miR-381靶向HMGB1抑制子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的探究miR-381调控高迁移率组蛋白1(HMGB1)对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法采用qRT-PCR检测miR-381在子宫内膜癌细胞和正常子宫内膜细胞中的表达水平。转染miR-381mimic后,检测HEC1A细胞中miR-381和HMGB1的表达水平。生物信息学预测miR-381和HMGB1的靶向关系,并用荧光素酶报告实验加以验证。细胞分为HEC1A组、miR-381mimic组、pc-HMGB1组、mimic+pc-HMGB1组,采用CCK8法检测HEC1A细胞增殖能力,Transwell和划痕实验分别检测HEC1A细胞侵袭和迁移能力,蛋白印迹法检测HEC1A细胞中Ki67、PCNA、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达水平。结果 miR-381在正常子宫内膜细胞和癌细胞中存在表达差异。miR-381与HMGB1具有直接的靶向关系。与HEC1A组相比,miR-381组细胞增殖倍数、侵袭细胞数、划痕闭合率、Ki67、PCNA、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达均降低(P0.01),E-cadherin表达则增加(P0.01),pc-HMGB1组上述指标则相反(P0.01);与pc-HMGB1组相比,miR-381mimic+pc-HMGB1组细胞增殖倍数、侵袭细胞数、划痕闭合率、Ki67、PCNA、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达均降低(P0.01),E-cadherin表达增加(P0.01)。结论 miR-381通过靶向下调HMGB1表达,抑制HEC1A细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-29a靶向调控IFITM3表达对肝癌HepG2细胞生长、增殖和凋亡的影响

目的探究微小RNA-29a(miR-29a)靶向调控干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)表达对肝癌HepG2细胞生长、增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肝癌细胞HepG2和正常肝细胞株LO2中miR-29a的表达水平;采用脂质体法将miR-29a minmic及阴性对照转染至HepG2细胞,并分为过表达组和对照组,转染48 h后用QRCR法检测两组miR-29a水平;采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞增殖及凋亡情况; Western blotting检测各组Bax、caspase-3凋亡相关基因及IFITM3的表达;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-29a对IFITM3的靶向调控作用。结果肝癌HepG2细胞miR-29a水平低于正常LO2细胞(P 0. 05);过表达组HepG2细胞miR-29a表达低于对照组(P 0. 05);过表达组HepG2细胞增殖率低于对照组(P 0. 05),凋亡率及Bax、caspase-3、IFITM3表达高于对照组(P 0. 05); miR-29a可显著抑制野生型FITM3-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(P 0. 05),但其对突变型FITM3-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性无显著影响(P 0. 05)。结论 miR-29a在肝癌中表达降低,可靶向调控IFITM3表达,抑制肝癌细胞生长、增殖,并促进其凋亡,可作为肝癌的潜在治疗靶点。     

MicroRNA-664对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究microRNA-664(miR-664)对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用Lipofectamine 2000脂质体法将miR-664模拟剂(miR-664 mimics)、miR-664抑制剂(miR-664 inhibitor)转染至人脑胶质瘤细胞U251中,并设置相应对照组(miR-NC、anti-NC);采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-664的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况,划痕实验及Tanswell小室法检测各组细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞中核蛋白(Ki67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及MMP-9的表达。结果与miR-NC相比,转染miR-664 mimics后明显上调U251细胞中miR-664的表达,并促进U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著上调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05);与anti-NC相比,转染miR-664 inhibitor后明显下调U251细胞中miR-664的表达,并抑制U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著下调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05)。结论 miR-664可能通过上调Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达,促进人脑胶质瘤细胞U251细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为潜在的肿瘤标志物。     

