EBV感染上皮细胞机制的研究进展

近年来发现EBV与多种上皮细胞恶性肿瘤的发生密切相关，探讨EBV感染上皮细胞的机制对预防和治疗EBV相关疾病有重要意义。本文就EBV感染上皮细胞的可能机制作一综述。     

人巨细胞病毒对腮腺导管上皮细胞表型的影响及其机制

目的　研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对腮腺导管上皮细胞表型所产生的影响及其可能的机制。方法　用免疫组织化学方法研究腮腺巨细胞包涵体病石蜡包埋组织中巨细胞病毒立即早期抗原、广谱角蛋白、组织蛋白酶D等的表达。结果　腮腺导管上皮细胞感染HCMV后,作为上皮性标志物的角蛋白表达转为阴性,而组织蛋白酶D的表达转为强阳性。结论　HCMV感染后腮腺导管上皮细胞角蛋白丢失,其机制可能与组织蛋白酶D的表达增强有关。     

新的丙肝病毒的共因子被发现

生物谷报道:claudin-1是在人类的肝脏中所表达的一种紧密连接的蛋白,已经被确定为丙肝病毒的一种重要的进入共因子(entry co-factor)。这项研究结果发表在最新一期的《Nature》杂志上。同以前确定的CD81共受体一样,claudin-1也跨过细胞膜四次,并有两个细胞外的环。它在丙肝病毒     

人巨细胞病毒对体外培养的人涎腺导管上皮细胞周期的影响及其相关机制

目的 研究人巨细胞病毒（HCMV）对人涎腺导管上皮细胞（HSG）细胞周期的影响及其相关机制.方法 体外培养HSG;用RT-PCR及nest-RT-PCR法检测感染HCMV的HSG中立即早期基因（ie1/ie2）的转录;用流式细胞仪检测HCMV对HSG细胞周期的影响;用蛋白印迹技术检测HCMV感染细胞中周期素D1的表达.结果 感染HCMV的HSG中可检测到HCMV ie1/ie2的转录;HCMV通过影响细胞周期的G1/S关卡,使HSG阻滞于G1期;感染HCMV的HSG周期素D1表达下调.结论 在体外HCMV通过作用于细胞周期的G1/S关卡及下调周期素D1抑制涎腺导管上皮细胞的增殖.     

病毒入侵的细胞生物学机制

随着我们对细胞膜分子、病毒蛋白质微粒细胞的了解及它们与受体分子间相互作用的认识,我们对病毒入侵的机制有了深入的了解,这为研制有效的拮抗剂、疫苗及特异性的载体提供了新视野和思维方法。本文就病毒入侵的细胞生物学机制方面的研究进展作一综述。     

Epstein—Barr病毒在人上皮细胞中的增殖和表达

为了研究Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒在人上皮细胞的存在方式，构建了真核表达质粒ｐＳＧ－ＣＲ２－Ｈｙｇ，并用电脉冲介导基因转移法把该质粒转入人羊膜上皮细胞（ｗｉｓｈ细胞），用Ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ Ｂ筛选出抗性细胞，用ＣＲ２单克隆抗体测定，约２５％ｗｉｓｈ细胞表达ＣＲ２。再用ＥＢ病毒感染此细胞，培养一定时间后，与鼻咽癌（ＮＰＣ）病人血清反应，通过间接免疫荧光法检测，发现１３％的细胞呈阳性结果。     

呼吸道合胞病毒对人支气管上皮细胞通透性的影响

目的探讨呼吸道合胞病毒对支气管上皮细胞通透性的影响。方法通过ELISA、荧光定量PCR检测呼吸道合胞病毒感染人支气管上皮细胞后对其血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,同时,通过检测细胞的跨膜电阻了解呼吸道合胞病毒对人支气管上皮细胞通透性的影响。结果呼吸道合胞病毒增加了人支气管上皮细胞VEGF的表达,增加了支气管上皮细胞的通透性,VEGF的单克隆抗体可以明显阻断这一效应。结论呼吸道合胞病毒通过上调VEGF的表达增加对支气管上皮细胞的通透性。     

紧密连接的分子基础及其调控

紧密连接对维持上皮细胞的选择性通透作用有重要作用,跨膜蛋白闭锁蛋白ｏｃｃｌｕｄｉｎ为参与紧密连接复合物构成的重要分子。ＺＯ１和ＺＯ２是与紧密连接和细胞内骨架系统有密切关系的胞膜下蛋白。闭锁蛋白与胞浆中ＺＯ１蛋白结合形成紧密连接的基本结构。紧密连接对细胞间隙的通透性起着主控作用并受酪氨酸激酶系统,蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）,Ｃａ２＋,ｃＡＭＰ,磷脂酶Ｃ和Ｇ蛋白等多种方式调控。肌球蛋白和“连结周围的肌动蛋白”结构形成的复合体在紧密连接的调节中可能占有重要地位     

