GnRH激动剂主动免疫对GnRHR在腺垂体与子宫表达及分布的作用研究

目的探讨GnRH激动剂主动免疫对绵羊腺垂体与子宫GnRHR表达及分布的影响,为深入研究GnRH-A调节生殖功能的机理及合理应用提供依据。方法 28只5～6月龄健康母绵羊(Ovis aries)随机分为4组(n=7),实验Ⅰ组(EG-Ⅰ)、实验Ⅱ组(EG-Ⅱ)和实验Ⅲ组(EG-Ⅲ)于0 d和14 d分别皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg和400μg(0 d和14 d各1次);对照组(CG)皮下注射2.0 ml药物的溶媒(0 d和14 d各1次)。各组于70 d无菌切取腺垂体和子宫。提取腺垂体总RNA,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测GnRHR mRNA表达的变化,Western blotting分析子宫GnRHR蛋白表达,免疫组织化学SP法染色检测GnRHR表达的变化。结果 EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ腺垂体GnRHR mRNA表达量均低于对照组,以EG-Ⅲ最小(P<0.01)。与CG相比,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ子宫GnRHR蛋白表达水平分别减少3.46%、4.90%和24.78%(P<0.05)。子宫组织中有GnRHR分布主要见于子宫内膜细胞和子宫腺上皮细胞的胞质和胞核,EG-Ⅲ灰度值显著低于CG(P<0.05)。结论 GnRH激动剂主动免疫可以剂量依赖性地抑制垂体GnRHR mRNA和子宫组织中GnRHR蛋白的表达。GnRHR主要分布在子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞的胞核和胞质,GnRHR激动剂免疫对子宫中GnRHR的分布具有抑制作用。     

Alarelin免疫绵羊对垂体GnRHR、FSHR和LHR基因表达与生殖激素分泌的作用

 目的 探讨GnRHago主动免疫对绵羊腺垂体GnRHR、FSHR和LHR表达及生殖激素合成与释放作用,为深入研究GnRH-A调节生殖功能的机理及合理应用提供依据。方法 42只5-6月龄母绵羊（Ovis aries）随机分为6组（n =7）,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg和400μg,0d和14d各1次,共2次;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg,0d、7d、14d和21d各1次,共4次;对照组皮下注射药物的溶媒,0d和14d各1次,共2次。于70d在颈动脉放血处死绵羊,无菌切取腺垂体、子宫及卵巢。用ELISA测定血清GnRH抗体浓度,以激素检测试剂盒分别测定血清GnRH、FSH、LH和E2浓度。提取腺垂体总RNA,PCR扩增与反转录,实时荧光定量PCR（FQ-PCR）,分析GnRHR、FSHR和LHR mRNA的表达。 结果 绵羊腺垂体中有丰富的RNA。特异性条带扩分别为2150 bp,1100bp和180bp左右。实验组GnRHR、FSHR和LHR mRNA值均低于对照组,EG-Ⅳ和EG-Ⅴ的mRNA值低于EG-Ⅰ和EG-Ⅱ。实验组血清GnRH浓度逐渐降低值谷值,之后上升,70d 时达到免疫注射前水平。实验组血清FSH浓度始终高于对照组（P＜0.05）。35d时EG-Ⅳ和EG-Ⅴ低于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ。实验组和对照组血清E2含量无显著差异。结论 阿拉瑞林主动免疫可抑制垂体GnRHR mRNA、FSHR mRNA和LHR mRNA的表达,促进垂体合成与释放FSH,增加血清FSH含量,降低GnRH和LH浓度,对E2浓度无明显影响。增加阿拉瑞林抗原的免疫剂量和注射次数,作用更加明显。     