miRNA-375对宫颈癌细胞系SiHa增殖能力和迁移能力的影响及相关机制研究

目的研究微小RNA-375(miR-375)对宫颈癌细胞系SiHa增殖能力和迁移能力的影响及相关机制。方法收集宫颈癌细胞系SiHa,将细胞随机分为A组(转染对照抑制剂)、B组(转染对照模拟基因)、C组(转染miR-375抑制剂)、D组(转染miR-375模拟基因)。通过实时荧光定量PCR法对SiHa细胞中miR-375的表达水平进行检测,并用免疫蛋白印迹法对磷脂酰肌醇激酶-3催化亚单位α(PIK3CA)蛋白的表达水平进行检测;采用MTT法对SiHa增殖活性进行检测,并用划痕实验对细胞迁移能力进行检测;采用双荧光素酶报告基因实验对miR-375与PIK3CA的靶向关系进行验证。结果采用生物学信息软件检测结果发现,miR-375与PIK3CA 3'-UTR存在结合位点。双荧光素酶报告基因检测结果可见,miR-375模拟基因+PIK3CA-Mut共转染组荧光素酶活性与对照模拟基因+PIK3CAMut共转染组比较,并无显著差异(P 0. 05);而相比对照模拟基因+PIK3CA-WT共转染组,共转染miRNA模拟基因和PIK3CA-WT后细胞荧光活性明显下降(P 0. 05)。相比A组,C组SiHa细胞中miR-375的相对表达量明显下降(P 0. 05);相比B组,D组SiHa细胞中miR-375的相对表达量明显增高(P 0. 05)。经免疫蛋白印迹法检测结果可见,相比A组,C组SiHa细胞中PIK3CA蛋白的表达水平明显增高(P 0. 05);相比B组,D组PIK3CA蛋白的表达水平明显下降(P 0. 05)。细胞培养后1 d、2 d、3 d,相比A组,C组SiHa细胞增殖活性明显升高(P 0. 05);相比B组,D组SiHa细胞增殖活性明显下降(P 0. 05)。划痕实验结果可见,相比A组,C组SiHa细胞迁移能力明显增强(P 0. 05);相比B组,D组SiHa细胞迁移能力明显减弱(P 0. 05)。结论 miR-375具有阻滞宫颈癌细胞增殖和迁移的作用,其作用机制可能与靶向调控PIK3CA密切相关。     

miR-135a靶向调控STAT6对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的分析微小RNA-135a(miR-135a)靶向调控信号传导和转录激活因子6(STAT6)对前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法选取DU145前列腺癌细胞株,细胞培养后分为空白组、miR-135a阴性对照组、miR-135a转染组,构建miR-135a慢病毒载体,空白组加入常规细胞培养液、生理盐水做空白处理,miR-135a阴性对照组加入miR-135aNC、Lipofectamine 2000试剂行无义序列转染,miR-135a转染组加Hsa-miR-135a、Lipofectamine 2000试剂行细胞转染。鉴定miR-135a转染效率及STAT6mRNA表达量,分析对细胞生物学行为、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bax蛋白的影响。结果与空白组相比,miR-135a阴性对照组miR-135a表达量降低,miR-135a转染组miR-135a表达量升高,差异具有统计学意义(P0.05),说明miR-135a转染成功。空白组、miR-135a阴性对照组、miR-135a转染组STAT6mRNA表达量、增殖、凋亡率、侵袭、迁移个数、MMP-2、MMP-9、TIMP-2、Bcl-2、Bax蛋白表达比较,差异具有统计学意义(P0.05);与miR-135a阴性对照组相比,miR-135a转染组STAT6mRNA表达量、细胞增殖率、侵袭、迁移个数、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量降低,细胞凋亡率、TIMP-2、Bax蛋白表达量升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 miR-135a对STAT6表达有一定的调控作用,通过调控MMP-2、MMP-9、TIMP-2表达抑制前列腺癌细胞迁移和侵袭,通过调控Bcl-2、Bax相关蛋白表达抑制前列腺癌细胞增殖,促进其凋亡,为临床前列腺癌靶向治疗提供理论依据。     

过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的作用

目的探讨过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移的影响。方法通过RT-PCR检测人子宫内膜上皮细胞HEEC和子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平。用Lipofiectamine~(TM)2000将miR-132-3p mimics及NC分别转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,分为miR-132-3p mimics组、NC组以及对照组,对照组不做处理。通过CCK8法检测24 h、48 h、72 h后,三组Ishikawa细胞的增殖情况。流式细胞仪检测转染后三组Ishikawa细胞的凋亡情况。Transwell小室检测三组Ishikawa细胞侵袭、迁移情况。Western-blot检测三组Ishikawa细胞B淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、BCL2-Associated X(Bax)、细胞增殖抗原标记物Ki-67(Ki-67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果与人子宫内膜上皮细胞HEEC相比,子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平显著下降。CCK8结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖受到抑制,Ki-67蛋白表达水平显著下降(P0.05)。流式检测结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa的凋亡率显著升高,Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。Transwell结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa侵袭及迁移能力受到抑制,MMP-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论 miR-132-3p在子宫内膜癌细胞Ishikawa中低表达,过表达miR-132-3p能够抑制细胞增殖、侵袭及迁移,并促进细胞凋亡。     

miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法回顾性收集2018年3月至2019年6月海南省人民医院收治的45例患者,取肺腺癌组织及癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测组织中miR-1290的表达。将肺腺癌细胞随机分为对照组、miR-1290 mimic组和miR-1290 inhibitor组,通过脂质体2000试剂盒,分别以无意义序列、miR-1290 mimic、miR-1290 inhibitor转染细胞。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell小室、划痕实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法检测Cyclin D1、p27、基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)蛋白的表达。经在线生物信息学和双荧光素酶报告基因检测miR-1290的靶基因,荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测miR-1290靶基因的表达。结果与癌旁组织比较,肺腺癌组织中miR-1290表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组miR-1290表达明显增加,miR-1290 inhibitor组miR-1290表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。培养48 h时,与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显增加,miR-1290 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞周期蛋白Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显增加、p27蛋白表达明显降低,miR-1290 inhibitor组Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显降低、p27蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,与对照组比较,共转染INPP4B-WT、miR-1290 mimic细胞中荧光表达量明显降低(P<0.05);与对照组比较,miR-1290 mimic组二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(INPP4B)mRNA和蛋白表达量明显降低,miR-1290 inhibitor组INPP4B mRNA和蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论miR-1290在肺腺癌组织中表达上调,miR-1290可能靶向抑制INPP4B水平,促进肺腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-145通过调控MMP-2、MMP-9的表达对卵巢癌细胞调亡、增殖、迁移的影响

目的研究微小RNA-145(miR-145)通过调控基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达对卵巢癌细胞调亡、增殖、迁移的影响。方法将卵巢癌细胞株随机分为3组,其中对照组为单纯卵巢癌细胞株,不做其他处理,进行正常培养;miR-145组为含miR-145质粒的慢病毒转染的卵巢癌细胞株;NC组为含NC质粒的慢病毒转染的卵巢癌细胞株。检测3组卵巢癌细胞的凋亡、增殖、迁移情况。检测3组MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达水平。结果与对照组、NC组比较,miR-145组卵巢癌细胞凋亡率明显升高,卵巢癌细胞增殖数、迁移数明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组与NC组卵巢癌细胞凋亡率、增殖数、迁移数差异无统计学意义(P>0.05)。miR-145组MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达水平均低于NC组、对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组与NC组MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-145可抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移,促进调亡,其作用机制可能与miR-145能降低MMP-2、MMP-9的表达有关。     

miR-21对晶状体上皮细胞增殖、迁移的影响

目的探讨miR-21对晶状体上皮细胞增殖、迁移的影响。方法人晶状体上皮细胞(HLE-B3)随机分为三组,实验组转染miR-21模拟剂(mimic),对照组转染miR-21阴性对照(NC),空白组加入等剂量的磷酸盐缓冲液(PBS)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,双染法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移,Western-blot检测细胞Bcl-2、Akt蛋白表达。对三组上述各指标进行比较。结果转染48 h后,实验组中miR-21相对表达水平显著上升,与空白组、对照组比较差异均有统计学意义(P 0. 05)。转染24 h、48 h后,实验组的细胞增殖活性显著低于空白组与对照组(P 0. 05);转染48 h后,实验组的细胞凋亡率显著高于空白组与对照组(P 0. 05),迁移距离与过膜细胞数都显著少于空白组与对照组(P 0. 05)。转染48 h后,实验组的Bcl-2、Akt蛋白表达水平显著低于空白组与对照组(P 0. 05),空白组与对照组对比差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 miR-21能通过调节晶状体上皮细胞中Bcl-2、Akt蛋白的表达,从而抑制细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。     

