从血液流变学的改变分析肾上腺素致血瘀证大鼠模型的建立

目的以肾上腺素（Adr）皮下注射法建立大鼠血瘀模型,对比不同的给药剂量、给药方式和给药周期对大鼠血液流变学的影响,确定最佳的血瘀证动物模型的建立方法。方法将实验大鼠随机分为6组,即空白对照组（不造模）、急瘀1d组（Adr 1．8mg／kg皮下注射加冰水浸泡1d）、急瘀2d组（Adr 1．8mg／kg注射加冰水浸泡2d）、慢瘀小剂量组（Adr0．1mg／kg注射7d）、慢瘀中剂量组（Adr3．3mg／kg注射7d）、慢瘀大剂量组（Adr0．9mg／kg注射7d）。用血液黏度仪检测全血黏度和血浆黏度;用红细胞变形／聚集仪检测红细胞变形和聚集指数;用血凝仪检测血浆纤维蛋白原含量。结果与对照组相比,慢瘀小、中剂量组可见大鼠全血黏度、纤维蛋白原含量明显升高（P〈0．05或P〈0．01）;急瘀1d组可见低切变下全血黏度升高（P〈0．05）,急瘀1d组和急瘀2d组可见血浆黏度和纤维蛋白原增加（P〈0．01）,急瘀2d组和慢瘀大剂量组可见红细胞变形指数明显降低（P〈0．05）。结论血瘀证动物模型戍功与否与所用的肾上腺素剂量、给药周期和给药方式密切相关。Adr0．3mg／kg注射7d和Adr1．8mg／kg注射加冰水浸泡2d大鼠出现血液流变学变化更加明显,可分别作为气郁血瘀证和气滞血瘀证的动物模型。     

哈巴苷及哈巴俄苷对肾上腺素损伤血管内皮细胞的保护作用

目的将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）分成对照组、肾上腺索损伤组（Adr组）、哈巴苷干预组及哈巴俄苷干预组,Adr组及药物干预组分别加入10μg/ml肾上腺素,药物干预组分别加入0．1mmol／L的哈巴苷及哈巴俄,用四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测细胞活力;取细胞上清液,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）和丙二醛（MDA）含量,酶联免疫吸附法（ELISA）测定E-选择素含量。结果与对照组相比,Adr组细胞活力降低,细胞LDH漏出增加、E-选择索和MDA含量增加（P均〈0．05）;哈巴苷及哈巴俄苷均可抑制Adr引起的细胞活力降低,减少细胞LDH漏出、降低E-选择素和MDA含量。结论哈巴苷及哈巴俄苷能对抗Adr引起的损伤,保护血管内皮细胞。     

别嘌呤醇对高糖诱导损伤的人脐静脉血管内皮细胞的保护作用

目的探讨别嘌呤醇对高糖损伤后的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的保护作用及其机制。方法以HUVEC为研究对象,体外培养至第三代,分为：①20mmol／L高糖损伤对照组;②别嘌呤醇保护组（浓度分别为0．1mmol／L、0．2mmol／L、0．3mmol／L）;③维生素C阳性对照组（浓度为100mg／L）。不同浓度别嘌呤醇及维生素C先与HUVEC孵育24h,再加入20mmol／L高糖诱导损伤48h,测定各组细胞上清液中一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）含量及细胞凋亡率。结果别嘌呤醇（0．1mmol／L、0．2mmol／L、0．3mmol／L）药物保护组的细胞凋亡率低于20mmol／L高糖组,其中以0．3mmol／L更为明显（P〈0．01）;细胞培养液中SOD、NO的量均较20mmol／L高糖组增高,其中以0．3mmd／L别嘌呤醇组更为明显（P〈0．01）。药物保护组细胞培养液中合成MDA、ICAM-1较波动性高糖组降低,且在一定浓度范围内（0．05-49．30mmol／L）呈浓度依赖性（P〈0．05）。结论①别嘌呤醇对高糖体外诱导的HUVEC损伤有保护作用,呈浓度依赖性。②别嘌呤醇对高糖体外诱导HUVEC损伤保护作用的机制包括抑制氧化应激、炎症反应及细胞凋亡。     