GnRH-A主动免疫公兔对垂体GnRHR、FSH-β和LH-β基因表达的影响

目的探讨GnRH-A激动剂(阿拉瑞林)主动免疫对公兔的去势效果和垂体GnRHR、FSH-β和LH-βmRNA表达的影响。方法 30只日本大耳白兔(Oryctolagus cuniculus)随机分为三组(n=10),在实验1组(EG-Ⅰ)和实验2组(EG-Ⅱ)颈部皮下注射1.0mL(100μg/mL)阿拉瑞林抗原乳剂EG-Ⅱ于20d以相同剂量重复注射1次,用荧光定量PCR分析垂体中GnRHR、FSH-β和LH-β mRNA的表达,并测定GnRHR的核苷酸序列。结果 EG-Ⅰ和EG-ⅡGnRH抗体水平高于对照组(P0.05),EG-Ⅱ在49d达到峰值,显著高于EG-Ⅰ(P0.05)和对照组(P0.01),而后开始逐渐下降。28d以后,EG-Ⅱ和EG-Ⅰ血清睾酮浓度低于对照组(P0.05),且EG-Ⅱ低于EG-Ⅰ(P0.01);公兔GnRHR的核苷酸为1179bp,同源性达96%。结论阿拉瑞林免疫可以明显提高血清GnRH抗体水平,降低垂体GnRHR、FSH-β和LH-β基因表达,减少睾酮的合成与分泌,从而导致性器官发育受阻,具有明显的作用,加强免疫效果更佳。     

GnRH激动剂主动免疫母羊对生殖激素分泌的作用

目的:探讨GnRH激动剂(GnRHa)主动免疫对绵羊生殖激素合成与分泌的作用,并深入研究GnRH-A免疫调节动物生殖功能的机理。方法:42只5～6月龄母绵羊(Ovis aries)随机分为6组(n=7),EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别于0和14天皮下注射阿拉瑞林抗原200、300和400μg;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200、300、0、7、14和21天各一次,共4次;对照组在0和14天皮下注射抗原溶媒(除不用阿拉瑞林外,其余成分和制备方法与阿拉瑞林抗原相同)2.0 ml。无菌采集不同时段的血液,分离血清。以ELISA测定血清GnRH抗体浓度,用激素检测试剂盒(ELISA)分别测定血清GnRH、FSH、LH和E2浓度。结果:①阿拉瑞林首次免疫7天后,各实验组的抗体浓度逐渐升高,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别在28、28和35天达到峰值(P<0.05),EG-IV和EG-V则在在45天达到峰值(P<0.01),至60天时仍明显高于对照组(P<0.05)。14～60天间EG-IV和EG-V抗体浓度均高于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ(P<0.05)。②EG-Ⅰ、EG-Ⅱ的GnRH在21和28天抵谷值(P<0.05),EG-Ⅲ、EG-Ⅳ和EG-Ⅴ则在45天抵谷值(P<0.01),且以EG-Ⅴ为最低。谷值之后逐渐上升趋势,70天时达到免疫注射前水平。③实验组血清FSH浓度始终高于对照组(P<0.05)。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ于28、28和35天达到峰值(P<0.05),而EG-IV和EG-V在60天达到高峰值(P<0.01)。④实验组绵羊血清LH呈下降趋势,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别在21、21和28天达到谷值(P<0.01),EG-Ⅳ和EG-Ⅴ在35天达到谷值(P<0.01)。35天时EG-Ⅳ和EG-Ⅴ低于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ。⑤各组的血清E2含量无显著差异。结论:GnRH激动剂(阿拉瑞林)抗原主动免疫可促进GnRH抗体的生成,抑制母羊GnRH和LH的合成与分泌,增强FSH的合成与分泌,且随着注射剂量和注射次数的增加,这种作用更加明显,而对血清E2无明显影响。     

