miR-21对晶状体上皮细胞增殖、迁移的影响

目的探讨miR-21对晶状体上皮细胞增殖、迁移的影响。方法人晶状体上皮细胞(HLE-B3)随机分为三组,实验组转染miR-21模拟剂(mimic),对照组转染miR-21阴性对照(NC),空白组加入等剂量的磷酸盐缓冲液(PBS)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,双染法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移,Western-blot检测细胞Bcl-2、Akt蛋白表达。对三组上述各指标进行比较。结果转染48 h后,实验组中miR-21相对表达水平显著上升,与空白组、对照组比较差异均有统计学意义(P 0. 05)。转染24 h、48 h后,实验组的细胞增殖活性显著低于空白组与对照组(P 0. 05);转染48 h后,实验组的细胞凋亡率显著高于空白组与对照组(P 0. 05),迁移距离与过膜细胞数都显著少于空白组与对照组(P 0. 05)。转染48 h后,实验组的Bcl-2、Akt蛋白表达水平显著低于空白组与对照组(P 0. 05),空白组与对照组对比差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 miR-21能通过调节晶状体上皮细胞中Bcl-2、Akt蛋白的表达,从而抑制细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。     

安立生坦对低氧性肺动脉高压大鼠肺血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨安立生坦对低氧性肺动脉高压大鼠模型肺血管重塑的作用及其内在的分子机制。方法 40只健康SD大鼠采用区组随机化分组方法分为模型组、药物治疗组、安慰剂组及对照组各10只。其中模型组、药物治疗组、安慰剂组大鼠置于低氧舱中饲养。第3周起药物治疗组大鼠进舱前给予安立生坦5 mg/kg灌胃,安慰剂组大鼠于给予生理盐水2 ml灌胃;对照组则置于正常环境中饲养4周。4周后测定各组平均肺动脉压力(m PAP)、右心室收缩压(RVSP);观察肺血管形态学变化,检测右心肥厚指数RV/(LV+S)、管壁厚度占外径的百分比(WT%)和管壁面积占血管总面积的百分比(WA%);检测肺血管中Bcl-2、Caspase-3的表达。结果 1.模型组大鼠m PAP和RVSP明显高于对照组(P 0. 05);而药物治疗组组较模型组及安慰剂组显著降低(P 0. 05),与对照组相比无统计学差异(P 0. 05)。2.与对照组相比,模型组和安慰剂组肺动脉中Bcl-2表达显著升高(P 0. 05);而与模型组、安慰剂组相比,药物治疗组Bcl-2蛋白表达均降低(P 0. 05)。相反,与对照组相比,模型组、安慰剂组Caspase-3表达明显降低(P 0. 05);与模型组、安慰剂组相比,药物治疗组升高(P 0. 05)。结论安立生坦可能通过抑制对动物模型肺动脉平滑肌细胞中Bcl-2的表达,促进Caspase-3的表达,有效降低低氧性肺高压大鼠模型肺动脉压力,有效逆转肺血管重塑。     

低氧训练与低氧大鼠心肌细胞凋亡及凋亡因子的表达

背景：低氧训练时,机体既要承受运动负荷,同时处于外界的低氧环境,此时,心组织将如何适应其变化？其机制研究国内外较少。目的：观察低氧与低氧训练对大鼠心肌细胞凋亡及Bax及Bcl-2表达的影响。方法：SD大鼠共60只随机分为6组,常氧组、低氧8h组、低氧12h组、常氧训练组、低氧8h训练组和低氧12h训练组,每组10只。后3组大鼠每天在坡度为0的动物跑台上以25m／min的速度训练1h。训练完后,将低氧8h组、低氧8h训练组和低氧12h组、低氧12h训练组放入氧体积分数为12．5％（相当于海拔4000m）的低氧舱内8h和12h。实验期为4周,5d／周。最后1次实验结束后24h,大鼠均实施速眠新II腹腔麻醉后取材,采用苏木精-伊红染色、原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法及蛋白免疫组织化学法检测各组大鼠心肌细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与结论：①与常氧组相比,低氧12h组、常氧训练组、低氧训练组心肌细胞凋亡指数均显著增加（P〈0．05）;低氧12h训练组心肌细胞凋亡指数显著多于常氧训练组和低氧8h训练组（P〈0．05）。②与常氧组比较,其他各组Bcl-2、Bax、Bcl-2／Bax均显著性增高（P〈0．05）：常氧训练组Bcl-2、Bax、Bcl-2／Bax表达显著高于低氧8h组,显著低于低氧12h训练组（P〈0．05）;低氧12h训练组Bcl-2、Bax、Bcl-2／Bax表达比低氧12h组、低氧8h训练组显著增加（P〈0．05）。提示低氧、低氧训练可诱导大鼠心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达,运动时低氧刺激与细胞凋亡率、凋亡指数及病理损伤有关,其中以低氧12h后运动训练组最明显,心肌细胞的凋亡调控与Bcl-2和Bax相关。     