人免疫缺陷病毒对不同黏膜上皮细胞系的感染能力的研究

目的 研究人免疫缺陷病毒(HIV-1)对不同黏膜上皮细胞系的感染能力.方法 用实验室株HIV-1 SF33和2株原代HIV-1(02010561,02010141)分别感染Caco-2、T斟和HeLa 3株黏膜上皮细胞和MT-4细胞.接种病毒后间隔3～4 d采集培养上清检测Ir24并用实时定量RT-PCR检测病毒载量;采集细胞提取DNA并用PCR法检测感染细胞中病毒DNA和整合入细胞基因组内的捕綝NA.结果 所用3株病毒都可以产毒性地感染阳性对照细胞MT-4,对整合病毒DNA的PCR检测发现它们均能够整合到MT-4细胞基因组内;实验室适应株HIV-1 SF33 虽然能够感染所有3株上皮细胞,但它不能整合入Cacoo2细胞的基因组中;虽然2株原代分离病毒均能感染T-84细胞,但只有HIV-1 02020141能够整合入T-84细胞的基因组中,原代分离病毒HIV-1 02010561能够感染HeLa细胞,但不能整合到其基因组中.结论 虽然HIV-1的实验室毒株和原代分离毒株都可能感染黏膜上皮细胞,但它们在黏膜上皮细胞中建立稳定产毒性感染(感染并产生病毒)的能力因细胞和毒株不同而异.     

RNA病毒逃避天然免疫机制的研究新进展北大核心CSCD

病毒感染后通过信号转导引发机体免疫反应。环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(c GAS)识别病毒DNA,与干扰素基因刺激蛋白(STING)相互作用,介导产生1型干扰素(IFN1)。维甲酸诱导基因1(RIG-1)受体识别病毒RNA,通过线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)引发RIG-1信号通路,激活IFN1。STING不仅可以作为DNA病毒信号通路蛋白,还可与MAVS相互作用,参与RNA病毒信号通路。然而,登革病毒、丙型肝炎病毒等RNA病毒的蛋白酶通过与STING相互作用逃逸免疫系统监视,抑制IFN产生。本文对STING与MAVS的相互作用机制,以及RNA病毒通过STING逃逸免疫系统监视进行综述,以期为研究病毒逃逸天然免疫调节机制提供新思路。     

干细胞基础研究的新进展

近5年来,在世界范围出现干细胞的研究热潮,有关干细胞的论文大量发表,风起云涌。然而,有部分的实验结论缺乏充足的证据,而引起质疑。例如干细胞“横向分化”的假设错误地认为干细胞可以跨胚层、跨系别地任意地变身,脂肪变肝脏,肌肉变神经等等。成体干细胞的存在是21世纪一个伟大的科学发现。越来越多的实验证明成体组织中还存在胚胎发育过程遗留下的各个胚层的干细胞和各类组织干细胞。全身各类组织中的成体干细胞含有除了生殖干细胞外的各种干细胞。至今,只有在生殖组织中才能发现生殖干细胞,因而生殖组织以外的成体干细胞又称为亚全能干细胞。成体干细胞包括造血和非造血的干细胞,非造血的干细胞又包括了各种非造血组织的干细胞,例如神经干细胞和间充质干细胞等。间充质干细胞是全身结缔组织(骨、软骨、肌肉、脂肪、纤维、血管等)的干细胞,它是创伤、烧伤、缺血坏死、骨髓损伤等修复过程中所必不可少的,有巨大的临床应用前景。随着生命科学的全面发展,干细胞领域中的认识误区将逐步得到澄清,干细胞科学也必将健康地发展起来。     

喉上皮细胞条件液诱导胚胎干细胞分化为上皮细胞的实验研究

目的:探讨体外用喉上皮细胞条件培养液诱导胚胎干细胞分化为上皮细胞的方法及诱导条件。方法:将E14小鼠胚胎干细胞体外培养形成拟胚体后，在人喉上皮细胞条件培养液及因子诱导条件下共培养 14 d，形态学观察并采用免疫细胞化学方法检测上皮细胞的角蛋白Ck 4、14、19蛋白质水平的表达情况。结果:在诱导14 d的培养系统中较对照细胞可见更多上皮样细胞出现，免疫细胞化学染色显示上皮样细胞胞浆中可见角蛋白Ck 4、14、19均有表达。结论:胚胎干细胞在喉上皮细胞条件培养液诱导条件下可形成上皮样细胞，为组织工程制作人工喉上皮材料奠定了实验基础。     