GnRH及其受体在兔卵巢和子宫的分布

目的探讨GnRH与其受体(GnRHR)在卵巢和子宫组织中的分布,研究GnRH-A(激动剂Alarelin)主动免疫对GnRH和GnRHR分布的影响。方法 24只日本大耳白雌兔(Oryctolagus cuniculus)随机分为4组(n=6),实验组和对照组。其中实验1组(EG-1)、实验2组(EG-2)和实验3组(EG-3)分别在兔颈背侧皮下注射1.0m(l100μg/ml、100μg/ml和50μg/ml)GnRH-A抗原,EG-2和EG-3于20d以原剂量加强注射1次,102d无菌采集垂体、卵巢和子宫。用SP法染色,图像分析技术进行定位与分析。结果卵巢和子宫均有GnRH和GnRHR阳性细胞分布,主要见于卵母细胞、卵泡细胞、子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞;GnRH-A的剂量不同,GnRH和GnRH阳性细胞的染色强度也不同,即GnRHR和GnRH的表达量不同。GnRH-A能增加GnRH和GnRH的分布与表达,EG-2的作用更为明显。结论卵巢和子宫中均有GnRH和GnRHR细胞分布,GnRH-A免疫能增强GnRH和GnRHR的表达。     

妊娠早期小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶的分布

目的　了解胚泡着床前后妊娠昆明系小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶 (inducible ni-tric oxide synthase,i NOS)的分布。　方法　免疫细胞化学 L SAB法。　结果　妊娠 2～ 5 d小鼠的卵巢内 ,黄体细胞上有 i NOS的阳性表达 ;输卵管粘膜上有 i NOS的分布 ,肌层则为阴性 ;妊娠 2、3d的小鼠子宫内 ,阳性标记主要出现在子宫内膜上皮以及子宫内膜中的子宫腺上皮 ,内膜基质细胞为阴性 ;妊娠 4d的子宫内 ,子宫腺及蜕膜部分均有 i-NOS的分布 ,妊娠 5 d时 ,在小鼠胚泡的表面也检测到了 i NOS的存在。　结论　小鼠胚泡着床前后 ,在其卵巢、输卵管及子宫内均有 i NOS的存在 ,提示 i NOS在小鼠胚胎早期发育及着床过程中起作用。     

ATF4基因在小鼠胚胎围着床期子宫内膜的表达

目的 探讨转录激活因子4(ATF4)在小鼠胚胎围着床期子宫内膜中的表达规律及在胚胎植入过程中的作用.方法 妊娠0～7d小鼠子宫内膜,用RT-PCR、免疫组织化学法和Western blot分别检测小鼠内膜ATF4 mRNA及蛋白的表达;用子宫角内注射ATF4抗体进行干预.结果 1)妊娠各组小鼠子宫内膜ATF4 mRNA的表达量均显著高于未孕组d0(P ＜0.0S),且随妊娠天数的增加其表达量逐渐增高,到d4达到峰值,之后逐渐下降;2)ATF4蛋白主要在基质细胞胞质表达,其表达规律与mRNA表达规律基本一致.3)子宫角ATF4抗体注射后与对照组相比着床数明显减少.结论 ATF4在小鼠妊娠早期可能参与子宫内膜蜕膜化过程,有利于着床.     

SA-30诱导的小鼠子宫内诱导型一氧化氮合酶的变化

目的　检测精子膜抗原 SA- 30对小鼠子宫内诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)含量及分布的影响 ,从而了解 SA - 30的抗生育机制。　方法　 SA- 30免疫雌性昆明小鼠后 ,应用免疫组织化学方法 ,对子宫内的 i NOS进行了检测。结果　 SA - 30免疫后对间情期小鼠子宫内的 i NOS没有明显影响 ,无论是免疫组还是对照组 ,在子宫内膜基质中均有大量阳性细胞分布 ,两者无明显差异 ;在妊娠第 3d时 ,对照组的小鼠子宫中有较多 i NOS表达 ,阳性标记主要集中在内膜上皮及固有膜中的子宫腺上 ,经 SA- 30免疫的小鼠子宫中 ,i NOS表达则显著减少 ,整个内膜标记极弱 ,只在子宫肌层内有少量 i NOS阳性细胞分布。　结论　 SA - 30可能通过使妊娠早期小鼠子宫内 i NOS表达显著减少 ,而影响小鼠胚胎植入及早期胚胎的发育     

