微电极充灌简法:直接推入充灌

在电生理学研究中被广泛采用的玻璃微电极,其尖端开口非常小(常用者的尖端多为一微米左右),而做细胞内记录用的玻璃微电极,其尖端直径更小(小于0.5微米),因此,微电极充灌成了微电极技术中的一个难题。早期的方法是采用煮沸法或减压煮沸法,以后又在这一方法上不断改进,但各种方法手续均较繁杂,花费时间也较长,尖端易于受损,且不利于长期保存。也有人将玻璃细丝插入电极内用注射器进行充灌,但细丝     

一种对玻璃微吸管电极抛光的装置及使用方法

目的 :对玻璃微电极尖端进行热抛光处理 ,以提高膜片钳实验中高阻抗封接的质量和成功率。方法 :用双相可控硅增加电流方法 ,完成低电压高电流输出 ;利用普通显微镜加以改造 ,在同一平面内观察电极尖端和电热丝情况。结果 :直流输出电压 6V ;直流输出电流 0～ 2 0A ;4 0× (物距 1cm)物镜 ;光镜和扫描电镜观察电极尖端平整、光滑。结论 :利用简单的双相可控硅增流技术和对普通生物显微镜的改造 ,可以制做出用于玻璃微电极尖端热抛光的装置。     

延髓头端腹外侧区调节心血管活动的γ—氨基丁酸机制

目的：探讨延髓头端腹外侧区（ＲＶＬＭ）调节心血管活动的γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）机制。方法：采用３管玻璃微电极作ＳＤ大鼠脑内微量注射，观察在ＲＶＬＭ微量注射ＧＡＢＡ受体阻断剂后，对心血管活动的紧张性抑制作用的影响。     

α-MSH对大鼠背侧迷走神经复合体胃扩张敏感神经元的作用

目的 观察α-促黑色素细胞激素(α-MSH)对大鼠背侧迷走神经复合体(DVC)胃扩张敏感神经元放电频率的调节作用.方法 采用多管玻璃微电极记录单个细胞外放电的电生理实验方法,观察大鼠DVC内微量注射α-MSH前后胃扩张敏感神经元放电频率的变化,并以微量注射9 /L NaCl溶液大鼠作为对照.     

电及化学刺激兔三叉神经脊束核不同平面对呼吸功能的影响

三叉神经脊束核是一长条状结构,为了验证其在呼吸运动的调节中是否发挥作用,取其三个不同的平面进行了实验观察。1.用50μA的电流刺激前、中、后三个点,RF和IA明显增加;2.向三个点内微量注射MSG0.2μ1,RF和IA也明显增加,并在注射后1min达最高值;3.微量注射1%Lid也使两者增加;4.微量注射0.9%NaCl无影响。结果表明三叉神经脊束核的不同平面在呼吸运动的调制中均起一定作用。     

神经细胞内注射辣根过氧化物酶的染色技术

本文报告用此法染色的一个猫脊髓前角运动神经原形态观察的结果。实验动物为猫,用玻璃微电极插入左侧脊髓腰下节段的前角运动神经原内,获得较稳定的细胞内电位记录后,利用微电泳原理将辣根过氧化物酶注入运动神经原内。微电极尖端直径为2微米左右,临实验前以压力法灌入含4%HRP 和0.2MKCI 的0.5MTris-HCI 缓冲溶液。微电极电阻约为20毫欧左右。通电时微电极尖端为正极,通电电流约为     

大鼠下丘脑腹外侧视前区和结节乳头体核的直接神经纤维投射研究

目的探讨促睡眠调节中枢下丘脑腹外侧视前区(VLPO)与促觉醒调节中枢结节乳头体核(TMN)之间是否具有双向调节的直接通路。方法将SD大鼠随机分为对照组( ACSF 组)与实验组( TMN + ACSF&VLPO + DiO 组, TMN+DiO&VLPO+ACSF组),采用脑立体定位技术,核团内微量注射、冰冻切片等方法观察和记录大鼠VLPO和TMN分别注射细胞膜荧光探针Fast DiO后的TMN和VLPO的荧光信号。结果 TMN+ACSF&VLPO+DiO组大鼠注射Fast DiO术后72 h, TMN 脑区神经细胞可见明显的绿色荧光;TMN+DiO&VLPO+ACSF组大鼠注射Fast DiO术后72 h, VLPO脑区神经细胞也可见明显的绿色荧光。结论 VLPO与TMN间有双向直接神经纤维投射。     