影响肺炎克雷伯菌粘附上皮细胞作用的研究

目的:研究不同理化及生物因素对肺炎克雷伯菌粘附宿主细胞的影响,探讨其粘附宿主细胞的可能机制。方法:用肺炎克雷伯菌临床分离株K.pnueumoniae 03183(K.p03183)建立粘附宿主细胞模型,通过结晶紫染色及扫描电镜观察其粘附效率;以不同理化及生物因素预处理K.p03183,平板菌落计数法观察上述因素对K.p03183粘附细胞的影响;用基因芯片技术,检测HMGN2蛋白预处理细菌对于其粘附相关基因表达的影响。结果:K.p03183可粘附至A549、T24、HeLa等3种上皮细胞系,其粘附率与E.coli 25992接近;氯化锂和盐酸胍、高碘酸钠及热预处理可明显降低K.p03183对于A549和T24的粘附率(P0.05);同时,胃蛋白酶及HMGN2蛋白预处理K.p03183,也可抑制其对A549和T24的粘附(P0.01);但胰蛋白酶预处理却能增加细菌对于A549细胞的粘附(P0.05);同时,HMGN2还可通过上调dksA基因表达,从而干扰细菌粘附细胞。结论:肺炎克雷伯菌可能借助细胞壁及其表面蛋白和碳水化合物等成分粘附至宿主上皮细胞,通过非共价键结合表面蛋白或消除碳水化合物成分,抑制细菌粘附至宿主细胞。     

Measurement of paracellular epithelial conductivity by conductance scanning

 A new method, conductance scanning, allows determination of local para- and transcellular conductivities in flat epithelia. Experiments were performed on kidney distal tubule cells, MDCK clone C11, which form monolayers on permeable supports. Above the apical surface, local voltage drops generated by a sinusoidal current clamp were recorded by means of a scanning microelectrode. Data were collected above cell centres and tight junctions. The scanning signal was always significantly higher above the tight junctions, but was uniformly distributed along the junctions. For determination of conductivities two procedures were applied. Method 1: the supraepithelial potential distribution was computed for given trans- and paracellular currents at all positions of the electrode. In a fit algorithm, the currents were varied until the calculated potential difference equalled the voltage measured. Method 2: after collecting scanning data in control Ringer’s, intercellular space width was reduced by mucosal addition of 40 mM sucrose and a second set of data was obtained at decreased paracellular, but presumably unchanged transcellular, conductivity. From these data, trans- and paracellular conductivities were calculated. Results of both methods were in excellent agreement. Confluent MDCK-C11 monolayers exhibited a transepithelial conductivity of 13 mS/cm². The transcellular pathway contributed 2.6 mS/cm² (20%) and the paracellular pathway 10.5 mS/cm² (80%) to the total conductivity. Collapse of the lateral intercellular spaces decreased the paracellular conductivity to 4 mS/cm² (60%). Confluent MDCK-C11 monolayers constitute true ”leaky” epithelia with homogeneously distributed trans- and paracellular conductivities. In conclusion, conductance scanning fills a methodical gap, which hitherto impeded the functional characterzation of tight junctions. Received: 10 February 1997 / Received after revision: 9 June 1997 / Accepted: 10 June 1997     

Different sugar residues of the lipopolysaccharide outer core are required for early interactions of Salmonella enterica serovars Typhi and Typhimurium with epithelial cells

The role of lipopolysaccharide (LPS) in entry of Salmonella Typhimurium into epithelial cells remains unclear. In this study, we tested the ability of a series of mutants with deletions in genes for the synthesis and assembly of the O antigen and the outer core of LPS to adhere to and invade HeLa, BHK, and IB3 epithelial cells lines. Mutants devoid of O antigen, or that synthesized only one O antigen unit, or with altered O antigen chain lengths were as able as the wild type to enter epithelial cells, indicating that this polysaccharide is not required for invasion of epithelial cells in vitro. In contrast, the LPS core plays a role in the interaction of S. Typhimurium with epithelial cells. The minimal core structure required for adherence and invasion comprised the inner core and residues Glc I–Gal I of the outer core. A mutant of S. Typhimurium that produced a truncated LPS core lacking the terminal galactose residue had a significant lower level of adherence to and ingestion by the three epithelial cell lines than did strains with this characteristic. Complementation of the LPS production defect recovered invasion to parental levels. Heat-killed bacteria with a core composed of Glc I–Gal I, but not bacteria with a core composed of Glc I, inhibited uptake of the wild type by HeLa cells. A comparison of the chemical structure of the S. Typhi core with the published chemical structure of that of S. Typhimurium indicated that the Glc I–Gal I–Glc II backbone is conserved in both serovars. However, S. Typhi requires a terminal glucose for maximal invasion. Therefore, our data indicate that critical saccharide residues of the outer core play different roles in the early interactions of serovars Typhi and Typhimurium with epithelial cells.     

