BCR-ABL抑制剂ST1571对慢性髓系白血病细胞株K562中SARI基因表达影响的研究

为了探讨抑癌基因SARI（suppressor of AP-1 regu1atexi by IFN）在慢性髓系白血病（CML）中表达调控可能的分子机制,收集了46名CML患者和40名健康志愿者外周血样品,使用实时定量PCR技术检测2组人群~eSAIU基因的相对表达水平。在体外以CML细胞株I（562为研究模型,使用BCR．ABL抑制剂ST1571（imatinib）处理K562细胞,用实时定量PCR技术检测聃耐基因的相对表达水平。结果表明,CML患者外周血中SAR1mRNA相对表达量明显低于健康志愿者,2组间具有明显的统计学差异（P〈0．001）。使用ST1571（2．5μmo1／L）处理K562细胞24小时后SARImRNA相对表达量明显高于未处理K562细胞,两组间差异具有显著性（P〈0．001）。结论：CML患者外周血SARImRNA表达水平降低可能与该疾病的发生发展过程相关联,而且融R,基因表达下调与BCR-ABL抑制作用有关。本研究为CML患者基因治疗的研究提供了新线索。     

慢性粒细胞白血病病人Mcl一1基因和Bcr／Abl基因的表达及临床意义

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）病人Mcl—l基因和Bcr／Abl融合基因的表达水平及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术检测了4l例cML病人（包括慢性期15倒、加速期6例、急变期6例、伊马替尼治疗后遗传学完全缓解8例及非伊马替尼治疗的未缓解的CML病人6例）骨髓标本Mel—l基因、Ber／Abl融合基因的表达水平,以10例正常人作为对照。结果CML各组Mcl—I和Bcr／AblmRNA的表达水平差异均有显著性（X2=19．12—36．08,P〈0．05）。伊马替尼治疗组与正常对照组Mel—lmRNA的表达明显低于其他各组（z=2．547—3．254,P〈0．05）;加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间Mcl—lmRNA的表达水平差异无显著性（z=0．481一1．922,P〉0．05）,但均明显高于慢性期（z=2．65—3．465,P〈0．05）。Ber／AblmRNA在慢性期、加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间表达差异无显著性（z=0．48—1．196,P〉0．05）。CML患者Mel—l与Bcr／AblmRNA的表达水平呈正相关（r=0．68,P〈0．05）。结论Mcl—l和Ber／Abl与CML的病情密切相关,参与cML的发生和发展,是判断病情进展及预后的分子标记物。     

Lyn激酶在伊马替尼耐药的慢性髓系白血病中的作用

本研究探讨Lyn激酶在伊马替尼耐药的慢性髓系性白血病（CML）中的作用。76例CML患者分为初治组、伊马替尼耐药组和伊马替尼治疗有效组,用Western blot方法检测CML患者骨髓单个核细胞中Lyn蛋白的表达水平,比较各组患者Lyn的表达差异,分析Lyn与I临床特征、BCR／ABL融合基因和染色体的关系。结果表明,76例CML均表达Lyn;伊马替尼耐药组Lyn表达明显高于正常对照组、初治组及伊马替尼治疗有效组（P〈0．05）,初治组和伊马替尼治疗有效组的Lyn表达水平与正常对照组无明显差别（P〉0．05）。Lyn表达水平与性别、年龄、平均血红蛋白水平、平均血小板计数、外周血幼稚细胞比例和脾脏大小无明显相关（P〉0．05）,但与初诊时外周血白细胞计数增高相关（P〈0．05）。Lyn表达与BCR／ABL融合基因定量无明显相关性（P〉0．05）;10例伊马替尼耐药的CML中,1例患者存在t（6;22）和t（2;9）改变,与Ph染色体共存,其余9例患者仅存在Ph染色体改变。结论：CML患者和正常人骨髓细胞均表达Lyn,Lyn在伊马替尼耐药的CML中表达明显增高,Lyn高表达与CML患者初诊时白细胞计数明显增高相关。     

