微小RNA-126对卡波西肉瘤细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨卡波西肉瘤细胞系转染微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)后对细胞迁移和侵袭能力影响。方法卡波西肉瘤细胞株SLK随机分为miR-126模拟物组、阴性对照组、miR-126抑制物组和抑制物阴性对照组,分别将miR-126模拟物25ng、阴性对照25ng、miR-126抑制物250ng和抑制物阴性对照250ng加入转染试剂3μL,室温孵育10min形成转染混合物,分别转染到4组细胞悬液中,孵育48h后行Transwell小室迁移实验和侵袭实验,将Transwell小室基底膜完整切除,行苏木精染色,光学显微镜下计数细胞迁移数目和细胞侵袭数目。结果 miR-126模拟物组细胞迁移数目[(77.33±7.02)个]和细胞侵袭数目[(25.67±2.52)个]较阴性对照组[(96.67±6.11)、(45.67±2.08)个]、miR-126抑制物组[(138.00±8.00)、(76.67±4.16)个]和抑制物阴性对照组[(101.33±9.29)、(47.33±1.53)个]少(P0.05);miR-126抑制物组细胞迁移和侵袭数目较阴性对照组和抑制物阴性对照组多(P0.05);阴性对照组细胞迁移和侵袭数目与抑制物阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 miR-126对卡波西肉瘤细胞侵袭和迁移起抑制作用,可能成为卡波西肉瘤的潜在治疗靶点。     

miR-20b对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制

目的:研究miR-20b在卵巢癌细胞系中的表达及其对迁移和侵袭的影响。方法:采用qRT-PCR检测卵巢癌细胞系HO8910,A2780,SKOV3与正常卵巢细胞系Hose中miR-20b的表达水平。将A2780细胞系分成两组,miR-20b模拟物组和阴性对照组,分别转染miR-20b mimics和阴性对照质粒;细胞划痕实验和Transwel l实验分别测定两组细胞迁移和侵袭能力,qRT-PCR和Western印迹分别测定两组血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)mRNA和蛋白表达水平。结果:miR-20b在卵巢癌细胞系HO8910,A2780,SKOV3中低表达,分别为0.30±0.05,0.23±0.03及0.10±0.02,显著低于Hose细胞系的1.00±0.03(P<0.001)。miR-20b模拟物组划痕愈合率为23.20%±3.50%,阴性对照组为65.70%±8.30%,miR-20b模拟物组划痕愈合率显著低于阴性对照组(P<0.01)。miR-20b模拟物组侵袭细胞数为(21.3±4.5)个,阴性对照组为(73.5±6.7)个,miR-20b模拟物组侵袭细胞数显著少于阴性对照组(P<0.01)。miR-20b模拟物组VEGF mRNA相对表达量为0.30±0.02,而阴性对照组为1.00±0.05,miR-20b模拟物组VEGF mRNA表达量显著低于阴性对照组(P<0.001)。miR-20b模拟物组VEGF蛋白表达量为118.00±8.00,显著低于阴性对照组的180.00±5.90(P<0.05)。结论:miR-20b在卵巢癌细胞系中低表达,过表达miR-20b抑制卵巢癌细胞转移与侵袭,可能通过下调VEGF发挥抑癌作用。     

miR-142-2p通过TCF7调控骨肉瘤细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的研究miR-142-2p对骨肉瘤细胞迁移、侵袭、凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用Western blot检测癌旁组织、骨肉瘤组织或U-2OS细胞中TCF7的蛋白表达;将miR-142-3p组(转染miR-142-3p mimics)、miR-con组(转染miR-con)、si-TCF7组(转染si-TCF7)、si-con组(转染si-con)均用脂质体法转染至U-2OS细胞; qRT-PCR法检测各组细胞中miR-142-2p的表达; Transwell法检测各组细胞的迁移、侵袭;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与癌旁组织相比,骨肉瘤组织中miR-142-3p表达显著降低,TCF7表达显著升高(P 0. 05);过表达miR-142-3p、敲减TCF7可抑制U-2OS细胞的迁移侵袭,促进凋亡; miR-142-3p可靶向负调控TCF7的表达。结论 miR-142-3p可抑制骨肉瘤细胞迁移、侵袭,促进凋亡,其机制可能与靶向TCF7有关,将可为骨肉瘤的治疗提供新靶点。     

