超顺磁性氧化铁标记脂肪干细胞移植入大鼠心脏后的活体磁共振示踪成像

目的 探讨超顺磁性氧化铁(SPIO)标记脂肪干细胞(ADSCs)移植入大鼠心脏后的活体磁共振成像(MRI)示踪的可行性.方法 使用左旋多聚赖氨酸-SPIO共培养方式标记ADSCs.采用普鲁士蓝染色及透射电镜观察细胞内铁颗粒,台盼兰染色检测细胞活力,并对标记的干细胞进行体外MRI成像.将经过SPIO标记的干细胞移植入正常大鼠心脏,使用MRI进行活体成像观察并与病理结果进行对照分析.结果 普鲁士蓝染色于ADSCs胞浆内可见蓝色颗粒,电镜检查见铁颗粒位于内涵体/溶酶体内;台盼兰染色检测细胞活力实验组与对照组差异无显著性(P>0.05);标记了SPIO的干细胞体外MRI成像时,实验组信号显著低于阴性对照组和空白对照组;标记后的干细胞移植到心脏后,MRI显示细胞移植区域信号缺失,对应区域病理切片普鲁士蓝染色可见胞浆内染色阳性的细胞.结论 MRI可以对移植入心脏的经SPIO标记的干细胞进行无创、动态的活体示踪成像,有助于了解移植细胞在体内的存活及迁徙情况.     

SPIO 标记下大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性及 多向分化潜能及体外MR成像

 【目的】 探讨超顺磁氧化铁纳米颗粒(SPIO)标记对骨髓间充质干细胞生物学特性和多向分化潜能的影响以及体外磁共振(MRI)成像的可行性,为移植干细胞活体MRI成像提供实验基础｡ 【方法】 采用梯度密度离心法和贴壁法获取大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),采用25 μg/mL SPIO联合0.75 μg/mL多聚赖氨酸(PLL)标记BMSC,比较标记和未标记MSC细胞活力､增值､细胞周期､凋亡和成骨､成脂多向分化能力;应用1.5T MR对不同数量级细胞分别进行T1WI､ T2WI和T2*WI序列扫描｡ 【结果】 普鲁士兰染色显示SPIO(25 μg Fe/mL, 48 h)对细胞的标记率接近100%,细胞活力､增殖､周期和凋亡检测,均显示SPIO标记细胞与未标记细胞间无统计学差异(P > 0.05);成骨､成脂诱导显示,BMSC和标记BMSC均具备成骨､成脂分化能力;对不同数量级的SPIO标记BMSC行MR扫描,T1WI､ T2WI和T2*WI能检测到的最小数量级细胞分别为2 × 104, 1 × 104, 0.5 × 104, 呈低信号｡ 【结论】 25 μg/mL SPIO联合0.75 μg/mL PLL能有效标记BMSC,不影响BMSC的活力､增值､细胞周期､凋亡和多向分化能力,1.5T MR示踪标记细胞可行,与T1WI和T2WI序列相比,T2*WI最敏感｡     

骨髓间充质干细胞两种示踪方法的优缺点比较

  【目的】 探讨荧光染料CM-DiI直接标记和慢病毒感染法EGFP标记人骨髓间充质干细胞(hMSC)用于体内示踪的优缺点｡【方法】 利用FUGW质粒构建携带EGFP基因的慢病毒载体,并感染P3代hMSC,荧光倒置显微镜下观察细胞的感染效果及传代前后细胞EGFP表达情况的变化;CM-DiI直接标记P3代hMSC,观察CM-DiI 标记对细胞生物学特性的影响及传代前后细胞标记效果的变化｡分别将CM-DiI和EGFP标记的P3代hMSC移植入新生大鼠左侧脑室,2周后取大鼠脑组织行冰冻切片,比较两种标记方法用于体内示踪的效果｡【结果】 慢病毒感染hMSC 48 h后,约40%细胞表达绿色荧光,体外培养1个月,EGFP阳性细胞数增至50%左右,荧光强度基本保持不变,细胞生长不受病毒转染的影响｡CM-DiI标记hMSC 12 h后,95%以上细胞呈现很强的红色荧光,1个月后,阳性细胞减少至50%左右,荧光强度也有一定程度降低,未见染料对细胞形态和生长产生明显影响｡CM-DiI标记的hMSC移植后2周脑冰冻切片可以找到红色荧光的标记细胞, EGFP标记的hMSC移植后2周脑冰冻切片未找到绿色荧光细胞｡ 【结论】 CM-DiI和EGFP均可在体外高效标记hMSC,但CM-DiI 标记的hMSC体内示踪效果优于EGFP标记｡     