CD25在急性B淋巴细胞白血病中的表达及其临床意义探讨

本研究旨在通过流式细胞术标记CD25,探讨其与急性B淋巴细胞白血病（B—ALL）的关系及其临床意义。选择88例初发B—ALL患者骨髓,应用流式细胞术检测免疫表型标记,包括白介素2受体α链（CD25）、B链（CD122）、Y链（CD132）,CD19、CD20、CD10、CD34、CDIgM、CD79a、CD22、CDTDT;用定性PCR方法检测BCR／ABL融合基因表达,实时定量PCR检测IL2RA（CD25基因）的表达。结果表明,CD25＋和CD25-的B—ALL患者白细胞计数（WBC）、血红蛋白（Hb）、血小板（Plt）、骨髓原始细胞比例（marrowblast％）、外周血原始细胞比例（peripheralblast％）、肝脾和淋巴结肿大、cD10、cD20、cD22、cD34、CD79a、CDTDT、CDIgM表达水平差别均无统计学意义（P〉0．05）,而CD19在CD25＋组中表达水平高于CD25-组（P〈0．05）。本组BCR／ABL＋患者为21例（23．9％,21／88）,CD25＋表达率为66．7％（14／21）;BCR／ABL-患者为67例,CD25＋表达率为4．5％（3／67）,两组间差别有统计学意义（P〈0．05）。IL2RA基因mRNA表达水平在CD25＋和CD25-两组间无统计学差异（P〉0．05）。21例BCR／ABL＋B—ALL患者中,CD25＋与CD25-两组间在缓解率和复发率方面差异无统计学意义（P〉0．05）。BCR／ABL＋B—ALL患者中有8例复发,复发率为38．1％（8／21）,BCR／ABL。组有9例复发,复发率为13．4％（9／67）,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。BCR／ABL＋组无复发生存时间（relapse—freesurvival,RFS）为21个月,BCR／ABL＋CD25＋患者RFS时间为15个月,而BCR／ABL＋CD25-患者RFS时间为21个月,BCR／ABL—CD25-患者RFS时间为24个月。结论：CD25在BCR／ABL＋B-ALL上患者中呈高水平表达,可以作为B—ALL的BCR／ABL融合基因表达的预测指标,与疾病复发有关,CD25＋可以作为判断B—ALL不良预后的辅助标志。     

慢性髓系白血病患者CD34^＋CD38^-细胞水平JunB和CDHB基因启动子区域的甲基化状态研究

慢性髓系白血病（CML）是骨髓造血干细胞恶性增殖的克隆性疾病,在CML患者细胞水平由于JunB和CDH13基因启动子区甲基化而使这2个抑癌基因的表达受损。为了探讨正常人和CML患者CD34＋CD38-细胞水平JunB和CDH13（cadherin-13）基因启动子区域甲基化状态及表达水平的差异,应用流式细胞仪分选出CD34＋CD38细胞,采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS—PCR）检测5例正常人和8例CML患者骨髓CD34＋CD38-细胞JunB和CDH13基因启动子区域甲基化状态,用实时定量PCR（RT—PCR）检测JunB和CDH13基因的表达情况。结果表明：JUNB和CDH13基因在正常人骨髓CD34＋CD38-细胞中呈完全性非甲基化状态,CML患者骨髓CD34＋CD38-细胞中JunB和CDH13基因启动子区甲基化比例分别为87．5％（7／8）和50％（4／8）,明显高于正常人（P〈0．05）。CML患者骨髓CD34＋CD38-细胞中JunB和CDH13基因mRNA相对表达水平与正常人的相比明显降低（2^-△△CT分别为1／5．21和1／10．63）。结论：在CML患者骨髓CD34＋CD38-细胞中JunB和CDH13基因启动子区域都发生了高度的甲基化,它们的mRNA表达水平也明显降低,JunB和CDH13基因启动子区域甲基化在CML的发病机制中起到一定的作用,甲基化检测对CML的靶向治疗及新的治疗方法具有重要意义。     

