温阳振衰颗粒对阿霉素致心肌细胞损伤ERK5/CREB的影响

目的观察温阳振衰颗粒含药血清对H9C2心肌细胞损伤模型ERK5/CREB表达的影响。方法 H9C2心肌细胞分为正常对照组,H9C2损伤组,5%含药血清组和10%含药血清组。H9C2损伤组的培养基中加入2.67μmol/L的ADR,两含药血清组培养基中加入2.67μmol/L的ADR和5%或10%的温阳振衰颗粒含药血清,共培养44h。检测实验末各组细胞p-ERK5、ERK5、p-CREB、CREB的表达水平。结果与正常对照组相比,各组p-ERK5表达明显下调,p-CREB表达明显上调,差异具有统计学意义(P0.05),10%含药血清组p-ERK5下调及p-CREB上调均相对缓慢(P0.05)。各组细胞ERK5、CREB的表达无明显差异(P0.05)。结论温阳振衰颗粒能抑制ERK5蛋白的过度去磷酸化和CREB蛋白的过度磷酸化,这可能是其治疗慢性心衰的重要机制之一。     

温阳振衰颗粒对心肌细胞损伤模型LncRNABIC的影响

目的观察温阳振衰颗粒含药血清对H9C2心肌细胞损伤模型LncRNA BIC表达的影响并探讨其作用机制。方法 H9C2心肌细胞分为正常对照组、正常加含药血清组、阿霉素(ADR)组(ADR组)、ADR加含药血清组。其中ADR组、含药血清组分别为在培养基中加入2.67μmol/L的ADR和加入10%的温阳振衰颗粒含药血清。各组均培养相同时间后检测实验末各组细胞LncRNA BIC的表达水平。结果倒置显微镜下可见正常对照组、正常加含药血清组心肌细胞形态、胞质、间质及横纹均为正常;ADR组心肌细胞出现肌纤维的溶解,横纹模糊,及胞浆空包变性,且表现出不同程度的炎症细胞浸润和间质水肿。ADR加含药血清组的心肌细胞较ADR组,其肌纤维溶解、恒温模糊、胞浆空泡变性、炎症细胞浸润、间质水肿等情况均有所改善。正常对照组、正常加含药血清组的细胞存活率相当(P 0.05);ADR组、ADR加含药血清组与正常对照组比较,其细胞存活率均明显下降(P 0.05);ADR加含药血清组与ADR组比较,其细胞存活率有所上升(P 0.05)。正常加含药血清组与正常组比较,LncRNA BIC表达明显升高(P 0.05);ADR组与正常组比较,LncRNA BIC表达明显降低(P 0.05);ADR加含药血清组与ADR组比较,LncRNA BIC表达升高(P 0.05)。结论温阳振衰颗粒能上调LncRNA BIC的表达,这可能是其治疗慢性心衰的重要机制之一。     

温阳振衰颗粒调控miR-155/p38MAPK途径减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤机制研究

目的:研究温阳振衰颗粒调控miR-155/p38MAPK途径减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用机制。方法:成年雄性SD大鼠随机分为阴性对照组、阴性对照+MIRI组、miR-155抑制剂+MIRI组、miR-155模拟物+MIRI组、对照组、MIRI组、中药组、中药+miR-155抑制剂组，建立MIRI模型，给予温阳振衰颗粒灌胃干预，miR-155抑制剂或模拟物局部注射。比较各组磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)含量、miR-155及p-p38MAPK表达、炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-6(IL-6)含量。结果:与对照组比较，MIRI组血清CK-MB、LDH含量及心肌p-p38MAPK表达、TNF-α、IL-6含量明显增加，心肌miR-155表达明显减少(均P<0.05);与MIRI组比较，中药组血清CK-MB、LDH含量及心肌p-p38MAPK表达、TNF-α、IL-6含量明显减少，心肌miR-155表达明显增加(均P<0.05);与中药组比较，中药+miR-155抑制剂组血清CK-MB、LDH含量及心肌p-p38MAPK表达...     