lncRNA TTN-AS1调控miR-134-5p/MBTD1信号轴促进骨肉瘤的生长和转移

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA) TTN-AS1对骨肉瘤生长和转移的影响及机制。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TTN-AS1在hFoB1.19、U2-OS、MG-63、SOSP-9607、SAOS2细胞中的表达水平,将其中TTN-AS1表达水平最高的SAOS2细胞分为Control组(未转染)、si-NC组[转染TTN-AS1小干扰RNA(siRNA)阴性对照]、si-TTN-AS1组(转染TTN-AS1 siRNA)、si-TTN-AS1+微小RNA(miR)-134-5p inhibitor组(共转染TTN-AS1 siRNA和miR-134-5p inhibitor)、si-TTN-AS1+含MBT结构域蛋白1(MBTD1)组(共转染TTN-AS1 siRNA和MBTD1质粒)。采用CCK8法检测细胞的增殖能力,Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证TTN-AS1与miR-134-5p的靶向关系以及miR-134-5p与MBTD1的靶向关系。结果 TTN-AS1在U2-OS、MG-63、SOSP-9607、SAO...     

沉默SETD8基因表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用

目的探究siRNA下调含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶) 8(SETD8)基因表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的机制。方法采用脂质体法将特异性针对SETD8基因的siRNA转入骨肉瘤MG-63细胞中,得到关于SETD8基因沉默表达的MG-63稳定的细胞系即实验组,将杂序siRNA用脂质体法同时转染骨肉瘤MG-63细胞,得到关于Control siRNA的MG-63细胞系即对照组,未经转染的骨肉瘤MG-63的稳定的细胞系即空白组。以上三组细胞系通过应用细胞毒性活性检测法(CCK-8法)、平板克隆法同时检测被SETD8基因沉默后骨肉瘤MG-63细胞的增殖能力,侵袭迁移小室即(Transwell小室)法检测骨肉瘤MG-63细胞的侵袭和迁移能力,实时荧光定量法即(PCR法)以及蛋白质印迹法即(Western Blot法)检测SETD8基因沉默表达效果及细胞内SETD8,β-catenin,cyclin D1,vimentin、MMP3的mRNA和相应蛋白的表达水平。结果 SETD8 siRNA转染后,骨肉瘤MG-63细胞的增殖能力显著低于对照组(control siRNA转染MG-63细胞)和空白组(未经转染的MG-63细胞)(P 0. 05); Transwell小室结果显示,沉默SETD8基因组的侵袭和迁移能力明显下降;实验组(SETD8 siRNA转染MG-63细胞)中SETD8、β-catenin、cyclin D1、vimentin、MMP3的mRNA及蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(P 0. 05)。结论 siRNA下调SETD8基因表达可以抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖、侵袭和迁移能力,Wnt/β-catenin信号通路可能参与并调控这一过程。     

miR-33b靶向HMGA2基因表达抑制食管癌细胞迁移的实验研究

目的研究miR-33b靶向高迁移率族蛋白A2(HMGA2)基因表达抑制食管癌细胞迁移的作用。方法培养食管癌Eca9706细胞,转染阴性对照(NC)模拟物、miR-33b模拟物、NC-siRNA、HMGA2-siRNA、pcDNA3.0空白质粒、pcDNA3.0-HMGA2质粒后,采用Transwell及划痕实验检测细胞的迁移,采用荧光定量PCR及western blot检测mi R-33b、HMGA2表达量,采用双荧光素酶报告基因验证miR-33b对HMGA2的靶向调节作用。结果转染miR-33b模拟物后mi R-33b的表达量明显增加,HMGA2的表达量明显减少,细胞的迁移明显受到抑制;转染HMGA2-siRNA后HMGA2的表达量明显减少,细胞的迁移明显受到抑制;转染pcDNA3.0-HMGA2质粒后HMGA2的表达量明显增加且miR-33b抑制细胞迁移的作用发生逆转;双荧光素酶报告基因证实miR-33b靶向HMGA2 m RNA的3’UTR。结论 miR-33b直接靶向HMGA2并抑制食管癌细胞的迁移。     

miR-138-5p过表达在骨肉瘤MG63细胞及多药耐药细胞MG63/Dox对阿霉素敏感性中作用

目的 探讨骨肉瘤MG63细胞及骨肉瘤多药耐药细胞MG63/Dox对阿霉素的敏感性与miR-138-5p过表达的关系.方法 采用脂质体将miR-138-5p mimics、miR-con分别转染至骨肉瘤MG63细胞及骨肉瘤多药耐药MG63/Dox细胞,分为miR-138-5p过表达MG63细胞组与MG63细胞对照组、mi...     

