硫化氢对大鼠急性脊髓损伤的保护作用

目的 探讨硫化氢 （H2S） 对大鼠急性脊髓损伤后自噬及细胞凋亡的影响。方法 36 只健康雄性 SD 大鼠随机分为假手术组 （Sham 组）、 单纯脊髓损伤组 （模型组）、 H2S 处理组(H2S 组), 每组 12 只。采用 Allen’ s 法构建大鼠脊髓损伤模型, Sham 组只行椎板切除术, 暴露脊髓不打击; H2S 组在脊髓损伤后 1 h 腹腔注射 50 μmol/kg 硫氢化钠;模型组给予等体积生理盐水。各组脊髓损伤 24 h 后取出脊髓组织, Western blot 检测 LC3、 p70S6K 和 Cleaved caspase-3 表达; 免疫荧光法检测 LC3 表达; TUNEL 染色法检测各组细胞凋亡率。结果 与 Sham 组相比, 模型组 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ, Cleaved caspase-3 表达升高,p70S6K 表达降低、 细胞凋亡率升高 （P < 0.01）; 与模型组相比, H2S 组 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、 Cleaved caspase-3 表达降低, p70S6K 表达升高, 细胞凋亡率下降（P < 0.01）。结论 H2S 可抑制大鼠急性脊髓损伤后自噬并减少细胞凋亡。     

Exendin-4 对大鼠脊髓损伤后氧化应激和神经细胞凋亡的影响

目的研究Exendin-4 对大鼠脊髓损伤后氧化应激和神经细胞凋亡的作用。方法成年雄性SD 大鼠36 只（体质量200~250 g）随机分为3 组（n=12）：假手术组（Sham 组）、单纯脊髓损伤组（SCI 组）、Exendin-4 组（Ex-4 组）。Sham 组只暴露脊髓,不打击;SCI 组和Ex-4 组均采用Allen′s 重物打击法制作脊髓损伤模型;Ex-4 组在脊髓损伤后立即腹腔内注射Exendin-4 溶液,剂量10 μg/只;SCI 组和Sham 组均注射等体积生理盐水。在24 h 后检测各组脊髓组织中丙二醛（MDA）含量和过氧化氢酶（CAT）活性,TUNEL 法检测神经细胞凋亡情况,Western blot 检测 caspase-9 和凋亡诱导因子（AIF）的表达情况。结果与Sham 组相比,SCI 组脊髓组织中的MDA 含量明显增加, caspase-9 和AIF 表达水平明显增加,神经细胞凋亡比例明显升高,CAT 活性明显降低（P < 0.01）。与SCI 组相比, Ex-4 组脊髓组织中MDA 含量明显降低,caspase-9 和AIF 表达水平明显降低,神经细胞凋亡比例明显降低,CAT 活性明显升高（P < 0.01）。结论大鼠脊髓损伤后,Exendin-4 可通过减轻氧化损伤抑制神经细胞凋亡。     

依托咪酯对急性脑缺血大鼠海马CA1区细胞凋亡与胱天蛋白酶-3及胱天蛋白酶-10蛋白表达的影响

目的探讨依托咪酯对急性脑缺血大鼠海马CA1区细胞凋亡与胱天蛋白酶(caspase)-3及胱天蛋白酶(caspase)-10表达的影响。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注模型。应用原位末端标记法检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测caspase-3及caspase-10蛋白表达。结果 1脑缺血组大鼠海马CA1区3h即出现凋亡阳性细胞,48h达到高峰,72h凋亡阳性细胞的数量开始下降。依托咪酯组大鼠海马CA1区凋亡细胞数于给药后再灌注6~72h各时间点均低于脑缺血组(P<0.05)。2依托咪酯组大鼠海马CAl区caspase-3及caspase-10蛋白表达于给药后再灌注6~72h各时间点均低于脑缺血组(P<0.05)。结论依托咪酯能够抑制急性脑缺血损伤引起的细胞凋亡。     

