MGIT 960系统快速检测结核分枝杆菌药物敏感性的应用评价

[目的]评价液体培养及快速药敏检测技术(BACTEC MGIT 960系统)检测结核分枝杆菌对一线、二线8种抗结核药物敏感性的效果. [方法]用BACTEC MGIT 960系统对结核分枝杆菌临床分离株进行一线、二线8种抗结核药物的药物敏感性试验,以传统的L-J比例法药敏试验作对照,从结果报告时间和符合率等方面进行评价.统计学分析分别采用配对f检验和Kappa检验. [结果]用MGIT 960法与L-J比例法同时对202株结核分枝杆菌临床分离株进行一线药物异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇的药物敏感性检测,该两种方法对此4种药物的符合率分别为98.0％(198/202)、96.5％(195/202)、94.1％(190/202)和83.7％(169/202);而该两种方法对77株结核分枝杆菌临床分离株进行二线药物卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫异烟胺的药物敏感性检测符合率,分别为87.0％(67/77)、93.5％(72/77)、97.4％(75/77)和68.8％(53/77).MGIT 960法完成一线、二线药物药敏试验的时间中位数分别为11d和8d,而比例法规定判读时间为28 d,二者检测时间差异有统计学意义(P＜0.01). [结论]与传统比例法相比,BACTEC MGIT 960系统能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对一线、二线抗结核药物的敏感性,有利于耐药结核病的早期诊断和治疗.     

两种结核分枝杆菌快速检测方法的比较

目的比较荧光定量PCR检测和直接扩增检测两种方法对结核分枝杆菌检测的敏感性、特异性,及在国境口岸卫生检疫工作中的应用前景。方法应用结核分枝杆菌荧光定量PCR和直接扩增检测47份疑似或确诊活动性肺结核空腹痰标本,并与液体培养结果进行比较。结果荧光定量PCR法与直接扩增法对结核分枝杆菌检测敏感性分别为46.7%和100%,特异性分别为81.2%和84.4%。结论结核分枝杆菌直接扩增检测是一种较为敏感而特异的快速检测方法,在国境口岸卫生检疫部门具有重要的应用价值。     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌检测中的应用价值

目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)与抗酸染色、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法对311例临床确诊的肺结核病患者和40例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌。结果FQ-PCR、抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为47.0%(146/311)、28.3%(88/311)、35.4%(110/311),特异性分别为100.0%、100.0%、95.2%,以FQ-PCR检测的阳性率最高。结论FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

BACTEC MGIT 960用于结核分枝杆菌快速培养的初步评价

目的评价BACTEC MGIT 960系统快速分离结核分枝杆菌及药敏试验的效果。方法对临床拟诊结核病患者痰样本,采用直接涂片萋-尼法抗酸染色显微镜检、BACTEC MGIT 960和改良罗氏(L-J)培养法进行检测,并对分离到的结核分枝杆菌进行药敏试验。比较其分离的阳性率、培养及药敏所需的时间。结果共对634例拟诊结核病患者痰样本进行了检测,MGIT960培养的阳性率(51.7%)明显高于L-J法(37.7%),直接涂片法阳性率最低(14.7%)。MGIT960和L-J法的污染率分别为4.9%和4.4%。MGIT960和传统的L-J法的检出时间分别为12.0 d和32.0 d。MGIT960和L-J法对异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇的药物敏感性检出时间分别为9.0 d和36.5 d。结论 BACTEC MGIT 960可以明显提高分离培养阳性率、缩短培养和药敏试验的时间。     

