骨保护素基因修饰的pSecTag2/B载体的构建

目的：克隆骨保护素基因(osteoprotegerin,OPG)的cDNA,构建pSecTag2／B-OPG真核分泌表达穿梭载体．为组织工程和基因工程联合治疗牙周病提供物质基础。方法：提取人胚胎肾293细胞的总RNA,设计和合成特异性引物,进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增出具有抑制破骨细胞功能的OPG基因cDNA,并将其重组到pSecTag2／B载体中,测序鉴定。结果：从293细胞的总RNA中反转录扩增得到编码骨保护素的基因片段．重组到pSecTag2／B载体。经测序证实,此基因与GenBank中[gi：33878056]提供的序列完全一致;重组质粒经PCR、Hind Ⅲ单酶酶切及EcoR I和BamH I双酶酶切,电泳显示均能切下与预期大小相符的片段。结论：本研究成功构建了pSecTag2／B-OPG分泌表达穿梭载体。     

骨保护素基因修饰的Cos-7细胞系的培养与鉴定

目的:构建pSecTag opg真核分泌表达穿梭载体,培养经opg基因修饰的Cos 7细胞系并检测其表达能力,为基因工程技术治疗牙周病提供物质基础。方法:提取293细胞的总mRNA,设计和合成特异性引物,进行逆转录-聚合酶链反应(RT PCR),扩增出具有抑制破骨细胞功能的opg基因cDNA,并将其重组到载体中测序;用脂质体法将目的基因转染至Cos 7细胞,应用免疫组织化学和Westernblot方法证实转染的细胞表达OPG。结果:重组质粒pSecTag2 /B opg经PCR、HindIII单酶酶切及EcoRI和BamHI双酶酶切,电泳显示均能切下与预期大小相符的片段,经测序证实此基因与GenBank中[gi: 33878056]提供的序列完全一致;经免疫组织化学和Westernblot方法检测,在转染opg基因的Cos 7细胞中有OPG表达。结论:成功构建了pSecTag2 /B opg分泌表达穿梭载体,并培养出高分泌表达OPG的Cos 7细胞系。     

碱性成纤维细胞生长因子与骨再生修复

骨组织的再生修复一直是多年来的研究热点之一，而生长因子因其能够促进组织细胞的生长和分化也已引起了广泛的关注。骨组织工程学的发展把生长因子作为重要激活物与种子细胞、支架材料、立体培养等联系在一起，成为构建骨组织再生修复必不可少的要素。碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)是主要的生长因子之一，但由于其促进成骨与毛细血管生成的双重作用，使其在促进骨再生修复方面的前景日益受到人们的重视。另外，它还可通过细胞因子网络发挥广泛的生物学作用。现就bFGF在骨组织再生修复过程中的作用及机制，及其在细胞因子网络中与其他因子的相互作用作一综述。     

碱性成纤维细胞生长因子和异种脱钙骨复合移植的实验研究

目的:研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与异种脱钙骨复合修复骨缺损时的成骨效果和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达水平及其相互关系,并初步探讨bFGF的骨修复机制。方法:在33只成年新西兰兔双侧下颌骨下缘形成15mm×5mm全层骨膜骨质缺损,分别植入复合骨、单纯异种脱钙骨和自体下颌骨块,并空置缺损作为空白对照。术后4w取材作组织学检查,采用图像分析软件量化计算成骨量和VEGF蛋白表达水平并分析其相互关系。结果:bFGF对于VEGF的表达与其诱导成骨作用一样存在双相剂量效应,VEGF表达和新骨形成呈密切关系。结论:bFGF是通过上调VEGF的表达以促进血管化来实现增强异种脱钙骨愈合的。     