microRNA-206对低氧诱导心肌细胞凋亡的作用及其可能机制

目的探讨microRNA-206(miR-206)在低氧诱导的原代心肌细胞凋亡中的作用及可能的作用机制。方法将心肌细胞分成六组,正常组、低氧组、miR-206模拟物组、miR-206模拟物-NC组、miR-206抑制剂组和miR-206抑制剂-NC组,其中正常组心肌细胞未转染,正常培养,低氧组心肌细胞未转染,经过低氧处理,miR-206模拟物组、miR-206模拟物-NC组心肌细胞经低氧处理后分别转染miR-206模拟物及其阴性对照序列,miR-206抑制剂组和miR-206抑制剂-NC组心肌细胞在低氧处理后分别转染miR-206抑制剂及其阴性对照序列。设置不同低氧处理时间(0 h、12 h、24 h和48 h)处理心肌细胞,同时正常组细胞正常培养,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖情况,qRT-PCR检测miR-206表达情况,采用流式细胞术、免疫组化检测和Western blot法检测细胞凋亡情况。MTT检测六组心肌细胞增殖变化情况,流式细胞术检测细胞凋亡改变情况,qRT-PCR检测表皮生长因子受体(EGFR)-低氧诱导因子1α(HIF-1α)信号通路mRNA表达情况,Western Blot检测EGFR-HIF-1α信号通路蛋白表达情况。结果 MTT结果显示心肌细胞随低氧处理时间增加增殖呈下降趋势,低氧处理24 h和48 h细胞增殖显著低于正常组(P 0. 05);免疫组化检测结果可知,低氧诱导48 h后,心肌细胞内凋亡蛋白cleaved-caspas3显著增加;流式细胞仪检测结果可知低氧诱导24 h、48 h后细胞凋亡呈时间依赖性增加; Western blot鉴定并证实细胞凋亡相关蛋白表达增加及抗凋亡蛋白表达的下降;心肌细胞随低氧处理时间增加miR-206表达呈上升趋势,处理24 h和48 h的miR-206表达量显著高于正常组(P 0. 05)。miR-206模拟物转染组细胞增殖显著增加,凋亡明显下降,miR-206抑制剂组增殖显著下降,凋亡显著增加(P 0. 05)。qRT-PCR法检测发现干扰后各组EGFR、HIF-1α和胰岛素样生长因子1(IGF-1)的mRNA水平无变化,但Western blot结果显示miR-206模拟物组较其阴性对照组EGFR和HIF-1α蛋白表达水平降低,而miR-206抑制剂组较其阴性对照组EGFR和HIF-1α蛋白表达水平升高。结论 MiR-206在缺氧的心肌细胞中会异常增高,高表达的miR-206可通过负调控EGFR-IGF-1-HIF-1α信号通路影响心肌细胞的增殖和凋亡。     