山茱萸环烯醚萜苷对局灶性脑缺血大鼠血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的研究山茱萸环烯醚萜苷（CIG）对局灶性脑缺血大鼠神经功能和血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体FLK-1表达的影响。方法取成年雄性SD大鼠115只,随机分为假手术组、模型组及CIG治疗组。治疗组又分为20、60和180mg／kg剂量组,每组23只大鼠。采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型,造模后3h开始灌胃给药。造模后7、14和28d,采用改良神经功能缺损评分（mNSS）评价大鼠的神经功能,用免疫组化法和Western Blot法检测VEGF蛋白表达。用RT—PCR方法检测VEGF及其受体FLK-1的mRNA表达。结果①造模后7、14和28d,与模型组相比,CIG 60和180mg／kg组大鼠mNSS均显著降低（F=2．832,F=4．970,F=2．661,均P〈0．05）;②造模后7d,模型组大鼠大脑皮质VEGF蛋白与假手术组相比无明显变化,14和28d时,VEGF蛋白表达降低;与模型组相比,7、14和28d时,CIG 60和180mg／kg组VEGF蛋白表达显著增加（F=1．202,F=1．705,F=2．189,均P〈0．05）;③造模后28d,CIG 60和180mg／kg组大鼠VEGF阳性细胞染色面积显著增加（F=13．249,均P〈0．05）;④造模后7d,与模型组相比,CIG 60和180mg／kg组大鼠大脑皮质VEGF-mRNA表达亦显著增加（F=2．389,均P〈0．05）;CIG 60和180mg／kg组FLK-1 mRNA的表达也显著增加（F=3．657,均P〈0．05）。结论CIG能明显改善局灶性脑缺血大鼠的神经功能,其机制可能与CIG促进VEGF蛋白的表达有关。     

氟伐他汀动员内皮祖细胞促进大鼠梗死心肌血管新生的作用

目的观察氟伐他汀动员急性心肌梗死（AMI）大鼠内皮祖细胞（EPCs）,促进梗死心肌血管新生,减小梗死面积的效果。方法①成年Wistar大鼠左前降支结扎造模,随机分为空白组（A组）、假手术组（B组）、AMI组（C组）和氟伐他汀治疗AMI组（D组）。②流式细胞技术检测不同时段大鼠外周静脉血EPC动态变化。③4周末处死大鼠,心肌切片Masson染色,左室心肌正中线弧长方法计算梗死面积。④CD31单克隆抗体免疫组化法标记心肌新生血管内皮细胞并计算各组梗死、梗死周边及非梗死区新生血管数。结果①造模后第7天D组EPCs（37．13±3．44／2×10^5MNCs）显著高于A组（19．88±4．91／2×10^5MNCs）、B组（22．33±5．43／2×10^5MNCs）和C组（26．56±3．17／2×10^5MNCs）,差异具有统计学意义（P〈0．05）;C组较A组有少量增加（P〈0．05）,B组较A组无明显升高（P〉0．05）,B组和c组差异无统计学意义（P〉0．05）。造模后第14天D组EPCs（45．5-±4．99／2×10^5MNCs）同样显著高于A组（17．25±7．17／2×10^5MNCs）、B组（22．78±2．91／2×10^5MNCs）和C组（26．88±3．76／2×10^5MNCs）（P〈0．05）;B组和C组较A组有少量增加（P〈0．05）,B组和C组差异无统计学意义（P〉0．05）。第7天和第14天各组变化比较,A、B、C三组EPCs变化无统计学意义（P〉0．05）,D组则明显增加（P〈0．05）。②D组梗死区新生血管计数（10．75±1．61／mm。）明显多于C组（5．09±2．33／mm。）（P〈0．01）,梗死周边区新生血管计数D组（17．53±2．35／mm^2）同样明显多于C组（8．55±2．40／mm^2）（P〈0．01）。③D组梗死面积[（31．41±2．59）％]小于C组[（35．67±5．22）％]（P〈0．01）。结论①氟伐他汀能动员急性心肌梗死大鼠内皮祖细胞进入外周血循环,使其数量增加并促进梗死周边区血管新生。②心肌梗死后大鼠应用氟伐他汀可以限制梗死面积。     

氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞PECAM-1基因转录的影响

目的探讨氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）对人血管内皮细胞血小板内皮细胞黏附分子-1（PECAM-1）mRNA表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），采用铜离子氧化24h制备Ox-LDL。取HUVEC以100mg／LOx-LDL分别孵育0．5、1、1．5、2h，另取HUVEC分别用100 mg／LLDL和0、50、100、200mg／LOx-LDL孵育1．5h．均采用RT-PCR技术检测细胞中PECAM-1基因的转录水平。结果Ox-LDL除正常LDL所含成分外．还含有胆固醇亚油酸酯的过氧化特异斑点X和甲基脂肪酸。Ox-LDL作用0．5h时PECAM-1 mRNA表达水平最低；随时间延长，表达水平逐渐升高，与0．5h时比较，P〈0．05；至2h时．PECAM-1表达水平有所回落，但与0．5h时比较，P-〈0．05。0、50、100、200mg／LOx-LDL作用1．5h，PECAM-1表达水平逐渐升高，以100mg／L时表达水平最高。100mg／LLDL作用1.5h时，PECAM-1表达水平无明显变化。结论Ox-LDL可在转录水平上调血管内皮细胞PECAM-1基因表达．从而促进血管内皮细胞高水平表达PECAM-1。     