SPIO标记骨髓间充质干细胞移植入心肌梗死大鼠的示踪研究

目的探讨超顺磁性氧化铁微粒(SPIO)体外标记骨髓间充质干细胞(BMSCs)及体内示踪移植入大鼠心肌梗死心脏的BMSCs的能力。方法使用左旋多聚赖氨酸-SPIO共培养方式标记BMSCs。采用普鲁士蓝染色观察细胞内铁颗粒,流式细胞术检测细胞活力,将经过SPIO标记的干细胞移植入心肌梗死大鼠心脏,应用1.5TMRI系统行磁标记干细胞成像。超声心动图检测各组心脏的左室射血分数(EF),左室舒张末期内径(LVIDd),左室收缩末期内径(LVIDs)及短轴缩短率(FS)。结果普鲁士蓝染色显示,SPIO标记的BMSCs细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒,标记效率为(99.81±1.57)%;与正常未标记细胞相比较,细胞的活力差异无统计学意义(P0.05)。标记了SPIO的BMSCs体内MRI成像时显示,细胞移植区域信号缺失,对应区域病理切片普鲁士蓝染色可见胞浆内染色阳性的细胞。超声心动图显示,PBS组FS移植前后没有明显变化,BMSC组FS从移植前的(23.1±1.88)%上升到第1周的(31.28±4.15)%。BMSC组EF在移植前是(51.13±5.07)%,第1周时上升到(60.12±8.40)%。结论 SPIO能成功地标记BMSCs,且对BMSCs的活力无明显影响。BMSCs移植后能改善心梗大鼠的心功能。SPIO标记的BMSCs移植后在大鼠体内的分布、迁移过程可用MRI进行检测评价。     

外加磁场诱导超顺磁氧化铁标记骨髓间充质干细胞迁移 的体外研究

 【目的】 观察外加磁场能否诱导用超顺磁氧化铁标记的大鼠骨髓间充质干细胞在体外条件下定向迁移。 【方法】 使用超顺磁氧化铁标记大鼠骨髓间充质干细胞,采用普鲁士蓝染色鉴定其标记率。台盼蓝染色检测标记细胞生存能力,MTT法检测标记干细胞的增殖活力。外加磁场进行划痕试验及Transwell试验验证磁场对标记细胞的定向诱导迁移作用。 【结果】 普鲁士蓝染色显示骨髓间充质干细胞的超顺磁氧化铁标记率接近100%,台盼蓝染色标记细胞生存率与对照组无差异(P > 0.05),MTT检测标记干细胞的增殖活力与未标记干细胞无差异(P > 0.05)。外加磁场可加速标记细胞填补划痕试验空白区的速度,同时可增加transwell试验跨膜的细胞数(P < 0.05),而未加磁场情况下标记细胞与未标记细胞迁移速率无差异(P > 0.05)。 【结论】 外加磁场可在体外条件下诱导超顺磁氧化铁标记的骨髓间充质干细胞定向迁移。     