苯乙酸对胶质瘤C6细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的:观察诱导分化剂苯乙酸(phenylacetate,PA)对Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响,探讨PA诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制.方法:体外培养胶质瘤C6细胞,实验组给予PA浓度5.0 mmol/L诱导72 h,对照组不用PA,用原位杂交检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达,图像分析比较表达水平的差异.结果:两组比较,Bcl-2无明显变化(P＞0.05),实验组的Bax和Caspase-3表达增强(P＜0.01).结论:PA能增强Bax和Caspase-3的表达,其诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制可能与此有关.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人非小细胞肺癌细胞增殖的作用及机制研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人非小细胞肺癌细胞增殖的作用及机制。方法人肺癌A549细胞随机分为三组:对照组、实验1组与实验2组,分别用含0μM、50μM、100μM浓度EGCG的DMEM培养液处理,24 h、48 h后CCK-8检测细胞增殖指数,流式细胞术检测细胞凋亡指数,48 h后流式细胞术检测细胞周期,24 h、48 h后蛋白质印迹法检测Caspase-3蛋白表达水平。结果细胞处理后24 h、48 h,实验2组与实验1组细胞增殖指数显著低于对照组(P 0. 05),实验2组也显著低于实验1组(P 0. 05)。实验2组48 h的细胞增殖指数显著高于24 h,其余两组在这两个时间点的对比无显著差异。实验2组与实验1组的细胞凋亡指数、Caspase-3蛋白相对表达水平显著高于对照组(P 0. 05),实验2组也显著高于实验1组(P 0. 05)。对照组48 h的细胞凋亡指数显著高于24 h,其余各组的细胞凋亡指数及三组的Caspase-3表达在这两个时间点的对比无显著差异。细胞处理后48 h,实验2组与实验1组的G1期细胞比率显著高于对照组(P 0. 05),G2期细胞比率显著低于对照组(P 0. 05)。结论表没食子儿茶素没食子酸酯呈剂量依赖式抑制人非小细胞肺癌细胞的增殖,促进其凋亡,调节其细胞周期,促进Caspase-3的表达,可发挥潜在的抑瘤作用。     

柿叶提取物通过MAPK/ERK1/2通路减轻心肌缺血再灌注损伤

目的探讨柿叶提取物(PEL)减轻心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、心肌缺血再灌注损伤组(MIRI组)、柿叶提取物组(PEL组)、MAPK抑制剂组、MAPK抑制剂+PEL组。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min后再灌注60 min建立心肌缺血再灌注模型。PEL组大鼠灌胃50 mg/(kg·d)柿叶提取物,MAPK抑制剂组大鼠尾静脉注射PD0325901; MAPK抑制剂+PEL组大鼠灌胃50 mg/(kg·d)柿叶提取物前30 min尾静脉注射PD0325901。假手术组和MIRI组灌胃等量生理盐水。每天相同时间给药1次,连续给药21 d。全自动生化分析仪检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)水平,试剂盒检测心肌组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,采用1%氯化三苯基四氯唑测定心肌梗死面积,Western Blot检测心肌组织中Bcl-2、Bax和p-ERK1/2蛋白表达。结果与假手术组比,MIRI组大鼠血清AST和CK含量、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积,心肌组织MDA和LDH含量、Bax蛋白表达均显著升高(P 0. 05),心肌组织SOD和GSH-Px活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达显著降低(P0. 05)。与MIRI组比,PEL组和MAPK抑制剂+PEL组大鼠血清AST和CK含量、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积、心肌组织MDA和LDH含量、Bax蛋白表达均显著降低(P 0. 05),心肌组织SOD和GSH-Px活力、Bcl-2和pERK1/2蛋白表达均显著升高(P 0. 05); MAPK抑制剂组无显著差异(P 0. 05)。与MAPK抑制剂组比,MAPK抑制剂+PEL组血清AST和CK含量、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积、心肌组织MDA和LDH含量、Bax蛋白表达均显著降低(P 0. 05),心肌组织SOD和GSH-Px活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达显著升高(P 0. 05)。结论 PEL可能通过激活MAPK/ERK1/2信号通路减轻心肌缺血再灌注损伤。     

骨髓间充质干细胞旁分泌途径与阿霉素损伤心肌细胞凋亡:怎样证明其抑制效应?

背景:近来研究发现骨髓间充质干细胞移植后短期心功能受益主要是因为其可分泌多种细胞因子,促进了内生性修复过程,而不是心肌细胞的再生.目的:观察骨髓间充质干细胞旁分泌途径对阿霉素损伤心肌细胞凋亡的影响.方法:体外培养的乳鼠心肌细胞按3×10~8~(-1)浓度加入6孔培养板,3 mL/孔,培养72 h后分为3组:阿霉素损伤组、共培养组加入1 mg/L阿霉素作用4 h建立心肌细胞损伤模型,正常对照组不进行任何干预.共培养组取培养至第3代大鼠骨髓间充质干细胞,调整细胞浓度为3×10~8~(-1),以3 mL/孔加入共培养插件Millicell装置中,预培养24 h,在造模后将Millicell装置插入到预先培养心肌细胞的6孔培养板中,建立共培养体系.检测条件培养基内细胞因子的质昼浓度变化,骨髓间充质干细胞对阿霉素损伤心肌细胞Caspase-9和Caspase-3活性、细胞凋亡、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.结果与结论:与正常对照组比较,阿霉素损伤组胰岛素样生长因子1及肝细胞生长因子的质量浓度、心肌细胞Caspase-3及Caspase-9活性、心肌细胞凋亡率,心肌细胞Bax蛋白表达均明显升高(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达明显降低(P＜0.05).与阿霉素损伤组比较,共培养组胰岛素样生长因子1及肝细胞生长因子的质量浓度、心肌细胞Bcl-2蛋自表达均明显升高(P＜0.05),心肌细胞Caspase-3及Caspase-9活性、心肌细胞凋亡率、心肌细胞Bax蛋白表达均明显降低(P＜0.05).结果证实骨髓间充质干细胞在损伤环境下细胞因子分泌增加,并可通过旁分泌途径抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡.     

