拓扑替康胞内浓度降低--卵巢癌细胞耐药的一种新机制

目的　探讨卵巢癌拓扑替康 (TPT)耐药细胞株中TPT胞内浓度的变化。方法　建立卵巢癌TPT耐药细胞株 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测该细胞株对多种化疗药物的耐药指数 ,流式细胞仪检测 2株细胞在不同条件下的TPT胞内浓度。结果　该细胞株对TPT及米托蒽醌 (MX)耐药。耐药细胞的TPT泵出速率明显快于亲本细胞的泵出速率 ,胞内TPT浓度约为亲本细胞的 1/ 6 (P <0 0 5 ) ;低温时 2株细胞的TPT泵出均受抑制 ;能量不足时 ,耐药细胞的TPT泵出减少 ,胞内浓度由 13 78增加到 2 0 13(P <0 0 5 )。结论　能量依赖性的拓扑替康胞内浓度降低是卵巢癌细胞耐药的一种机制。     

拓扑替康对人卵巢癌顺铂耐药细胞株作用的研究

目的:探讨拓扑替康(TPT)在体外诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP凋亡的作用及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法:应用TPT诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP凋亡,运用MTT法、透射电镜、DNA凝胶电泳检测和观察TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/杀伤效应、凋亡形态、生物特性。采用Westernblot印迹杂交法以检测TPT对凋亡相关蛋白bcl-2和bax表达的影响。结果:TPT可诱导细胞株A2780/DDP凋亡,经TPT作用后A2780/DDP细胞内bax蛋白增加,而bcl-2蛋白不表达,bax/bcl-2比值增加。结论:TPT可诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP凋亡,其机制可能与bax蛋白高表达及bax/bcl-2不表达有关。     

维康醇对DNA拓扑异构酶活性的影响

目的 探讨维康醇对DNA拓扑异构酶活性的影响.方法 以质粒pBR322超螺旋DNA为底物,采用凝胶电泳分别检测维康醇对拓扑异构醇Ⅰ (Topo Ⅰ)和拓扑异构醇Ⅱ(TopoⅡ)介导的pBR322 DNA解旋反应的影响.结果 维康醇对TopoⅠ介导的pBR322解旋反应无明显的抑制作用,而对TopoⅡ的活性有明显的抑制作用.结论 维康醇的直接作用靶点可能是DNATopoⅡ,该药可能成为新的TopoⅡ抑制剂.     

DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂研究进展

DNA拓扑异构酶Ⅰ(TopoⅠ)参与DNA复制、转录、重组、修复等所有关键的细胞核内过程,已成为极其重要的抗癌药物研究新靶点.目前,美国国立癌症研究所药物机制分析电脑网络系统已将TopoⅠ抑制剂列为重点研究的六大类抗肿瘤药物之一.近年来,Topo Ⅰ抑制剂研究出现了新的高潮,已有数个喜树碱类化合物进入临床研究,还发现了一些结构新颖、活性较好的非喜树碱类TopoⅠ抑制剂.本文简单介绍TopoⅠ的拓扑结构与活性位点,重点了各类Topo Ⅰ抑制剂研究的最新进展.     

TopoⅡ与膀胱癌多药耐药性关系的实验研究

目的 探讨DNA拓扑异构酶Ⅱ（Topo Ⅱ）与膀胱癌多药耐药性（MDR）的关系。方法 应用逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）和免疫细胞化学技术，分别对人膀胱癌耐药细胞株（BIU－87／ADM）及敏感细胞株（BIU－87）中TopoⅡ基因及其产物的表达进行研究。结果 BIU－87／ADM细胞中TopoⅡ基因表达呈弱阳性，BIU－87细胞中呈强阳性。结论 TopoⅡ基因在人膀光癌耐药细胞中表达的降低。与人膀胱癌多药耐药的产生有关。     

肺耐药蛋白、拓扑异构酶Ⅱ在肺癌中的表达

目的 探讨肺耐药蛋白(LRP)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)在肺癌中的表达及临床意义。方法 应用免疫组化技术S-P法 ,对60例肺癌标本进行LRP、TopoⅡ指标检测。结果 在肺癌组织中LRP、TopoⅡ表达的阳性率分别为78.3%、83.3% ,其与性别、年龄、临床分型、部位和临床分期无关(均P>0.05)。LRP在未分化型、小细胞肺癌中表达的阳性率明显降低(均P<0.05) ,TopoⅡ在未分化型肺癌中表达的阳性率明显升高(P<0.05)。小细胞癌与鳞癌、腺癌、支气管肺泡癌比较 ,LRP的表达强度明显降低(P<0.05) ,而TopoⅡ表达强度的差别无显著性意义(P>0.05) ;LRP的表达强度随分化程度的降低而降低(P<0.05) ,而TopoⅡ的表达强度随分化程度的降低而升高(P<0.05)。 结论 LRP、TopoⅡ在未化疗过的肺癌组织中均有不同程度的高表达 ,且与肺癌的某些生物学行为有关 ,临床检测有助于对化疗药物的选择及预后的判断。     