骨髓基质细胞的体内成骨示踪研究

目的 探讨应用超顺磁性氧化铁(SPIO)纳米粒子标记骨髓基质细胞(MSCs)后自体移植,应用MRI进行体内示踪的可行性.方法 分离骨髓基质细胞,进行体外培养、SPIO标记,将标记细胞自体移植入动物股骨头内,进行活体核磁共振成像(MRI)检查及组织学对比检测.结果 SPIO标记细胞体内移植侧MRI检测可见明显的低信号改变.股骨头缺损内发现大量SPIO阳性细胞,很多骨陷窝及骨小梁表面细胞SPIO呈阳性.MSCs移植侧成骨程度强于对照侧.结论 MRI活体示踪可对MSCs移植后在活体内的迁徙情况提供影像学证据.移植的MSCs能在股骨头内成活,促进成骨.     

应用MRI活体示踪干细胞心肌移植可行性的实验研究

目的：探讨应用MRI活体示踪干细胞心肌移植的可行性.方法：选择8只雌性家猪,体重35～45 kg,经导管应用球囊封堵前降支动脉建立心肌梗死模型后,将存活的7只随机分为Feridex标记的干细胞移植组（n=4）和Feridex未标记的干细胞移植组（n=3）.建立模型2周后开胸,在梗死区中央及梗死边缘区共5个点注射骨髓间充质干细胞（BMSC）（1.25～7.54×10^6）.于移植前及移植后1 h、1周、2周分别行心脏MRI 检查,比较移植前后MRI心脏影像学变化.移植后2周,取心脏组织行HE染色和普鲁士蓝染色.结果：移植后1 h,Feridex标记的干细胞移植组中4只动物（100%）间充质干细胞移植区在MRI上呈明显的低信号改变,术后1周示心脏低信号改变达100%（4只动物）,术后2周示2只动物（50%）细胞移植区有低信号改变.病理检查示梗死区内大量炎性细胞浸润,Feridex标记的干细胞移植组心脏注射点处的组织普鲁士蓝染色阳性.结论：Feridex标记的干细胞在MRI上呈低信号改变,应用MRI活体示踪BMSC是可行的.     

磁探针标记骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死的MRI示踪研究

目的利用磁探针标记猪骨髓单个核细胞（BM-MNC）,探讨磁共振成像（MRI）示踪磁探针标记BM-MNC（MR-MNC）的可行性。方法制备猪急性心肌梗死模型,分离培养14头（实验组9头,对照组5头）小型家猪的自体BM-MNC,将MR-MNC（实验组）和BM-MNC（对照组）经冠脉途径植入模型猪梗死相关动脉,术后MRI在体示踪移植细胞并与心肌组织切片对照。结果BM-MNC的超顺磁性氧化铁标记率近100％,10头（实验组7头,对照组3头）获得MRI示踪结果,MRI示心肌梗死模型均成功。3头MR-MNC移植后T2加权像（T2·WI）序列心肌梗死周边见模糊的低信号区,增强后可见此区呈现较增强前清晰的低回声信号,其中2头分别于14、21d发现低回声区消失,另1头随诊至26d因重症感染死亡;2头离体T2·WI序列示梗死区周边一个呈点状分布的低信号区。对照组均未发现低信号区。组织学检查发现5头（MR-MNC10^6以上）普鲁士染色阳性蓝细胞分布于梗死心肌周边,与磁共振信号减低区基本一致。结论1．5TMR可在体示踪心肌梗死模型猪经冠脉途径植入的MR-MNC,但移植的MR-MNC数量不应少于10^6。     