白细胞介素-8在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达及对胚泡着床的影响

目的：研究白细胞介素-8（IL-8）在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达及其对小鼠胚泡着床的影响。方法：用免疫组化法及图像分析技术对IL-8在妊娠1～6d小鼠子宫内膜的表达进行定位和测定;子宫角注入IL-8抗体,探讨IL-8对胚泡着床的影响。结果：在子宫内膜腔上皮,IL-8主要定位于细胞的游离面,妊娠1d阳性反应最弱,4d表达最强,5d有所下降,6d又开始增强;在子宫内膜腺上皮,妊娠4d表达最弱,5d和6d最强;在子宫内膜的基质细胞,随妊娠天数增加,IL-8的表达逐渐增强。IL-8Ab明显抑制小鼠胚泡着床。结论：IL-8在妊娠早期小鼠子宫内膜持续表达,并参与胚泡的着床调控过程。     

妊娠早期小鼠子宫内膜层粘连蛋白定位、定量及对胚泡植入的作用

目的　研究妊娠早期小鼠子宫内膜层粘连蛋白（ｌａｍ ｉｎｉｎ,ＬＮ）定位和定量变化及其对胚泡着床的作用。方法　应用间接免疫荧光法、免疫组织化学ＡＢＣ技术及图像分析法进行ＬＮ定位和定量测定;利用子宫内注射ＬＮ抗体的方法探讨ＬＮ对小鼠胚泡植入的作用。　结果　动情期及妊娠早期小鼠子宫内膜内源性ＬＮ 在上皮和腺基膜及血管内皮基膜均有表达,并随着植入的发生基膜的ＬＮ 表达减弱,而内膜上皮中ＬＮ免疫染色逐渐增强;外源性ＬＮ 对小鼠胚泡粘附与植入子宫内膜不产生明显影响,层粘连蛋白抗体明显抑制小鼠胚泡着床。　结论　动情期及妊娠早期小鼠子宫内膜的层粘连蛋白主要存在于基膜,胚泡植入期间内膜上皮细胞内ＬＮ 的含量增加;ＬＮ在促进小鼠胚泡粘附与植入子宫内膜过程中起重要作用。     

促性腺激素释放激素类似物对乳腺癌细胞株化疗敏感性的影响

目的： 探讨促性腺激素释放激素类似物（GnRHa）对乳腺癌细胞株（MCF-7和MDA-MB-231）化疗敏感性的影响。方法：不同浓度的GnRHa（曲普瑞林,triptorelin）（10^－9 mol/L、10^－8 mol/L、10^－7 mol/L、10^－6 mol/L、10－5 mol/L）分别作用于MCF-7和MDA-MB-231细胞24 h、96 h和168 h后，用CCK-8方法检测细胞活性。用或不用GnRHa（10^－5 mol/L）处理96 h后，分别加入5-氟尿嘧啶（5-FU）或表阿霉素(EPI)作用24 h，用CCK-8法检测细胞抑制率。用RT-PCR检测GnRHa（10^－5 mol/L）作用168 h后GnRH受体、PCNA和MDR1 mRNA表达水平。结果：不同浓度GnRHa作用不同的时间后对乳腺癌细胞活性无影响。GnRHa（10^－5 mol/L）作用96 h后，5－FU和EPI对两种细胞的IC50不改变；GnRHa（10^－5 mol/L）不影响5－FU（MCF-7细胞0.5 g/L，MDA－MB－231细胞0.5 g/L）和EPI（MCF-7细胞1.2 mg/L,MDA－MB－231细胞0.8 mg/L）对两种细胞的抑制作用（P>0.05）。GnRHa（10^－5 mol/L）作用168 h后，MCF-7细胞的PCNA mRNA表达无改变。而在MDA-MB-231细胞，PCNA表达升高，差别有统计学意义（P<0.05）。在MCF-7对照组中，MDR1 mRNA有弱表达。GnRHa作用后，抑制了MDR1 mRNA表达。MDA-MB-231细胞GnRHa作用前后， MDR1 mRNA均无表达。结论：GnRHa不影响乳腺癌细胞株对5-FU和EPI的敏感性。GnRHa可能通过下调MDR1 mRNA表达水平，减弱MCF-7细胞的耐药性。     

