白细胞介素-24及白细胞介素-12基因治疗小鼠黑色素瘤实验研究

[目的]研究重组质粒pEGFP-N1-白细胞介素(IL)-24基因及pGEG-IL-12基因单独应用与联合应用对小鼠黑色素瘤移植瘤的抑制作用及其机制.[方法]制备黑色素瘤B16细胞荷瘤小鼠模型,并随机分为5个组,分别向瘤体内注射给予脂质体包裹的基因重组质粒pEGFP-N1-IL-24(IL-24组),pEGFP-N1-IL-24和pGEG-IL-12(联合应用组),pGEG-IL-12(IL-12组),pEGFP-N1(空质粒组)及PBS(PBS组).每次给药前测量小鼠背部肿瘤的长径和短径,绘制肿瘤生长曲线.采用HE染色法观察各组肿瘤组织形态;RT-PCR法检测移植瘤组织中IL-24,IL-12,Bax,Bcl-2,VEGF,caspase-3及caspase-12mRNA的表达;Western Blot检测移植瘤组织中Bax,Bcl-2,VEGF,caspase-3及caspase-12蛋白的表达.[结果]肿瘤生长曲线观察结果表明,IL-24组、IL-12组及联合应用组肿瘤体积均明显小于空质粒组和PBS组(P<0.05),联合应用组肿瘤体积最小(P<0.05).HE染色结果显示,空质粒组多数细胞生长差,形态不规则,细胞皱缩,结构稀疏,细胞核溶解、变形,细胞成片坏死.RT-PCR检测结果表明,IL-24组和IL-12组分别有IL-24和IL-12基因mRNA表达,联合应用组同时有IL-24和IL-12基因mRNA表达,而空质粒组和PBS组均未见表达;IL-24组、IL-12组及联合应用组Bax基因mRNA表达水平均明显高于空质粒组和PBS组(P<0.05),联合应用组Bax基因mRNA的表达水平最高,而Bcl-2和VEGF基因mRNA的表达水平则显著降低(P<0.05).Western Blot检测结果表明,IL-24组、IL-12组及联合应用组Bax,caspase-3,caspase-12蛋白的表达水平均明显高于空质粒组和PBS组(P<0.05),联合应用组中Bax,caspase-3,caspase-12蛋白的表达水平最高,而Bcl-2和VEGF蛋白的表达水平则显著降低(P<0.05).[结论]IL-24和IL-12对荷瘤小鼠有治疗作用,二者联合应用治疗效果更强.     

IL-24对小鼠黑色素瘤B16细胞的抑制作用

[目的]研究携带IL-24基因的真核表达质粒对小鼠黑色素瘤B16细胞的凋亡和体外增殖的影响.[方法]采用重组DNA技术构建含有IL-24基因的真核表达质粒pEGFP-N1-IL-24,用脂质体法将pEGFP-N1-IL-24转染B16细胞,用荧光显微镜观察其表达,在生物显微镜下观察细胞的形态学变化,用吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）法检测细胞凋亡,用MTT比色法检测B16细胞的体外增殖能力.[结果]荧光显微镜下观察到pEGFP-N1-IL-24可在B16细胞中表达;生物显微镜下显示转染IL-24基因的B16细胞皱缩、成团;AO/EB法检测显示转染IL-24的B16细胞核染色质着橘黄色或橙红色,并呈固缩状;MTT比色法显示IL-24明显抑制B16细胞的生长,与对照组相比较差异有统计学意义（P〈0.05）.[结论]外源性IL-24基因在体外对小鼠黑色素瘤B16细胞有显著的诱导凋亡和抑制增殖的作用.     

