 （1） 通过收集经不同浓度 CSE 处理 24 h 的 ASMCs, 分为对照组、 2.5%CSE 组、 5%CSE 组、 10%CSE 组。以 MTT 法分析各组细胞增殖情况, 采用逆转录聚合酶链反应 （RT-PCR） 检测各组细胞 CEBPα的 mRNA 水平; 免疫印迹法检测 4 组细胞 CRT、 CEBPα的蛋白水平。（2） 在 10%CSE 组, 分别在 ASMCs 中转染阴性对照 siRNA、 CRT 的 siRNA, 比较 2 组 ASMCs 的 CEBPα、 CRT 表达及细胞增殖情况。结果 （1）对照组、 2.5％CSE 组、 5％CSE 组、 10％CSE 组 ASMCs 的 CEBPα蛋白表达依次递减, CRT 和细胞增殖程度呈依次增高（P＜0.05）; 而 CEBPα mRNA 表达差异无统计学意义 （P＞0.05）。（2） 在 10％CSE 作用下, CRTsiRNA 组中 ASMCs 的 CEBPα表达较阴性对照 siRNA 组增强 （P＜0.05）, 而 CRT 和细胞增殖程度均较相应阴性对照 siRNA 组减弱 （P＜ 0.05）。结论 CSE 可使 ASMCs 中 CRT 的表达增强, 从而抑制 CEBPα mRNA 的翻译, 使 CEBPα的表达减少, 最终促进 ASMCs 的增殖。     

鬼针草总黄酮对肝纤维化大鼠肝星状细胞TGF-β1信号传导通路的影响

目的研究外源性转移生长因子-β1(transforming growth factor betal,TGF-β1)对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的激活作用,观察鬼针草总黄酮(total flavonoids of Bidens Bipinnata L,TFB)对HSC中smad2/7和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达的影响,以探讨TFB抗肝纤维化的作用及分子机制。方法采用Collagenase Ⅳ胶原酶原位肝灌注法分离HSC,MTT法观察TFB对TGF-β1刺激下HSC增殖的作用,ELISA法检测HSC自分泌TGF-β1和产生Ⅰ型胶原的影响;RT-PCR法观察分析TFB对TGF-β1刺激下HSC中smad2/7和Ⅰ型胶原基因表达的影响;Westernblot法观察TFB对TGF-β1刺激下HSC中smad2蛋白表达的影响。结果TGF-β1明显促进HSC增殖、自分泌TGF-β1和产生胶原,促进HSCsmad2、Ⅰ型胶原mRNA及smad2蛋白的表达,明显抑制smad7mRNA表达(P<0.05),TFB作用后,TGF-β1刺激的HSC中smads2mRNA、蛋白和Ⅰ型胶原mRNA表达受到抑制,smad7mRNA表达明显上调。结论TFB抗肝纤维化作用可能与其阻断HSCTGF-β1通路进而阻断HSC的活化、增殖有关。     

姜黄素介导微小RNA-199a-3p基因对前列腺癌细胞的影响

目的 探讨姜黄素调控微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)的表达对前列腺癌C4-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 (1)将体外培养的前列腺癌C4-2细胞分为4组:空白组(无药物干预)和低、中、高3个剂量实验组(20,40,80μmol·L-1姜黄素干预),选取对C4-2细胞的增殖抑制最明显姜黄素浓度用于...     

扶正化瘀方含药血清对肝星状细胞activinA/smad信号通路活化的影响

目的　探讨扶正化瘀方含药血清对肝星状细胞（HSC）激活素A（activinA）/smad信号通路活化的影响。方法　20只SD大鼠按照随机数字表法分为对照组及扶正化瘀（Fzhy）-低、中、高剂量含药血清组，每组5只，分别以蒸馏水，0.75、1.5、3.0 g/kg扶正化瘀溶液（扶正化瘀胶囊药物粉末与蒸馏水配制）灌胃1次/d，连续3 d，取血制备空白血清（对照组）和含药血清。以大鼠HSC-T6细胞为研究对象，分别用5%、10%、20%体积分数的各组含药血清培养细胞。CCK-8检测细胞存活率，选取细胞存活率在50%左右的体积分数重新分为对照组及Fzhy-低、中、高剂量组。流式细胞术检测细胞周期及凋亡率、线粒体膜电位变化和活性氧（ROS）水平；实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞中activinA、smad3、samd7、核因子（NF）-κB的mRNA水平；蛋白质印迹法检测细胞中activinⅡA受体（ActRⅡA）、smad3、NF-κB p65、胱天蛋白酶（caspase）-3的蛋白水平。结果　各扶正化瘀含药血清组的细胞存活率均低于对照组（P＜0.05），选择体积分数为10%的含药血清进行后续实验。对照组和各扶正化瘀方含药血清组细胞周期和凋亡率差异均无统计学意义。对照组及Fzhy-低、中、高剂量组细胞内ROS水平及线粒体膜电位水平降低比例逐次升高（P＜0.05）。与对照组比较，Fzhy-中、高剂量组smad3 mRNA表达水平降低，smad7 mRNA升高，Fzhy-低、中、高剂量组NF-κB、activinA mRNA，smad3、NF-κB p65、ActRⅡA蛋白表达水平降低，Fzhy-低剂量组、中剂量组caspase-3蛋白表达水平升高（P＜0.05）；与Fzhy-低剂量组相比，Fzhy-中、高剂量组smad3 mRNA表达水平降低，Fzhy-中剂量组activinA及smad7 mRNA升高（P＜0.05）。结论　扶正化瘀方含药血清可通过影响HSC-T6细胞增殖、参与细胞的氧化应激以及调节细胞activinA/smad信号转导通路来实现抗纤维化作用。