骨痂中碱性成纤维细胞生长因子的免疫组化定位

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子在人颌面部骨折愈合过程中的表达及量的变化。方法：于颌面部骨折的患者行切开复位内固定术时，取骨断端间骨痂，利用ＡＢＣ免疫组织化学方法检测了骨折后不同时间碱性成纤维细胞生长因子在骨痂组织中的分布。结果：在骨折修复初期的骨痂中，新生骨基质、未分化间充质细胞、成骨细胞、幼稚的软骨细胞、骨细胞及血管内皮细胞的免疫组化染色均为强阳性。随着骨化的进行及软骨的成熟，成熟钙化的骨基质、处于分化末期的肥大的软骨细胞染色为阴性，成骨细胞、骨细胞及血管内皮细胞仍有部分呈阳性反应，但阳性着色的细胞数及阳性反应程度均较前明显下降。结论：碱性成纤维细胞生长因子参与了人颌面部骨折修复的全过程，在骨折愈合中发挥着重要的作用。     

水蛭素对牙龈成纤维细胞碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β1表达的影响

目的 观察水蛭素对人牙龈成纤维细胞（HGFs）碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达变化的规律,探讨水蛭素影响牙龈改建的可能作用机制。方法 体外培养并鉴定HGFs,利用不同浓度的水蛭素分别作用于正常（对照组）和受长期机械外力作用后增生的HGFs（实验组）,通过实时定量聚合酶链反应法和免疫细胞化学法检测TGF-β1及bFGF的表达。结果 未加入水蛭素时,受长期机械外力作用后,实验组促进HGFs增殖胶原合成的TGF-β1表达升高,而抑制胶原合成的bFGF表达降低（P<0.05）。加入水蛭素干预增生的HGFs后,可正向调节bFGF表达,而负向调节TGF-β1的表达（P<0.05）。结论 外力作用干扰了HGFs胶原合成与降解之间的平衡,水蛭素可能通过调节这一平衡而促进牙龈改建过程。     

骨形成蛋白—2和碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的联合效应

目的了解重组人骨形成蛋白-2（rhBMP-2）和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单独和联合作用对人牙周膜细胞（PDLC）碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法体外培养人PDLC,分别用不同浓度的rhBMP-2和bFGF单独或联合作用,用酶动力学方法检测PDLC的ALP活性。结果50～200μg/L浓度的rhBMP-2可显著增强人PDLC的ALP活性（P<0.01）,而10μg/L浓度的bFGF可显著抑制人PDLC的ALP活性(P<0.01),rhBMP-2和bFGF联合作用仍可较明显地增强人PDLC的ALP活性（P<0.05）。结论rhBMP-2和bFGF联合应用可增强人PDLC的ALP活性。     

骨形态发生蛋白-2与碱性成纤维细胞生长因子在异位和原位成骨中的作用

目的通过骨髓基质细胞（BMSCs）的体外增殖和分化、异位成骨和原位成骨实验来观察骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在成骨过程中的作用。方法分别用含BMP-2、bFGF和BMP-2+bFGF的培养液体外培养Beagle犬的BMSCs,通过甲基噻唑基四唑（MTT）比色法测定细胞增殖水平,通过测定碱性磷酸酶（ALP）活性观察细胞的分化情况。将BMSCs与多孔磷酸钙（CPC）分别在含BMP-2、bFGF和BMP-2+bFGF的培养液中复合培养,制成复合材料,一部分植入裸鼠皮下,观察异位成骨情况,另一部分植入Beagle犬的种植体周围骨缺损区,经过荧光标记观察原位成骨情况。结果含有BMP-2+bFGF的培养液促进BMSCs增殖和分化的能力最强。异位成骨情况：BMP-2+bFGF组的成骨量较其他组明显增加,其新骨形成百分比为48.79%±11.31%,高于单一BMP-2组（30.71%±10.85%）和bFGF组（27.33%±9.67%）以及对照组（10.65%±6.05%）。原位成骨术后12周,BMP-2+bFGF组的矿化沉积率高于其他组,其差异有统计学意义（P<0.01）。结论在促进成骨方面,BMP-2和bFGF共同作用优于单一因子。     

转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的观察转化生长因子．晶和碱性成纤维细胞生长因子单独或联合应用对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用组织块培养技术进行人牙周膜成纤维细胞的体外培养，对照组采用含小牛血清的DMEM培养液，实验组分别在培养液中加入不同浓度的转化生长因子-β1或碱性成纤维细胞生长因子或两者联合加入，通过四唑盐比色法观察细胞增殖情况。结果转化生长因子-β1或碱性成纤维细胞生长因子单独作用后，人牙周膜成纤维细胞较对照组有显著的增殖，而两者联合作用后的增殖较各自单独作用时明显（P〈0．05）。结论转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子两者联合具有促进人牙周膜成纤维细胞增殖的作用。     