Ferumoxide标记Flk1＋＋CD31＋-CD34-人骨髓间充质干细胞及其在食蟹猴脑内移植示踪观察

目的探讨Ferumoxide-PLL标记Flk1 CD31-CD34-人骨髓间充质干细胞(hBMSC)的方法及其在食蟹猴脑实质内移植活体示踪的可行性。方法采用Ferumoxide-PLL标记hBMSC,台盼蓝染色、普鲁士蓝染色和透射电镜扫描鉴定标记效率及细胞活力。体外磁共振成像(MRI)分别扫描标记和未标记细胞,计算T2*的弛豫时间和弛豫率(R2*)变化。通过立体定向手术将标记的hBMSC移植入食蟹猴右侧基底节区,采用MRI扫描活体示踪细胞。采用免疫组织化学、普鲁士蓝和HE染色对脑组织切片进行干细胞存活、分化及病理学研究。结果Ferumoxide-PLL标记hBMSC效率为96%,普鲁士蓝染色、电镜可显示标记hBMSC细胞质内铁颗粒。1×106和5×105两组Ferumoxide-PLL标记细胞的T2*的弛豫时间分别为68.86和79.88ms,而未标记细胞分别为12.71和15.24ms。标记细胞的R2*分别为78.68和65.61/s,分别是未标记细胞(14.52和12.52/s)的5.4和5.2倍。移植后3周MRI扫描T2WI仍可发现hBMSC呈明显的低信号。病理及免疫荧光结果显示hBMSCs在移植区大量存活,移植区有大量新生血管,但未见hBMSC向神经细胞分化。结论Ferumoxide-PLL可高效标记hBMSC,能显著增加其MRI图像对比度。MRI可活体示踪干细胞。移植入食蟹猴脑内的hBMSC可大量存活并促进新生血管形成。     

SPIO标记下大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性及多向分化潜能及体外MR成像

【目的】探讨超顺磁氧化铁纳米颗粒（SPIO）标记对骨髓间充质干细胞生物学特性和多向分化潜能的影响以及体外磁共振（MRI）成像的可行性,为移植干细胞活体MRI成像提供实验基础。【方法】采用梯度密度离心法和贴壁法获取大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）,采用25μg/mLSPIO联合0.75μg/mL多聚赖氨酸（PLL）标记BMSC,比较标记和未标记MSC细胞活力、增值、细胞周期、凋亡和成骨、成脂多向分化能力;应用1.5TMR对不同数量级细胞分别进行T1WI、T2WI和T2＊WI序列扫描。【结果】普鲁士兰染色显示SPIO（25μgFe/mL,48h）对细胞的标记率接近100%,细胞活力、增殖、周期和凋亡检测,均显示SPIO标记细胞与未标记细胞间无统计学差异（P〉0.05）;成骨、成脂诱导显示,BMSC和标记BMSC均具备成骨、成脂分化能力;对不同数量级的SPIO标记BMSC行MR扫描,T1WI、T2WI和T2＊WI能检测到的最小数量级细胞分别为2&#215;10^4,1&#215;10^4,0.5&#215;10^4,呈低信号。【结论】25μg/mLSPIO联合0.75μg/mLPLL能有效标记BMSC,不影响BMSC的活力、增值、细胞周期、凋亡和多向分化能力,1.5TMR示踪标记细胞可行,与T1WI和T2WI序列相比,T2＊WI最敏感。     

Efficiently tracking of stem cells in vivo using different kinds of superparamagnetic iron oxide in swine with myocardial infarction

Background  Superparamagnetic iron oxide (SPIO) particles have shown much promise as a means to visualize labeled cells using molecular magnetic resonance imaging (MRI). Micrometer-sized superparamagnetic iron oxide (MPIO) particles and nanometer-sized ultrasmall superparamagnetic iron oxide (USPIO) are two kinds of SPIO widely used for monitoring stem cells migration. Here we compare the efficiency of two kinds of SPIO during the use of stem cells to treat acute myocardial infarction (AMI).

Methods  An AMI model in swine was created by 60 minutes of balloon occlusion of the left anterior descending coronary artery. Two kinds of SPIO particles were used to track after intracoronary delivered 10⁷ magnetically labeled mesenchymal stem cells (MR-MSCs). The distribution and migration of the MR-MSCs were assessed with the use of 3.0T MR scanner and then the results were confirmed by histological examination.