miR-497下调MFN2缓解异丙基肾上腺素诱导的心肌损伤

目的探讨microRNA-497(miR-497)对异丙基肾上腺素诱导的心肌损伤的作用及机制。方法 30只雄性C57BL/6小鼠随机分为三组:对照组(每日背部皮下注射与模型组同剂量的生理盐水,持续10 d),模型组[每日背部皮下注射5 mg/kg的异丙基肾上腺素(ISO),持续10 d]及激动剂组(在注射ISO的同时给予心肌内注射100μl 10nmol的miR-497-5p激动剂),每组各10只。检测三组小鼠心功能[心率(HR)、左室收缩内压(LVESP)、左室舒张内压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(±dp/dtmax)及心输出量(CO)]、心肌损伤[心肌肌钙蛋白T(c Tn-T)、心肌肌钙蛋白I(c Tn-I)、N-端脑利钠肽前体(NT-pro BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及肌红蛋白(Mb)]等指标及心肌中线粒体融合蛋白2(MFN2)、Caspase-3、Fas、Bcl-2及Bax等的表达。结果模型组中LVESP、±dp/dtmax及CO的水平显著低于对照组(P 0. 05),LVEDP、Tn T、Tn I、NT-pro BNP、CK-MB及Mb水平高于对照组(P 0. 05)。而激动剂组的HR、LVESP、±dp/dtmax及CO的水平显著高于模型组(P 0. 05),LVEDP、TnT、TnI、NT-proBNP、CK-MB及Mb水平低于模型组(P 0. 05)。模型组中MFN2、Caspase-3、Fas及Bax的mRNA和蛋白的表达显著高于对照组(P 0. 05),Bcl-2的表达低于对照组(P 0. 05)。而激动剂组中MFN2、Caspase-3、Fas及Bax的表达显著低于模型组(P0. 05),Bcl-2的表达高于模型组(P 0. 05)。结论 miR-497可改善异丙基肾上腺素诱导的小鼠心肌损伤,其机制与抑制MFN2表达并阻止心肌细胞凋亡有关。     

沉默HDAC4抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用机制的研究

目的探究沉默组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)基因表达对多发性骨髓瘤LP-1细胞增殖、凋亡的影响以及作用机制。方法脂质体Lipofectamine 2000转入LP-1细胞中,实验分为对照组(不做任何处理)、阴性组(转入siRNA NC)、siRNA HDAC4组(转入siRNA HDAC4)。CCK-8法检测细胞的增殖活性,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡率,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中HDAC4、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达量。结果转染siRNA HDAC4后,LP-1细胞中HDAC4蛋白的表达量显著低于对照组(P 0. 05);与对照组相比,siRNA HDAC4组细胞的增殖活性显著降低(P 0. 05);而凋亡率显著增加(P 0. 05); siRNA HDAC4组细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05),但Bcl-2蛋白水平显著降低(P 0. 05)。结论沉默HDAC4基因可抑制多发性骨髓瘤LP-1细胞增殖,诱导其凋亡,可能通过降低Bcl-2水平,促进Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9表达发挥作用。     