分子生物学方法在痰结核分枝杆菌检测中的应用价值分析

目的：分析分子生物学方法荧光定量PCR（FQ-PCR）在痰结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法回顾性分析306例确诊肺结核患者和108例非结核病患者临床资料,结核患者按照不同检查方式分为三组（306例）,将萋-尼氏法抗酸菌染色涂片检查方法设为实验A组;将分枝杆菌快速液体培养法检查方法设为实验B组;将FQ-PCR检查方法设为研究组,对比三组检测结果;收集同期临床108例确诊为非结核病患者痰标本行以上三项检查,分别设为对照A组、对照B组和研究对照组,对比分析三组检测结果。结果实验B组与研究组痰分枝杆菌检出率均显著高于实验A组;对照A组与研究对照组检测特异性均显著高于对照B组,且高于对照A组,均具统计学意义（P＜0.05）。结论FQ-PCR检测痰结核分枝杆菌DNA具积极应用价值,检测灵敏度和特异性均较高,操作简捷,可作为结核病临床常规检测方案。     

BACTEC MGIT960分枝杆菌分析系统结果分析

目的评价美国BD公司生产的BACTECMGIT960分枝杆菌分析系统（960）快速分离分枝杆菌效果。方法采用BACTECMGIT960分枝杆菌分析系统对临床标本进行分析，同时用《结核病诊断细菌学检验规程》规定的中性改良罗氏培养基法（L—J法）进行平行对照，比较其对不同来源的样本中分枝杆菌的分离率、阳性报告时间。结果对1449份标本用960和传统的中性改良罗氏培养基进行平行接种，960培养的阳性率为32．9％（482／1449），传统的L—J法培养的阳性率为25．5％（370／1449），前者明显高于后者（X^2=61．65，P〈0．005）。960的污染率为2．3％，L—J法的污染率为6．5％，前者明显小于后者（X^2=29．42，P〈0．005）。阳性报告时间方面，14d内支纤镜提取物（BF液）晚于其它标本；而对链霉素（STR）、异烟肼（INH）、利福平（RIF）和乙胺丁醇（EMB）全耐药菌株早于其它耐药菌株。结论应用BACTEC MGIT960系统分离培养分枝杆菌可以明显提高分离分枝杆菌的阳性率和减少污染。     

四种结核分枝杆菌检测方法的比较

目的评价痰抗酸染色、荧光染色、荧光抗酸联染法和细菌培养四种方法检测结核分枝杆菌的临床诊断价值。方法本院860例临床痰标本,用同一痰标本直接厚涂片并分别用三种染色方法镜检,再用相隔时间不长的同一份标本进行细菌培养共四种方法的检测结果比较。结果荧光法、联染法、抗酸法和培养法检测痰标本阳性检出率依次为20.4%、15.7%、18.0%和31.0%,培养与荧光法差异有显著性(2=24.7,p<0.05),培养和联染法差异有显著性(2=54.0,p<0.05),荧光法与联染法也有显著性差异(2=5.89,p<0.05),荧光法与抗酸法差异无显著意义(2=2.79,p>0.05)。结论以培养法为金标准,荧光法与其总和一致率达85%,说明荧光法较准确。并且快速、省时,敏感,实验方法简便,是目前诊断结核病的一种较为理想的检测方法。     

结核分枝杆菌复合群核酸检测联合痰涂片找抗酸杆菌检测对诊断肺结核的临床应用价值

目的探讨肺结核诊断中应用结核分枝杆菌复合群核酸检测联合痰涂片找抗酸杆菌检测的临床价值。方法收集阳春市人民医院2020年1月-2021年1月前来本院检查的260例患者作为本次研究病例,对其进行回顾性分析,所有患者均经痰涂片、痰培养和2种方法联用检测结核分枝杆菌,恒温扩增技术检测结核分枝杆菌,将临床诊断结果作为金标准,比较痰涂片、痰培养、恒温扩增技术、痰涂片与恒温扩增技术联用及痰涂片和痰培养联用等5种方法的阳性检出率。结果痰涂片阳性检出率57.5%,痰培养阳性检出率48.00%,恒温扩增技术阳性检出率72.00%,痰涂片与痰培养的阳性检出率59.50%,恒温扩增技术联用痰涂片的阳性检出率79.00%;恒温扩增技术阳性检出率高于痰涂片和痰培养,痰涂片与恒温扩增技术联用阳性检出率高于痰涂片、痰培养、恒温扩增技术、痰涂片联合痰培养,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结核分枝杆菌复合群核酸检测联合痰涂片找抗酸杆菌检测可以作为肺结核的方式之一,其中痰涂片与恒温扩增技术联用检测价值最为显著。     