HPV16 E6调控miR-23a表达促进宫颈癌细胞侵袭、迁移

目的 探讨高危型人乳头瘤病毒16 E6蛋白（HPV16 E6蛋白）调控miR-23a表达对宫颈癌细胞SiHa侵袭、迁移的作用。方法 选取100例宫颈癌HPV阴性患者、100例HPV阳性患者的组织标本、100例癌旁正常组织;宫颈癌SiHa细胞分为空白组、E6过表达组、阴性转染组、E6+miR-23a mimics组;qRTPCR法检测miR-23a、HPV16 E6 mRNA表达;MTT法检测增殖抑制率;流式细胞仪检测凋亡;Transwell小室实验检测细胞侵袭;划痕实验检测细胞迁移;WB检测HPV16 E6、凋亡相关蛋白（Caspase-3、Bax、Bcl-2）、迁移相关蛋白（MMP-2、MMP-9）的表达。结果 宫颈癌组织中miR-23a表达降低,其中宫颈癌HPV阳性组织中miR-23a表达水平更低。E6过表达降低miR-23a表达水平、细胞增殖抑制率、凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达,增高Bcl-2蛋白、划痕愈合率、侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9蛋白表达（P <0.05）;miR-23a mimics逆转了E6过表达对上述各项指标的影响。结论 HPV16 E6促...     

miR-543调控肾透明细胞癌细胞增殖和侵袭的机制分析

目的探讨与分析miR-543调控肾透明细胞癌(CCRCC)细胞增殖和侵袭的机制。方法 CCRCC细胞系ACHN随机分为三组:空白组、阴性对照(NC)组与miR-543组,NC组与miR-543组分别转染照NC与miR-543模拟剂,空白组不进行转染。MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞转移与侵袭比率,Western blot检测蛋白表达水平。结果转染后24 h与48 h,与NC组与空白组相比,miR-543组的细胞增殖抑制率显著增加(P0. 05),细胞凋亡率显著增加(P 0. 05),细胞转移与侵袭相对数显著降低(P 0. 05),SDF-1、CXCR7蛋白相对表达量显著降低(P 0. 05),NC组与空白组比较差异无统计学意义(P 0. 05)。且miR-543对细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、细胞转移与侵袭、SDF-1和CXCR7蛋白相对表达量的影响均不具有时间依赖性。结论 miR-543能抑制调控肾透明细胞癌细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡,且不具有时间依赖性,其作用机制可能与抑制SDF-1/CXCR7表达有关。     

干扰miR-21调控人前列腺癌 细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的实验研究

目的观察干扰微小RNA-21(miR-21)对人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的影响,并初步探讨其调控机制。方法收集对数期生长PC-3细胞株及人前列腺正常上皮细胞株RWPE-1,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并对比其miR-21基因表达情况。取对数期生长PC-3细胞株,采用脂质体转染法将miR-21抑制剂(inhibitor)及NC inhibitor质粒转染至PC-3细胞,分别设为干扰组和空载组,另取不做处理PC-3细胞为空白组。采用倒置荧光显微镜检测转染效率;采用MTT法检测并对比各组不同时刻吸光度(OD值);采用划痕试验及Transwell试验检测并对比三组穿膜细胞数及迁移率;采用RT-PCR法检测并对比三组miR-21、基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测并对比三组TIMP3、MMP-9蛋白表达水平。结果 PC-3细胞miR-21相对表达量显著低于RWPE-1细胞(P 0. 05);倒置显微镜下检测转染24 h后干扰组和空载组转染效率分别为(82. 16±8. 20)%、(80. 23±8. 69)%;干扰组MTT实验不同时刻OD值均显著低于空白组和空载组(P 0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P 0. 05),三组MTT实验OD值均随时间延长呈显著升高趋势(P 0. 05);干扰组12 h、24 h迁移率均显著低于空白组和空载组(P 0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P 0. 05),三组24 h迁移率显著高于12 h(P 0. 05);干扰组穿膜细胞数显著少于空白组和空载组(P 0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P 0. 05);干扰组miR-21相对表达量、MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量显著低于空白组和空载组(P 0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P 0. 05);干扰组TIMP3 mRNA和蛋白相对表达量显著高于空白组和空载组(P 0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P 0. 05)。结论前列腺癌细胞miR-21异常高表达,干扰miR-21可抑制人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭能力,可能与上调TIMP3 mRNA和蛋白、下调MMP-9 mRNA和蛋白有关。     