雌激素与C型利尿钠肽介导的青春期线性生长的关系

 目的：探讨青春期女孩雌激素与C型利尿钠肽（C-type natriuretic peptide, CNP）介导的长骨生长的关系,及两者在中枢性性早熟女孩GnRHa治疗相关身高增长减速中的作用。方法：（1）检测56例正常不同青春发育期女孩空腹血清雌二醇（E2）、CNP的N端前肽（N-terminal propeptide of CNP, NT-proCNP）、胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor 1, IGF-1）以及骨形成生化标志物N端中段骨钙素（N-terminal mid-fragment of osteocalcin, N-MID OC）的浓度。（2）检测13例特发性中枢性性早熟（idiopathic central precocious puberty, ICPP）女孩在促性腺激素释放激素类似物（gonadotropin-releasing hormone analogue, GnRHa）治疗开始、治疗6个月末及12个月末时血清E2、NT-proCNP、IGF-1和N-MID OC水平,并计算身高增长速度（height velocity, HV）。结果：(1) 在56例正常不同青春发育期女孩中,与青春前期相比,血清NT-proCNP、IGF-1、E2和N-MID OC浓度均自青春早期开始升高（P<005或P<0.01）;血清NT-proCNP在青春中期维持高水平,至青春后期达峰值（P<005）;血清IGF-1和E2浓度于青春中期继续升高（P<0.01）,亦至青春后期达峰值（P<0.01）;血清N-MID OC浓度于青春中期达到峰值（P<0.05）,青春后期则开始下降（P<0.05）。(2) ICPP女孩GnRHa治疗6个月末HV、血清NT-proCNP和血清N-MID OC均较治疗开始时显著下降（P<0.05）,但与12个月末相比无显著差异;GnRHa治疗开始、治疗6个月末和12个月末后血清IGF-1浓度无显著差异;治疗后血清E2显著下降并回复至青春前期水平（P<0.05）。结论：女孩血清NT-proCNP水平随青春发育进程升高,与血清E2和IGF-1浓度平行,提示女孩青春期升高的雌激素在一定程度上可诱导CNP介导的青春期生长加速。ICPP女孩经GnRHa治疗后,随着雌激素受抑,生长速度减慢,血清NT-proCNP浓度下降,并与生长速度和骨形成平行,提示GnRHa致ICPP女孩生长减速部分缘于雌激素被抑制后CNP介导的长骨生长减慢。     

Comparison of clinical efficacy between a single administration of long-acting gonadotrophin-releasing hormone agonist (GnRHa) and daily administrations of short-acting GnRHa in in vitro fertilization-embryo transfer cycles

This study was aimed to evaluate the efficacy of a single administration of long-acting gonadotrophin-releasing hormone agonist (GnRHa) as compared with daily administrations of short-acting GnRHa in controlled ovarian hyperstimulation (COH) for in vitro fertilization and embryo transfer (IVF-ET) cycles. The mean dosage of recombinant follicle-stimulating hormone (rFSH) required for COH (2,354.5+/-244.2 vs. 2,012.5+/-626.1 IU) and the rFSH dosage per retrieved oocyte (336.7+/-230.4 vs. 292.1+/-540.4 IU) were significantly higher in the long-acting GnRHa group (N= 22) than those in the short-acting GnRHa group (N=28) (p<0.05). However, the mean number of visit to the hospital that was required before ovum pick-up (3.3+/-0.5 vs. 22.2+/-2.0) and the frequency of injecting GnRHa and rFSH (12.8+/-1.2 vs. 33.5+/- 3.5) were significantly decreased in the long-acting GnRHa group (p<0.0001). The clinical pregnancy rate, implantation rate, and early pregnancy loss rate were not significantly different between the 2 groups. So, we suggest that a single administration of long-acting GnRHa is a useful alternative for improving patient's convenience with clinical outcomes comparable to daily administrations of short-acting GnRHa in COH for IVF-ET cycles.     