上皮性卵巢癌患者血和组织miR-200b表达水平及其与肿瘤侵袭程度的相关性分析

目的分析上皮性卵巢癌患者血浆和卵巢组织中微小RNA-200b(miR-200b)的表达水平及其与肿瘤侵袭程度的相关性。方法回顾性选取解放军第九七医院44例经手术病理确诊的上皮性卵巢癌患者为上皮性卵巢癌组,另同期选取32例因子宫腺肌病、子宫肌瘤和其它非卵巢病变行手术切除者为对照组。通过实时荧光定量PCR法对两组患者血浆和卵巢组织中miR-200b mRNA的表达水平进行检测;将人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞分为空白对照组(未转染任何质粒)、阴性对照组(转染非特异序列siRNA)及实验组(转染miR-200b抑制物)。采用transwell细胞侵袭实验以观察肿瘤细胞的侵袭能力,并采用Western blot法测定基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平,并用实时荧光定量PCR法对MMP-9 mRNA相对表达量进行检测。结果上皮性卵巢癌组血浆中miR-200b mRNA的表达水平较对照组明显升高,且卵巢组织中miR-200b mRNA的表达水平较对照组亦明显升高(P 0. 01)。miR-200b抑制物经人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞转染后,实验组miR-200b mRNA表达水平较空白对照组、阴性对照组明显下降(P 0. 01)。Transwell细胞侵袭实验结果发现,miR-200b抑制物经人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞转染后,实验组transwell小室下层细胞数量较空白对照组、阴性对照组明显减少(P 0. 01)。相比空白对照组、阴性对照组,干扰miR-200b基因表达后实验组SK-OV-3细胞中MMP-9蛋白和mRNA的表达水平均显著下降(P 0. 01)。结论 MiR-200b高表达于上皮性卵巢癌患者血浆和卵巢组织中,其可能通过调节MMP-9蛋白和mRNA的表达水平以诱导上皮性卵巢癌细胞的迁移和侵袭。     

miR-21在脂多糖诱导的人鼻黏膜上皮细胞中表达变化及作用机制

目的 探讨微RNA-21（miR-21）在脂多糖诱导的人鼻黏膜上皮细胞（HNEpC）中表达变化及可能的作用机制。方法 应用脂多糖诱导建立HNEpC炎症反应细胞模型,分别应用荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法检测炎症细胞模型建立前后miR-21和磷酸酶及张力蛋白同源物 （PTEN）蛋白的表达水平变化。取脂多糖诱导的HNEpC细胞,分为miR-21抑制物组和阴性对照组,应用脂质体转染法分别将miR-21抑制物和阴性对照物转染入2组HNEpC细胞,比较转染后2组细胞中miR-21和PTEN蛋白的表达、细胞增殖活性和凋亡率以及细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的水平。结果 脂多糖诱导的HNEpC细胞中miR-21表达水平增高（P < 0.05）,PTEN蛋白的表达水平降低（P < 0.05）。miR-21抑制物组细胞中miR-21表达水平低于阴性对照组（P < 0.05）,转染后24、48、72 h后的吸光度值均低于阴性对照组（P均 < 0.05）,凋亡率高于阴性对照组（P < 0.05）,并且细胞上清液中TNF-α、IL-1β及IL-6水平均低于阴性对照组（P均 < 0.05）,IL-10水平高于阴性对照组（P < 0.05）,细胞中PTEN蛋白的表达水平高于阴性对照组（P < 0.05）。结论 miR-21在脂多糖诱导的HNEpC炎症反应细胞模型中表达升高,抑制miR-21可显著抑制脂多糖诱导的HNEpC细胞的增殖活性和炎症反应,同时促进其凋亡,其机制可能与其对PTEN基因的调控有关。     