miR-128对胶质母细胞瘤U87细胞侵袭性的影响及作用机制

目的探讨miR-128对胶质母细胞瘤U87细胞侵袭性的影响及其作用机制。方法采用RTPCR法测定胶质母细胞瘤U87细胞和SHG-44细胞中miR-128的表达情况,应用Transwell侵袭和迁移实验检测U87细胞的侵袭性,采用荧光素酶报告基因分析法检测miR-128调节的靶基因,应用Western blot分析法检测MMP-7蛋白的表达情况,并与阴性对照组(NC组)进行比较。结果 miR-128在SHG-44细胞、U87细胞中的表达量分别为1.00±0.13、0.52±0.16,差异有统计学意义(P0.05)。与NC组比较,肿瘤细胞高表达miR-128时两组穿膜细胞数分别为445±23、313±59,差异有统计学意义(P0.05)。与NC组比较,肿瘤细胞过度表达miR-128时,MMP-7蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-128通过负性调控MMP-7蛋白的表达以抑制U87细胞的侵袭,提示miR-128可作为临床靶向治疗胶质母细胞瘤的关键。     

miR-92a靶向PTEN促进宫颈癌细胞增殖

目的 探讨微小RNA-92a(miR-92a)对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响,并对其相关的分子机制进行初步探索。方法 采用脂质体瞬转法向宫颈癌细胞SiHa和HeLa分别转染miR-92a inhibitor(inhibitor组)及其阴性对照(NC组),设未处理的宫颈癌细胞为空白对照组。转染48 h后,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞miR-92a和第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN) mRNA的相对表达量,CCK-8试验和流式细胞术分别检测各组细胞活率和凋亡率,Western blotting检测细胞通路蛋白PTEN和磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)表达情况。结果 与空白对照组比较,inhibitor组miR-92a相对表达量明显降低(P<0.001),PTEN mRNA相对表达量明显升高(P<0.01);与空白对照组和NC组比较,inhibitor组在各时间点细胞活率明显下降(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与空白对照组和NC组比较,inhibitor组PTEN蛋白表达增加,p-AKT蛋白表达降低。结论...     

长链非编码RNA HOTAIR靶向miR-1对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探究长链非编码RNA (Long non-coding RNA,LncRNA)HOTAIR对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移能力的作用及机制。方法 RT-PCR检测胶质瘤细胞株U87、U251、U118和LN18中HOTAIR的表达水平和shRNA HOTAIR (sh-HOTAIR)转染U251细胞细胞后HOTAIR和miR-1的表达水平。生物信息预测HOTAIR和miR-1的靶向关系,荧光素酶报告实验验证两者靶向关系。将细胞分为Control、sh-HOTAIR、miR-1inhibitor和sh-HOTAIR+inhibitor组,用sh-HOTAIR和miR-1inhibitor分别或同时转染细胞,CCK8检测各组细胞活性,流式检测细胞凋亡,Transwell和划痕实验分别检测细胞侵袭和迁移能力,免疫印迹检测Ki67、Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的表达。结果 HOTAIR在U251细胞中表达水平最高,因此选择U251细胞进行后续实验;sh-HOTAIR能显著降低U251细胞HOTAIR的表达水平,升高miR-1的表达水平;miR-1mimic能显著降低HOTAIR野生质粒的荧光素酶活性;与Control组比较,sh-HOTAIR组细胞增殖速度、Ki67和Bcl-2表达水平明显降低,细胞凋亡水平和Bax表达水平明显升高;sh-HOTAIR组比较,sh-HOTAIR+inhibitor组细胞增殖速度、Ki67和Bcl-2表达水平明显升高,细胞凋亡水平和Bax表达水平明显降低;同时,sh-HOTAIR组侵袭细胞数与Control组比较明显减少,划痕闭合率明显降低;sh-HOTAIR+inhibitor侵袭细胞与sh-HOTAIR比较显著增多,划痕闭合率明显升高;此外,sh-HOTAIR能显著降低MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平,miR-1inhibitor能显著减弱sh-HOTAIR对MMP-2和MMP-9表达的抑制作用。结论 HOTAIR能通过靶向抑制miR-1的表达促进胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-152对SHI-1细胞增殖、转移及致瘤性的调控机制