艾灸减轻新生小鼠缺氧缺血性脑病的作用及其机制研究

目的　研究艾灸减轻新生小鼠缺氧缺血性脑病（HIE）的作用及其机制。方法　55只出生7 d的ICR小鼠按照随机数字表法分为假手术组（Sham组）、模型组（HI组）和艾灸组（MOX组）。HI组和MOX组采用右侧颈总动脉结扎联合缺氧法制备HIE模型，MOX组建模后艾灸刺激大椎穴，35 min/次，1次/d，连续治疗3 d。处理结束后麻醉取脑，DAPI染色观察脑组织形态结构，TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡；免疫荧光染色检测脑组织caspase-9表达；放射免疫分析法测定脑组织caspase-3含量。结果　与Sham组相比，HI组小鼠脑组织排列疏松，脑组织凋亡细胞数和caspase-9表达显著增多（P＜0.05）；与HI组相比，MOX组小鼠脑组织排列较致密，脑组织凋亡细胞数、caspase-9和caspase-3表达显著减少（P＜0.05）。结论　艾灸可能通过降低脑组织caspase-9和caspase-3的表达来减少细胞凋亡，从而减轻新生小鼠缺氧缺血性脑损伤。     

黄芪甲苷对STZ诱导的糖尿病大鼠肾组织内质网应激及CHOP信号通道的影响

目的：通过观察黄芪甲苷对链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织内质网应激标志蛋白及CHOP信号通路表达的影响,探讨黄芪甲苷延缓早期DN进展的作用机制。方法：采用STZ诱导糖尿病肾病大鼠为动物模型,随机分为模型组（model）、黄芪甲苷组（AS-IV）、苯丁酸组（PBA）,每组6只,并以6只雄性SD大鼠作为正常组（normal）。在治疗第8周末检测各组大鼠24 h尿蛋白排泄率（UAER）、血肌酐（SCR）、尿素氮（BUN）、肾质量指数（KI）;HE和PAS观察肾脏病理改变;流式细胞术检测各组大鼠肾细胞凋亡情况;Western blot检测肾组织eIF2α、PERK和IREα磷酸化水平,并测定GRP78、CHOP、BAX、BCL2和Cleaved caspase-3蛋白的表达变化。结果：与正常组比较,模型组大鼠肾小球UAER明显升高,肾功能恶化,肾脏病理检查示系膜基质积聚,肾组织细胞凋亡水平提高;肾组织eIF2α、PERK及IREα磷酸化水平显著上调,GRP78、CHOP和Cleaved caspase-3表达明显升高,BAX/BCL-2升高。与模型组大鼠比较,黄芪甲苷组大鼠KI和UAER显著降低,肾功能改善,肾小球系膜基质积聚等病理变化显著减轻,肾组织细胞凋亡率显著降低;肾组织eIF2α、PERK和IREα磷酸化水平明显降低,GRP78、CHOP和Cleaved caspase-3表达明显下调,BAX/BCL-2下降。结论：黄芪甲苷能显著减少糖尿病肾病大鼠蛋白尿,改善大鼠肾脏组织病理损伤,这种效应与黄芪甲苷显著抑制肾组织内质网应激、缓解CHOP介导的肾组织细胞过度凋亡有关。     

依布硒啉对大鼠急性脊髓损伤后线粒体的保护作用

【摘要】目的 探讨依布硒啉对大鼠急性脊髓损伤后线粒体氧化损伤、细胞色素C释放及神经细胞凋亡的影响。方法 将60只健康SD大鼠随机分为5组,每组12只。采取用Allen’s法制脊髓损伤（SCI）模型,假手术组仅行椎板切除,SCI模型组行椎板切除+打击,甲基泼尼松龙组打击后给予甲基泼尼松龙腹腔注射处理（30 mg/kg）,依布硒啉组打击后给予依布硒啉腹腔注射处理（10 mg/kg）,生理盐水组打击后给予等体积0.1%二甲基亚砜的生理盐水溶液腹腔注射处理。术后24 h取受损脊髓,检测丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量、细胞色素C表达及神经细胞凋亡情况。结果 依布硒啉组较SCI模型组脊髓组织线粒体中MDA含量明显降低,GSH明显增高,Western blot检测细胞色素C的释放量减少,TUNEL法检测神经细胞凋亡数目明显减少（均P<0.01）。结论 依布硒啉能够改善SCI后线粒体氧化损伤,减少线粒体细胞色素C释放,抑制神经细胞凋亡,对脊髓损伤起到保护作用。      

