热休克蛋白70反义寡核苷酸诱导PC-3m凋亡及抑制生长的研究

目的 探讨热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）与雄激素不敏感前列腺癌细胞生长的关系。方法用形态学、流式细胞术、琼脂糖凝胶ＤＮＡ电泳及Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ方法观察０－１６μｍｏｌ／Ｌ人工合成的ＨＳＰ７０反义寡核苷酸作用０－１００ｈ后,对体外培养的人雄激素不敏感前列腺癌细胞株ＰＣ－３ｍ ＨＳＰ７０表达的抑制及其对生长和凋亡的影响。结果 １０μｍｏｌ／Ｌ ＨＳＰ７０反义寡核苷酸作用４８ｈ后,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂ     

热休克蛋白70 反义寡核苷酸对膀胱癌细胞系EJ细胞对丝裂霉素C敏感性的影响

目的　了解热休克蛋白 70 (HSP70 )反义寡核苷酸增强膀胱癌细胞系EJ细胞对丝裂霉素C (MMC)敏感性的作用。方法　用 10 μmol/LHSP70反义寡核苷酸封闭EJ细胞HSP70mRNA ,将 5 0μg/L的MMC与其共培养 ,采用逆转录 聚合酶链反应技术检测HSP70mRNA表达的降低情况 ,四甲基噻唑蓝试验和集落形成试验检测EJ细胞的生长情况。以正义寡核苷酸、无义寡核苷酸处理及未处理EJ细胞为对照。结果　经HSP70反义寡核苷酸处理的EJ细胞 ,HSP70mRNA的表达 (吸光度值为 132± 18)明显低于经正义、无义寡核苷酸处理的细胞 (吸光度值分别为 312± 2 3、32 5± 12 4 ,U值分别为95、10 1,均P <0 0 1) ;对MMC的敏感性 ,细胞生长抑制率、细胞集落抑制率分别为 (5 4 3± 12 3) %和(5 1 8± 12 6 ) % ,明显高于相应的正义 [(11 2± 3 6 ) %和 (13 4± 4 6 ) % ,U值分别为 86、98,均P <0 0 1]、反义寡核苷酸处理的细胞 [(9 6± 2 3) %和 (10 4± 3 0 ) % ,U值分别为 110、10 6 ,均P >0 0 1]。结论　HSP70反义寡核苷酸能增强膀胱癌细胞系EJ细胞对MMC的敏感性。     

端粒酶催化亚单位基因反义寡核苷酸诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的 探讨端粒酶催化亚单位(hTRT)基因反义寡核苷酸(ASODN)对前列腺癌细胞的诱导凋亡作用。方法合成针对hTRT的28mer ASODN,转染前列腺癌细胞12～36 h后,细胞计数、透射电镜、DNA Ladder、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测癌细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验(PCR-ELISA)技术检测hTRT基因表达和端粒酶活性。结果0.5～2.0μmol/L ASODN转染后,癌细胞体外生长抑制16.08％～53.41％(P<0.05),部分癌细胞呈现凋亡形态学改变和DNA片段化,凋亡率为9.36％～37.54％(P<0.05),hTRT表达减弱24.48％～86.73％(P<0.01),端粒酶活性降低24.74％～76.72％(P<0.01)。 结论运用ASODN阻断端粒酶hTRT基因表达,能降低端粒酶活性,显著诱导前列腺癌细胞凋亡。     

survivin反义寡核苷酸诱导胆囊癌细胞凋亡的研究

目的研究survivin反义寡核苷酸(ASODN)对胆囊癌细胞凋亡的诱导作用。方法采用脂质体介导survivinASODN转染人胆囊癌细胞株GBC SD,采用流式细胞仪技术检查细胞凋亡变化,采用电镜技术观察细胞的形态变化,采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测survivin基因表达的变化。结果脂质体介导转染survivinASODN后,胆囊癌细胞内survivinmRNA表达相对系数为0.512±0.011,明显低于未转染者的0.980±0.012(P<0.01),平均下调了47.83%(P<0.01),凋亡细胞比率为(26.28±3.91)%,明显高于未转染者的(0.50±0.23)%,P<0.01,电镜下可见胆囊癌细胞呈典型凋亡样改变。结论survivinASODN转染后能下调survivin的表达,可有效诱导GBC SD细胞凋亡。     