温阳振衰颗粒对阿霉素致心肌细胞损伤MEF2表达的影响

目的观察温阳振衰颗粒含药血清对H9C2心肌细胞损伤模型肌细胞增强因子2(MEF2)表达的影响。方法实验分为正常对照组、H9C2损伤组、5%含药血清组和10%含药血清组。H9C2损伤组的细胞培养基中加入2.67μmol/L的阿霉素(ADR),两含药血清组培养基中加入2.67μmol/L的ADR和5%,10%温阳振衰颗粒含药血清,共培养44 h。检测实验末各组H9C2心肌细胞中p-MEF2、MEF2表达量。结果各损伤组细胞存活率和p-MEF2表达量均明显低于正常对照组(P均0.05),5%含药血清组和10%含药血清组细胞存活率和p-MEF2表达量均明显高于H9C2损伤组(P均0.05),且10%含药血清组均明显高于5%含药血清组(P均0.05);各组间H9C2心肌细胞MEF2表达量比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论温阳振衰颗粒能抑制MEF2蛋白的过度去磷酸化,这可能是其治疗慢性心力衰竭的重要机制之一。     

温阳振衰颗粒对心肾综合征模型大鼠血浆外泌体及心、肾组织p38MAPK表达的影响

目的探讨温阳振衰颗粒对心肾综合征大鼠心功能、肾功能的影响及可能作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、温阳振衰组、依那普利组,每组10只。除空白组外其余各组大鼠采用阿霉素3mg/kg腹腔注射,每周1次,共6周建立心肾综合征大鼠模型。造模3周后空白组和模型组大鼠给予生理盐水每次1ml/100g灌胃,温阳振衰组每次给予0.72g/kg温阳振衰颗粒灌胃,依那普利组每次给予0.9mg/kg依那普利片灌胃。每天给药2次,连续4周。HE染色观察肾组织病理改变,TUNEL法检测心肌及肾组织细胞凋亡阳性率,检测心功能、肾功能及血清N端前脑钠素(NT-pro BNP)、肾损伤分子1(KIM-1)含量,检测心脏和肾脏p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)蛋白及mRNA表达,检测血浆外泌体定量,心脏、肾脏组织及血浆外泌体miR-155表达。结果与空白组比较,模型组大鼠心功能、肾功能损伤,心肌及肾组织细胞凋亡阳性率增加,血清NT-pro BNP、KIM-1含量升高,心脏和肾脏p-p38MAPK蛋白、p38MAPK mRNA表达均升高,心脏、肾脏和血浆外泌体miR-155均降低(P0.05或P0.01);与模型组比较,温阳振衰组和依那普利组上述指标均不同程度改善(P0.01)。结论温阳振衰颗粒可改善心肾综合征模型大鼠心功能、肾功能,其作用可能与增加外泌体miR-155抑制p-p38MAPK表达,从而抗细胞凋亡有关。     

温阳振衰颗粒对慢性心力衰竭大鼠干预机制研究

目的:研究温阳振衰颗粒对慢性心力衰竭(CHF)大鼠外泌体微小RNA-21(miR-21)、心肌p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响。方法:取40只清洁级SD雄性大鼠作为研究对象,随机分为正常组、模型组、依那普利组、温阳振衰组,每组10只。正常组正常喂养,其他三组采用阿霉素诱导建立CHF模型。模型组、依那普利组、温阳振衰组分别给予0.9%氯化钠溶液、依那普利及温阳振衰颗粒灌胃处理。分别在灌胃前、灌胃完成后采血,提取外泌体,检测外泌体miR-21水平。在灌胃结束后4周处死大鼠,取心肌组织,检测p38MAPK和p-p38MAPK水平。结果:灌胃前,模型组、依那普利组、温阳振衰组LVEF低于正常组,E/A、LVDD、LVPW水平高于正常组,差异有统计学意义(均P<0.05)。灌胃后,温阳振衰组、依那普利组LVEF高于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。灌胃后,温阳振衰组、依那普利组血清外泌体miR-21、心肌miR-21 mRNA高于模型组,差异有统计学(均P<0.05)。温阳振衰组、依那普利组p38MAPK和p-p38MAPK mRNA和蛋白水平低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:温阳振衰颗粒治疗CHF效果较好,其机制可能与上调外泌体miR-21,抑制p38MAPK信号通路活性有关。     