Results  MR-MSCs appeared as a local hypointense signal on T₂^*-weighted MRI and there was a gradual loss of the signal intensity after intracoronary transplantation. All of the hypointense signals in the USPIO-labeled group were found on T₂^*-weighted MRI, contrast to noise ratio (CNR) decreased in the MPIO-labeled group (16.07±5.85 vs. 10.96±1.34) and USPIO-labeled group (11.72±1.27 vs. 10.03±0.96) from 4 to 8 weeks after transplantation. However, the hypointense signals were not detected in MPIO-labeled group in two animals. MRI and the results were verified by histological examination.

Conclusions  We demonstrated that two kinds of SPIO particles in vitro have similar labeling efficiency and viability. USPIO is more suitable for labeling stem cells when they are transplanted via a coronary route.

     

骨髓间充质干细胞联合促红素治疗大鼠急性心肌梗死实验研究

目的:观察静脉移植骨髓间充质干细胞(MSC)联合促红素(EPO)治疗心肌梗死的可能性。方法:大鼠MSC培养后,制备成悬液备用。40只Lewis大鼠用异丙肾上腺素(ISO)制作急性心肌梗死模型,随机分为4组:A.MSC加EPO治疗组(n=10);B.MSC治疗组(n=10);C.EPO治疗组(n=10);D.心肌梗死对照组(n=10)。4周后,观察大鼠的心功能、血流动力学变化。结果:与对照组相比,MSC加EPO组、MSC组和EPO组的心功能明显改善,左室腔明显缩小(P<0.05),梗死面积减少;其中MSC加EPO组较MSC组和EPO组的心功能好(P<0.05)。结论:骨髓MSC联合EPO治疗大鼠急性心肌梗死取得了良好的效果,比单用效果好。     

骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死的实验研究

目的 研究60Coγ射线对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖和分化能力的影响;评价MSC移植对大鼠心梗后心功能的影响.方法 MSC受照射后继续培养,检测增殖能力;5-氮胞苷(5-asa)诱导分化,检测C-心肌肌钙蛋白重链(C-TNT)、β-心肌肌球蛋白重链(β-MHC)的表达.建立大鼠急性心梗模型并行照射和非照射MSC移植,术后4周检测心脏大小和功能变化、并比较微血管密度的差异.结果 4 Gy组细胞增殖能力受抑制,C-TNT和β-MHC在未照射组有所表达.两细胞移植组较对照组术后心功能改善、心脏缩小,微血管计数值增加.结论 移植正常和丧失分化能力的MSC同样能明显改善心梗后早期的心功能.     

应用超顺磁性氧化铁粒子标记组织工程关节软骨种子细胞及在体磁共振示踪的研究

目的探讨应用1．5T MRI活体示踪注入兔膝股骨髁软骨缺损关节腔内的超顺磁性氧化铁粒子（SPIO）标记的骨髓间充质干细胞（MSCs）的可行性。方法从兔骨髓中分离培养MSCs,经体外采用SPIO和BrdU双重标记后,与壳聚糖支架复合,然后注射到兔膝股骨髁自体软骨缺损关节腔中,术后1d及4、8、12周应用MR对膝关节腔内注入的磁标记MSCs进行扫描示踪,并与组织切片普鲁士染色及免疫组化BrdU对照。结果体外标记的MSCs普鲁士染色和电镜检查显示细胞胞质内含致密铁颗粒,标记细胞可正常成软骨分化。复合物注射后MRI GRET2^＊ WI序列检查显示关节腔内磁标记MSCs产生颗粒状低信号改变至少12周,不同时相信号改变在空间上呈不一致性。MRI信号改变区域与组织学检查结果基本一致。结论兔MSCs经SPIO标记后仍然具有成软骨细胞分化能力,利用1．5TMRI活体示踪注入自体软骨缺损膝关节腔内的兔磁标记MSCs分布和迁移是可行的。     