白细胞介素-24的研究进展

白细胞介素24(IL24)又称黑色素瘤分化相关基因7(mda7),其基因由7个外显子和6个内含子组成,定位于染色体1q32。IL24主要表达于脾、胸腺、外周血白细胞、单核细胞等免疫组织。IL24的受体为两对异二聚体:IL22R1IL20R2、IL20R1IL20R2。IL24具有抗肿瘤和免疫调节作用,既能抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制血管形成,又可刺激白细胞分泌细胞因子。因此,进一步研究IL24抑制肿瘤生长的机制及其生物学作用具有重要的理论和临床意义。     

白细胞介素12基因转染抑制B16细胞成瘤性及转移性的研究

目的探讨白细胞介素１２（ＩＬ１２）基因转移对弱免疫原性的小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞生长与转移的影响。方法构建小鼠ＩＬ１２两个亚单位ｐ４０、ｐ３５ｃＤＮＡ表达载体;经脂质体ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮ介导,将两真核表达载体同时导入Ｂ１６细胞;应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测ｐ４０、ｐ３５ｍＲＮＡ表达;用生物学活性检测法（致分裂激活的活化的小鼠脾细胞增殖）检测ＩＬ１２分泌;经皮下或静脉接种肿瘤细胞,检测其体内成瘤性及转移性。结果ＩＬ１２基因转染的Ｂ１６细胞（Ｂ１６ＴＩＬ１２）能够表达ｐ４０及ｐ３５ｍＲＮＡ,分泌有生物活性的ＩＬ１２;Ｂ１６ＴＩＬ１２细胞体内成瘤性降低,成瘤延迟,肿瘤生长慢,荷瘤小鼠存活期延长（Ｐ＜００１）;肺转移率降低,肺内转移灶明显减少（Ｐ＜００１）。结论ＩＬ１２基因转染可明显抑制肿瘤生长与转移     

pEGFP-IL-24对B16F0细胞抑制效应的实验研究

目的:构建IL-24真核表达质粒,研究其体内外表达对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:用重组DNA技术构建IL-24真核表达质粒pEGFP-IL-24。用脂质体法将重组质粒及空载体体外转染B16F0细胞后,经激光扫描共聚焦显微镜观察其表达,用MTT法检测B16F0细胞的体外增殖能力。用小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤生长的抑制。结果:pEGFP-IL-24转染B16F0细胞后,LSM可观察到其表达。IL-24基因转染的B16F0细胞体外增殖能力明显受到抑制。转染IL-24的B16F0细胞体内致瘤率降低。结论:IL-24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。IL-24基因转染的肿瘤细胞体内生长能力显著降低。     

白细胞介素-2基因转染人骨肉瘤细胞的体外生物学特性

目的 研究白细胞介素－２基因转染人骨肉瘤细胞体外生物学特性,方法：应用逆转录病毒载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ将人的ＩＬ－２ｃＤＮＡ插入人骨肉效率细胞,经Ｇ４１８筛选及ＰＣＲ分析获得阳性细胞,并测定其上清液中ＩＬ－２含量,结果：ＰＣＲ可从阳性细胞基因组中扩增出ＩＬ－２基因片段,并从其上清液中测得每２４ｈ１０＾５细胞ＩＬ－２活性为５０Ｕ－８００Ｕ。结论 逆转录病毒介导的ＩＬ－２ｃＤＮＡ可以在人骨肉瘤细胞系中获     

白细胞介素2基因瘤苗治疗泌尿系肿瘤

白细胞介素２基因瘤苗治疗泌尿系肿瘤辛军综述王晓雄审校关键词肿瘤疫苗；基因治疗；白细胞介素２；泌尿系肿瘤；综述中国图书资料分类法分类号Ｒ３９２．１１肿瘤生物治疗作为除手术、放疗及化疗之外的第四种治疗模式取得了可喜的成绩，其中白细胞介素２（ＩＬ－２）占有...     

黑素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24抑制肺癌细胞增殖

目的：探讨黑素瘤分化相关基因-7／白细胞介素-24（mda-7／IL-24）对非小细胞肺癌细胞系H460增殖的影响。方法：将mda-7／IL-24插入真核表达载体pcDNA3中，构建重组表达载体pcDNA3-mda-7／IL-24。按照DNA和脂质体（Lipofectamine）的不同比例，将重组表达载体瞬时转染H460细胞，用RT—PCR检测mda-7／IL-24在不同转染条件下的表达，用MTT法检测转染重组表达载体后对H460细胞增殖的影响。结果：成功构建了mda-7／IL-24的重组表达载体，用SP6引物和mda-7／IL-24上游引物进行RT—PCR分析，在DNA和Lipofectamine的比例为1μg：2μl—1μg：4μl时有目的基因表达。按照1μg：2μl的比例瞬时转染重组表达质粒72h后进行MTT分析，结果表明，与未转染细胞和转染空质粒细胞相比，重组质粒pcDNA3-mda-7／IL-24对肺癌细胞H460的增殖有明显抑制作用，抑制率为18．4％。结论：mda-7／IL-24对非小细胞肺癌细胞系H460增殖具有明显的抑制作用。     