基于P38MAPK通路的复方参鹿颗粒含药血清对TNF-α诱导的正常骨髓CD34~+细胞凋亡的影响

目的基于P38MAPK途径探讨复方参鹿颗粒含药血清对TNF-α诱导的正常骨髓CD34+细胞凋亡的影响。方法 Wistar大鼠随机分为空白组和复方参鹿颗粒低、中、高剂量组,分别制备空白血清和不同浓度的含药血清。收集并分离8例正常的骨髓单个核细胞(BMMC),分别加入空白血清和10%不同浓度含药血清,与20 ng/ml人重组TNF-α共同培养。流式细胞术检测CD34~+细胞凋亡率,Western blot检测骨髓单个核细胞P38、p-P38、P53、p-P53、Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达,荧光定量PCR检测P38、P53、Bcl-xl、Bcl-2mRNA表达。结果与空白组相比,复方参鹿颗粒中、高剂量组CD34~+细胞凋亡率以及p-P38、p-P53蛋白表达显著下降,Bcl-xl蛋白和mRNA表达显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论复方参鹿颗粒含药血清可有效抑制TNF-α诱导的正常骨髓CD34~+细胞凋亡,下调p-P38和p-P53蛋白表达,上调Bcl-xl表达。其机制可能与P38MAPK通路介导的凋亡途径有关。     

补中益气汤含药血清对caco-2细胞SGLT1、P38MAPK通路及NHE3表达影响的研究

目的探讨补中益气汤含药血清对人结肠腺癌细胞(caco-2细胞)钠葡萄糖共转运体蛋白1(SGLT1)、P38MAPK通路及钠-氢交换体3(NHE3)蛋白及基因表达的影响。方法根据血清药理学方法制备补中益气汤含药血清,将caco-2细胞分为正常组、根皮苷组、根皮苷+补中益气汤含药血清组和根皮苷+空白大鼠血清组。检测各组SGLT1蛋白和基因、P38MAPK/Ezrin通路蛋白和NHE3蛋白的表达。结果与根皮苷组比较,根皮苷+补中益气汤含药血清组caco-2细胞SGLT1蛋白表达有所上调(P 0.05),且呈浓度依赖关系;根皮苷+15%补中益气汤含药血清组caco-2细胞SGLT1mRNA,NHE3蛋白及P38MAPK/Ezrin通路磷酸化蛋白表达均有所增加,与根皮苷组比较差异有显著性(P 0.05);根皮苷+补中益气汤含药血清组的SGLT1mRNA及NHE3、P-P38MAPK、P-Ezrin蛋白表达均高于根皮苷+15%空白血清组,差异有统计学意义(P 0.05)。结论补中益气汤含药血清可上调caco-2细胞SGLT1的基因和蛋白表达、增加NHE3蛋白表达,这可能与其促进P38MAPK和Ezrin磷酸化有关。     