间充质干细胞移植早期对心肌细胞凋亡及左心室功能的影响

目的 研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC) 缺血心肌内移植早期对心肌细胞凋亡、血流动力学及左心室功能的影响.方法 采用密度梯度离心+ 贴壁培养方法分离培养Wistar 大鼠MSC,结扎左前降支建立急性心肌梗死(AMI)模型,结扎后30min 随机分为MSC 组( 于梗死边缘分4 点心肌内注射1×106 /0.1ml 的MSC,10 只),AMI 组( 同法心肌内注射PBS 0.1ml,10 只),假手术组(SHAM 组,5 只).监测细胞移植后72h 血流动力学、超声心动图及TUNEL 心肌细胞凋亡的变化.结果 与SHAM 组相比,AMI 大鼠血流动力学恶化,表现为平均动脉压、左心室收缩压明显下降,左心室舒张末压显著升高,左心室射血分数及缩短分数均显著降低,梗死及缺血区心肌细胞凋亡比例分别为41.6% 和18.9% ;MSC移植减少梗死及缺血区心肌细胞凋亡32% 和51%(P 均<0.01),但对大鼠的平均动脉压、左心室收缩压、左心室舒张末压及左心室功能无明显改善作用(P 均>0.05).结论 MSC 移植早期能减少心肌细胞凋亡但不改善急性心肌梗死后大鼠的心功能.     

肌酸激酶MM3／MM1比值诊断急性心肌梗塞参比值的研究

目的：探讨血清肌酸激酶ＭＭ同工酶（ＣＫ－ＭＭ）亚型ＭＭ３／ＭＭ１比值诊断急性心肌梗塞的参比值。方法：应用琼脂凝胶电泳法测定了６０例ＡＭＩ,７６例非ＡＭＩ和４０例正常人血清ＣＫ－ＭＭ亚型ＭＭ３／ＭＭ１比值。结果：在诊断ＡＭＩ中ＭＭ３／ＭＭ１比值的最佳界限值为０．５,当参比值为０．５时,其敏感性为８０．０％,特异性为９３．１。诊断效率为８８．６％。结论：血清ＭＭ３／ＭＭ１比人趔ＡＭＩ诊断敏感而特异的酶     

急性冠脉综合征患者血清hs-CRP和IL-6水平变化及预后意义

【目的】探讨炎性标志物C反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)与急性冠脉综合征(ACS)的发病及预后的关系。【方法】ACS患者112例,其中不稳定型心绞痛(UAP)51例,急性心肌梗死(AMI)61例(按治疗方法分3个亚组),稳定型心绞痛(SAP)10例,健康对照21例,测定其血清hs-CRP、IL-6水平,比较组间及亚组间差异,观察9例静脉溶栓再通患者早期系列血清标志物的水平变化,随访冠心病患者不良心血管事件与hs-CRP、IL-6的关系。【结果】与对照组、SAP组相比,UAP和AMI组hs-CRP、IL-6水平升高(P<0.05);AMI组中PCI亚组hs-CRP、IL-6水平治疗后较治疗前升高(P<0.05),静脉溶栓亚组IL-6水平治疗后较治疗前升高(P<0.05);9例溶栓再通患者IL-6在发病12h显著升高(P<0.01),达峰时间与CK-MB一致,而hs-CRP水平持续升高;ACS患者hs-CRP与IL-6呈正相关(rAMI=0.493,rUAP=0.452);hs-CRP、高脂血症是冠心病患者不良事件的预测因素(OR=1.163,OR=2.844),IL-6与冠心病患者预后无相关关系(P>0.05)。【结论】血清hs-CRP、IL-6水平是判断斑块稳定性的血清指标物;AMI患者血清IL-6来自心脏,而CRP并非由心脏释放;hs-CRP、高脂血症对冠心病预后判断具有重要价值。     