Effect of disruption versus continuation of gonadotrophin-releasing agonist after human chorionic gonadotrophin administration on corpus luteum function in patients undergoing ovulation induction for in-vitro fertilization

Previous studies have described the luteolytic effect of gonadotrophin- releasing hormone agonist (GnRHa) administered in the early luteal phase. The present work was undertaken to compare in a prospective and randomized design the effect of disruption versus continuation of daily GnRHa after human chorionic gonadotrophin (HCG) administration on corpus luteum function in patients undergoing ovulation induction for in-vitro fertilization (IVF). Two different studies were designed and a total of 38 ovum donors, aged 23-30 years, were included. In the first study, the effect of GnRHa on the early luteal phase of IVF-stimulated cycles was investigated (n = 27); the patients were divided into two groups, according to whether they stopped (n = 13) or continued with daily GnRHa injections (n = 14) for an additional period of 15 days after HCG administration. Blood was drawn from luteal phase days 2 to 6 (day 0 = day of HCG administration) and oestradiol and progesterone concentrations were analysed. The second study focused on the effects of continuation versus disruption of GnRHa administration in the mid- late luteal phase. A similar design was employed including six patients who stopped GnRH on day 0 and five other women who continued GnRHa for 15 days after HCG administration. In this second study, blood was drawn from days 5 to 11 and oestradiol, progesterone and luteinizing hormone (LH) concentrations were analysed. IVF parameters were similar in both groups. The results indicate that continuous GnRHa administration, after HCG injection, does not produce changes in oestradiol, progesterone and LH concentrations in the early, mid- and late luteal phases compared to those patients in whom GnRHa is discontinued at the day of HCG administration. The present work demonstrates that, when ovulation induction is performed, the corpus luteum is driven primarily by the HCG, regardless of the administration or disruption of GnRHa in the luteal phase. This suggests that the lack of differences between continuation versus disruption of GnRHa may be due to the accumulation of the product over the previous 2-3 weeks of treatment.      

促性腺激素释放激素激动剂对子宫腺肌病在位内膜细胞凋亡的影响

目的 研究促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)对子宫腺肌病(AM)在位内膜细胞凋亡的影响.方法 取本院妇科住院行全子宫切除术的32例AM患者在位子宫内膜细胞为研究组;同期因卵巢上皮性良性肿瘤行卵巢囊肿剔除术的20例患者正常子宫内膜细胞为埘照组.两组细胞进行体外培养,用GnRHa 10-7、10-5mol/L分别作用24、48、72 h后,用末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)及流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率.结果 (1)镜下可见两组部分细胞固缩、漂浮、核浓缩、碎裂,呈典型的凋亡小体;(2)不含GnRHa培养的AM在位内膜细胞凋亡率在各时间点均低于对照组,且两组都随时间的延长凋亡率增加(P<0.01);(3)GnRHa作用后,两组的凋亡率高于作用前,且均随浓度的增加而增加,且研究组符时间点、各浓度AM在位内膜细胞凋亡率均显著高于同时间、同浓度的对照组(P<0.01).结论 在位内膜细胞凋亡率异常可能是AM发病机制之一.GnRHa可能以自分泌或旁分泌机制直接作用于子宫在位内膜细胞,提高了AM在位内膜细胞的凋亡率.     