热休克蛋白70对大鼠离体心脏细胞凋亡的影响

目的 观察热休克蛋白70(HSP70)对离体大鼠供心心肌细胞凋亡相关蛋白bcl-2、bax表达的影响.方法 Wistar大鼠18只,分为2组:对照组(C,n=9),腹腔注射生理盐水0.5 ml,24 h后取离体心脏灌注HTK心脏保护液,4 ℃保存3 h后建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注KH液2 h;实验组(E,n=9)腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素(溶于生理盐水中)3.1 μmol/kg(0.53 mg/kg),腹腔注射24 h后取离体心脏,处理方法旧C组.运用免疫组织化学SP法测定心肌HSP70含量、bcl-2、bax蛋白的含量并做统计学处理比较.结果 HSPT0含量E组(17.78±1.82)较C组(5.22±1.05)明显增高(P＜0.01),bel-2的表达E组(41.88±5.09)较C组(31.36±3.27)明显增多(P＜0.01),bax的表达E组(22.61±3.49)较C组(40.52±4.17)明显减少(P＜0.01),bel-2/bax比值E组(1.86±0.11)较C组(0.77±0.01)明显增高(P＜0.05).结论 心肌HSP70高表达能促进心肌抗凋亡蛋白bcl-2的表达,减少促凋亡蛋白bax表达,增加bel-2/bax比率,抑制心肌细胞凋亡.     

热休克蛋白70对细胞应激反应的调节

应激反应从宏观上看,是机体在遭受一切有害刺激(如创伤、感染、惊吓、温度变化)后作出的一系列非特异性防御反应.近年来分子生物学的迅速发展使人们能够从细胞与分子水平以微观角度来了解应激反应,由此提出了细胞应激的概念.研究认为细胞应激反应中能起保护作用的应激蛋白主要是热休克蛋白家族.     

热休克蛋白90与前列腺癌

雄激素阻断疗法虽然对前列腺癌有显著疗效,但是大多数肿瘤仍会进展为雄激素非依赖性生长阶段.分子伴侣热休克蛋白90的多种底物蛋白与前列腺癌的发生、发展密切相关.以热休克蛋白90作为治疗靶点,能够同时阻断对前列腺癌生长具有重要作用的多条信号通路,为前列腺癌的治疗提供新的思路.     

雄激素受体反义寡核苷酸对前列腺癌细胞生长的抑制作用

目的　探讨雄激素受体 (AR)反义寡核苷酸 (aODN)对前列腺癌细胞AR表达和生长的抑制作用。　方法　合成 1对AR正、反义寡核苷酸 ,与LNCaP细胞共培养 ,观察LNCaP细胞的增殖情况 ,RT PCR和Westernblot方法检测ARmRNA水平和AR蛋白表达水平。　结果　含ARaODN的培养基培养处于静止期和对数生长期的LNCaP细胞增殖较对照组均明显减慢。RT PCR证实aODN组吸光度A值 (0 .5 3± 0 .18)与ODN组 (1.14± 0 .2 1)差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,提示ARaODN可导致LNCaP细胞ARmRNA显著下调。Westernblot分析显示aODN组条带的吸光度A值 (2 6 .35± 1.33)与ODN组 (33.5 1± 1.4 8)之间差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,提示ARaODN可下调LNCaP细胞AR蛋白含量。　结论　ARaODN可抑制前列腺癌细胞AR表达并抑制前列腺癌细胞增殖。     