葡萄籽原花青素提取物对心肌梗死大鼠心肌功能的影响及其机制研究

目的研究葡萄籽原花青素提取物(GSPE)对心肌梗死大鼠心功能的影响及其可能机制。方法取48只SD大鼠,其中40只用于建立心肌梗死大鼠模型,并随机分为模型组、GSPE低剂量组、GSPE中剂量组、GSPE高剂量组及BSI-201组,每组各8只,余8只大鼠为假手术对照组。模型组与对照组均给予等量生理盐水灌胃,GSPE低剂量组采用100 mg/ml GSPE进行灌胃给药,GSPE中剂量组采用200 mg/ml GSPE进行灌胃给药,GSPE高剂量组给予400mg/ml GSPE进行灌胃给药,BSI-201组采用多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制剂BSI-201 120 mol/L进行灌胃给药,1次/d,持续1个月。采用彩色多普勒超声心动图评估各组大鼠心功能状况,记录心率(HR)、左心室舒张末压(LVEDP)及左心室收缩压(LVSP)。通过苏木精-伊红染色评估各组大鼠心肌组织病理学改变状况,采用TUNEL法对大鼠心肌细胞凋亡情况进行检测,并用蛋白免疫印迹法检测大鼠心肌组织中PAR、切割的Caspase-3(cCaspase-3)、Bcl-2及Bax蛋白的表达水平。结果相比对照组,模型组大鼠LVSP明显下降,HR、LVEDP及细胞凋亡率明显升高(P 0. 05),心肌纤维排列不一,心肌细胞破碎,出现大量炎性细胞浸润;心肌组织中Bcl-2蛋白表达水平显著下降,PAR、c-Caspase-3及Bax蛋白的表达水平明显升高(P 0. 05)。相比模型组,GSPE低、中、高剂量组和BSI-201组大鼠LVSP明显升高,HR、LVEDP及细胞凋亡率显著下降(P 0. 05),心肌组织病理损伤程度明显减轻;心肌组织中Bcl-2蛋白表达水平显著升高,PAR、c-Caspase-3及Bax蛋白的表达水平明显下降(P 0. 05),并呈剂量依赖性。结论 GSPE可呈剂量依赖性有效改善心肌梗死大鼠心脏功能,其作用机制可能与阻滞PARP-1活化以起到阻滞心肌细胞凋亡的作用密切相关。     

重组人生长激素对糖尿病小鼠胰岛β细胞功能的保护作用机制分析

目的探讨重组人生长激素(rh GH)对糖尿病小鼠胰岛β细胞功能的影响,并对其可能存在的保护机制进行研究。方法选择30只小鼠采取高糖高脂饲养以及链脲佐菌素(35 mg/kg)建模2型糖尿病模型,采用随机数字表法均分为对照组、模型组、实验组。实验组小鼠采取皮下注射rh GH(0. 3 IU/kg),模型组及对照组小鼠注射等体积生理盐水,给药周期7 d。检测干预0 d、1 d、4 d、7 d时间点时各组小鼠血糖含量,酶联免疫法检测各组小鼠血清胰岛素、胰高血糖素、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平以及胰岛组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、丙二醛(MDA)水平以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6 (IL-6)水平。HE染色观察胰岛组织病理学变化,采用TUNEL法及RT-PCR分别检测胰岛β细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达水平。结果在0 d、1 d、4 d、7 d时,模型组小鼠血糖含量均低于对照组(P 0. 05),且在1 d、4 d、7 d时实验组小鼠血糖水平均低于模型组(P 0. 05);模型组小鼠TG、TC、胰岛素及胰高血糖素均明显高于对照组(P 0. 05),且实验组小鼠血清胰岛素、胰高血糖素、TG与TC含量均低于模型组(P 0. 05);实验组小鼠胰岛组织中TNF-α、IL-6及MDA水平低于模型组(P 0. 05),而SOD、GSH-Px含量明显高于模型组(P 0. 05); HE染色结果显示模型组小鼠胰岛组织排列紊乱、细胞大小不均匀且炎性细胞浸润,实验组小鼠胰岛组织受损程度较模型组轻;实验组小鼠胰岛β细胞凋亡率低于模型组,RT-PCR结果显示实验组小鼠胰岛β细胞中的Bcl-2表达量高于模型组(P 0. 05)、Bax达量低于于模型组(P 0. 05)。结论 rh GH可以降低糖尿病小鼠血糖、血脂、胰岛素水平,降低胰岛β细胞凋亡率,可能与促进Bcl-2表达、抑制Bax表达量、减少氧化应激及炎性因子水平有关。     