慢性髓细胞白血病增殖细胞核抗原基因的异常表达

目的 了解慢性髓细胞白血病（CML）基因表达谱规律,对在CML中高表达的PCNA基因进行分析鉴定.方法 应用基因表达谱芯片技术,对CML患者和正常人的外周血单个核细胞（PBMC）基因表达差异进行分析.对于其中表达显著上调的增殖细胞核抗原（PCNA）基因,根据其核苷酸序列设计并合成该基因序列特异性引物,以CML PBMC的总RNA为模板,RTPCR技术扩增PCNA基因;用蛋白印迹法分析PCNA蛋白的表达.结果 从4 096个基因中筛选出差异表达基因共591奈,其中288条基因表达增强,303条基因表达降低.在表达增高的基因中,PCNA表达增高8.725倍.在病人的标本中扩增出PCNA基因,蛋白印迹证明CML病人PCNA蛋白表达增高.结论 基因表达谱芯片检测发现CML中PCNA基因高表达,并在mRNA转录水平及蛋白表达水平证明其异常表达,提示PCNA的表达增高与CML的发病存在一定的关系.     

格列卫对慢性粒细胞白血病病人Foxo3a和bcr-abl融合基因表达影响

目的探讨初发及格列卫治疗的慢性粒细胞白血病（CML）病人骨髓中转录因子Foxo3a和bcr-abl融合基因的表达及其临床意义。方法采用SYBR GreenⅠ建立的实时荧光RT-PCR的方法,检测18例初发及10例格列卫治疗的CML病人骨髓样本中Foxo3a和bcr-abl融合基因的表达,以GAPDH为内参基因,以行骨髓穿刺排除诊断的非血液病病人的骨髓为对照组;各实验组基因表达水平的差异采用ΔΔCT相对定量法计算。结果初发CML病人骨髓bcr-abl融合基因的表达水平与格列卫治疗组比较差异有显著性（χ2=4.25,P〈0.05）;3组骨髓样本中Foxo3a的表达水平比较差异均有显著性（χ2=5.73～13.73,P〈0.01）;且初发CML病人的bcr-abl融合基因的高表达与转录因子Foxo3a的低表达呈明显负相关（r=-0.674,P〈0.01）。结论格列卫降低CML病人bcr-abl融合基因表达的同时可以增加Foxo3a的表达;转录因子Foxo3a的低表达与bcr-abl融合基因的高表达密切相关,二者可能共同参与CML的发生。     

慢性粒细胞白血病T细胞TCRζ链表达上调后全基因表达谱改变的分析

目的:分析表达上调TCRζ后慢性粒细胞白血病(CML)患者T细胞基因表达谱的变化特点,探讨转基因上调TCRζ后T细胞活性恢复的分子机制。方法:收集3例初发未治疗慢性期CML患者的外周血单个核细胞(PBMCs),利用MACS法分选获得CD3~+T细胞;利用核转染技术转染TCRζ-IRES2-EGFP(实验组)和pIRES2-EGFP(对照组)质粒至T细胞中;应用AffymetrixGeneChip Human Gene 2.0 ST Array芯片对上调TCRζ链表达的CML T细胞和对照细胞基因表达谱进行检测,并对差异表达基因进行GO功能注释分析和KEGG通路的富集分析。结果:共筛选出2 248个差异表达基因,其中553个基因表达上调,1 695个基因表达下调(P 0.05); GO功能注释分析和KEGG通路的富集分析结果显示,参与T细胞免疫功能相关的生物学过程,如TCR信号通路、T细胞增殖和活化等的差异表达基因发生显著富集; TCR信号通路,T细胞增殖、活化和凋亡通路中促进T细胞增殖活化的部分核心基因表达明显上调,而抑制T细胞活化的部分核心基因表达则明显下调。结论:上调TCRζ后CML患者T细胞的活化和增殖能力明显改善,其分子机制可能与促进T细胞活化增殖的相关基因明显上调,抑制T细胞活化和促进细胞凋亡相关基因表达的下调有关。     