雌性小鼠骨髓移植给雄性小鼠后内源性骨髓细胞残存状态的研究

 目的:以雌性小鼠骨髓移植给雄性小鼠的方法,通过检测雄性小鼠血细胞的Y染色体来明确内源性骨髓细胞的残存状态。方法:将雌性或雄性C57BL/6小鼠作为受体,实验组用［137Cs］照射,6 h后每只经尾静脉注射供体小鼠骨髓细胞1×107。统计骨髓移植后14 d动物的存活率,并通过眶静脉采血观察外周血白细胞数量的变化,检测受体雄性小鼠体内Y染色体基因水平的变化以明确骨髓移植的效果。结果:分别用1 000、950和900 rad的照射剂量对受体小鼠进行照射后将供体小鼠的骨髓移植到受体小鼠体内,1 000和950 rad剂量时雌性受体小鼠可迅速恢复造血功能,而雄性受体小鼠则仅有48%的存活率。900 rad照射剂量骨髓移植后,雄性受体小鼠迅速恢复了造血功能,13 d后外周血白细胞计数基本恢复正常。移植后的雄性受体小鼠在5周内已检测不到外周血细胞Y染色体基因,表明雄性受体小鼠的骨髓被完全破坏,雌性供体小鼠的骨髓可完全替代受体雄性小鼠的骨髓并且发挥造血功能。结论: 在照射剂量900 rad照射后,雄性小鼠可以作为骨髓移植受体,为将来应用雄性小鼠作为骨髓移植受体动物开展有关心血管疾病的研究奠定了实验基础。     

Fibromodulin is expressed in leiomyoma and myometrium and regulated by gonadotropin-releasing hormone analogue therapy and TGF-beta through Smad and MAPK-mediated signalling

Microarray gene expression profiling revealed fibromodulin (FMOD) is among differentially expressed genes in leiomyoma (L) and myometrium. Using realtime PCR, western blotting and immunohistochemistry, we validated the expression of FMOD in paired leiomyoma and myometrium (N = 20) during the menstrual cycle, from women who received gonadotropin-releasing hormone analogue (GnRHa) therapy (N = 7) and in leiomyoma and myometrial (M) smooth muscle cells (SMC) due to transforming growth factor (TGF)-beta and GnRHa treatment. The results indicated that FMOD is expressed at significantly higher levels in leiomyoma as compared to myometrium from proliferative phase (two- to three-folds; P < 0.05), but not the secretory phase of the menstrual cycle, whereas GnRHa therapy reduced FMOD expression to levels detected in myometrium from proliferative phase (P = 0.05). By using western blotting and immunohistochemistry immunoreactive FMOD was detected in leiomyoma and myometrial tissue-extract and in LSMC and MSMC, connective tissue fibroblasts and arterial walls. In a time- and cell-dependent manner, TGF-beta1 (2.5 ng/ml) increased the expression of FMOD in MSMC, whereas GnRHa (0.1 microM) inhibited that in MSMC and LSMC (P < 0.05). The effect of TGF-beta and GnRHa on FMOD expression was reversed following pretreatment of LSMC and MSMC with Smad3 SiRNA and U0126 (MEK1/2 inhibitor), respectively. In summary, menstrual cycle-dependent expression of FMOD and suppression following GnRHa therapy in leiomyoma and myometrium, as well as differential regulation by TGF-beta and GnRHa in vitro suggests that FMOD, a key regulator of tissue organization, plays a critical role in leiomyoma fibrotic characteristics.     

Response of CBA/N x DBA2/F1 mice to Nocardia asteroides.

Immunized and nonimmunized B-lymphocyte-deficient CBD2/F1 (CBA/N x DBA/2) mice were infected with Nocardia asteroides GUH-2 by different routes of inoculation. The 50% lethal dose, organ clearance, footpad response, and antibody titers were measured. It was observed that B-cell-deficient male mice were not significantly more susceptible to infection than normal female controls even though the female CBD2/F1 mice produced antinocardial antibodies while the deficient male animals did not. Preimmunized male and female mice were identical in their ability to clear N. asteroides from the adrenals, brain, kidneys, liver, lungs, and spleen. Both DBA/2 and CBD2/F1 female mice were more susceptible than their male littermates to intravenous challenge with N. asteroides GUH-2. This enhanced susceptibility of the female mice as compared to the male littermates appeared to be due to a decreased resistance to nocardial infections in the brains of the female animals. These data indicate that antibody and certain B-lymphocyte subpopulations are not essential components in host resistance to N. asteroides GUH-2 in these mice.     