目的:探究miR-152对人急性单核细胞白血病细胞系SHI-1增殖、转移及致瘤性的调控机制。方法:将购买的SHI-1细胞系进行miR-152过表达(miR-152 agomir组)或抑制处理(miR-152 antagomir组)并设置阴性对照组(NC组)。应用CCK-8法检测各组细胞活力,划痕愈合实验检测各组细胞迁移能力,Transwell法检测各组细胞侵袭能力,Western blot检测各组细胞Cyclin D1、Caspase-3、MMP-2、TIMP-2、E-cadherin和N-cadherin的表达,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,裸鼠成瘤实验检测各组细胞的致瘤性。结果:与NC组相比,miR-152 agomir组细胞活力显著下降,细胞迁移和侵袭能力均显著下降(P0.05),而miR-152antagomir组的细胞活力以及细胞迁移和侵袭能力均显著上升(P0.05)。与NC组相比,miR-152 agomir组细胞Cyclin D1、MMP-2、N-cadherin蛋白表达均显著下调(P0.05),但Caspase-3、TIMP-2和E-cadherin的表达在上述各组中明显升高;同时,细胞凋亡增强,裸鼠致瘤性降低(P0.05)。miR-152 antagomir组Cyclin D1、MMP-2和N-cadherin被显著诱导,但该组Caspase-3、TIMP-2和E-cadherin的蛋白表达显著下调;同时,细胞凋亡减少,裸鼠致瘤性增强(P0.05)。结论:miR-152能抑制SHI-1细胞系增殖、转移及致瘤的能力,同时诱导细胞凋亡,其机制可能与miR-152调控MMP-2以及TIMP-2等侵袭转移相关因子有关联。     

miR-625靶向HMGA1对食管癌细胞生物学行为的影响及机制

目的分析miR-625靶向高迁移率族蛋白A1(HMGA1)对食管癌细胞生物学行为的影响及机制。方法收集2018年3月—2019年3月经手术切除的食管癌组织及癌旁组织(距癌组织≥5 cm)标本,体外培养食管癌细胞系(KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706)和正常食管上皮细胞HET-1A,采用RT-qPCR检测不同组织和细胞中miR-625的表达。将miR-625 mimic、miR-625 inhibitor转染ECA109细胞,采用CCK-8实验、流式细胞仪、Transwell小室实验和划痕实验检测miR-625对ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移的影响,Western blot检测增殖、侵袭和迁移相关蛋白的表达。经生物信息学软件在线预测miR-625靶基因,通过RT-qPCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测验证靶向关系。同时干预miR-625和HMGA1,检测ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移。结果 miR-625相对表达量,食管癌组织低于癌旁组织,食管癌细胞系KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706低于正常食管上皮细胞HET-1A(P0.05)。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组miR-625相对表达量、处于G1期细胞比例及p21、E-cadherin表达升高,细胞增殖、侵袭、迁移能力及处于S期细胞比例、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin表达降低(P0.05);miR-625 inhibitor组可逆转上述作用(P0.05)。miR-625与HMGA1 3'端非编码区存在结合位点。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组细胞中相对荧光素酶活性和HMGA1表达降低(P0.05)。与pcDNA3.1-HMGA1组比较,miR-625+HMGA1组HMGA1表达及细胞增殖、侵袭、迁移能力降低,处于G1期细胞比例升高(P0.05)。结论 miR-625在食管癌中低表达,miR-625过表达可靶向HMGA1抑制食管癌细胞的增殖、侵袭与迁移。     

miR-15b-5p通过靶向LATS2基因调控 前列腺癌细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的探讨miR-15b-5p靶向大肿瘤抑制分子(LATS2)基因对前列腺癌PC-3细胞侵袭、迁移及凋亡的影响及机制。方法将anti-miR-15b-5p及anti-miR-15b-5p+si-LATS2(同时抑制miR-15b-5p和LATS2表达)转染前列腺癌PC-3细胞,48 h后,通过qRT-PCR检测miR-15b-5p mRNA表达,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。双荧光素酶报告系统检测miR-15b-5p与LATS2的靶向关系。Western blotting检测LATS2、β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达。结果 PC-3细胞转染anti-miR-15b-5p后,miR-15b-5p mRNA表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P 0. 05)。miR-15b-5p与LATS2存在靶向关系,抑制LATS2表达后可明显减弱anti-miR-15b-5p对PC-3细胞侵袭、迁移、凋亡及β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达的影响(P 0. 05)。结论抑制miR-15b-5p可明显降低前列腺癌PC-3细胞的侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其机制与靶向LATS2抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

