葡萄膜黑色素瘤细胞相关差异表达蛋白的研究进展

葡萄膜黑色素瘤是成年人最常见的眼内恶性肿瘤,尚缺少有效的治疗方法.葡萄膜黑色素瘤细胞相关差异表达蛋白包括黑色素小体特异性蛋白MART-1、gp100、TYR系列,以及其他与正常组织差异表达蛋白如S100、NSE、NDP kinase、MITF等.这些差异表达的蛋白在葡萄膜黑色素瘤发生发展中具有不同的功能,并逐渐被应用于肿瘤的鉴别诊断和治疗中.     

比较蛋白质组学技术筛选葡萄膜黑色素瘤相关蛋白

目的 应用比较蛋白质组学技术,分析鉴定葡萄膜黑色素瘤与正常人葡萄膜差异蛋白质,筛选出葡萄膜黑色素瘤相关蛋白.设计实验性研究.研究对象手术中切除的人葡萄膜黑色素瘤标本4例以及正常人捐献眼葡萄膜标本4例.方法 研磨组织提取蛋白质后,应用双向凝胶电泳进行总蛋白分离,考马斯亮兰染色,Image Master 5.0软件分析蛋白胶图,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定部分差异蛋白质点,通过MASCOT软件在NCBI数据库中检索蛋白质信息.主要指标差异蛋白质.结果 建立了葡萄膜黑色素瘤和正常人葡萄膜组织的双向凝胶电泳图谱,鉴定了葡萄膜黑色素瘤与正常人葡萄膜之间差异表达的蛋白质30种,其中24种蛋白只在葡萄膜黑色素瘤中出现.葡萄膜黑色素瘤中表达上调的蛋白5种,表达下调的蛋白1种.这些差异蛋白可能执行新陈代谢酶、信号转导调节、细胞骨架、免疫调节等生物学功能.结论 通过比较蛋白质组学初步筛选出与葡萄膜黑色素瘤发生演进相关的蛋白质.需要进一步验证蛋白的定位及功能.(眼科,2008,17:230-234)     

葡萄膜恶性黑色素瘤中血管内皮生长因子水平与肿瘤转移的关系

目的：分析葡萄膜恶性黑色素瘤患者血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平是否与葡萄膜恶性黑色素瘤的转移和预后有关。

方法：采用ELISA法检测葡萄膜恶性黑色素瘤患者和正常对照组中外周血VEGF水平,并采用RT-PCR和Western-blot检测葡萄膜恶性黑色素瘤患者肿瘤组织中VEGF mRNA和VEGF蛋白表达水平。对葡萄膜恶性黑色素瘤患者进行随访,用Kaplan-Meier法分析基线VEGF水平与患者术后转移的关系。

结果：葡萄膜恶性黑色素瘤患者外周血VEGF水平较健康者升高。就诊时肿瘤发生转移的患者VEGF mRNA和VEGF蛋白表达水平均较未发生转移的患者升高。在随访过程中,血清VEGF≥700pg/mL的患者,肿瘤发生转移的风险较高。

结论：葡萄膜恶性黑色素瘤患者中VEGF的表达水平与葡萄膜恶性黑色素瘤的转移密切相关。     

端粒酶在葡萄膜恶性黑色素瘤中的表达及意义

目的 检测端粒酶在人眼葡萄膜黑色素瘤中的表达,探讨其在葡萄膜黑色素瘤发病机制中的作用,为其临床治疗提供新的思路.方法 选取16例因患葡萄膜黑色素瘤而行眼球摘除术的患者,取其葡萄膜黑色素瘤组织,采用PCR-ELISA及PCR-PAGE检测其端粒酶的含量及表达.结果 16例患者中15例的端粒酶检测呈阳性表达,占93.8%.PCR-ELISA结果显示其活性绝大多数呈中度、高度表达,仅1例△A值＜0.15.电泳结果显示为多少不等的梯形条带,其中15例显示为4条以上.结论 葡萄膜黑色素瘤患者端粒酶活性明显增高,可能是肿瘤发生、发展的重要原因之一,抑制端粒酶活性有可能成为葡萄膜黑色素瘤的新型疗法之一.     