补中益气汤含药血清对caco-2细胞SGLT1、P38MAPK通路及NHE3表达影响的研究北大核心CSCD

目的探讨补中益气汤含药血清对人结肠腺癌细胞(caco-2细胞)钠葡萄糖共转运体蛋白1(SGLT1)、P38MAPK通路及钠-氢交换体3(NHE3)蛋白及基因表达的影响。方法根据血清药理学方法制备补中益气汤含药血清,将caco-2细胞分为正常组、根皮苷组、根皮苷+补中益气汤含药血清组和根皮苷+空白大鼠血清组。检测各组SGLT1蛋白和基因、P38MAPK/Ezrin通路蛋白和NHE3蛋白的表达。结果与根皮苷组比较,根皮苷+补中益气汤含药血清组caco-2细胞SGLT1蛋白表达有所上调(P <0.05),且呈浓度依赖关系;根皮苷+15%补中益气汤含药血清组caco-2细胞SGLT1mRNA,NHE3蛋白及P38MAPK/Ezrin通路磷酸化蛋白表达均有所增加,与根皮苷组比较差异有显著性(P <0.05);根皮苷+补中益气汤含药血清组的SGLT1mRNA及NHE3、P-P38MAPK、P-Ezrin蛋白表达均高于根皮苷+15%空白血清组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论补中益气汤含药血清可上调caco-2细胞SGLT1的基因和蛋白表达、增加NHE3蛋白表达,这可能与其促进P38MAPK和Ezrin磷酸化有关。     

三子养亲汤通过抑制miR-155-5p调控Th17/Treg平衡失调对支气管哮喘的机制研究

目的:探讨三子养亲汤对与Th17/Treg细胞关联密切的miR-155表达是否产生调控作用。方法:建立培养原代大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs),利用噻唑蓝比色法(MTT)检测大鼠气道平滑肌细胞的增殖情况,Real-time PCR检测miR-155-5p的mRNA表达,Werstern blot检测IL-17、IL-10、Foxp3、RORΥt蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组支气管平滑肌细胞增殖率明显增高,IL-10、Foxp3蛋白表达量明显下调,RORγt、IL-17蛋白表达显著上调(P0.01);与模型对照组比较,三子养亲汤5%、10%、15%、20%含药血清6 g/kg组能有效抑制支气管平滑肌细胞的过度增殖,三子养亲汤6 g/kg 20%含药血清能够下调miR-155-5p的表达,三子养亲汤含药血清各组IL-10、Foxp3蛋白表达量上调,RORΥt、IL-17蛋白表达量下调(P0.05),6 g/kg三子养亲汤20%含药血清+miR155-5抑制剂组Foxp3、IL-10蛋白表达量上调,IL-17、RORΥt蛋白表达量下调。结论:三子养亲汤通过下调miR-155的表达,进而调节Th17/Treg平衡失调,这可能是其抗支气管哮喘的作用机制。     

杞精明目汤含药血清对结膜松弛症MAPK信号通路的影响

目的探讨杞精明目汤含药血清对结膜松弛症(CCh)成纤维细胞表达丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响及其作用机制。方法体外培养结膜松弛症结膜成纤维细胞并鉴定,分为CCh对照组、CCh+20%含药血清组(含药血清组)、CCh+20%无药血清组(无药血清组),予20%的含药或无药血清干预48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测p38MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化水平的光密度值,Western Blot检测p38 MAPK、JNK、ERK蛋白及其磷酸化水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测p38 MAPK、JNK、ERK的m RNA表达,并行统计学分析。结果 ELISA结果显示:含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、p-p38 MAPK光密度值明显降低(P0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P0.05)。含药血清组较CCh对照组JNK光密度值降低(P0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-JNK光密度值下降(P0.05)。含药血清组较CCh对照组ERK、p-ERK光密度值下降,差异有统计学意义(P0.05);而无药血清组与CCh对照组差异均无统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示:含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-p38MAPK蛋白表达量明显下降(P0.05),且20%含药血清的p38 MAPK蛋白磷酸化水平下调更为明显。含药血清组、无药血清组与CCh对照组JNK、p-JNK蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05)。含药血清组、无药血清组与CCh对照组ERK蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-ERK蛋白表达量均明显降低(P0.05),其中含药血清组的ERK蛋白磷酸化水平下调更为明显。RT-PCR结果显示:无药血清组和含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、JNK、ERK的m RNA表达水平均显著下降,差异有统计学意义(P0.05),且20%含药血清组p38 MAPK、JNK、ERK m RNA水平下调更为明显。结论杞精明目汤含药血清可下调结膜松弛症成纤维细胞MAPK信号通路相关蛋白和基因的表达,其对p38 MAPK、ERK蛋白的磷酸化水平和基因表达的抑制,可能是该方疗效机制的关键。     