成纤维细胞生长因子诱导骨形成研究进展

文章综述了成纤维细胞生长因子(FGF)的结构、分布和释放特征,及其在骨组织再生修复过程中的生物学行为,认为FGF一方面能够通过跨膜受体的介导作用,促进软骨细胞和成骨细胞的有丝分裂,另一方面也能够通过刺激其它生长因子的分泌,共同发挥诱导成骨作用;在进一步阐明FGF诱导成骨机制的基础上,展望开发FGF缓释载体系统的应用前景。     

雌激素与机械张应力对碱性成纤维细胞生长因子的影响

目的研究雌激素与机械张应力共同作用对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)增殖分化相关因子碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)mRNA表达水平的影响。方法体外培养HPDLF,分为两组。实验组使用10-7mol/L雌激素干预后,使用4点弯曲加力装置对HP-DLF进行张应力加载;对照组不使用雌激素干预,只进行机械张应力加载。采用实时多聚酶链反应、琼脂糖凝胶电泳和紫外线分析检测HPDLF加力时3、6、12 h时bFGF基因的表达。结果加力0、3、6、12 h时,对照组bF-GFmRNA表达量光密度值分别为1.000,3.245±0.261,4.498±0.431,7.969±0.597,实验组bFGFmRNA表达量光密度值分别为16.736±1.003,22.542±1.768,27.923±1.914,31.556±2.142。雌激素干预与张应力加载共同作用与单纯受到机械张应力作用相比,bFGF的mRNA表达量明显上调(P<0.05)。结论雌激素对机械张应力状态下的牙周膜成纤维细胞增殖分化相关因子bFGF有较强调控作用,表现为bFGF的mRNA表达量显著上升。     

引导组织再生治疗术及碱性成纤维细胞生长因子促进牙周组织再生的实验研究

目的 了解引导组织再生治疗术(GTR)及碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)是否能够促进犬Ⅱ度根分叉病变牙周组织的再生。方法 将六只杂种犬的下颌双侧第二、三、四前磨牙制备慢性Ⅱ度根分叉病变模型后。随机分成两组，每组三只动物。每组中一只动物一侧进行GTR治疗，另一侧只进行翻瓣术治疗；另一只双侧都进行GTR b-FGF治疗；剩下的一只一侧进行GTR治疗，另一侧进行GTR b-FGF治疗。分别于术后第6、8周进行形态学和组织学观察。结果与翻瓣术组对比，GTR组和GTR b-FGF组都有明显的牙周组织再生；而GTR组和GTR b-FGF组之间牙周组织再生的量没有明显的差别。结论 GTR能够促进犬Ⅱ度根分叉病变牙周组织的再生，但单纯应用喷洒法使用b-FGF于牙周组织再生术中难以发挥其应有的疗效。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞表皮生长因子受体基因表达的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜细胞（PDLC）表达表皮生长因子受体（EGFR）的影响,探讨bFGF在牙周组织分化再生中的意义。方法体外原代培养人PDLC,有限稀释法形成单细胞克隆,用外源性bFGF刺激单细胞克隆,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测克隆细胞内EGFR基因表达的变化。结果bFGF促进人PDLC内EGFR mRNA的合成,并且随着质量浓度的增加促进作用增强。结论bFGF对EGFR的促进作用很可能是牙周炎损伤修复过程中一个重要的调节因素,为牙周组织分化再生提供部分理论基础。     

表皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓干细胞分化的影响

目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响。方法确定EGF与bFGF最大效应浓度后,对细胞分组,根据EGF和bFGF单独或联合应用,分为4组:EGF组、bFGF组、EGF联合bFGF组、不加任何生长因子的对照组。作用1、3、5、7、14 d后,采用ALP活性检测法(酶动力法)检测hDPSCs细胞ALP活性。结果 1～14 d bFGF组ALP活性与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);在5、7、14 d,EGF组和EGF联合bFGF组ALP活性显著高于对照组(P<0.05);EGF联合bFGF组的ALP活性明显高于bFGF组(P<0.05),但EGF联合bFGF组ALP活性与EGF组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 bFGF单独应用不能诱导hDPSCs分化,EGF在hDPSCs的分化中发挥作用,EGF和bFGF无明显协同作用。     

碱性成纤维细胞生长因子在人牙胚生长发育中的作用

目的 :研究碱性成纤维细胞生长因子在人牙胚生长发育中的作用。方法 :选择胎龄分别为 7、8、10、14周自愿终止妊娠的新鲜人胚胎各 4例 ,制作牙胚切片 ,将蕾状期、帽状期和钟状期牙胚切片 ,做免疫组化检测。结果 :bFGF在蕾状期上皮细胞强染 ,外胚间充质细胞少量弱染色 ;帽状期 ,bFGF在上皮细胞呈整体弱染色 ,牙乳头细胞染色更弱 ;钟状期 ,bFGF在内釉细胞呈强染色 ,牙乳头近切缘的外层细胞亦呈阳性染色 ,星网状层少量细胞弱染色。结论 :bFGF对人牙胚上皮细胞的增殖和分化起着促进作用 ;在人牙胚的钟状期 ,bFGF在促进内釉上皮细胞向成釉细胞转化以及牙乳头细胞向成牙本质细胞转化中起重要作用 ,促进牙胚发育成熟     

bFGF真核表达载体的构建及骨髓基质细胞转染

目的：探讨bFGF基因转染骨髓基质干细胞的方法及可行性。方法：构建bFGF基因真核表达质粒,用脂质体法介导转染骨髓基质细胞,通过免疫组织化学、RT-PCR及Western blot方法检测bFGF基因转染骨髓基质细胞的成功性。结果：bFGF基因成功转染大鼠骨髓基质细胞,并能持续稳定地分泌bFGF蛋白。结论：bFGF基因可以转染骨髓基质细胞,并能在骨髓基质细胞内稳定表达。     

Immunohistochemical localization of fibroblast growth factor-1 (FGF-1), FGF-2 and fibroblast growth factor receptor-1 (FGfR-1) in pleomorphic adenoma of the salivary glands

Fibroblast growth faclor-1 (FGF-l) and FGF-2 are heparin-binding polypeplides that are potent mitogens for neoplastic cells. In this study, fibroblast growth factor-1 (FGF-l), FGF-2, and fibroblast growth factor receptor-1 (FGfR-1) were immunohistochemically analyzed in 10 patients with pleomorphic adenoma of the salivary gland by using specific monoclonal antibodies. The tumor tissues were histopathologically classified as: tubular, solid, myxoid or chondroid. Both FGF-1 and FGF-2 were immunohistochemically identified in the tumor cells of all histological types. In addition, immunoreactive FGF-2 was also found in the basement membrane of tubular type tumor cells. Conversely. FGfR-1-positive tumor cells were essentially confined to the tubular and solid areas of tumors. Tumor cells in the myxoid and chondroid areas were FGfR-1 immunonegative. These results suggest that the co-expression of FGF and its receptor appears to be related to the proliferative activity of tumor cells in the tubular and solid areas, whereas loss of FGF receptor expression may be associated with the differentiation of tumor cells into myxoid and chondroid tissue types.     