钨丝微电极的制备方法及其应用观察

研究单个神经元兴奋时的电活动,可用细胞外微电极技术进行,这时对微电极的要求是很高的因为引导的特点是要求微电极的尖端比起神经元体或轴突的直径小得多,微电极的尖端细得不致损伤神经元但又能非常接近神经元甚至能紧密地和神经元膜相接触。金属微电极中采用钨丝作材料不仅在直径上能满足这一要求而且也能具备这样一些特点:材料易取、电极电阻低,机械强度高,     

楔状核内促甲状腺激素释放激素抗伤害感受机制探讨

目的；探讨楔状核（ＮＣＦ）内促甲状腺激素释放激素（ＴＲＨ）抗伤害感受作用的机制。方法：用玻璃微电极细胞外记录结合核团微量注射的方法，于延髓中缝大核（ＮＲＭ）内记录痛兴奋神经元（ＰＥＮ）的单位放电，观察中脑导水管灰质（ＰＡＧ）内注射纳络酮对ＮＣＦ内注射ＴＲＨ对ＮＲＭ内ＰＥＮ的痛放电影响。     

Effect of Bmk venom microinjected into LS on electric activities of nociceptive neurons in Pf of rat

目的 :研究外侧隔核是否是蝎毒产生中枢镇痛作用的重要部分之一。方法 :用玻璃微电极记录束旁核的单位放电 ;通过不锈钢套管向外侧隔核内微量注射 0 .0 3%蝎毒。结果 :外侧隔核内微量注射0 .0 3%蝎毒可以明显地减弱束旁核内的痛兴奋神经元和痛抑制神经元对伤害性刺激的反应。结论 :外侧隔核是蝎毒产生中枢镇痛作用的重要部位之一。     

平阳霉素和鱼肝油酸钠治疗口腔颌面部海绵状血管瘤42例临床分析

笔者从2002～2005年采用平阳霉素或鱼肝油酸钠瘤内注射治疗口腔颌面部海绵状血管瘤共42例,将两者疗效进行对照,现将方法和结果报道如下.     

长茎玻璃微电极的制备

记录单个细胞活动电位目前采用的是金属微电极和玻璃微电极。由于金属微电极茎段较粗,在某些研究中,对组织损伤较大,使用玻璃微电极较好。我们根据玻璃微电极长度,划分微电极为短茎微电极(30～60mm)和长茎微电极(60mm以上)。对于短茎微电极的制备方法已趋成熟,但对于长茎微电极,特别是严格控制长度的长微电极的制备,目前还面临着许多技术困难,现将我们在制备过程中的一些体会和改进提出来,供研讨。     

大鼠孤束核内H3受体对哮喘发作时脑组织中Fos蛋白表达的影响

目的:探讨大鼠孤束核(NTS)内组胺H3受体对哮喘发作时大脑Fos蛋白表达的影响及其意义。方法:取健康雄性SD大鼠制备哮喘模型并诱发哮喘发作,采用中枢立体定位及微量注射技术,分3组分别在NTS内微量注射无菌生理盐水、H3受体激动剂R--αmethylhistamine(RMHA)以及H3受体拮抗剂thioperamide(Thio)加RMHA,用SABC免疫组织化学方法测定大鼠哮喘急性发作后1 h Fos蛋白在丘脑至延髓平面各核团的分布情况。结果:与哮喘组相比,哮喘大鼠NTS内微量注射1μg RMHA,丘脑室旁核、下丘脑室旁核、室周核、NTS等核团Fos蛋白表达减少,阳性细胞数降低,差异有显著性(P<0.01);而用Thio 5μg预处理则可拮抗RMHA的上述效应。结论:NTS内H3受体可能通过丘脑室旁核、下丘脑室旁核和室周核等脑区相关神经元参与对哮喘的神经调控,从而可能抑制哮喘发作。     

钨丝微电极的制作法

在神经生理研究中,应用微电极进行神经元胞外记录,是目前常用的方法,进行细胞放电记录需要采用合适的微电极,理想的微电极应具有较高的灵敏度、稳定性好,噪音水平低并且要具有较大的穿刺强度,常用的微电极根据其制作时应用的材料不同可分为玻璃微电极与金属微电极,前者绝缘性能好,电阻值适宜、尖端较细、信噪比好适合于急性实验时应用.为了观察慢性动物脑细胞放电活动,避免动物脑组织感染,并能反复多次穿刺引导记录,需要采用尖端强度较大的金属微电极(钨、铂、铱等),其中以钨丝电极用的最多,制     

大鼠蓝斑核区注射加压素和催产素对迷走—加压反应的影响

我们采用神经核团微量注射方法,观察了大鼠蓝斑核(LC)内注射加压素、催产素及其相应抗血清对迷走—加压反应(VPR)的影响,报道如下.     