DDRs对免疫细胞调控机制的研究进展

盘状结构域受体(DDRs)是受体酪氨酸激酶(RTKs)超家族的重要成员,由DDR1和DDR2组成.胶原蛋白与DDRs特异性结合可诱导其酪氨酸磷酸化,从而引起下游细胞信号的转导.目前,研究表明DDRs在树突状细胞、巨噬细胞、小胶质细胞、中性粒细胞、T淋巴细胞中均有表达,并通过NF-κB、p38 MAPK、JNK、ERK等...     

MUC16介导卵巢癌细胞免疫逃逸NK细胞杀伤的研究进展

过继性自体NK细胞免疫治疗临床应用的效果不明显可能与肿瘤在恶化过程中对NK细胞的免疫逃逸有关,MUC16作为一种表达于卵巢癌上皮细胞表面的跨膜黏蛋白可能参与了卵巢癌细胞对NK细胞杀伤作用的免疫逃逸.因而了解MUC16介导卵巢癌细胞免疫逃逸NK细胞杀伤作用的相关性研究很重要.     

实验性肾小管间质纤维化中肾小管上皮细胞表型转化的研究

目的 观察和研究肾小管间质纤维化过程中肾小管上皮细胞发生表型转化的现象及其形态特点。方法 结扎大鼠一侧肾静脉,制作大鼠肾小管间质纤维化模型,连续饲养25d。每5d杀检5只,对肾脏重点检查,未结扎肾静脉的对侧肾作为对照,采用光镜、透射电镜、偏振光显微镜及免疫组织化学方法[链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶(sP)法]观察肾组织的病理变化以及肾小管上皮细胞的表型转化情况。结果肾静脉结扎侧肾逐渐出现肾小管萎缩,肾间质淋巴、单核细胞浸润和纤维化等肾小管间质纤维化的典型病变。免疫组织化学观察发现,随着病变的发展,损伤的肾小管上皮细胞角蛋白表达逐渐减弱,而a平滑肌肌动蛋白、波形蛋白、转化生长因子β1和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达逐渐增强,肾间质中也出现角蛋白阳性的间质细胞。透射电镜下可见肾小管上皮细胞内线粒体减少,内质网和微丝增多,并可见肾小管上皮细胞突破基底膜游离到肾间质中。天狼星红染色偏振光显微镜观察显示早期肾间质中Ⅲ型胶原增生为主,后期以Ⅰ型胶原为主。结论 在大鼠肾小管间质纤维化病变的发生和发展中,肾小管上皮细胞可转化为间质成纤维细胞,是成纤维细胞的来源之一。     

纤维蛋白支架上人羊膜上皮细胞的培养

目的：观察人羊膜上皮细胞（HAEC）能否在体外构建的纤维蛋白支架上良好生长。 方法： 体外构建的纤维蛋白支架，采用倒置显微镜观察，吉姆萨（Giemsa）染色和扫描电子显微镜，观察人羊膜上皮细胞在纤维蛋白支架上生长情况。 结果： 人羊膜上皮细胞在纤维蛋白支架上生长良好，细胞间相互有伪足等多种形式的接触。 结论： 体外构建的纤维蛋白支架与羊膜上皮细胞有组织相容性，纤维蛋白支架可能作为人羊膜上皮细胞的生长载体和胎膜破口的修复材料。     

Abnormal development of thymic dendritic and epithelial cells in human X-linked severe combined immunodeficiency

The X-linked form of severe combined immunodeficiency (X-SCID) is caused by mutations in the common cytokine receptor gamma chain and results in lack of T and NK cells and defective B cells. Without immune reconstitution, X-SCID patients typically die from infection during infancy. This report describes thymic epithelial (TE), lymphocyte, and dendritic cell (DC) differentiation in the thymic microenvironment of seven X-SCID patients who died before or after treatment for their immunodeficiency. X-SCID thymus consisted predominately of TE cells without grossly evident corticomedullary distinction. CD3+ and CD1a+ developing T cells and CD83+ thymic DC were reduced >50-fold when compared to age- and gender-matched control thymus (P < 0.001). TE expression of epithelial differentiation markers CK14, involucrin, and high molecular weight cytokeratins also differed in X-SCID versus normal thymus. These histopathologic findings indicate that in addition to T cells, thymic DC development and differentiation of TE cells are also abnormal in X-SCID.