MC、bFGF在皮肤血管瘤中的表达及意义

目的 :研究皮肤血管瘤中肥大细胞 (MC)、碱性成纤维细胞生长因子 (BasicFibroblastGrowthbFGF)之间的关系 ,以及它们在血管瘤形成中的作用。方法 :颌面部血管瘤标本 68例 ,按Mulliken[1] 分类法将血管瘤病程分为三期 :增殖期 3 2例、退化期 2 4例、退化完成期 12例。选取 5例唇裂患者的唇部皮肤做正常对照。将每个标本连续切片 4张 ,分别行HE染色和免疫组织化学染色 ,并计算肥大细胞数和bFGF阳性率。结果 :①肥大细胞的胞浆内抗胰蛋白酶抗体显色为棕褐色 ,胞核为蓝色 ,多位于小血管管壁及其周围。各期血管瘤中肥大细胞计数分别为 :增殖期 2 1.3± 3 .0SD/HPF ,退化期 8.4± 2 .6SD/HPF ,退化完成期 3 .2± 2 .0SD/HPF。正常皮肤组织中肥大细胞计数 3 .1± 1.3SD/HPF。增殖期与退化期、退化完成相比有高度显著性差异 (P <0 .0 1)。②血管瘤中bFGF位于肥大细胞内或胞外基质中 ,增殖期bFGF染色深 ,棕褐色 ,呈阳性连续片状分布。退化期呈不连续片状分布、染色浅。退化完成期染色更浅 ,呈点状分布 ,阳性反应物少。增殖期bFGF阳性表达率 93 .75 % ,退化期 5 4.16% ,退化完成期 3 3 .3 3 %。增殖期bFGF明显高于退化期、退化完成期 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 )。正常对照组中bFGF无表达。③bFGF与MC计数表达呈正     

Regeneration of periodontal tissues by basic fibroblast growth factor

Several growth factors (or cytokines) have recently received attention because of their ability to actively regulate various cellular functions of periodontal ligament (PDL) cells and the effects of topical application of such factor(s) on periodontal tissue regeneration has been evaluated. In this study, we examined the role of basic fibroblast growth factor (bFGF) in the wound healing and regeneration of periodontal tissues. Alveolar bone defects (such as 2-wall, 3-wall and furcation class II bone defects) were created surgically in beagle dogs and primates. Recombinant bFGF was topically applied to the artificial bony defects. Six or 8 wk after application, the periodontal regeneration was morphologically and histomorphometrically analyzed. In all sites where bFGF was applied, significant periodontal ligament formation with new cementum deposits and new bone formation was observed in amounts greater than in the control sites. We found it noteworthy that no instances of epithelial down growth, ankylosis or root resorption were observed in the bFGF sites. In vitro studies demonstrated that bFGF enhances the proliferative responses of human PDL cells, which express FGF receptor-1 and -2, but inhibits the induction of alkaline phosphatase activity and mineralized nodule formation by PDL cells. Interestingly, we observed that the mRNA level of laminin in PDL cells, which plays an important role in angiogenesis, was specifically upregulated by bFGF stimulation, but that of type I collagen was downregulated. The present study demonstrates that bFGF can be applied as one of the therapeutic modalities which actively induce periodontal tissue regeneration. The results of in vitro studies suggest that by suppressing the cytodifferentiation of PDL cells into mineralized tissue forming cells, bFGF may play important roles in wound healing by promoting angiogenesis and inducing the growth of immature PDL cells, and may in turn accelerate periodontal regeneration.     

成纤维细胞生长因子3基因多态性与非综合征型唇腭裂的相关性研究

目的探讨成纤维细胞生长因子3（FGF3）基因rs4980700、rs4631909单核苷酸多态性（SNP）与非综合征型唇腭裂（NSOC）的相关性。方法收集186例非综合征型唇腭裂患者,患者父亲183例,母亲174例,核心家系172个;200例正常新生儿为对照组。采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测FGF3基因rs4980700与rs4631909多态位点基因型,并进行病例对照分析,传递不平衡检验（TDT）和以家系为基础的相关性分析（FBAT）。结果病例组rs4980700多态位点基因型和等位基因频率与对照组比较存在统计学差异（P<0.05）;病例组rs4631909多态位点基因型和等位基因频率与对照组比较存在统计学差异（P<0.05）,而在腭裂组则无统计学差异（P=0.49）。传递不平衡研究发现,FGF3基因rs4980700位点的G等位基因与rs4631909位点的C等位基因在本研究人群非综合征型唇腭裂患者中存在过传递（P<0.05）。FBAT分析rs4980700、rs4631909多态位点与本研究人群非综合征型 唇腭裂存在相关性（P<0.05）。结论FGF3基因rs4980700、rs4631909多态位点与非综合征型唇腭裂存在相关性。