大鼠缺氧复氧损伤神经元钙敏感受体表达水平及其与神经元凋亡的相关性分析

目的分析缺氧复氧损伤神经元钙敏感受体表达水平及其与神经元凋亡的相关性。方法取新生SD大鼠(出生1 d)脊髓神经元,随机分为A组(正常对照,未进行任何处理)、B组(建立缺氧复氧损伤模型)、C组(缺氧复氧损伤+激动剂GdCl_3)、D组(缺氧复氧损伤+抑制剂NPS-2390)。通过免疫荧光技术对各组大鼠脊髓神经元中钙敏感受体的表达定位进行检测,并用Western blotting法对各组钙敏感受体及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平进行检测,通过激光共聚焦显微镜对细胞内游离钙的变化进行检测,同时用TUNEL法对各组细胞凋亡情况进行检测。结果 B组钙敏感受体和细胞内游离钙的表达水平较A组显著升高(P 0. 01),C组钙敏感受体和细胞内游离钙表达水平较B组显著升高(P 0. 01),D组钙敏感受体和细胞内游离钙表达水平较B组显著下降(P 0. 01)。B组细胞凋亡比率较A组显著升高,C组细胞凋亡比率较B组显著升高,D组细胞凋亡比率较B组显著下降(P 0. 05)。B组凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平较A组显著下降,Bax和Caspase-3的表达水平较A组显著升高(P 0. 05); C组Bcl-2的表达水平较B组显著下降,Bax和Caspase-3的表达水平较B组显著升高(P 0. 05); D组Bcl-2的表达水平较B组显著升高,Bax和Caspase-3的表达水平较B组显著下降(P 0. 05)。结论在大鼠缺氧复氧损伤模型中,钙敏感受体在脊髓神经元中的表达水平升高,细胞内游离钙增多,脊髓神经元细胞凋亡比率升高,凋亡相关蛋白的表达水平升高。     

3cl-2基因在脓毒症大鼠心肌细胞凋亡中作用的研究

目的：探讨Bcl-2基因在脓毒症大鼠心肌细胞凋亡中的意义。方法：以盲肠结扎并穿刺法制作脓毒症大鼠模型。用电镜和TUNEL法检测其心肌细胞凋亡变化，用免疫组化方法检测Bcl-2蛋白，用RT-PCR法检测其心肌细胞的Bcl-2基因mRNA的表达。用SPSS10．0软件完成统计分析。结果：一定时间内脓毒症大鼠心肌细胞凋亡数均明显高于正常对照组和假手术对照组（P〈0．05），Bcl-2蛋白表达阳性细胞数和mRNA表达量均较正常对照和假手术组明显降低（P〈0．05），其变化均与TUNEL法检测凋亡的结果一致（P〈0．05）。结论：细胞凋亡可能是脓毒症中心肌损害的机制之一。Bcl-2基因的改变可作为脓毒症病情改变的标志。     

miR-27b基因对病毒性心肌炎细胞凋亡的影响研究

目的探讨抑制miR-27b基因表达对病毒性心肌炎心肌细胞凋亡的影响及机制。方法将40只健康BALB/c小鼠随机分为对照组:小鼠一次性腹腔注射0. 1 ml的柯萨奇病毒B3(CVB3); miR-27b抑制剂组(抑制组):小鼠一次性腹腔注射0. 1 ml的CVB3,次日,通过尾静脉注射miR-27b抑制剂(10μg/10 g); miR-27b NC组(NC组):小鼠一次性腹腔注射0. 1 ml的CVB3,次日,通过尾静脉注射miR-27b NC(10μg/10 g)每组10只。于接种CVB3病毒后第7天,采集血清及心脏组织。肌酸激酶(CK)试剂盒检测血清CK含量; qRT-PCR检测心肌组织miR-27b表达;TUNEL试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、髓过氧化物酶(MPO)试剂盒及细胞内活性氧(ROS)试剂盒分别检测心肌细胞凋亡率、心肌组织SOD活力、MPO活性及ROS含量。Western blotting检测NF-κBp65、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果小鼠感染CVB3后第7天体重减轻率及血清CK活性明显高于对照组小鼠(P 0. 05)。与对照组比较,模型组SOD活力、Bcl-2蛋白表达明显降低,miR-27b mRNA表达、细胞凋亡率、MPO活性、ROS含量及NF-κBp65和Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),与模型组比较,抑制组SOD活力、Bcl-2蛋白表达明显升高,miR-27b mRNA表达、细胞凋亡率、MPO活性、ROS含量及NF-κBp65和Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05)。结论抑制miR-27b基因表达可降低病毒性心肌炎心肌细胞凋亡率及氧化应激反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