骨髓间充质干细胞旁分泌效应的实验研究

目的 研究~(60)Co γ射线对骨髓间充质干细胞(MSC)旁分泌效应的影响,评价MSC培养上清液对大鼠心肌梗死后心脏形态、结构及功能的影响,并初步探讨其作用机制.方法 MSC行不同剂量~(60)Co γ射线照射,收集各组照射前及照射后第1次换液的培养液,ELISA法检测上清液中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量.建立大鼠急性心梗模型并行心肌内和体内注射培养上清液或培养基,术后4周检测心脏大小和功能变化、并比较微血管密度的差异.结果 MSC旁分泌能力受射线照射后明显下降,与照射剂量呈正相关.上清液组(B组)较对照组(A组)和培养基组(C组)术后心功能改善、心脏缩小.术后左心室舒张末期内径(LVDd):A组(8.1±1.5)mm、B组(7.0±1.5)mm、C组(7.7±1.1)mm;术后射血分数EF:A组43.8%±8.9%、B组51.5%±7.8%、C组45.6%±8.1%,微血管计数值增加,B组10.8±2.9,C组5.7±0.7,A组6.6±0.6.结论 ~(60)Co γ射线照射会降低MSC的旁分泌能力,MSC的旁分泌效应对改善急性心梗后的心功能起到重要作用,其作用机制很复杂,促新生血管形成是其中重要的环节.     

龟板含药血清对大鼠骨髓间质干细胞体外增殖的影响

[目的]观察益肾中药龟板血清对大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)体外增殖的影响。[方法]使用密度梯度法分离大鼠骨髓间质干细胞进行培养,经5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)标记和CD44染色及两者双重染色鉴定后,分别从光学显微镜下的形态学特征、免疫细胞化学染色后的MSC表型特征、四甲基偶氯唑盐(MTT)染色后MSC的吸光值以及以Brdu、增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色后MSC的阳性细胞数变化等角度观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSC的生长变化。[结果]不同浓度的龟板血清均以浓度依赖方式促进MSC增殖活力和增加Brdu、PCNA阳性细胞数,与对照组比较具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。[结论]龟板血清可促进MSC的增殖而有利于细胞脱氧核糖核酸(DNA)合成,推测这可能是龟板补肾的机理之一。     

超顺磁性氧化铁标记大鼠骨髓间充质干细胞的研究

目的探讨应用超顺磁性氧化铁（superparamagnetic iron oxid,SPIO）标记间充质干细胞（mesenchymal stemcells,MSCs）的有效性、安全性及可靠性。方法分离、培养SD大鼠MSCs,通过流式细胞仪分析鉴定表面抗原CD34、CD44。选取第4代MSCs,在铁（Fe）浓度为25、50、75μg.ml-1和多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine,PLL,0.75μg.ml-1）的DMEM/F12培养液中,孵育48h,作为3个实验组。通过普鲁士蓝染色、流式细胞仪检测、台盼蓝染色及MTT细胞增殖活性检测SPIO,探讨不同SPIO浓度对MSCs标记效率、免疫学表型、细胞活性及增殖的影响。结果经Fe浓度为25、50、75μg.ml-1SPIO标记后,普鲁士蓝染色标记效率均在99%以上;3个实验组细胞表面均表达CD44,阳性细胞率为超过98%。与对照组相比,Fe浓度为25、50μg.ml-1的SPIO标记的MSCs活细胞比率均在96%左右,细胞增殖活性差异无统计学意义,而Fe浓度为75μg.ml-1时,活细胞比率约为93%,对细胞的增殖有明显的抑制作用（P〈0.05）。培养4周,细胞内检测不到SPIO。结论全骨髓直接贴壁法可以成功分离、培养MSCs。超顺磁性氧化铁在PLL介导下,能高效地标记MSC,且在合适的浓度范围不会影响MSCs的免疫学表型、细胞活性及增殖能力等生物学特性。细胞内的SPIO,大约在4周左右,即可被完全降解。