白细胞介素24及其抗肿瘤作用

白细胞介素24(IL-24)又称黑素瘤分化相关基因7(melanoma differentiation associated gene-7,MDA-7)主要表达于脾、胸腺、外周血白细胞、单核细胞等免疫组织和分化的黑素细胞．其他组织细胞可被诱导表达。IL-24受体有2种(IL-22R1／IL-20R2和IL-20R1／IL-20R2)。IL-24可诱导人外周血单个核细胞产生高水平IL-6、TNF—α和IFN-γ以及少量IL-1β、IL-12和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)。将携IL-24基因的腺病毒质粒(Ad—IL-24)转染细胞后能抑制多种肿瘤细胞的增殖并诱导细胞凋亡,但对正常细胞无影响。IL-24的这些作用与其诱导凋亡相关因子(BAX／Bcl-2,BAK／Bcl-2)的比例变化、上调p38-MAPK及可被生长停滞和DNA损伤诱导的基因家族产物增加有关。提示IL-24有治疗肿瘤的临床价值,基于Ad—IL-24基因治疗的临床试验已经开始。现就IL-24及其抗肿瘤作用的现状和发展作一综述。     

白细胞介素-28和白细胞介素-29的研究进展

白细胞介素-28(IL-28A、IL-28B)和白细胞介素-29(IL-29)是一组由病毒或双链RNA诱导的多种细胞产生的新型白细胞介素，它们能结合一种由IL-10RB和IL-28Rα组成的异二聚体型Ⅱ类细胞因子受体，通过Jak-STAT信号通路而发挥其抗病毒或其他防御功能。作者就IL-28与IL-29的分子结构、编码蛋白、受体与生物学活性等作一综述。     

IL-12联合B7-1基因放射治疗对小鼠B16移植肿瘤生长的影响

目的：探讨基因联合放疗对小鼠B16移植肿瘤的抑制作用。方法：碱裂解法提取纯化质粒DNA，微量注射法直接将质粒DNA导入体内肿瘤；建立荷瘤小鼠模型, 于小鼠右后肢皮下接种5×10⁵个B16黑色素瘤细胞，待肿瘤直径达0.3~0.5 cm时开始治疗；肿瘤局部注射pNE-mIL-12和pcDNA-B7-1质粒3次，并给予3次X线照射，观察小鼠移植肿瘤的生长情况。结果：pNE-mIL-12重组质粒与pcDNA-B7-1质粒联合2 Gy放射治疗组肿瘤生长速率最低，小鼠生存时间明显延长（P<0.01~P<0.001），末次照射后31 d小鼠死亡率仅为22.2%，而且其中有1只小鼠肿瘤消退。结论：多基因联合放疗可有效抑制小鼠B16移植肿瘤的生长，其效果好于单基因治疗和单纯放疗。     

Macrophage activation of lymphoma-bearing mice by liposome-mediated intraperitoneal IL-2 and IL-6 gene therapy

Objective To investigate the antitumor mechanism of interleukin-2 (IL-2) and interleukin-6 (IL-6) gene therapy. Methods Liposome encapsulated IL-2 DNA and IL-6 DNA were intraperitoneally (i.p.) injected into mouse lymphoma cell line (EL-4) lymphoma-bearing mice. Macrophage function (MФ) from the mice was assessed. Results Cytotoxicity, major histocompatibility (MHC) Ⅱ expression and IL-1 and TNF secretion of the macrophages all augmented after i.p. injection of liposome encapsulated IL-2 DNA or IL-6 DNA. More efficient activation of macrophages was observed in mice treated with liposome encapsulated IL-2 DNA than IL-6 DNA. IL-2 gene therapy combined with IL-6 gene therapy showed the maximal activation of macrophages in the lymphoma-bearing mice.Conclusion IL-2 and IL-6 gene therapy can relieve the supression of macrophages of the lymphoma-bearing mice, and efficiently activate the antitumor immune responses.     