葡萄膜黑色素瘤动物模型的建立

葡萄膜黑色素瘤是成年人最常见的原发性眼内恶性肿瘤,在过去的数十年里,研究葡萄膜黑色素瘤所面对的主要挑战是建立合适的动物模型.最常见的葡萄膜黑色素瘤动物模型可分为动物的自发性肿瘤、诱发肿瘤和移植性肿瘤.开始应用人葡萄膜黑色素瘤细胞系和肿瘤组织碎片建立模型是原发的和转移的实验性动物模型的一大进步.葡萄膜黑色素瘤动物模型常被用于原发和转移葡萄膜黑色素瘤的预后因素及治疗手段等方面的研究.尽管动物模型与人类的疾病有一定差异,但它们确实为研究人葡萄膜黑色素瘤的发生、发展、转移预后及治疗手段等方面提供了有力的工具.本文对近年来葡萄膜黑色素瘤动物模型研究做一综述.     

miR-26a对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及机制研究

目的 分析miR26a在葡萄膜黑色素瘤中的表达及对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响.方法 对葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5、M23及正常葡萄膜上皮细胞系ARPE-19行RT-PCR实验,检测3种细胞系中miR-26a的相对表达差异;将葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5分成miR-26a模拟物组和NC组,分别转染miR-26a mimics和对照序列scramble,用CCK-8实验和流式细胞术分别检测两组细胞增殖和凋亡;采用细胞划痕实验及Transwell实验分别检测两组细胞的迁移和侵袭能力;采用Western blot检测其下游蛋白组蛋白甲基化转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)的表达水平.结果 葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5中miR-26a相对表达量为0.250±0.029,细胞系M23中为0.350±0.017,正常葡萄膜上皮细胞系ARPE-19中miR-26a相对表达量为1.0,在细胞系SP6.5及M23中miR-26a的相对表达量均低于正常葡萄膜上皮细胞系ARPE-19中miR-26a的相对表达量(均为P＜0.001).miR-26a模拟物组在培养72 h、96 h、120 h OD450值(0.69 ±0.09、1.23 ±0.15、2.12±0.23)均显著低于NC组(1.39±0.11、2.35 ±0.25、3.53±0.27),差异均有统计学意义(均为P＜0.05).miR-26a模拟物组细胞凋亡率(15.60±2.30)％高于NC组(5.00±0.70)％(P＜0.01);miR-26a模拟物组划痕愈合率(23.7±2.1)％低于NC组(68.9 ±5.1)％(P＜0.01);侵袭细胞数(45.1±3.9)个低于NC组(115.3±8.9)个(P＜0.O1).miR-26a模拟物组EZH2蛋白相对表达量(0.39±0.09)低于NC组(1.0;P＜0.01).结论 miR-26a在葡萄膜黑色素瘤中低表达,过表达miR-26a显著抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖,促进凋亡,并抑制迁移和侵袭,其可能是通过下调EZH2的表达来发挥作用的.     

细胞周期相关基因在葡萄膜黑色素瘤中的 表达与意义

目的探讨细胞周期相关基因与葡萄膜黑色素瘤病理分型及浸润能力的关系。方法采用免疫组化法定量检测96例葡萄膜黑色素瘤 标本中cyclinD1和Bcl-2蛋白的表达。结果Bcl-2在所有葡萄膜黑色素瘤中均有较高表达,与病理学分型及巩膜外浸润无关;cyclinD1的表达依梭型 、混合型、上皮型逐渐增高,与肿瘤的浸润能力呈正相关。结论bcl-2的表达对于葡萄膜黑色素瘤细胞的存活具有重要作用,cyclinD1可作为其恶性程度的评估指标。(中华眼底病杂志,2001,17:44-46)     