miR-155在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中的表达及其对细胞生物学特性的影响

目的:探讨miR-155在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达,以及转染miR-155抑制物对DLBCL细胞生物学特性的影响。方法:选取2013年4月至2017年12月在本院接受治疗的DLBCL患者76例,同时选取因淋巴结反应性增生就诊的40例患者作为对照组。取2组患者组织标本。培养DB细胞并将其分为miR-155抑制物组、阴性对照组和空白组。使用实时荧光定量PCR技术检测DLBCL组和对照组组织及细胞中miR-155的表达;应用MTT法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力。结果:DLBCL患者组织中miR-155相对表达量(1.93±0.16)明显高于对照组(1.01±0.09)(t=33.991,P=0.000)。miR-155表达量在乳酸脱氢酶水平异常、BCL-2~+、MUM1~+和Ki-67≥50%、病理类型非GC型、Ann Arbor分期Ⅲ-Ⅳ期、结外病变数≥2和IPI评分3-5分的DLBCL患者组织中升高(P0.05);miR-155抑制物组细胞中miR-155相对表达量明显低于阴性对照组和空白组(P0.05),miR-155抑制物组细胞在培养24、48、72和96 h时吸光度A值明显低于阴性对照组和空白组(P0.05),而细胞凋亡率则明显高于阴性对照组和空白组(P0.05);miR-155抑制物组迁移细胞数和侵袭细胞数明显低于阴性对照组和空白组(P0.05)。结论:miR-155在DLBCL患者组织中呈高表达,且与肿瘤恶性程度和侵袭进展有关,在特异性抑制DB细胞中miR-155的表达可减少细胞增殖,加速细胞凋亡,抑制细胞迁移及侵袭。     

p53通路抑制FANCD2基因的表达来诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡

目的研究与骨肉瘤(OS)和范可尼贫血(FA)相关联的通路和分子机制。方法进行范可尼贫血互补群D2(FANCD2)的siRNA构建并转录至骨肉瘤细胞株MG-63细胞中。通过Western blot方法检测MG-63细胞中FANCD2蛋白表达。结果在MG-63细胞中,FANCD2基因表达受到抑制,诱导细胞调亡。p53信号通路介导细胞凋亡。FANCD2基因表达抑制后,TP53INP1基因表达上调,促进p53的磷酸化,p21蛋白被激活,导致依赖半胱天冬酶介导的细胞凋亡。结论抑制FANCD2基因表达可以诱导骨肉瘤细胞凋亡。     

miR-21靶向调控PTEN/PI3K/AKT通路对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 检测微小核糖核酸（micro RNA, miR）-21在人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和MG-63中的表达,并探讨miR-21对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法 实时荧光定量PCR法(real-time fluorescent quantitative PCR, qRT-PCR)检测人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和MG-63中miR-21的表达。选择MG-63细胞随机分为3组,利用脂质体2000分别转染空白对照（control）、阴性对照miR-21-NC及抑制剂组（miR-21-inhibitor）,再通过qRT-PCR法验证转染后MG-63细胞中miR-21表达。CCK-8法检测MG-63细胞增殖能力变化;流式细胞技术检测抑制miR-21表达对MG-63细胞凋亡的影响;Transwell实验检测对MG-63细胞侵袭能力的影响以及采用Western blot检测抑制miR-21表达对MG-63细胞中PTEN,PI3K,AKT及p-AKT蛋白表达的影响。结果 人骨肉瘤细胞系Saos-2,U2OS和MG-...     

沉默IL-37表达对骨肉瘤细胞的影响及其作用机制研究

目的 探讨IL-37对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 定量逆转录PCR（RT-qPCR）检测人正常成骨细胞（hFOB1.19）和骨肉瘤细胞（U2OS、MG63、Saos-2）中IL-37 mRNA的表达情况;设计沉默IL-37的小干扰RNA（siRNA）序列转染骨肉瘤细胞系,将转染干扰序列si...     

沉默Sema6A基因对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和转移的影响

目的检测信号素6A(Sema6A)基因在骨肉瘤细胞系中的表达情况,探讨RNA干扰Sema6A基因对骨肉瘤U-2OS细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨肉瘤细胞株U-2OS、Saos-2及MG-63中Sema6A的mRNA表达水平。设计并合成针对Sema6A的小干扰RNA(siRNA)3条及阴性对照siRNA,在Lipofectamine RNAi MAX介导下转染U-2OS细胞,通过qRT-PCR检测Sema6A mRNA水平表达及蛋白质印迹法检测Sema6A蛋白水平,进而筛选出转染效率高的siRNA,CCK-8检测各组细胞活力,Transwell细胞侵袭和迁移实验检测各组细胞的侵袭及迁移能力。结果骨肉瘤细胞株中,Sema6A mRNA在U-2OS中表达最高。瞬时转染Sema6A siRNA的U-2OS细胞中Sema6A的mRNA及蛋白水平较阴性对照组均下降,与阴性对照组相比,实验组细胞的增殖、侵袭及迁移能力均增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论 RNA干扰沉默Sema6A基因可以增强U-2OS细胞的增殖、侵袭及迁移能力。     