几类恶性血液病病人杀伤免疫球蛋白样受体基因型的表达在高危及标危组的差异分析

本研究探讨几类高危和标危恶性血液病患者杀伤免疫球蛋白样受体（KIR）基因表达的异同。54例恶性血液病患者分为高危组（27例）和低危组（27例），其中急性髓系白血病14例、急性淋巴细胞白血病16例、慢性髓系白血病20例、骨髓增生异常综合征3例、急性混合白血病1例。用序列特异性引物PCR分型技术检测了6个激活性KIR基因（KIR2DS1-S5、3DS1）和6个抑制性KIR基因（KIR2DL1-2DL4、3DL1-3DL2）的表达，其中24例患者用流式细胞仪测定了NK细胞、T细胞表面CD158a（KIR2DL1、2DS1）、CD158b（KIR2DL2、2DL3、2DS2、2DS3）、CD158e（KIR3DL1、3DS1）的表达。结果显示，标危组病人激活性KIR基因的阳性率均高于高危组患者，2DS1（P=0.014）、2DS2（P=0.046）、3DS1（P=0．005）的差异有统计学意义；抑制性KIR基因的表达在两组患者之间的差异无统计学意义（P〉0.05）。在髓系恶性血液病病人中标危组病人KIR激活性基因表达率仍然高于高危组患者，其中2DS1（66.7％vs29.4％．P=0.022）、2DS2（57.6％vs17.6％，P=0.013）和2DS3（33.3％vs5.9％。p=0．039）。高危组患者同时表达两种以上激活性KIR基因的比例显著低于标危组（P=0.035）。高危和标危组患者NK细胞和T细胞表面CD158a、CD158b、CD158e的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：几类恶性血液病患者激活性KIR基因表达在高危和标危之间存在差异。     

30例慢性淋巴细胞白血病分子遗传学异常的FISH检测的意义

为探讨间期荧光原位杂交（FISH）在检测慢性淋巴细胞白血病（CLL）＋12、del（13q14）、p53基因缺失、atm基因缺失情况中的意义,采用组合探针（CEP12、LSI D13S319、LSI p53、LSI atm）对30例CLL患者进行FISH检测,分析分子遗传学异常与患者外周血淋巴细胞绝对计数、Binet分期、血清乳酸脱氢酶（LDH）和B：微球蛋白（β2-MG）水平、ZAP-70和CD38表达之间的相关性。结果发现,30例CLL患者中,19例（63．3％）存在1种及1种以上细胞遗传学异常,7例（23．3％）同时检测出2种及2种以上的异常,其中最常见为del（13q14）（43．3％）,其他依次为＋12（23．3％）,atm基因缺失（13．3％）,p53基因缺失（10．0％）。各分子遗传学异常与性别、年龄、Binet分期、外周血淋巴细胞绝对计数、血清LDH和β2-MG水平、ZAP-70表达水平无明显相关性（p〉0．05）,在CD38高表达组中,atm基因缺失的发生率均明显高于CD38低表达组,且差异有统计学意义（p=0．035）。结论：FISH是一种检测CLL患者分子遗传异常快速、准确及敏感的方法,其在CLL患者中的预后预测价值有待进一步的深入研究。     

CpGODN2216对白血病缓解期患者外周血单个核细胞的活化能力及活化的细胞对K562细胞的杀伤作用

本研究探讨CpGODN2216对白血病缓解期患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMNC）的活化能力以及CpGODN2216活化的PBMNC对白血病细胞K562的杀伤作用。取白血病缓解期患者外周血,以淋巴细胞分离液（Ficoll）分离PBMNC,用含10％胎牛血清的RPMI1640培养液调整PBMNC浓度为2．0×10^6／ml。对照组加入生理盐水（NS）,实验组加入CpGODN2216,培养1周,提取上清,用ELISA检测上清中IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10的水平。取白血病缓解期患者外周血,分离PBMNC,对照组加入生理盐水,实验组加入CpGODN2216,培养48小时,用流式细胞仪检测PBMNC中淋巴细胞的Th1／Th2,Tc1／Tc2细胞比例;流式细胞术检测活化的PBMNC对肿瘤细胞K562的杀伤能力。结果表明：实验组上清中IFN-γ、IL-12水平与对照纽相比有显著差异（P〈0．01）;IL-4、IL-10水平与对照组相比无明显差异（P〉0．05）。CpGODN2216能刺激白血病缓解期患者PBMNC向Th1／Tc1转化,与对照组相比有显著差异（P〈0．01）,但对Th2／Tc2无明显的刺激作用（P〉0．05）。CpGODN2216活化的PBMNC对K562细胞的杀伤能力明显高于对照组（P〈0．01）。结论：CpGODN2216可在体外诱导白血病缓解期患者PBMNC分泌Th1型细胞因子,诱导PBMNC向Th1方向转化,并强烈地活化CD8^＋T细胞应答。CpGODN2216活化的PBMNC对白血病细胞K562具有较强的杀伤作用.     