柴胡三参胶囊对p38MAPK通路介导BMSCs向心肌细胞分化的干预研究

目的研究柴胡三参胶囊含药血清干预骨髓间充质干细胞在p38MAPK通路向心肌细胞分化的作用,探讨其抗心律失常机制与p38MAPK信号转导通路的相关性。方法根据不同处理因素将骨髓间充质干细胞分为4组:空白对照组、BMP-2诱导剂组、柴胡三参含药血清+BMP-2诱导剂组、柴胡三参含药血清组,分别加入空白血清、BMP-2、柴胡三参含药血清+BMP-2及柴胡三参含药血清,用WB法检测各组内p38MAPK m RNA表达水平,RT-PCR法检测干预后各组中MEF2C、CTn T蛋白表达。结果 WB法结果显示:与其他各组对照,柴胡三参+BMP-2组p38MAPK m RNA表达均上调(P0.01);以最佳浓度即20%的含药血清给予柴胡三参+BMP-2组、柴胡三参组干预后,空白组、BMP-2组、柴胡三参组p38MAPK m RNA表达较柴胡三参+BMP-2组均见下调(P0.05或P0.01),而空白组表达与其他组比较均无统计学意义。RT-PCR结果显示:诱导后BMP-2组、BMP-2+柴胡三参组、柴胡三参组MEF2C及CTn T表达水平均高于空白血清组,差异有统计学意义(P0.01);BMP-2+柴胡三参组表达水平高于BMP-2组、柴胡三参组(P0.05);BMP-2组与柴胡三参组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论柴胡三参胶囊含药血清在一定条件下能促进骨髓间充质干细胞的增殖,对P38MAPK通路介导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化具有一定的促进作用。     

糖肾宁对高糖培养的小鼠系膜细胞TGF-β1和P38MAPK表达的影响

目的观察糖肾宁对高糖培养的小鼠系膜细胞转化生长因子-1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen activated protein kinases,P38MAPK)表达的影响。方法以体外高糖培养的小鼠系膜细胞为研究对象,实验分为正常对照组、高糖培养组、高糖+缬沙坦组和高糖+糖肾宁高、中、低剂量组,使用大鼠含药血清给药分别处理24小时,用ELISA法检测细胞上清液中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的含量水平;运用Western Blot方法检测P-P38MAPK、环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)、TGF-β1的蛋白水平。结果与正常对照组比较,高糖培养组系膜细胞上清液中FN蛋白表达明显升高(P0.05);与高糖组比较,糖肾宁组能明显抑制P38MAPK及其下游核转录因子CREB的水平,下调TGF-β1和FN的表达(P0.05)。结论糖肾宁能够抑制细胞外基质增生,可能与下调TGF-β1,抑制P38MAPK/CREB信号通路的激活,从而抑制FN等细胞外基质的合成有关。     

miR-145抑制VSMC增殖的作用及其相关信号通路研究

目的探讨miR-145对PDGF—BB诱导的大鼠原代血管平滑肌细胞（VSMC）的作用及丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号转导途径的作用。方法体外培养大鼠原代VSMC,再将细胞分为空白对照组、miR—NC组、PDGF—BB＋miR-145组及PDGF—BB组。CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;实时RT—PCR方法检测PCNA、c—Jun及SM22a的表达水平;Western印迹方法检测ERK1／2和P—ERK1／2的表达、JNK和P—JNK的表达以及p38MAPK和P—p38MAPK的表达。结果miR-145过表达后能够抑制PDGF诱导的大鼠原代VSMC增殖,并下调VsMc增殖相关基因PCNA、c—Jun的表达、上调分化相关基因SM22a的表达;PDGF—BB诱导VSMC后,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显上调,而转染miR-145慢病毒后再加PDGF刺激,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显下调。结论miR-145能够抑制去分化型VSMC中的MAPK信号通路,进而抑制VSMC的增殖。     