同型半胱氨酸对内皮细胞tPA影响的实验研究

目的观察同型半胱氨酸（Hcy）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）组织型纤溶酶原激活物（tPA）抗原含量的影响。方法将体外培养的HUVEC分为5个实验组0、10、50、200、500μmol／L浓度Hcy组和上述各Hcy共同培养组，培养24h后，酶联免疫吸附实验法（ELISA）测定各组细胞上清液中的tPA抗原含量。结果与单纯培养基组（0μmol／L Hcy）相比，10μmol／L Hcy组（生理浓度组）tPA含量明显增高（P〈0．05）。超生理剂量Hcy时，tPA含量依赖性地下降，但与对照组无明显区别（P〈0．05）。而与生理浓度Hcy相比，当Hcy浓度达到500μmol／L时，tPA抗原合成明显减少（P〈0．05）。加入叶酸后，可以减弱Hcy抑制tPA抗原合成的作用，500μmol／LHcy共同培养组与单纯Hcy组相比差异有显著性（P〈0．05）。结论高Hcy可以减少内皮细胞tPA抗原的分泌，可能降低纤溶系统的活性。生理浓度的Hcy可以增加内皮细胞tPA抗原的分泌，可能提高纤溶系统的活性。     

心脏骤停复苏后内皮细胞损伤与凝血关系的研究

目的：探讨心脏骤停和成功复苏后内皮细胞损伤与凝血状态的变化、相关性及与预后的关系。方法：35例心脏骤停成功复苏患者,按照预后分为生存组和死亡组;健康正常人30例为对照组。分别测定血乳酸（LA）,血管性假性血友病因子（vWF）和D-二聚体（D-dimer）水平。结果：死亡组和生存组的LA,vWF和D-dimer均高于对照组（P〈0．01）,死亡组LA,vWF与D-dimer高于生存组（P〈0．05）,复苏组LA,vWF与D-dimer呈明显正相关（P〈0．01）,D-dimer与预后呈非常明显的负相关（r=-0．2903,P〈0．01）。结论：心脏骤停复苏成功患者存在组织和血管内皮细胞损伤及凝血功能紊乱,且二者存在相关性,D-dimer可能是判断预后的一种标记物。     

PM2．5急性暴露对大鼠凝血功能的影响及其机制

目的探讨PM2．5暴露对大鼠凝血功能的影响及机制。方法24只雌性SD大鼠随机分为4组：对照组、PM2.53．75mg／kg组、PM257．5mg／kg组、PM2s15mg／kg组。将大鼠暴露于不同剂量PM2．5,24h后处死大鼠,取大鼠血浆检测凝血酶原时间（PT）、活化的部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）,取BALF显微镜下细胞计数及分类,大鼠肺脏石蜡切片HE染色观察病理改变,酶联免疫吸附试验法检测BALF中IL-6、肿瘤坏死因子α（TNFd）含量、肺组织丙二醛（MDA）含量及血清血管性血友病因子（vWF）含量,蛋白免疫电泳法（Westernblot）检测血管紧张素Ⅱ的1型受体（ATl）蛋白表达。结果PM2.57．5mg／kg组、PM2.5 15mg／kg组PT、APTT值较对照组及PM2.53．75mg／kg组缩短（P〈0．05）,各组血浆FIB值均无统计学差异（P〉0．05）。PM2.5各剂量组BALF中细胞总数及中性粒细胞比例均明显高于对照组（P〈0．05）,且随着PM2.5剂量增加而呈剂量依赖性升高。PM2.57．5mg／kg组和PMzs15mg／kg组BALF中II-6、TNF-α含量、肺组织MDA含量、血清vwF含量及肺组织ATl受体蛋白表达明显高于对照组及PM2.53．75mg／kg组（P〈0．05）。结论PM2.5暴露可导致PT、APTT缩短,诱发血液高凝,其机制可能与炎症反应及血管内皮损伤相关。     

甲硝唑对大鼠NSAIDs肠道损伤COX-2表达的影响

目的通过口服双氯芬酸建立大鼠非甾体抗炎药（NSAIDs）肠道损伤模型,观察NSAIDs对肠黏膜COX-2表达的影响及甲硝唑干预后肠黏膜COX-2表达的变化,探讨可能机制。方法24只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、甲硝唑组,每组8只。双氯芬酸7．5mg／kg,1mL／100g体质量,2次／d,灌胃制备大鼠肠黏膜损伤模型。空白组于造模当日按1mL／100g体质量蒸馏水灌胃,2次／d,共5d;模型组于造模当日7．5mg／kg双氯芬酸灌胃,2次／d,共5d;甲硝唑组造模前一日50mg／kg甲硝唑灌胃,共2次,次日起每次甲硝唑给药1h后均予7．5mg／kg双氯芬酸灌胃,共5d。5d后处死所有大鼠,观察肠黏膜大体形态学改变、组织学损伤评分、免疫组化法检测肠黏膜COX-2表达。结果模型组大鼠肠道大体损伤及病理组织学评分中位数分别为3．5和5．0,较空白组（0．0）均明显升高（P均〈0．01）;模型组肠黏膜COX-2表达明显高于空白组（P〈0．05）;甲硝唑组COX-2表达明显低于模型组（P〈0．05）。结论口服双氯芬酸可成功制备大鼠NSAIDs肠道损伤模型;COX-2可能参与了NSAIDs肠道损伤的发生;甲硝唑对NSAIDs肠道损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抑制COX-2的表达有关。