热休克蛋白90与前列腺癌

雄激素阻断疗法虽然对前列腺癌有显著疗效,但是大多数肿瘤仍会进展为雄激素非依赖性生长阶段。分子伴侣热休克蛋白90的多种底物蛋白与前列腺癌的发生、发展密切相关。以热休克蛋白90作为治疗靶点,能够同时阻断对前列腺癌生长具有重要作用的多条信号通路,为前列腺癌的治疗提供新的思路。     

热休克蛋白70例与心肌细胞缺氧性凋亡的关系

心肌缺血、缺氧在临床非常常见。缺氧极易导致心肌细胞损伤 ,甚至死亡。细胞凋亡是心肌细胞的另一种死亡途径[1] 。热休克蛋白 70 (ＨｅａｔＳｈｏｃｋＰｒｏ ｔｅｉｎ 70 ,ＨＳＰ 70 )是一种重要的应激蛋白 ,是心肌细胞耐受缺血缺氧损伤的内源性物质。本实验旨在探讨缺氧时培养心肌细胞ＨＳＰ 70的表达及其与凋亡发生的关系 ,为心肌保护的深入研究提供理论依据。材料与方法1 原代乳鼠心肌细胞的分离培养参考Ｓｉｍｐｓｏｎ等[2 ] 介绍的方法 ,将细胞培养于盛有盖玻片的 30ｍｍ培养皿中。常氧培养 3ｄ后的心肌细胞随机分成 :对照组、缺氧 6…     

热休克蛋白70表达与心肌细胞缺氧性凋亡的关系

心肌缺血、缺氧在临床非常常见.缺氧极易导致心肌细胞损伤,甚至死亡.细胞凋亡是心肌细胞的另一种死亡途径[1].热休克蛋白70(Heat Shock Protein 70,HSP 70)是一种重要的应激蛋白,是心肌细胞耐受缺血缺氧损伤的内源性物质.本实验旨在探讨缺氧时培养心肌细胞HSP 70的表达及其与凋亡发生的关系,为心肌保护的深入研究提供理论依据.     

survivin反义寡核苷酸诱导胃癌原代细胞凋亡的实验研究

目的探讨survivin反义寡核苷酸对人胃癌原代细胞凋亡的影响，为胃癌的靶向治疗提供实验依据。方法利用人胃癌实体瘤新鲜标本培养胃癌原代细胞，胃癌细胞分为空白对照组、脂质体组、正义寡核苷酸组及反义寡核苷酸转染组。用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染胃癌原代细胞，48h后，观察肿瘤细胞的形态变化，Westernblot检测survivin蛋白的表达，流式细胞术检测细胞的凋亡。结果反义寡核苷酸转染组肿瘤细胞体积变小，细胞碎裂，出现凋亡小体；survivin蛋白量下降；流式细胞术检测到肿瘤细胞的凋亡率增高。与其他各组相比，其差异有统计学意义（P〈0．05），而空白对照组、脂质体组、正义寡核苷酸组之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论survivin反义寡核苷酸在脂质体介导下转染人胃癌原代细胞，可以诱导肿瘤细胞发生凋亡，抑制细胞生长，反义survivin可能成为一个促进胃癌细胞凋亡的手段。     

热休克蛋白70 mRNA在膀胱癌中的表达及与细胞凋亡的关系

目的　探讨热休克蛋白 70 (HSP 70 )mRNA在膀胱移行细胞癌中的表达及与细胞凋亡的关系。　方法　应用原位杂交法对 6 0例膀胱癌组织中HSP 70mRNA进行检测 ,原位DNA末端标记法 (TUNEL)检测细胞凋亡情况。　结果　 6 0例标本中 ,HSP 70mRNA阳性表达率为 5 6 .7% (34/ 6 0 )。HSP 70mRNA表达随肿瘤分级增高而增加 (P <0 .0 5 ) ;G1,G2 和G3 各级间两两比较 ,HSP 70mRNA表达差异也有显著性意义 (P <0 .0 5 )。随着肿瘤分期增高 ,HSP 70mRNA表达随之增加 (P <0 .0 5 ) ;Ⅰ ,Ⅱ和Ⅲ各期间两两比较 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。肿瘤细胞凋亡指数 (AIs)随恶性程度的增高显著降低 (P <0 .0 5 ) ;HSP 70mRNA表达率和AIs呈负相关 (rs=- 0 .6 85 ,P <0 .0 5 )。　结论　HSP 70mRNA表达随膀胱癌恶性程度增加显著增高 ,细胞凋亡则显著降低 ,提示HSP 70表达能够抑制膀胱癌细胞的凋亡。     