结核分枝杆菌的检验及结果分析

检出痰液中结核分枝杆菌一直是临床诊断肺结核或鉴别肺结核与其他肺病的主要依据，涂片法简单易行，但阳性率较低，罗氏培养法虽为金标准，但因周期较长，均难以满足临床需要。近年来，作为直接检测分枝杆菌种系的鉴定及药敏的许多分子生物学方法得到长足发展，这些方法能将诊断的时间从几周缩短到几天，其中实时荧光定量PCR（FQPCR）因其技术成熟，具有较高的敏感性和特异性，已逐步应用于临床，我们用以上3种方法同时检测100例临床痰液标本结核杆菌，对结果进行分析。     

4种结核分枝杆菌检测方法的比较

目的建立更快速、准确的痰结核分枝杆菌检测方法。方法收集83份肺结核病患者的痰标本,分别采用涂片抗酸染色、荧光染色法、罗氏培养和DNA环介导恒温扩增(LAMP)试验对结核分枝杆菌进行检测,并对其阳性检出率进行比较。结果 LAMP试验结核分枝杆菌检出率为72.6%,高于罗氏培养法的57.8%(χ2=11.4,P<0.01),同样高于荧光染色的59.8%(χ2=8.6,P<0.01),显微镜下抗酸染色法的检出率最低,为51.8%,明显低于LAMP法(χ2=22.2,P<0.01);荧光染色法与萋尼染色法比较,差异无统计学意义。结论 LAMP试验检测痰结核分枝杆菌具有快速、敏感、简便、特异等优点,在肺结核患者的早期诊断中将发挥重要作用。     

噬菌体生物扩增法与常规方法在结核分枝杆菌检测中的比较

目的评价噬菌体生物扩增技术在结核分枝杆菌快速检测中的临床应用价值,并与其他两种常规方法进行比较。方法应用噬菌体生物扩增法（PhaB法）、Bactec 960培养法、涂片法同时对135份临床确诊为结核病（包括肺结核、结核性胸膜炎、结核性脑膜炎）的患者的标本（痰、胸腔积液、肺泡灌洗液、脑脊液）以及排除结核病的患者（21例慢性支气管炎、20例支气管扩张病、18例肺癌、8例肺炎）的痰液共计67份进行检测。结果 135份标本应用噬菌体生物扩增法、Bactec 960培养法与涂片法的阳性率为48.2%、44.4%、28.2%。噬菌体生物扩增法的阳性检出率较高于涂片法,差异有统计学意义,阳性符合率为58.5%（38/65）,阴性符合率为95.7%（67/70）,总体符合率为77.8%（105/135）。噬菌体生物扩增法与Bactec 960培养法比较差异有统计学意义,阳性符合率为78.5%（51/65）,阴性符合率为72.9%（51/70）,总体符合率为75.6%（102/135）。在涂片阴性、Bactec 960培养法检测均为阴性的75例标本中,用噬菌体生物扩增法检测出11例阳性,其检出率为14.7%。67份排除结核病的痰标本应用三种方法的阳性率均为0%。结论噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌在诊断结核病中有较好的灵敏度和特异度,是辅助诊断和鉴别诊断结核病的有效手段。     

结核分枝杆菌的临床和实验室诊断

结核病是危及我国人民健康的重大传染病之一,由于临床表现不典型,加之潜伏性结核感染以及结核耐药问题,导致我国结核病疫情防控形势依然严峻。对结核病及时准确的早期诊断是降低结核病发病率的有效措施。近年来,随着生物技术、分子生物学和免疫学的快速发展,极大地缩短了细菌学检查和结核菌药敏试验的时间,在此,阐述结核分枝杆菌的临床和实验室诊断最新研究进展,以提高临床诊断的敏感度和特异度,以更大范围地确定统一的诊断标准。     