siRNA沉默表皮生长因子受体蛋白表达对肾癌细胞生物学行为的影响

目的观察在siRNA沉默EGFR基因处理后肾癌细胞的生物学行为情况。方法将肾癌细胞株ACHN分为3组,对照组不进行任何干预,阴性对照转染组使用加入非特异性转染试剂及siRNA干预,观察组使用加入特性性转染试剂及siRNA干预,分别检测3组细胞的EGFR表达量、增殖活性、生长曲线、迁移及侵袭活性。结果经siRNA处理72 h后,观察组细胞EGFR表达水平明显低于阴性对照转染组和对照组;观察组细胞生长活跃能力显著低于对照组和阴性对照转染组,且在处理48 h后RNAi组细胞数显著低于对照组和阴性对照转染组(P0.05);较空白组和阴性对照转染组,观察组细胞生长受到显著抑制(P0.05);12 h时及24 h时观察组细胞划痕距离显著高于对照组和阴性对照转染组(P0.05);12 h时对照组、阴性对照转染组穿膜细胞数差异无统计学意义(P0.05),观察组穿膜细胞数显著低于对照组和阴性对照转染组(P0.05)。结论采用siRNA沉默EGFR蛋白后,可有效改善肾癌细胞的增殖、生长、迁移及侵袭等生物学活性。     

胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1表达对鼻咽癌细胞系CNE1发生发展的研究

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP-rP1)对鼻咽癌细胞系CNE1细胞的增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法构建2条特异性针对IGFBP-rP1基因的小干扰RNA(siRNA32、siRNA34)及其阴性对照siRNA,将CNE1细胞分为4个转染组:siRNA32组(siRNA32转染)、siRNA34组(siRNA34转染)、阴性对照组(阴性对照siRNA转染)、空白组(不做任何处理),分别培养24h或48h后检测相关指标。结果siRNA32组和siRNA34组IGFBP-rP1mRNA及蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白组(P0.05);siRNA32组和siRNA34组CNE1细胞迁移数、穿过PVP-F膜的CNE1细胞数显著低于阴性对照组和空白组(P0.05);培养24、48h后,siRNA32组和siRNA34组CNE1细胞增殖OD值显著低于阴性对照组和空白组(P0.05);培养48h后,siRNA32组和siRNA34组G0/G1期、G2/M期细胞所占比例显著高于阴性对照组和空白组(P0.05);siRNA32组和siRNA34组S期细胞所占比例显著低于阴性对照组和空白组(P0.05)。结论抑制IGFBP-rP1表达能降低鼻咽癌CNE1细胞的增殖、侵袭、迁移能力,为临床治疗鼻咽癌提供一种新的思路。     

槐耳浸膏对骨肉瘤 MG63细胞凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探讨槐耳浸膏对体外骨肉瘤MG63细胞的凋亡、转移和侵袭的影响。方法不同浓度的槐耳浸膏（0、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml和4.0 mg/ml）作用于体外培养的骨肉瘤MG63细胞24 h、48 h和72 h。采用细胞增殖与毒性检测方法（ CCK-8法）,测定槐耳对细胞活力的影响;通过流式细胞仪检测槐耳对细胞周期及凋亡的影响;采用细胞划痕实验观察槐耳对细胞迁移能力的影响;通过Transwell实验检测槐耳对细胞侵袭能力的影响。结果和对照组相比,2.0 mg/ml和4.0 mg/ml浓度的槐耳作用于骨肉瘤MG63细胞24 h、48 h、72 h后可以抑制细胞的活力（ P均＜0.01）;流式细胞仪分析结果显示,槐耳可以将大鼠MG63细胞周期阻滞于G2期（ P均＜0.01）,可以促进大鼠MG63细胞凋亡（ P均＜0.01）;细胞划痕实验显示,槐耳可以抑制MG63细胞的迁移能力（ P均＜0.01）;Transwell实验结果显示,槐耳可以抑制MG63细胞的侵袭能力（ P均＜0.01）。结论槐耳可以促进骨肉瘤MG63细胞的凋亡,抑制细胞的迁移和侵袭能力。     