抗纤灵方对体外培养肾成纤维化细胞TGF-β1/p38MAPK信号通路干预的实验研究

目的:观察抗纤灵含药血清对大鼠成纤维细胞TGF-β1和p38MAPK、α-SMA、Ⅰ型胶原的抑制作用。方法:将抗纤灵方煎至含原药材2g/ml,氯沙坦钾配成含药0.33mg/ml,给大鼠灌胃(正常组给予蒸馏水灌胃),制备抗纤灵血清、氯沙坦钾血清和正常血清。用DMEM培养基稀释血清,将其分为正常血清组、TGF-β1组、抗纤灵组、抗纤灵组+TGF-β1、氯沙坦钾组和氯沙坦钾+TGF-β1组。以大鼠的成纤维细胞为材料,采用Westernblot法检测大鼠成纤维细胞p38MAPK、α-SMA、Ⅰ型胶原和TGF-β1的表达。结果:加入TGF-β1刺激因子的细胞表达TGF-β1和p38MAPK、α-SMA、Ⅰ型胶原较正常大鼠血清组明显增强,抗纤灵及氯沙坦钾含药血清可明显抑制其表达。结论:抗纤灵含药血清可以通过抑制大鼠的成纤维细胞TGF-β1的表达,减少细胞外基质p38MAPK、α-SMA、Ⅰ型胶原的沉积,从而延缓肾纤维化的进程。     

温阳振衰颗粒对慢性心衰大鼠模型心肌细胞线粒体自噬关键蛋白的影响

目的探讨温阳振衰颗粒对慢性心衰大鼠模型心肌细胞线粒体自噬关键蛋白(PINK1/Parkin/LC3/Prohibitin2)的影响。方法 SPF级SD大鼠90只,随机抽取15只为正常对照组,将余下75只予注射阿霉素6周,造模6周后行心脏彩超检查,再从造模成功的实验大鼠中先分层后分组,按随机区组设计分组:模型对照组、缬沙坦对照组、温阳低剂量组、温阳中剂量组、温阳高剂量组。灌胃6周后,分别检测各组(PINK1、Parkin、LC3、Prohibitin2)表达水平。结果造模6周后,模型组心肌细胞线粒体自噬蛋白表达明显高于正常对照组,且组间差异具有统计学意义(P0.05);各治疗组经药物干预6周后,自噬蛋白表达较模型组均有下降趋势,且具有统计学意义(P0.05),其中以温阳中剂量组心肌PINK1/Parkin/LC3/Prohibitin2水平下降最为明显(P0.05),温阳高剂量组与阳性药物对照组两者相比无明显差异(P0.05)。结论温阳振衰颗粒能下调心衰细胞线粒体自噬关键蛋白的表达水平,这可能是其调控心室重构和心肌细胞凋亡的重要机制之一。     

温阳振衰颗粒对慢性心衰模型大鼠心肌CREB表达的影响

目的观察温阳振衰颗粒(附子、干姜、甘草等)对慢性心衰模型大鼠心肌反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响。方法健康SD大鼠60只,随机抽取10只为正常对照组,其余50只大鼠建立慢性心衰模型后随机分为模型对照组,温阳振衰颗粒低、中、高剂量组和阳性对照组。各组连续用药干预4周。检测实验末各组大鼠心肌p-CREB、CREB mRNA及蛋白的表达水平。结果与正常对照组相比,药物干预各组p-CREB表达明显上调,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,温阳振衰颗粒中、高剂量组较其余各组上调相对缓慢(P0.05)。各组大鼠心肌CREB蛋白及mRNA的表达无明显差异(P0.05)。结论温阳振衰颗粒能抑制CREB蛋白的过度磷酸化,这可能是其治疗慢性心衰的重要机制之一。     