E26转录因子-1在不同类型葡萄膜黑色素瘤中的表达及意义

目的　探讨E2 6转录因子 1(E2 6transformation specific 1,Ets 1)在不同类型的葡萄膜黑色素瘤中的表达及其与预后的相关关系。方法　以原位杂交和免疫组织化学法检测 78例葡萄膜黑色素瘤中Ets 1mRNA和蛋白的表达 ,并按WHO 1980年的标准进行分型 :梭型细胞型、类上皮细胞型和混合细胞型。结果　 78例中 ,梭型细胞型占 2 1例 ,类上皮细胞型占 34例 ,混合细胞型占 2 3例。Ets 1mRNA和蛋白在 3种类型的葡萄膜黑色素瘤中均有表达 ,但表达强度随梭型细胞型 ,混合细胞型和类上皮细胞型依次递增。回访37例患者 ,其中梭型细胞型 18例 ,平均生存时间为 (78.33± 2 4 .6 9)月 ;混合细胞型 10例 ,平均生存时间 (6 1.4 4± 2 0 .4 6 )月 ;类上皮细胞型 9例 ,平均生存时间 (36 .76± 12 .19)月。患者生存时间与Ets 1表达强度呈负相关。结论　Ets 1可能在葡萄膜黑色素瘤的转移、浸润中发挥重要作用 ,Ets 1的检测可作为葡萄膜黑色素瘤恶性程度的参考指标。     

SIRT1对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的表观遗传调控

目的: 探讨沉默信息调节蛋白1(SIRT1)对人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的影响。方法: 实验研究。通过定量PCR和Western blot法检测SIRT1在葡萄膜黑色素瘤细胞(M23和SP6.5)和正常人葡萄膜黑色素细胞(DM78、UM95和UM96)中的表达。在葡萄膜黑色素瘤细胞(M23、SP6.5)中, 用EX527抑制SIRT1活性, 以溶剂DMSO作为阴性对照组;用SIRT1小干扰RNA(siSIRT1)转染细胞抑制SIRT1表达, 以无义小干扰RNA(NC)转染作为阴性对照组。细胞增殖实验(MTS)、流式细胞术、平板克隆形成实验分别检测细胞活性、细胞周期以及细胞克隆形成能力。裸鼠眼内成瘤实验检测葡萄膜黑色素瘤细胞眼内成瘤能力。Western blot法检测增殖相关蛋白。组间数据均采用独立样本t检验进行比较。结果: 与葡萄膜黑色素细胞相比, 葡萄膜黑色素瘤细胞(M23、SP6.5)中SIRT1 mRNA(t=17.08, P<0.001;t=13.24, P<0.001)和蛋白(t=6.26, P=0.008)表达水平显著升高。MTS结果显示, EX527抑制M23和...     

胰岛素样生长因子-1受体在原发性葡萄膜恶性黑色素瘤中的表达及临床意义

目的 观察胰岛素样生长因子-1受体(insulin-like growth factor-1-receptor,IGF-1R)对人葡萄膜恶性黑色素瘤预后评估的作用.方法 用免疫组织化学SABC法检测IGF-1R在41例葡萄膜恶性黑色素瘤组织的表达.用x2检验分析其表达与临床病理参数之间的关系.采用乘积极限法分析生存率,并绘制Kaplan-Meier曲线.建立Cox比例风险模型,探讨影响预后的相关危险因素.结果 41例葡萄膜恶性黑色素瘤标本中,IGF-1R在28例肿瘤的细胞胞浆中表达,阳性率68.3%.x2检验分析显示:IGF-1R的表达水平与肿瘤的细胞类型、最大基底直径、肿瘤的高度显著相关(P<0.05).单因素及多因素分析提示:IGF-1R的表达为影响预后的因素.结论 IGF-1R在葡萄膜恶性黑色素瘤中的高表达是影响预后的因素,可能成为临床判断预后和指导治疗的重要指标.