Survivin反义核酸对拓扑替康诱导SKOV3细胞凋亡的影响

目的 :探讨Survivin反义核酸对拓扑替康 (TPT)诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的影响。方法 :在光镜下观察Survivin反义核酸与TPT联合应用后SKOV3凋亡的形态学改变 ,通过DNA电泳检测SKOV3细胞凋亡的情况 ;应用MTT法检测SKOV3细胞对TPT的敏感性。结果 :Survivin反义核酸可明显促进TPT诱导的SKOV3凋亡 ,呈现出特征性的DNA梯状带 ;TPT对SKOV3、SKOV3/neo、SKOV3/SVVas细胞的IC50 值分别为 (1 6 0 .0 0± 6 .36 ) μg/L、(1 5 8.0 0±6 .32 ) μg/L、(4 2 .0 0± 2 .31 ) μg/L ,其差异具有统计学意义 (P <0 .0 1 )。 结论 :Survivin反义核酸可明显促进TPT诱导的卵巢癌细胞SKOV3凋亡 ,提高卵巢癌细胞对TPT的敏感性     

THP、ADM和VP-16诱导CNE-2鼻咽癌细胞凋亡的研究

[目的]探讨拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)抑制剂吡喃阿霉素(THP)、阿霉素(ADM)、鬼臼乙叉甙(VP-16)对鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE-2抑制增殖及诱导细胞凋亡的作用;进一步检测了TopoⅡ抑制剂作用以后鼻咽癌细胞Survivin表达水平的变化.[方法]采用MTT法检测THP、ADM和VP-16对CNE-2细胞的生长抑制,Annenxin V FITC染色检测凋亡早期细胞,流式细胞仪检测Survivin的表达情况.[结果]ADM、THP和VP-16对鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE-2均具有较强的体外抗肿瘤作用,随着药物浓度增高细胞增殖抑制率增高.ADM、THP和VP-16的IC50分别为(0.0238±0.0089)μg/mL、(0.0019±0.0030)μg/mL、(0.6416±0.0691)μg/mL.THP的IC50明显低于ADM.随着药物作用时间的增加,CNE-2细胞凋亡率逐渐增高.但ADM和VP-16作用CNE-2 48 h后细胞凋亡率的升高不如THP作用48h后明显.ADM、THP和VP-16诱导CNE-2细胞凋亡过程中出现Survivin的表达上调,但THP作用后表达上调的程度较ADM、VP-16低.[结论]TopoⅡ抑制剂THP、ADM和VP-16对CNE-2鼻咽癌细胞均具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用.含TopoⅡ抑制剂的化疗方案可能在鼻咽癌的治疗中具有一定价值.THP在诱导细胞凋亡时Survivin的上调不如ADM、VP-16明显,是否意味着临床使用中THP有较少的耐药性有待进一步研究.     

人宫颈癌顺铂耐药细胞系SiHa/cDDP的建立

目的建立人宫颈癌SiHa细胞对顺铂(cDDP)的耐药细胞系并分析其生物学特性。方法用化疗药物cDDP与人宫颈癌细胞系SiHa共培养,逐步增加培养液中cDDP浓度以诱导细胞产生耐药性,建立SiHa细胞对cDDP的耐药细胞系。利用MTT法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间并检测肿瘤细胞耐药指数(RI)。免疫细胞化学法检测细胞P-糖蛋白(P-gp)、胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)蛋白的表达。结果成功建立耐药细胞系SiHa/cDDP(耐cDDP 2μg/mL),倍增时间(45.82±3.69)h,对cDDP的RI为16.131,对多种化疗药物有不同程度交叉耐药。耐药细胞P-gp、GST-π表达较亲代细胞增多(P<0.01),TopoⅡ表达与亲代细胞间差异无统计学意义。结论本研究建立了人宫颈癌顺铂耐药细胞系SiHa/cDDP,为肿瘤细胞体外研究提供了理想的实验模型。     

拓扑异构酶Ⅱ与肿瘤化疗

DNA拓扑异构酶Ⅱ(topoisomeraseⅡ,TopoⅡ)是一种调整DNA拓扑结构的核酶,在几乎所有DNA代谢过程中发挥重要作用,已成为抗癌药物的重要作用靶点。作者介绍了TopoⅡ抑制剂的作用机制及其与肿瘤耐药关系方面的研究进展。