荧光定量PCR技术在痰结核菌检测中的应用

目的 比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术与痰涂片抗酸染色、改良罗氏培养法在检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值.方法 对240例临床确诊的肺结核病患者和107例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本分别应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌;另用FQ-PCR法检测14例非结核分枝杆菌DNA以评价该方法对非结核分枝杆菌检测的特异性.结果 FQ-PCR检测结核分枝杆菌的敏感性分别为52.1％ (125/240),明显高于抗酸染色法的24.2％ (58/240)和改良罗氏培养法的35.4％ (85/240),x2=39.36,P＜0.01;FQ-PCR法对14例非结核分枝杆菌检测结果全部为阴性,特异性为100％.结论 FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,并且可以有效地鉴别非结核分枝杆菌感染,在肺结核的临床实验室诊断上有重要的应用价值.     

结核分枝杆菌实验室耐药诊断技术进展

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的一种严重危害人类健康的传染病,随着抗结核药物的不断使用,耐药菌株不断增多,使得结核病流行的控制变得越来越严峻。耐药结核患者治疗方案的制定和改变依赖于实验室药敏检测的数据。传统的检测方法由于报告时间太长,无法及时给临床提供可靠的信息。因此,对于快速准确检测技术的需求正越来越迫切,新型的结核菌药敏快速检测技术将有很大的发展前景。     

糖尿病合并结核感染诊断中结核分枝杆菌检测方法的比较

目的比较糖尿病合并结核感染诊断中四种结核分枝杆菌检测方法,包括金胺O荧光染色涂片法,BacT/ALERT3D快速培养法,噬菌体生物扩增法和荧光定量PCR法。方法收集糖尿病合并结核感染患者的痰标本,分别采用上述四种方法进行结核分枝杆菌检测。结果涂片法、快速培养法、噬菌体法和PCR法的阳性率分别为27.5%,38.3%,36.7%和39.2%。结论在糖尿病合并结核感染诊断中,与传统的涂片法和培养法相比,噬菌体生物扩增法和荧光定量PCR法检测结核分枝杆菌具有快速、敏感性高、特异性高等特点。     

荧光定量PCR对血及痰培养物中结核分枝杆菌DNA的检测

Objective To evaluate if fluorescence quantitative PCR (FQ-PCR) detection for Mycobacterium tuberculosis in blood or sputum culture can help tuberculosis (TB) diagnosis. Methods A total of 81 patients with a clinical diagnosis of tuberculosis but sputum negative were enrolled, 40 were tuberculosis group and 41 coexisting HIV were HIV-TB group. Blood and sputum were cultured for bacilli or L-forms of Mycobacterium tuberculosis, and FQ-PCR was used to detected bacilli DNA. Results For pulmonary tuberculosis group, 54.1 %(20/37) were positive for bacilli or Informs of Mycobacterium tuberculosis in sputum by FQ-PCR, 27.5% (11/40) were positive in blood culture, 22.5%(9/40) were positive in blood by FQ-PCR, and the total positive rate of blood was 42.5% (17/40). But for HIV-TB group, only 2 positive cultures were found in 10 sputum, the positive rate of blood culture was 7.3% (3/41), and the positive rate of blood was 17.1%(7/41) by FQ-PCR. There was no significant difference between two groups in the positive rate of Mycobacterium tuberculosis by FQ-PCR after blood cultures (P > 0.05). The total positive rates detected by FQ-PCR of sputum or blood cultures were 65.0% (26/40) and 22.0% (9/41) respectively, and there was significant difference between two groups( χ2 = 15.305, P < 0.01). Conclusions FQ-PCR for blood or sputum culture detection appears to be a useful method to diagnose TB in persons with or without HIV infection. The use of FQ-PCR significantly enhance the efficiency of the etiological diagnosis of sputum negative pulmonary tuberculosis.     