宫颈癌细胞通过下调miR-301b表达促进基因组DNA损伤修复

目的通过研究miR-301b、C末端结合蛋白作用蛋白(Ctip)基因表达在DNA损伤修复过程中的作用以及miR-301b影响Ctip基因表达的作用机制,揭示宫颈癌细胞修复DNA损伤的新机制。方法 (1)Siha细胞经肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理、miR-301b模拟物、抑制物转染以及pcDNA3.1/Ctip与miR-301b模拟物共转染后,利用流式细胞术检测平台和彗星实验测定细胞内DNA损伤标志物γ-H2AX蛋白平均表达水平和DNA彗星状尾距;(2)采用实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测DNA损伤修复过程中细胞内miR-301b、Ctip mRNA的水平以及转染miR-301b模拟物、抑制物后细胞内Ctip mRNA的水平;(3)采用Western-blot蛋白印迹试验检测转染miR-301b模拟物、抑制物后细胞内Ctip蛋白的水平;(4)应用生物信息学预测miR-301b在Ctip mRNA上的靶定位点;(5)应用荧光报告实验检测转染miR-301b模拟物、抑制物后细胞内mRNA上存在miR-301b靶定位点的报告基因的表达水平。结果 (1)与对照相比,刺激1.5和3h后,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)使细胞内γ-H2AX蛋白平均水平和DNA平均尾距升高,刺激6h后,TNF-α对胞内γ-H2AX蛋白平均水平以及DNA平均尾距无影响;转染miR-301b模拟物升高γ-H2AX蛋白平均水平和DNA尾距,转染miR-301b抑制物降低γ-H2AX蛋白平均水平和DNA平均尾距;与miR-301b模拟物共转染的pcDNA3.1/Ctip降低细胞内γ-H2AX蛋白平均水平和DNA平均尾距;(2)TNF-α刺激使细胞内miR-301b水平降低,Ctip mRNA水平升高;转染miR-301b模拟物降低Ctip mRNA水平,转染miR-301b抑制物升高Ctip mRNA水平;(3)转染miR-301b模拟物降低Ctip蛋白水平,转染miR-301b抑制物升高Ctip蛋白水平;(4)miR-301b靶定Ctip mRNA的3208至3214核苷酸位点;(5)mRNA上存在miR-301b靶定位点的报告基因的表达水平在miR-301b模拟物转染后降低,在miR-301b抑制物转染后升高。结论 Siha细胞通过下调miR-301b表达增强Ctip基因表达促进基因组DNA的损伤修复。     

人端粒酶逆转录酶基因沉默对肺腺癌细胞侵袭、增殖、凋亡的影响

目的:探讨靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(siRNA)转染对肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响。方法:构建靶向hTERT的siRNA表达质粒转染A549细胞,通过Western blot检测蛋白的表达水平,确定有效后,通过Transwell小室检测细胞体外侵袭能力,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定转染后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡率。结果:成功构建靶向hTERT的siRNA表达质粒。实验组siRNA转染后的细胞侵袭能力较对照组减弱(P<0.01),生长抑制率明显高于阴性对照组(P<0.01),且表现出时间依赖性。流式细胞术测定显示,实验组siRNA转染48h后,肿瘤细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论:靶向hTERT的siRNA转染后可以显著降低A549细胞侵袭能力,抑制增殖,诱导细胞凋亡的发生。     

miRNA-21siRNA对宫颈癌Hela细胞周期及细胞凋亡的影响

目的探讨microRNA-21(miR-21)siRNA对宫颈癌Hela细胞周期和细胞凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR检测Hela细胞转染后siRNA干扰组及阴性对照组中miR-21的表达量。流式细胞仪分析Hela细胞周期及凋亡率的变化。结果转染siRNA干扰载体后,实时荧光定量PCR检测Hela细胞中miR-21明显低于空白对照组及阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05),空白对照组与阴性对照组相比,差异无统计学意义(P0.05);siRNA表达载体可明显增加细胞凋亡率,并显现出G_0/G_1期阻滞作用。结论miR-21siRNA干扰载体可以高效地抑制宫颈癌Hela细胞miR-21基因的表达,增强细胞的凋亡,并使细胞周期阻滞于G_0/G_1期。