重组人内皮抑素腺病毒对裸鼠胰腺癌移植瘤的抑制作用

目的 探讨重组人内皮抑素腺病毒(Ad-endo)对人胰腺癌移植瘤生长的影响.方法 人胰腺癌Capan-2细胞经Ad-endo感染后,PT-PCR方法检测人内皮抑索基因的表达.收集Ad-endo感染Capan-2细胞的条件培养液,观察其对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)体外增殖的影响.建立人胰腺癌Capan-2细胞移植瘤模型,观察Ad-endo对胰腺癌移植瘤生长的抑制作用,分析肿瘤内微血管密度的变化情况.结果 RT-PCR方法检测到人内皮抑素基因在Capan-2细胞的表达,Ad-endo感染Capan-2细胞的条件培养液能明显抑制HUVEC的增殖.Ad-endo显著减缓了人胰腺癌Capan-2细胞移植瘤生长(P<0.05),同时也明显减少了肿瘤组织微血管密度(P<0,05).结论 腺病毒介导的人内皮抑素基因能明显抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长与血管生成.     

含鼠GM-CSF基因的腺病毒载体对荷B16黑色素瘤小鼠免疫功能的影响

目的：研究含鼠GM-CSF基因的腺病毒载体（AdCMVGM-CSF）直接注射荷B16黑色素瘤小鼠瘤体内对小鼠免疫功能的影响。 方法：将B16黑色素瘤细胞（5×10⁶/只）接种于C57/BL6小鼠右侧背部皮下后,将荷瘤小 鼠随机分为2组,每组12只,待瘤体直径达5 mm时分别注射AdCMVGM-CSF、AdCMVLacZ （5×10⁸ PFU/只）,检测每组小鼠的免疫功能及其对B16黑色素瘤的抑制作用。 结果：AdCMVGM-CSF实验组小鼠注射后第10天,荷瘤鼠血清中GM-CSF水平［(1 563.72±136.58)ng·L^-1］高于对照组（P<0.01）,肿瘤组织周围的CD8＋ T细胞表达明显增强。 结论：AdCMVGM-CSF可增强荷B16黑色素瘤小鼠的抗肿瘤免疫反应,具有抑制肿瘤生长的作用。     

白细胞介素-12基因治疗肿瘤及抑制肝转移

[目的]探讨经静脉转染表达mIL-12的DNA质粒在肿瘤的治疗及抑制肝转移中的作用.[方法]经皮下和腹腔接种M5076细胞建立荷瘤模型,用水流动力学方法将mIL-12基因转染荷瘤C57BL/6小鼠,观察实验组与对照组的生存率及肿瘤转移灶数目,用ELISA法检测血清中细胞因子水平,用小鼠脾细胞的细胞毒性实验评价CTL和NK细胞活性.[结果]转染pGEG.mIL-12小鼠血清中白细胞介素-12(IL-12)及IFN-γ水平明显升高.经皮下接种肿瘤细胞建立荷瘤模型的转染pGEG.mIL-12小鼠组抑制肿瘤细胞作用、抑制肿瘤细胞肝转移和生存时间与对照组相比较差异均有统计学意义.经腹腔接种肿瘤细胞建立荷瘤模型转染pGEG.mIL-12小鼠组与对照组相比较明显抑制腹腔内肿瘤播散,延长生存时间,差异有统计学意义.M5076细胞对转染pGEG.mIL-12小鼠脾细胞的CTL和NK细胞破瘤细胞活性均不敏感.[结论]用水流动力学方法转染小鼠细胞因子基因产生的高水平IL-12对CTL不敏感的M5076肿瘤有治疗和抑制肝转移的作用.     