褪黑素对大鼠急性脊髓损伤内质网应激蛋白GADD153/CHOP表达的影响

目的探讨褪黑素（MT）对急性脊髓损伤（ASCI）大鼠模型脊髓组织GADD153/CHOP表达的影响。方法选取健康SD大鼠96只,随机分为生理盐水处理组（NS组）、乙醇处理组（ET组）及褪黑素治疗组（MT组）各32只。所有大鼠均以改良Allen法制备脊髓损伤模型;MT组在模型制备的基础上给予褪黑素治疗;ET组在模型制备的基础上给予5%乙醇处理;NS组在模型制备的基础上给予0.9%氯化钠溶液处理。分别于伤后3h、1d、3d、7d时各取8只应用改良Tarlov评分法评价其神经功能;Tarlov评分后处死,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色,观察形态学改变和CHOP表达的特点;并应用TUNEL方法检测神经细胞凋亡情况。其量的评定借助于麦克奥迪数码医学图像分析系统A（Motic.med6.0）软件,结果分别用累积光密度（IOD）及细胞凋亡指数（AI）来表示。结果所有实验大鼠脊髓组织均有不同程度出血、水肿、细胞凋亡及坏死。MT组Tarlov评分除3h时间点外,其他各时间点Tarlov评分明显高于ET组及NS组,且差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。MT组与ET、NS组不同时间点CHOP表达、细胞凋亡差异有统计学意义,表现为除3h时间点外,其他各个时间点MT组CHOP表达及细胞凋亡均明显低于其余两组（P〈0.05）。而ET、NS组之间各时间点CHOP表达、细胞凋亡比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 MT可抑制CHOP表达,降低脊髓细胞凋亡指数,可能为其发挥急性脊髓损伤保护作用的重要机制之一。     

MK-801对大鼠脊髓损伤后Caspase-3、HSP27表达的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用兴奋性氨基酸受体非竞争性拮抗剂地卓西平马来酸盐(MK-801)对热休克蛋白27(HSP27)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达及细胞凋亡的影响。方法 20只SD大鼠平均分为2组,采用Al-len’s法造成SD大鼠脊髓损伤模型,分别给予MK-801及生理盐水治疗,24h后取材,用免疫组化染色检测Caspase-3阳性细胞及HSP27阳性细胞,用流式细胞学检测细胞凋亡。结果两组均发现Caspase-3、HSP27表达及凋亡细胞,损伤组Caspase-3表达及神经细胞凋亡指数均高于MK-801组(P<0.01),而HSP27表达MK-801组高于损伤组(P<0.01)。结论脊髓损伤后,MK-801能上调HSP27的表达,抑制Caspase-3表达及神经细胞凋亡。     

糖尿病神经病理性痛大鼠脊髓背角凋亡细胞与凋亡蛋白酶caspase-3的表达变化

目的探讨糖尿病神经病理性痛（DNP）大鼠脊髓背角凋亡细胞及与之相联系的凋亡蛋白酶caspase-3的表达变化。方法健康雄性sD大鼠60只,随机分为DNP组和正常对照组,每组30例。DNP组：腹腔注射链脲霉素（STZ）50mg／kg制备成DNP模型;正常对照组给予等容量0．9％氯化钠溶液。分别给予注射STZ或0．9％氯化钠溶液后3、5、7周时取10只大鼠,采集静脉血样,测定空腹血糖浓度,然后测定机械缩足阈值,取2组大鼠L1-5脊髓组织,采用原位末端标记法（TUNEL）检测2组大鼠脊髓背角神经细胞凋亡的变化。采用免疫组织化学染色法观察凋亡蛋白酶caspase-3的表达变化。结果与正常对照组比较,DNP组血糖升高,机械缩足阈值降低（P〈0．05）,凋亡细胞与凋亡蛋白酶caspase-3的表达逐渐增加（P〈0．05）。结论DNP大鼠脊髓背角凋亡细胞与凋亡蛋白酶caspase-3的表达上调。     

2-脱氧葡萄糖对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织中葡萄糖调节蛋白78及天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶-12的影响研究