c-fes基因在白血病细胞中的表达及其临床意义

本研究观察了c—fes基因在急、慢性白血病患者骨髓细胞中的表达情况,并探讨其临床意义。采用实时定量逆转录-聚合酶链反应（RQ—PCR）方法,分别检测121例急、慢性白血病患者骨髓和20例正常人外周血单个核细胞中c-fesmRNA的表达水平。结果表明,急性髓系白血病（aML）患者组c-fes基因相对表达量（48．017±57．170）×10^-3高于正常对照组（0．152±0．398）×10^-3（P〈0．0001）;急性淋巴细胞白血病（ALL）患者组c—fes基因相对表达量（0．047±0．068）×10^-3。与正常对照组相比无差异（P=0．178）;慢性髓系白血病（CML）患者组c—fes基因相对表达量（21．605±24．818）×10^-3高于正常对照纽（P〈0．0001）。CML慢性期阳性率（80％）高于加速期（66．7％）和急变期（28．6％）,AML患者中C-fes基因阳性率最高的亚型是M2和M3,分别为80．77％、92．86％。初治AML（非M3）患者中,c-fes基因表达阳性患者的CR率（81．08％）高于不表达患者（40．00％）。结论：C-fes基因主要在髓系表达,在淋系中无表达或低表达;c-fes基因在髓系分化方面具有一定的作用,c-fes基因表达高的除M,外的AML患者CR率高,预后好。     

慢性髓系白血病中prame基因转录本的定量研究

本研究旨在分析慢性髓系白血病(CML)患者中黑色素瘤优先表达抗原(prame)的基因转录本表达状况及其临床意义。用实时定量PCR(RQ-PCR)方法对30例CML患者和15例缺铁性贫血(IDA)患者骨髓单个核细胞中prame基因转录本水平进行检测。结果表明:15例缺铁性贫血患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中prame转录本水平为0%-1.46%(中位0.19%),30例CML患者中BMMNC中prame基因转录本水平为0%-772.25%(中位8.28%),二组之间具有显著性差异(p0.001)。CML患者中prame基因转录本含量与bcr-abl融合基因转录本水平显著相关(r=0.708,p0.001);6例CML加速期(AP)和急变期(BC)患者中prame基因转录本水平明显高于24例慢性期(CP)患者(p=0.007)。动态检测2例CML患者在不同病程中prame基因转录本水平变化显示,AP及BC时prame基因转录本水平增高,经治疗后恢复至CP时prame基因转录本水平降低,与bcr-abl转录本变化趋势一致。结论:CML患者中prame基因转录本表达水平增高,且与病情发展相关,可用于病情监测。     

CIAPIN1基因在白血病患者骨髓单个核细胞中表达的研究

本研究旨在检测CIAPIN1基因在白血病患者中的表达,探讨其在白血病中的作用。收集112例初治白血病患者的新鲜骨髓,用TRIzoL一步法提取细胞总RNA、合成cDNA、以β-actin为内参,应用实时定量PCR方法检测CIAPIN1mRNA的表达;实验中选择10例正常人的骨髓作为对照。结果表明:骨髓单个核细胞(MNC)中CIAPIN1mRNA在急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性髓系白血病(CML)患者中的表达均高于正常人(p<0.05);在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中的表达与正常人相比差异无统计学意义(p>0.05)。结论 :CIAPIN1基因在初治白血病患者MNC中表达升高,其表达上调在白血病的发病中可能有一定的作用。     