IL-24基因联合电离辐射对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的：探讨人白细胞介素24（IL-24）基因联合X射线对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响，为IL-24基因联合电离辐射治疗肿瘤奠定实验基础。方法：检测电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为假照射组及2、4、6、8、12和18 Gy X射线照射组；检测IL-24目的基因的表达分为对照组（0.01 mol•L^-1PBS）、空载体组［pcDNA3.1(+)载体］和IL-24基因组；检测IL-24基因联合电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组（6 Gy）、空载体联合照射组以及IL-24基因联合照射组。碱裂解法提取纯化质粒DNA，用PEI转染质粒DNA至PC-3细胞中，目的基因表达的检测采用RT-PCR法。Annexin V-FITC和PI双染后，采用流式细胞术（FCM）检测肿瘤细胞凋亡的变化。结果：与假照组比较，2和4 Gy X射线照射48 h后PC-3细胞凋亡百分率无明显变化，6 Gy X射线照射后细胞凋亡百分率开始明显升高（P<0.01），且细胞凋亡百分率随剂量增大而增加，约是假照组的1.6～3.0 倍。PC-3细胞中对照组和空载体组均未观察到IL-24基因的表达，而IL-24基因组则可见IL-24基因的表达；以上3组均有GAPDH基因的表达。IL-24基因联合照射组与对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组和空载体联合照射组比较，早期凋亡细胞数均有上升趋势，除单纯照射组外，与其他组比较差异均有显著性（P<0.05）；晚期凋亡和坏死细胞数也均有上升趋势，其中与对照组、单纯照射组和空载体联合照射组比较显著升高（P<0.05或P<0.001）；凋亡和坏死的总细胞数均有上升趋势，除IL-24基因组外，与其他组比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。结论：IL-24基因联合电离辐射能够有效诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡。      

人IL-24基因重组腺病毒的构建及其在A549细胞中的表达

目的构建含有人IL-24基因的重组腺病毒载体,并转染肺腺癌细胞A549细胞观察其感染能力,为进一步的基因治疗奠定实验基础.方法采用基因工程技术将人IL-24基因cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,采用PAdEasy系统进行细菌内同源重组,后通过脂质体将正确重组体包裹并转染293T细胞以包装并扩增病毒.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定, 利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检定;最后采用免疫组化法对IL-24在A549中的表达进行检测.结果酶切和PCR结果证实IL-24基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达1.2×1010 pfu/ml,能够成功转染A549细胞并在其中进行表达.结论成功构建了有较强感染能力的含人IL-24基因的重组腺病毒载体.     

IL-2和IL-12的单/联合基因治疗对肝癌大鼠体内IL基因表达和T细胞亚群的影响

目的:探讨大鼠诱发性肝癌模型中脾内直接注射IL-2和(或)IL-12基因对血清IL-2和IL-12,以及T细胞活性的影响.方法:全部肝癌大鼠(以二乙基亚硝胺诱发制备)48只分为4组(空载对照组、IL-2单基因治疗组、IL-12单基因治疗组、IL-2/IL-12联合基因治疗组),构建携带IL-2和(或)IL-12基因的逆转录病毒载体及其包装细胞,含IL-2和(或)IL-12基因的包装细胞于不同时间对诱发性肝癌大鼠进行脾内注射转染细胞,比较大鼠血清IL-2和IL-12浓度、T细胞活性和毒性反应.结果: IL单基因治疗后血清IL-2或IL-12明显增高,IL-2/IL-12基因联合治疗组中血清IL较单基因组显著增高(P<0.01),病理示肝癌组织中淋巴细胞浸润明显增多.IL单基因治疗组T细胞活性较对照组显著增高,IL-2/IL-12基因联合组T细胞功能较IL单基因组增强,且持续时间长.结论: 脾内直接注射IL-2和(或)IL-12基因可增强T细胞活性,IL基因联合治疗优于IL单基因治疗.     

3腺病毒介导的LacZ基因在B16小鼠黑色素瘤细胞中的表达

目的　观察腺病毒介导的LacZ基因转移在B1 6细胞的转导效率。方法　腺病毒介导的LacZ基因转导B1 6细胞。结果　当MOI为 50～ 1 0 0 ,即可获得较高的转导效率 ,达 90 %± 1 %。结论　腺病毒介导的基因转移在B1 6细胞能获得较高的转导效率和目的基因的有效表达。提示腺病毒载体作为一种高效的基因转移载体 ,在肿瘤的基因治疗中有着良好的应用前景