环磷酰胺对BALB／C（H-2^d）雌性成年小鼠卵巢形态结构与功能的影响

目的探讨造血干细胞移植前环磷酰胺预处理对卵巢的损伤作用。方法将60只BALB／C（H-2d）小鼠随机分为A组（20只），不给予任何处理；B组（20只），经腹腔内注入生理盐水0．5ml；C组（20只），以环磷酰胺溶解于生理盐水后，按380mg／kg剂量一次性腹腔注射。C组分别于预处理后15d、（C1组）、30d（C2组）各取10只小鼠处死，A组（A1组、A2组）和B组（B1组、B2组）分别于第2、4个间情期各取10只小鼠处死，分别在光镜和电镜下观察卵巢组织形态学改变，计数始基卵泡、初级卵泡、窦状卵泡和排卵前卵泡。放免法检测血清E2、P、T、FSH、LH、PRL。结果C组小鼠于预处理后出现精神萎靡、体重下降、阴道上皮细胞失去周期性变化等表现。卵巢体积缩小，光镜下颗粒细胞变性、坏死，发育期卵泡数减少，闭锁卵泡增加（P〈0．01），但始基卵泡数正常。电镜下可见卵泡透明带完整，卵母细胞、卵丘细胞和颗粒细胞均受到不同程度损伤。C组E2、P显著低于空白组和对照组，FSH、LH水平则显著高于A组和B组，（P〈0．01）；T、PRL水平在各组之间无显著性差异，预处理30d小鼠较15d损伤程度减轻。结论造血干细胞移植前化学药物预处理可造成卵巢结构与功能的损伤，但这种损伤未影响始基卵泡，卵巢尚有一定储备功能，随距药物作用时间的延长其结构与功能还可在一定程度上得以恢复。     

CNP在GH促进GnRHa治疗中大骨龄、青春中后期CPP/EFP女孩线性生长机制中的作用

 目的:探讨生长激素（growth hormone,GH）改善促性腺激素释放激素类似物（gonadotropin-releasing hormone analogue,GnRHa）治疗中大骨龄、青春中后期中枢性性早熟（central precocious puberty,CPP）或快速进展型早发育（early and fast puberty,EFP）女孩线性生长的近期疗效,以及C型利钠肽（C-type natriuretic peptide,CNP）在GH促线性生长机制中的作用。方法:22例骨龄≥11.5岁、预测成年身高（predicted adult height,PAH）严重受损、青春中后期的特发性CPP或EFP女孩分为2组各11例：（1）单用GnRHa组:仅用GnRHa（每4周缓释型曲普瑞林60～80 μg/kg,im）治疗;（2）联用GH组:联用GnRHa和GH（每周1 U/kg,分6~7次睡前sc）治疗。每3个月测量身高和体重,检查性征;治疗开始和治疗6个月末行骨龄检查,并检测血清CNP氨基端前体（amino-terminal pro-C-type natriuretic peptide,NTproCNP）、胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor 1,IGF-1）及1型前胶原氨基端伸展肽（procollagen type 1 amino-terminal propeptide,P1NP）的浓度。比较治疗前及治疗后6个月的身高增长速度（height velocity,HV)、按骨龄身高的标准差分值（height SD score for bone age,HtSDSBA）、PAH及上述血清指标的变化。结果:（1）联用GH组治疗6个月的HV、HtSDSBA增值（ΔHtSDSBA）和PAH增值（ΔPAH）均显著高于单用GnRHa组(P<0.01)。（2）联用GH组治疗6个月末与治疗开始时比较,血清NTproCNP、P1NP浓度和IGF-1浓度均无显著性差异。（3）单用GnRHa组治疗6个月末的血清NTproCNP和P1NP浓度则均较治疗开始时显著下降（P<0.05),IGF-1浓度则无显著差异。结论: 对于大骨龄、青春中后期的特发性CPP或EFP女孩,GnRHa联用GH能促进线性生长,有效改善预测成年身高。GH的促生长作用不依赖于血清IGF-1水平的变化,而可能部分与CNP介导的长骨生长加速有关。