长链非编码RNA MALAT1对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制

目的探究长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)对口腔鳞癌细胞(OSCC)的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法转染小干扰MALAT1(si-MALAT1)至TSCCA细胞分为空白组、si-NC组、siMALAT1组;转染小干扰对照(si-NC)、si-MALAT1、抑制剂对照(inhibitor-NC)、miR-218inhibitor至TSCCA细胞分为空白组、si-NC+inhibitor-NC组、si-MALAT1+inhibitor-NC组、si-NC+miR-218inhibitor组、si-MALAT1+miR-218inhibitor组。qRT-PCR、WB法检测MALAT1、miR-218、Fbxw8表达; MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆形成试验检测菌落形成; Transwell检测细胞迁移、侵袭能力;荧光素酶活性检测MALAT1、miR-218、Fbxw8三者靶向调控关系。结果与正常HIOE细胞系相比,TSCCA细胞系中MALAT1、Fbxw8表达均升高,miR-218表达均降低(P 0. 05)。与空白组、si-NC组相比,si-MALAT1组MALAT1表达、细胞菌落、迁移、侵袭数量降低,miR-218表达、细胞抑制率升高,差异均有统计学意义(P 0. 05)。在MALAT1 3'UTR-Mut细胞中,miR-218 mimis组荧光素酶活性低于miR-218NC组(P 0. 05)。与空白组、si-NC+inhibitor-NC组、si-MALAT1+miR-218inhibitor组相比,si-NC+miR-218inhibitor组MALAT1表达、菌落、细胞侵袭、迁移数量、Fbxw8蛋白表达升高,miR-218表达降低; si-MALAT1+inhibitor-NC组MALAT1表达、菌落、细胞侵袭、迁移数量、Fbxw8蛋白表达降低,miR-218表达升高(P 0. 05)。在Fbxw83'UTR-Mut细胞中,miR-218 mimis组荧光素酶活性低于miR-218 NC组(P 0. 05)。结论在OSCC中MALAT1、Fbxw8表达上调,miR-218表达下调,MALAT1可能通过miR-218介导Fbxw8调控OSCC的增殖、迁移和侵袭。     

苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响

目的探讨苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及其机制。方法采取体外培养MDA-MB-231细胞进行分组,苦瓜多糖组给予不同浓度苦瓜多糖(0μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml),空白组(苦瓜多糖0μg/ml)培养基中含有与苦瓜多糖组等浓度的DMSO,将各组细胞孵育分别培养至12 h、24 h、48 h处理。MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测后细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体变化,Trans well法检测细胞迁移率,免疫组化检测Ki67与Caspase-3阳性率,Western-blot检测MMP-9、Bcl-2、Bax表达水平,RT-PCR检测细胞周期蛋白(CyclinD1)、血管内皮生长因子(VEGF)表达量;体内建立移植瘤裸鼠模型,试验组裸鼠采用苦瓜多糖(120μg/ml)灌胃治疗,早晚一次,1 ml/次,对照组裸鼠灌胃等体积的生理盐水,两组裸鼠治疗6周后测量肿瘤质量、观察肿瘤体积变化。结果与空白组相比,苦瓜多糖组癌细胞增值率与迁移能力随苦瓜多糖剂量增加而降低(P 0. 05),细胞凋亡率、凋亡小体数量随着药用剂量增加而升高(P 0. 05); Western-blot检测结果显示苦瓜多糖组MMP-9、Bcl-2表达水平低于空白组(P 0. 05),Bax表达水平高于空白组(P 0. 05); RT-PCR结果显示苦瓜多糖组CyclinD1、VEGF表达量显著低于空白组(P 0. 05)。试验组肿瘤组织中的Ki67蛋白水平、肿瘤体积、肿瘤质量显著低于对照组(P 0. 05),而试验组肿瘤组织中Casppase-3蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05)。结论苦瓜多糖可以通过调控细胞周期、凋亡、迁移侵袭相关蛋白及基因表达,进而调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为。