川芎嗪干预钝性肺挫伤急性期大鼠肺组织细胞的凋亡

背景：急性胸部撞击后所致的肺挫伤（钝性肺挫伤）常引起呼吸功能异常和继发性炎性反应,并参与全身炎性反应综合征和多器官功能障碍综合征,其发病原因及致病机制亟待明确。目的：观察胸部撞击所致钝性肺挫伤急性期细胞凋亡的变化及其川芎嗪对其的影响。方法：健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、川芎嗪治疗组,后两组制备胸部撞击伤模型,川芎嗪治疗组建模后立即腹腔注射川芎嗪80mg／kg1次。在创伤发生后1,2,3h观察肺组织病理形态学及细胞凋亡的改变、检测肺水肿程度和肺血管通透性改变,免疫组织化学检测肺组织Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达及血液中肿瘤坏死因子α水平变化。结果与结论：模型组肿瘤坏死因子α水平在创伤后1h即显著增加,创伤后2h及3h间急剧增加（P〈0．05）;创伤后2h及3h肺组织细胞凋亡指数及肺组织损伤程度显著增高（均P〈0．05）;肺血管通透性及肺水肿程度增加（P〈0．05）;Caspase-3表达显著增高（P〈0．05）,Bcl-2／Bax比值显著降低（P〈0．05）。川芎嗪治疗组在相应时间点相对于模型组肿瘤坏死因子α水平显著降低（P〈0．05）,肺组织内细胞凋亡指数及肺组织损伤程度降低（P〈0．05）,肺血管通透性及肺水肿程度减轻（P〈0．05）;Caspase-3表达下降（P〈0．05）,Bcl-2／Bax比值增加（P〈0．01）。结果提示,川芎嗪可通过抑制肿瘤坏死因子CI表达,下调Caspase-3的表达并提高Bcl-2／Bax的比值,以降低胸部撞击所致肺组织急性期的异常凋亡并减轻胸部撞击所致急性期肺挫伤。     

苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响

目的探讨苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及其机制。方法采取体外培养MDA-MB-231细胞进行分组,苦瓜多糖组给予不同浓度苦瓜多糖(0μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml),空白组(苦瓜多糖0μg/ml)培养基中含有与苦瓜多糖组等浓度的DMSO,将各组细胞孵育分别培养至12 h、24 h、48 h处理。MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测后细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体变化,Trans well法检测细胞迁移率,免疫组化检测Ki67与Caspase-3阳性率,Western-blot检测MMP-9、Bcl-2、Bax表达水平,RT-PCR检测细胞周期蛋白(CyclinD1)、血管内皮生长因子(VEGF)表达量;体内建立移植瘤裸鼠模型,试验组裸鼠采用苦瓜多糖(120μg/ml)灌胃治疗,早晚一次,1 ml/次,对照组裸鼠灌胃等体积的生理盐水,两组裸鼠治疗6周后测量肿瘤质量、观察肿瘤体积变化。结果与空白组相比,苦瓜多糖组癌细胞增值率与迁移能力随苦瓜多糖剂量增加而降低(P 0. 05),细胞凋亡率、凋亡小体数量随着药用剂量增加而升高(P 0. 05); Western-blot检测结果显示苦瓜多糖组MMP-9、Bcl-2表达水平低于空白组(P 0. 05),Bax表达水平高于空白组(P 0. 05); RT-PCR结果显示苦瓜多糖组CyclinD1、VEGF表达量显著低于空白组(P 0. 05)。试验组肿瘤组织中的Ki67蛋白水平、肿瘤体积、肿瘤质量显著低于对照组(P 0. 05),而试验组肿瘤组织中Casppase-3蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05)。结论苦瓜多糖可以通过调控细胞周期、凋亡、迁移侵袭相关蛋白及基因表达,进而调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为。     

丙泊酚通过上调microRNA-218的表达抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭、迁移和凋亡