Effect of Bmk venom microinjected into LS on electric activities of nociceptive neurons in Pf of rat

目的：研究外侧隔核是否是蝎毒产生中枢镇痛作用的重要部分之一。方法：用玻璃微电极记录束旁核的单位放电;通过不锈钢套管向外侧隔核内微量注0.03%蝎毒。结果：外侧隔核内微量注射0.03%蝎毒可以明显地减弱束旁核内的痛兴奋神经元和痛抑制神经元对伤害性刺激的反应。结论：外侧隔核是蝎毒产生中枢镇痛作用的重要部位之一。     

nesfatin-1对大鼠迷走复合体内葡萄糖感受神经元和胃扩张敏感神经元兴奋性的作用

目的 观察nesfatin-1对大鼠迷走神经复合体(DVC)内胃扩张敏感神经元和葡萄糖感受神经元放电频率的调制作用,探讨其参与摄食调控的可能机制.方法 采用多管玻璃微电极记录单个细胞单位放电的电生理学方法,观察大鼠DVC区微量注射nesfatin-1前后上述两种神经元放电频率的变化,以微量注射9 g/L NaCl作对照.结果 在DVC中记录到经多管微电极给予葡萄糖的109个神经元,有46个神经元放电频率降低(鉴定为G-INH);31个神经元放电频率升高(鉴定为G-EXC);32个神经元对葡萄糖没有反应.在39个G-INH经多管微电极给予nesfatin-1,有33个神经元放电频率降低,1个神经元放电频率升高,5个神经元对nesfatin-1无反应.在26个G-EXC神经元中,有20个神经元放电频率升高,3个神经元放电频率降低,3个神经元对nesfatin-1无反应.对89个神经元进行胃扩张(GD)刺激,在DVC中记录到48个神经元被激活(鉴定为GD-EXC),21个神经元被抑制(鉴定为GD-INH),其余20个神经元对胃扩张无反应.在42个GD-EXC神经元中,32个神经元被nesfatin-1所兴奋,10个神经元对nesfatin-1无反应.在18个GD-INH神经元中,16个神经元被nesfatin-1所抑制,2个神经元无反应.上述两类神经元经多管微电极给予9 g/L NaCl,注射前后神经元放电频率的变化无统计学意义.结论 nesfatin-1能够调制DVC胃扩张敏感神经元和葡萄糖感受神经元的兴奋性,这可能是nesfatin-1抑制摄食的部分机制.     

侧脑室内注射催乳素释放肽引起摄食相关脑区Fos表达

目的：观察在SD大鼠侧脑室内注射催乳素释放肽(prolactin-releasing peptide,PrRP)所导致的与摄食有关脑区的Fos表达．方法：大鼠侧脑室内注射PrRP或生理盐水后．应用免疫组织化学方法,在与摄食相关脑区检测Fos的表达．结果：与生理盐水组相比,侧脑室内注射PrRP导致在许多脑区Fos表达的改变,包括下丘脑室旁核、下丘脑室周核、杏仁中央核、杏仁基底外侧核、丘脑室旁核、臂旁核及最后区和孤束核．结论：PrRP激活了某些与摄食和味觉有关的脑区．     

清醒犬脑内微量注射药物的方法

对清醒犬脑内微量注射实验用三套不锈钢管,即导向管、注射外管和注射管,外径分别为0.75、0.45、和0.25mm。实验前给麻醉犬皮质内埋藏导向管,测定出从导向管顶端至注射核团的深度,导向管周围用有机玻璃圈和牙托粉加固。术后隔3～5d进行实验。首先拔出导向管内蕊,将带有蕊子的注射外管插至定位的中枢核团。然后拔出注射外管内蕊,插入充满药液的注射管进行微量注射。实验结束时拔出注射管和注射外管,放入导向管内蕊,以便再次实验。本方法结合清醒犬慢性实验的特点,加固了导向管;用三套管的方法保证了注射管的通畅,减少了脑内组织增生、感染等并发症,能使实验持续2～3周。     

单管有芯玻璃微电极的拉制与充灌

作者近几年来在细胞内HRP注射的实际操作中,对单管有芯玻璃微电极的拉制与充灌积累了一些经验,现总结如下: 1 微电极的拉制用国产GG17硬质有芯毛细管(上海脑研究所产),外径为1.6～1.8mm,内径为1.0～1.2 mm。毛细管在拉制前