荧光定量PCR对血及痰培养物中结核分枝杆菌DNA的检测

Objective To evaluate if fluorescence quantitative PCR (FQ-PCR) detection for Mycobacterium tuberculosis in blood or sputum culture can help tuberculosis (TB) diagnosis. Methods A total of 81 patients with a clinical diagnosis of tuberculosis but sputum negative were enrolled, 40 were tuberculosis group and 41 coexisting HIV were HIV-TB group. Blood and sputum were cultured for bacilli or L-forms of Mycobacterium tuberculosis, and FQ-PCR was used to detected bacilli DNA. Results For pulmonary tuberculosis group, 54.1 %(20/37) were positive for bacilli or Informs of Mycobacterium tuberculosis in sputum by FQ-PCR, 27.5% (11/40) were positive in blood culture, 22.5%(9/40) were positive in blood by FQ-PCR, and the total positive rate of blood was 42.5% (17/40). But for HIV-TB group, only 2 positive cultures were found in 10 sputum, the positive rate of blood culture was 7.3% (3/41), and the positive rate of blood was 17.1%(7/41) by FQ-PCR. There was no significant difference between two groups in the positive rate of Mycobacterium tuberculosis by FQ-PCR after blood cultures (P > 0.05). The total positive rates detected by FQ-PCR of sputum or blood cultures were 65.0% (26/40) and 22.0% (9/41) respectively, and there was significant difference between two groups( χ2 = 15.305, P < 0.01). Conclusions FQ-PCR for blood or sputum culture detection appears to be a useful method to diagnose TB in persons with or without HIV infection. The use of FQ-PCR significantly enhance the efficiency of the etiological diagnosis of sputum negative pulmonary tuberculosis.     

高特异性基因芯片法检测结核分枝杆菌的临床应用评价

目的探讨结核分枝杆菌基因芯片法直接检测在结核病临床诊断中的应用价值。方法应用基因芯片法检测76例结核病临床确诊病例和96例非结核病患者痰液、骨脓、胸腹水、脑脊液等标本中的结核分枝杆菌DNA,并对基因芯片的影响因素如标本的液化和样本浓度等进行探讨。结果标本液化对基因芯片法的检测结果影响较大,而样本浓度对检测结果影响不大。结论基因芯片法直接检测结核分枝杆菌具有简便快速,灵敏度高,特异性好等特点,可以作为临床结核病诊断的重要检测手段。     

TaqMan-MGB荧光定量PCR快速检测痰结核分枝杆菌异烟肼耐药效果的评价

目的评价通过检测结核分枝杆菌katG基因突变以诊断异烟肼耐药并检测结核分枝杆菌的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。方法收集临床诊断为肺结核病的患者痰样本,用已建立的荧光PCR方法进行检测,与常规痰涂片抗酸染色、分枝杆菌培养和传统比例法药敏试验比较,评价检测结核分枝杆菌敏感性和特异性及异烟肼耐药的特异性和敏感性。统计学分析采用χ2检验,P值<0.05为差异有统计学意义。结果荧光定量PCR共检测186份痰液样本,敏感性为84.47%,特异性为100.00%。在确诊病人的痰液中阳性检出率84.47%,明显高于痰涂片40.99%(χ2=46.44,P<0.01),痰培养40.37%(χ2=47.89,P<0.01),且差异有统计学意义。其中荧光PCR在菌阳痰液中检出率94.44%,涂阴培阴的痰液中检出率75.28%。与常规药敏试验结果比较,培养阳性的61份痰样本的药敏符合率96.72%(59/61),敏感性33.33%(1/3),特异性100.00%(58/58)。结论 TaqMan-MGB荧光定量PCR的方法能特异、灵敏、快速诊断痰液中的结核分枝杆菌及其异烟肼耐药性。