目的探讨丙泊酚对人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法采用对数生长期的人胶质瘤细胞U251,分别给予不同浓度(0. 5mM、2mM、5mM)的丙泊酚处理,分组为对照组、丙泊酚0. 5mM组、丙泊酚2m M组、丙泊酚5mM组。CCK-8检测细胞毒性;丙泊酚分别处理细胞24 h、48 h、72 h、96 h后检测各组细胞活力; Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力;检测凋亡相关蛋白Caspase-3 mRNA、Caspase-9 mRNA、迁移相关蛋白血管内皮生长因子(VEGF) mRNA和miRNA-218的表达情况。结果 CCK-8细胞毒性试验表明,0. 5mM丙泊酚、2mM丙泊酚以及5mM丙泊酚均不能达到对U251细胞的细胞毒性(P 0. 05),10mM丙泊酚的细胞毒性明显大于5mM丙泊酚(P 0. 05),当丙泊酚≥10mM以上时,显示出对U251细胞有明显细胞毒性(P 0. 05)。与对照组相比,丙泊酚(0. 5mM、2mM、5mM)可显著抑制U251细胞的增殖、侵袭和迁移能力(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P0. 05),凋亡相关蛋白Caspase-3mRNA和Caspase-9mRNA的表达水平上升(P 0. 05);丙泊酚可显著上调U251细胞microRNA-218的表达,抑制VEGF表达(P 0. 05)。结论丙泊酚可抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与上调microRNA-218、Caspase-3mRNA和Caspase-9mRNA以及下调VEGFmRNA的表达有关。     

合欢花黄酮对精神分裂症大鼠学习记忆能力、海马组织c-fos蛋白和基因表达水平的影响分析

目的探讨合欢花黄酮对精神分裂症大鼠学习记忆能力、海马组织c-fos蛋白和基因表达水平的影响。方法将72只SD大鼠随机分为对照组、模型组和合欢花黄酮高、中、低剂量组和氯氮平组各12只。合欢花黄酮高、中、低剂量组分别灌胃5 ml/kg合欢花黄酮(120 mg/kg、60 mg/kg和30 mg/kg),氯氮平组灌胃氯氮平(20 mg/kg),连续28d,在最后一次给药2 h后,模型组、合欢花黄酮高、中、低剂量组和氯氮平组分别给予一次性腹腔注射0. 6 mg/kg地佐环平/地卓西平(MK-801)建立大鼠精神分裂症模型,对照组给予等体积生理盐水。采用Morris水迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力; HE染色观察大鼠的海马组织病理变化; TUNEL法检测海马组织神经元细胞的凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测c-fos的表达; Western Blot检测c-fos、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bax的表达。结果与对照组相比,模型组大鼠学习记忆能力明显下降(P 0. 05),海马组织细胞的凋亡率明显升高(P 0. 05),Bcl-2蛋白的表达明显下调(P 0. 05),c-fos、cleaved Caspase-3和Bax表达明显上调(P 0. 05);与模型组相比,合欢花黄酮高、中剂量组和氯氮平组大鼠学习记忆能力明显升高(P 0. 05),海马组织Bcl-2表达明显上调(P 0. 05),c-fos、cleaved Caspase-3和Bax蛋白的表达明显下调(P 0. 05); HE染色显示,合欢花黄酮高、中剂量组和氯氮平组大鼠海马组织病理变化明显减轻。结论合欢花黄酮可以呈浓度依赖性的下调c-fos的表达,改善精神分裂症大鼠的学习记忆能力,减轻脑组织损伤。     

Bcl-2、Bax、Caspase-3表达与颞叶癫痫发病的相关性研究

目的：探讨神经元凋亡与颞叶癫痫患者海马硬化的关系。方法：取15例颞叶癫痫患者手术切除标本（癫痫组）和5例无癫痫发作的患者正常脑组织标本（对照组）,用原位末端标记（TUNEL）方法检测神经元凋亡,免疫组化染色检测细胞凋亡相关基因表达产物Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达。结果：癫痫组和对照组的TUNEL阳性细胞平均百分率分别为（52．2±3．2）％、（4．0±1．8）％,差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组化染色结果表明,对照组患者脑组织内Bcl-2蛋白无表达,癫痫组患者脑内Bcl-2蛋白表达明显增强（P〈0．05）;Bax蛋白在癫痫组与对照组中均微弱表达,差异无统计学意义;Caspase-3在对照组中有轻微表达,在癫痫组表达明显增强,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：神经元凋亡部分参与癫痫患者海马硬化的形成,Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白在这一过程中可能发挥作用。