目的:探讨2-脱氧葡萄糖(2-DG)对脑缺血再灌注(IR)模型大鼠脑组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)的影响。方法:取大鼠随机分为假手术组、模型组和2-DG组(2-DG100mg·kg-1),每组60只,后2组建立局灶性脑IR模型,假手术组行手术但不插入线栓。建模前7d开始给药,每天1次,连续7d,考察建模后3、6、12、24、48h各组大鼠海马CA1区细胞凋亡情况(阳性细胞率)、GRP78和caspase-12蛋白及其mRNA的表达情况。结果:与假手术组比较,模型组和2-DG组阳性细胞率、GRP78和caspase-12蛋白及其mRNA表达均明显升高(P均<0.01);与模型组比较,2-DG组阳性细胞率、cas-pase-12蛋白及其mRNA表达明显降低,GRP78蛋白及其mRNA表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:2-DG可能通过上调GRP78和下调caspase-12的表达来预防脑IR损伤。     

选择性线粒体分裂抑制剂对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞的保护作用及其机制

【摘要】目的 检测选择性线粒体分裂抑制剂-1（Mdivi-1）对大鼠急性脊髓损伤（ASCI）后神经细胞线粒体中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、细胞色素C（Cyt-C）及神经细胞凋亡的影响。方法成年雌性SD大鼠36只,体质量 250~300g,随机分为假手术组（Sham组）、单纯脊髓损伤组（SCI组）、Mdivi-1预处理组（1.20mg/kg,Mdivi-1组）,各12 只。Sham组只暴露脊髓,不打击。SCI组和Mdivi-1组采用Allen’s方法制备脊髓损伤模型。Mdivi-1组在脊髓打击之前15min尾静脉给予Mdivi-1,而SCI组给予等量二甲基亚砜（DMSO）。Sham组在暴露脊髓8h后立即处死,SCI组和Mdivi-1组均于脊髓损伤后8h处死;然后取出脊髓节段T9~T11,用分光光度计检测各组脊髓组织线粒体中MDA 和GSH的含量,Western Blot法检测线粒体及胞浆内Cyt-C表达情况,荧光TUNEL法观察神经细胞凋亡情况。结果与Sham组相比,SCI组线粒体中Cyt-C和GSH明显减少,但线粒体中的MDA,胞浆中Cyt-C及神经细胞凋亡数目明显增多（P<0.01）;与SCI组相比,Mdivi-1组线粒体中Cyt-C和GSH明显增多,但线粒体中MDA,胞浆中Cyt-C以及神经细胞凋亡数目明显减少（P<0.01）。结论Mdivi-1具有减轻ASCI后神经细胞线粒体氧化损伤,抑制线粒体中Cyt-C 的释放及神经细胞凋亡的作用,促进了脊髓功能恢复。     

基于7T动物磁共振成像研究改良Allen’s法制作脊髓外伤动物模型之细胞过度凋亡机制

目的本研究拟采用改良Allen’s法制作SCI动物模型,通过检测致伤脊髓组织mi R-16的表达探究SCI后细胞过度凋亡的可能机制。方法36只成年SD大鼠随机分为正常组(12只)、假手术组(12只)、模型组(12只),通过改良Allen’s制作SCI模型,观察各组行为学评分(BBB评分)、病理表现及PCR法检测mi R-16的表达。结果模型组在术后3 d及7 d的BBB评分与正常组和假手术组对比差异有统计学意义(P <0.01)。模型组中的mi R-16表达较正常组和假手术组显著升高(P <0.01)。结论研究认为mi R-16参与改良Allen’s法制作大鼠SCI模型后引发神经细胞过度凋亡机制。     