基于P38 MAPK信号通路探讨扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌LNCaP细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞增殖、凋亡及p38 MAPK通路的作用。方法：应用CCK-8法观察扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞的增殖抑制作用,以流式细胞仪分析扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞凋亡的影响,Western Blot法检测LNCaP细胞p38 MAPK、p-p38MAPK、Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53等蛋白的表达。结果：扶正利湿抗癌方含药血清能够以剂量依赖性地抑制LNCaP细胞增殖并诱导其凋亡,上调p-p38 MAPK、Bax、Caspase-3及p53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平。结论：扶正利湿抗癌方含药血清可能通过激活p38 MAPK信号传导通路抑制LNCaP细胞增殖并促进其凋亡。     

芪卫颗粒调控miRNA-155减轻高糖诱导小鼠足细胞转分化的研究

目的观察中药芪卫颗粒对体外高糖诱导的小鼠肾小球足细胞转分化的作用及对细胞miRNA-155表达的影响,探讨其保护足细胞的可能机制。方法以小鼠肾足细胞株作为研究对象,采用高糖刺激构建细胞转分化模型,分为正常组(空白血清培养)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖+空白血清培养)、芪卫颗粒组(30 mmol/L葡萄糖+含药血清培养)、miRNA-155基因敲减组(30 mmol/L葡萄糖+miRNA-155抑制剂)4个组,48小时后,收集各组细胞并进行相关检测。CCK-8法检测各组细胞活力,实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白质印迹法检测各组细胞转分化相关指标nephrin和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平,各组细胞miRNA-155的表达水平采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测。结果相比较于正常组,高糖组细胞活力下降(P0.05),转分化相关指标nephrin的基因和蛋白表达均减少(P0.05),α-SMA的基因和蛋白表达均增加(P0.05),miRNA-155表达水平明显升高(P0.05);而与高糖组相比,芪卫颗粒组和miRNA-155基因敲减组细胞活力有所升高(P0.05),nephrin的基因和蛋白表达均明显上调(P0.05),α-SMA的基因和蛋白表达均有所下调(P0.05),且芪卫颗粒组miRNA-155表达水平较高糖组明显减少(P0.05)。结论芪卫颗粒能通过抑制miRNA-155的水平来减轻高糖诱导的足细胞转分化。     

益气逐瘀方对缺氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡及miR-24/Bim通路的影响

目的研究益气逐瘀方(参元丹)对缺氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡及miR-24/Bim通路的影响。方法分离并培养乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧模型,Lipofectamine2000转染miR-24 mimic/inhibitor至心肌细胞,实验分为正常组、缺氧组、参元丹组、参元丹+miR-24 mimic组、参元丹+miR-24 inhibitor组,治疗组予参元丹含药血清干预。比色法检测心肌细胞培养基上清液LDH、CPK活性,MTT法检测心肌细胞存活率,Annexin V/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡,qRT-PCR检测心肌细胞miR-24、Bim mRNA表达。结果与低氧组相比,参元丹组、参元丹+miR-24 mimic组、参元丹+miR-24 inhibitor组均能显著降低细胞培养基上清液LDH、CPK活性(P<0.05),提高心肌细胞存活率(P<0.05),降低心肌细胞凋亡(P<0.05),升高心肌细胞miR-24 mRNA表达(P<0.05),降低Bim mRNA表达(P<0.05);治疗组之间比较,参元丹+miR-24 mimic组作用更显著(P<0.05)。结论益气逐瘀方参元丹能够减轻缺氧诱导乳鼠心肌细胞损伤及细胞凋亡,其作用机制可能与其上调miR-24表达,同时抑制其靶基因Bim mRNA表达有关。