Survivin反义寡核苷酸诱导胰腺癌细胞凋亡并增加吉西他滨的化疗敏感性

目的探讨凋亡抑制蛋白Survivin反义寡核苷酸转染对胰腺癌BxPC 3细胞系SurvivinmRNA的表达及细胞增殖、凋亡和对吉西他滨化疗敏感性的影响。方法用脂质体瞬时转染法介导Survivin反义硫代磷酸寡核苷酸处理胰腺癌BxPC 3细胞后用RT PCR检测SurvivinmRNA的表达 ,四唑氮蓝法检测细胞的相对存活率 ,用流式细胞仪和透射电镜检测其对BxPC 3细胞的凋亡诱导作用。结果Survivin反义寡核苷酸作用于BxPC 3细胞后 ,细胞的存活率呈剂量和时间依赖性 ,其中 2 4h的IC50 值为 4 0 0nmol/L ,在此浓度和时间下 ,Survivin反义寡核苷酸可明显降低SurvivinmR NA的表达 ,细胞凋亡率为 (2 5± 3) %。在透射电镜下BxPC 3细胞可呈凋亡的早期改变。Survivin反义寡核苷酸和吉西他滨的联合实验组与单独应用吉西他滨组相比 ,在 4 8h和 72h可使细胞的存活率分别降低 2 76和 4 5 8倍。结论Survivin反义寡核苷酸可诱导胰腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖并增强吉西他滨的化疗敏感性。     

Survivin反义寡核苷酸诱导肝癌细胞凋亡及细胞结构的变化

目的采用反义寡核苷酸封闭肝癌细胞中Survivin基因的表达，研究其诱导细胞凋亡过程中对细胞超微结构与细胞骨架的作用及其机理。方法采用脂质体介导Survivin反义寡核苷酸转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞，Western—blot及原位杂交方法检测Survivin蛋白及mRNA表达，流式细胞仪检测细胞凋亡比率，透射电子显微镜观察细胞超微结构变化，激光共聚焦显微镜观察细胞骨架微丝系统变化，激酶活性检测方法测定细胞内Caspase-3活性变化。结果脂质体介导Survivin反义寡核苷酸转染肝癌细胞后Survivin蛋白及mRNA表达分别由69．59及75．60降低至10．71及22．90，Caspase-3活性由0．0153升高至0．0992，同时细胞结构呈典型凋亡改变，细胞内微丝形态结构破坏，细胞凋亡比率由0．7％增加至31．4％。结论脂质体介导转染Survivin反义寡核苷酸可以有效降低细胞内Survivin基因的表达，并激活Caspase-3。活化的Caspase-3可以切割破坏细胞内骨架微丝系统的结构，进而诱导细胞凋亡。     

bcl-2反义寡核苷酸促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

目的 观察ｂｃｌ－２反义寡核苷酸（ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ,ＯＤＮ）对ＭＣＦ－７细胞内ｂｃｌ－２表达及细胞凋亡的影响。方法 电转染法将合成的针对ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ的反义ＯＤＮ导入ＭＣＦ－７乳腺癌细胞,用荧光显微镜,电镜,免疫组化法及流式细胞仪检测反义ＯＤＮ对乳腺癌细胞凋亡,ｂｃｌ－２表达及细胞周期的影响。     