特发性血小板减少性紫癜患者外周血共刺激分子的表达及与血小板抗体关系的临床研究

本研究检测特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者外周血共刺激分子CD80、CD86和CD137的表达及血清血小板抗体（PAIgG）含量并探讨二者相关性及与血小板数量等疾病表现的关系,以期阐明共刺激分子在特发性血小板减少性紫癜发病及病情判断中的作用。分别应用免疫荧光法和流式细胞术检测48例ITP患者及40名正常人外周血单个核细胞（PBMNC）表面共刺激分子CD80、CD86和CD137的表达;应用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清PAIgG含量。结果表明：ITP患者CD80、CD86和CD137的表达水平分别为（4．92±2．02）％,（8．68±4．25）％,（5．32±2．67）％,PAIgG平均含量为210±3．02ng／10^7PA,均明显高于正常对照组（2．01±0．75）％,（4．56±2．06）％,（1．37±1．25）％和20±1．13ng／10^7 PA（p〈0．01）。共刺激分子表达水平与PAIgG含量呈正相关（r=0．302,P〈0．05）,与患者血小板数量呈负相关（r=-0．369,P〈0．05）。结论：共刺激分子CD80、CD86和CD137是参与ITP发病和免疫反应的重要共刺激分子,其过度表达与ITP发病及临床病情密切相关。纠正其异常表达、调节免疫状态可能是ITP的治疗策略之一,具有重要的临床研究意义。     

免疫抑制治疗对再生障碍性贫血患者外周血淋巴细胞胞浆内TNF-ɑ/IFN-γ表达的影响

本研究探讨免疫抑制治疗对再生障碍性贫血(AA)患者外周血淋巴细胞胞浆内肿瘤坏死因子-浕(TNF-浕)/干扰素-γ(IFN-γ)表达的影响。利用流式细胞术检测25例再生障碍性贫血初发病人和20例经免疫抑制治疗后的再生障碍性贫血患者外周血中CD3+淋巴细胞胞浆内TNF-浕/IFN-γ的表达情况。结果显示:再生障碍性贫血初发组CD3+淋巴细胞胞浆内TNF-浕、IFN-γ的表达率分别为(5.97±6.78)%和(15.20±11.28)%,正常对照组为(1.56±0.87)%,(1.76±0.87)%,两者之间的差异有统计学意义(p<0.05);免疫抑制治疗组CD3+淋巴细胞胞浆内TNF-浕、IFN-γ的表达率分别(1.67±1.26)%,(4.35±4.33)%,与初发组之间的差异有统计学意义(p<0.05)。结论 :再生障碍性贫血患者淋巴细胞胞浆内TNF-浕/IFN-γ的表达高于正常对照组,免疫抑制治疗可以显著下调胞浆内TNF-浕/IFN-γ的表达。     

储存期内血小板相关参数的变化及CD62p的表达

【摘要】目的观察储存期内血小板（platelet,PLT）CD62p的表达和PLT各参数间的变化,为临床PIJT输注的安全性和有效性提供参考依据。方法收集健康献血者的PLT标本30份,随机分为正常组和谷胱甘肽（glutathione,GSH）组各15份;（22±2）℃体外震荡存放0—5d,检测PIJT的pH值、计数、聚集和释放试验的参数指标变化及CD62p的表达情况,并在显微镜下动态观察PLT的形态变化。结果在PLT保存期间,正常组0—3d中,各参数指标变化及CD62p表达差异均无统计学意义（P均〉0．05）;3—5d中,正常组PlJTpH值和计数均呈明显下降趋势,聚集和释放试验指标及CD62p表达均呈明显上升趋势,差异均有统计学意义（P均〈0．05）;而GSH组0-5d中,PLT各参数指标变化及CD62p表达差异均无统计学意义（P均〉0．05）。显微镜下观察正常组第5天时,PIJT出现聚集、空泡现象,但未发生变性;GSH组第5天时,PTJT偶见少量空泡,形态无变化。而正常组与GSH组各储存期内不同指标检测结果,除PIJT1—3d差异均有统计学意义（P均〈0．05）外,其余指标0—2d差异均无统计学意义（P均〉0．05）,而3—5d差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论PLT在保存期间发生一定程度的活化和PLT形态、功能的变化,为提高临床输注安全性和有效性,建议输注储存期3d内的PLT更为有效。