Roscovitine在衣霉素诱导足细胞损伤中的保护作用

目的 应用衣霉素诱导内质网应激（ERS）, 观察 Roscovtine 对 ERS 导致足细胞损伤的保护作用。方法体外培养永生化小鼠足细胞, 取 37 ℃分化成熟细胞随机分组：（1）正常对照组、 DMSO 组及衣霉素 Tunicamycin（1.0 μmol/L, TM） 组, 各实验组分别刺激 3、 6、 12 h。（2） 正常对照组、 Tunicamycin （1.0 μmol/L, TM） 组及 Tunicamycin+Rosco⁃ vitine（20、 40 μmol/L, TM+ROS）组, 各实验组分别刺激 12 h。应用流式细胞术及 TUNEL 法检测足细胞凋亡情况; 应用 Western blot 检测细胞周期素依赖性蛋白激酶 5（Cdk5）及 ERS 标志蛋白 GRP78、 Caspase-12、 CHOP 的表达变化。结果 （1）与正常对照组和 DMSO 组相比, Tunicamycin 刺激 3、 6 及 12 h 后, TM 组足细胞凋亡率及 Cdk5、 GRP78、 Caspase-12 和 CHOP 蛋白的表达水平均呈明显的时间依赖性增高 （P < 0.05）;（2） 加入 Roscovitine 干预后, 与 TM 组相比, TM+ROS（20、 40 μmol/L）组足细胞凋亡率及 GRP78、 Caspase-12 和 CHOP 蛋白的表达水平均显著降低（P < 0.05）, 其干预作用呈现明显的剂量依赖性。结论 Cdk5 抑制剂 Roscovitine 能显著抑制衣霉素诱导的足细胞凋亡,从而发挥细胞保护作用。Roscovitine 的足细胞保护作用可能有助于糖尿病肾病的治疗。     

外伤性背侧脊髓损伤对膀胱排尿神经通路的影响

目的采用伪狂犬病毒(PRV)示踪技术观察大鼠背侧胸腰脊髓损伤(SCI)所致的膀胱排尿神经通路改变。方法清洁级雌性SD大鼠24只,采用随机数字表法分为2组:假手术组12只和背侧SCI损伤组12只。使用标准化SCI动物模型实验装置来制备动物模型,损伤部位定于T12～L1水平,假手术组大鼠仅咬除棘突及椎板,不损伤脊髓。SCI由背侧损伤脊髓,模型制备后,即刻对无SCI、SCI大鼠膀胱壁注射PRV,注射后96h直接取材,免疫组织化学方法显示大鼠脊髓切片中PRV阳性神经元。结果 PRV阳性神经元经免疫组织化学显色后呈棕黄色,观察切片SCI平面以上及以下均出现阳性神经元。SCI节段平面以上切片与对照组比较,阳性神经元显著减少;节段平面以下切片与对照组比较,阳性神经元增加。结论 SCI后,损伤导致受伤脊髓节段以上排尿反射通路受阻,进而SCI平面以下膀胱排尿反射通路发生代偿。     

米诺环素对脊髓损伤大鼠凋亡机制探索和神经红蛋白表达的影响

目的 探讨米诺环素对脊髓横断损伤大鼠凋亡蛋白 Bcl-2、Bax和 Caspase-3的表达及神经红蛋白 Ngb表 达的影响。方法 36只健康成年雄性 Wistar大鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组、米诺环素干预组,每组 12只。假 手术组只暴露脊髓,脊髓损伤组和米诺环素干预组制备胸3~4脊髓节段全横断损伤模型。米诺环素干预组于术前腹 腔注射米诺环素（90 mg/kg）,1次/d,连续5 d,脊髓损伤组和假手术组腹腔注射等体积生理盐水。术后22 d处死所有 大鼠,采用免疫组化染色和 Western blot法检测脊髓组织 Bcl-2、Bax和 Caspase-3蛋白的表达;Hoechst 染色检测凋亡 细胞;免疫荧光染色检测神经红蛋白（Ngb）的表达。结果 与假手术组相比,脊髓损伤组脊髓组织中 Bcl-2表达增 多,Bax和 Caspase-3蛋白的表达增多,凋亡细胞数明显增多,Ngb荧光强度明显增强（均P＜0.05）。与脊髓损伤组相 比,米诺环素干预组Bcl-2表达进一步增高（P＜0.05）,Bax和Caspase-3表达显著降低（P＜0.05）,而凋亡细胞数有所 减少,Ngb的平均荧光强度较其明显增强。结论 米诺环素干预可通过降低 Bax和 Caspase-3的表达,升高 Bcl-2的 表达来抑制细胞凋亡,提高神经红蛋白表达。