Bcl-2反义寡核苷酸诱导增生性瘢痕细胞凋亡的研究

目的：探讨反义寡核苷酸(ASODN)对bcl-2基因的表达调控及诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用。方法：采用RT-PCR法和流式细胞术检测ASODN对bcl-2蛋白和mRNA表达量的调控；通过MTT法比较两条人工合成ASODN直接作用及脂质体D0’FAt，转染对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制效果；用相差显微镜、电子显微镜观察bcl-2ASODN诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡效果。结果：ASODN降低bcl-2蛋白和mRNA表达；两条ASODN抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用呈浓度和时间依赖性，且靶位点于mRNA蛋白编码区(ASODN2)和以DOTAP为载体的ASODN对成纤维细胞的增殖抑制效果最佳。Bcl-2ASODN作用于成纤维细胞后，成纤维细胞缩小、凋亡小体和染色质浓缩等特征性改变出现。结论：bcl-2ASODN能抑制bcl-2mRNA和蛋白表达，诱导成纤维细胞凋亡。     

存活素反义寡核苷酸诱导肾癌细胞凋亡及机制的实验研究

目的观察存活素反义寡核苷酸封闭存活素的表达对肾癌细胞凋亡的影响。方法采用脂质体介导的存活素反义寡核苷酸技术转染肾癌细胞786-0。电镜观察细胞超微结构,免疫组织化学、Western blot及RT-PCR方法检测存活素蛋白及mRNA表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐比色法检测癌细胞抑制率。酶标免疫测定caspase-3活性。结果存活素反义寡核苷酸能显著降低存活素蛋白和mRNA的表达,并呈浓度和时间依赖效应。转染后的肾癌细胞出现了大量凋亡小体。400、600、800 ng／ml反义寡核苷酸细胞凋亡率分别为（10．54±0．72）％,（12．80±0．38）％,（22．30±1．23）％,较空白对照组[（6．05±0．48）％]和正义对照组[（5．70±0．41）％]显著增加（P〈0．05）。反义寡核苷酸各组caspase-3的相对活性分别为0．052±0．009,0．078±0．004和0．092±0．002,与空白对照组（0．027±0．008）和正义对照组（0．028±0．001）相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论存活素反义寡核苷酸能显著下调存活素基因表达,明显促进肾癌细胞786-0凋亡并抑制其增殖;可能是通过上调caspase-3表达来促进凋亡。     

聚酰胺树形分子递送Survivin反义寡核苷酸诱导结肠癌细胞凋亡的研究

目的 观察聚酰胺(PAMAM)树形分子高聚合物介导Survivin反义寡核苷酸(Sur-vivin-asODN)转染结直肠癌SW620细胞的可行性以及对结直肠癌SW620细胞凋亡的影响.方法 制备PAMAM反义基因复合物和阳离子脂质体反义基因复合物,透射电镜观察复合物的形态,激光散射粒径分析仪测定粒径,zeta电位分析仪测定zeta电位,离心法和紫外分光分度仪测定复合物的的包封率、载药率和体外DNA释放速度.将上述两种基因转染复合物转染结直肠癌细胞,测定其转染效率;检测转染后细胞中Survivin蛋白的表达和细胞的凋亡率.结果 PAMAM-Survivin-asODN复合物的粒径小于脂质体-Survivin-asODN复合物的粒径(P<0.01),但zeta电位高于后者(P<0.05);基因载药率、包封率两组差异无统计学意义;PAMAM对DNA持续释放14 d,但脂质体只持续5 d.PAMAM.Survivin-asODN转染结直肠癌细胞的效果强于脂质体-SurvivinasODN(P<0.05).转染后结直肠癌细胞Survivin蛋白的表达低于脂质体复合物(P<0.05),细胞的凋亡率高于脂质体复合物(P<0.05).结论 PAMAM能将Survivin-asODN高效递送到结直肠癌SW620细胞,降低Survivin蛋白表达并诱导结直肠癌细胞凋亡.