辛润苦泄方对胰岛素抵抗大鼠糖脂代谢影响的实验研究

目的研究辛润苦泄方对胰岛素抵抗(IR)大鼠糖脂代谢的影响。方法采用高脂饮食结合腹腔注射链脲佐菌素方法建立2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型,将成功造模的30只大鼠随机分为模型对照组、唐旨宁颗粒低剂量组、唐旨宁颗粒中剂量组、唐旨宁颗粒高剂量组和吡格列酮组,每组6只。另设正常对照组。药物干预6周后,采用酶联免疫吸附检测法(ELESA)检测各组血清中脂联素(ADP)、游离脂肪酸(NEFA)含量;采用RT-PCR方法检测大鼠肝脏胰岛素抵抗相关基因磷酸烯醇式丙酮酸羟激酶(PEPCK)和胰岛素受体底物2(IRS-2)的mRNA表达;采用Western-blot方法检测大鼠肝脏胰岛素抵抗相关蛋白PEPCK和IRS-2的蛋白表达。结果模型组大鼠空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)和血清胰岛素(FINS)均显著高于正常组,胰岛素敏感性指数(ISI)显著低于正常组(P0.01)。药物干预6周后,与模型组比较,各治疗组大鼠血清ADP浓度均升高,NEFA含量均降低(P0.01);各治疗组大鼠肝脏组织中PEPCK的mRNA表达水平均显著下调,IRS-2的mRNA表达水平均显著上调(P0.05);各治疗组大鼠肝脏组织中PEPCK的蛋白表达均显著上调,IRS-2的蛋白表达均显著下调(P0.01)。与吡格列酮组比较,唐旨宁颗粒中、低剂量组的ADP浓度均偏低,低剂量组的NEFA浓度偏高(P0.05),唐旨宁颗粒高剂量组的ADP浓度高于吡格列酮组,中、高剂量组的NEFA浓度均高于吡格列酮组,差异均不具有统计学意义(P0.05);唐旨宁颗粒中、低剂量组中PEPCK均上调,IRS-2的mRNA表达均下调(P0.05);高剂量组中PEPCK和IRS-2的mRNA表达均上调(P0.05);中、低剂量组中PEPCK蛋白表达均上调,IRS-2蛋白表达均下调,差异均具有统计学意义(P0.05);高剂量组中PEPCK蛋白表达上调,IRS-2蛋白表达下调,差异不具有统计学意义(P0.05)。结论辛润苦泄方使2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠血清中的ADP含量升高,NEFA含量下降,能明显改善胰岛素抵抗大鼠的糖脂代谢,其作用机制可能是通过下调PEPCK、上调IRS-2的表达实现的。     

青钱柳叶复方对糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素信号通路和GLUT4的影响

目的通过建立高血糖动物模型,研究青钱柳叶复方对糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素信号通路和GLUT4的影响及作用机制。方法采用高脂饮食联合小剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)30 mg/kg建立2型糖尿病模型,造模成功后大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、青钱柳叶复方高剂量组(复方高剂量组)、青钱柳叶复方低剂量组(复方低剂量组)。正常对照组和模型组给予蒸馏水,各药物治疗组分别灌胃给予相应剂量药物。给药12周后,氧化酶法检测大鼠空腹血糖(FBG)的变化;ELISA法检测大鼠血清中的空腹胰岛素水平(FINS)的变化;计算各组大鼠胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(HOMA-IS);Western-Blot法、RT-PCR法和免疫组织化学检测骨骼肌胰岛素信号通路IRS-1、IRS-2、PI3K、AKT、GLUT4的表达情况。结果复方(高、低)治疗组大鼠血清FBG、糖化血红蛋白(Hb A1c)、FINS均显著降低(P0.05);HOMA-IR显著降低,HOMA-IS显著升高(P0.05);其中复方高剂量组大鼠血清FBG、Hb A1c、FINS等含量低于复方低剂量组;但差异无统计学意义(P0.05)。复方高剂量组糖尿病大鼠骨骼肌IRS-1、IRS-2、PI3K、AKT、GLUT4等蛋白表达量增多。结论青钱柳叶复方能降低2型糖尿病大鼠血糖,改善胰岛素抵抗。此作用是通过增加胰岛素受体底物(IRS-1、IRS-2)数量,激活PI3K途径增加GLUT4转位,增强骨骼肌中GLUT4基因和蛋白表达实现的。     

白虎加人参汤对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响

目的 探讨白虎加人参汤对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗模型的影响及其作用。方法 通过尾静脉注射四氧嘧啶联合高脂饲料喂养制备2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗模型,观察白虎加人参汤对大鼠空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素敏感指数（ISI）、血清总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）水平及葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）、胰岛素受体（InsR）基因表达的影响。结果 与模型组比较,白虎加人参汤低、高剂量均可显著降低糖尿病大鼠FPG、FINS、TC和TG含量,显著升高ISI（P＜ 0.05,P＜ 0.01）,明显增加骨骼肌GLUT4、肝细胞膜InsR蛋白表达,显著上调骨骼肌GLUT4 mRNA、肝脏InsR mRNA表达（P＜ 0.01）。结论 白虎加人参汤可降低糖尿病大鼠FPG、FINS、TC和TG含量,显著升高ISI,对2型糖尿病胰岛素抵抗模型大鼠胰岛功能有明显保护作用,其机制可能与调控骨骼肌GLUT4、肝细胞膜InsR mRNA和蛋白表达水平,维持胰岛细胞的正常结构和功能密切相关。     

桑精胶囊改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及其分子机制的研究

目的观察桑精胶囊对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的治疗效应及其分子机制。方法应用小剂量链脲佐茵素加高热量饲料饲养的方法建立实验性2型糖尿病大鼠模型,观察桑精胶囊灌胃6周对葡萄糖耐量、血清胰岛素、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白-胆固醇、游离脂肪酸和胰岛素敏感性指数的影响,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定肝脏胰岛素样生长因子1(IGF-1)mRNA表达及蛋白印迹(Western-blot)检测骨骼肌葡萄糖转运子4(GLUT4)水平。结果桑精胶囊能减轻2型糖尿病大鼠体重,改善糖耐量和调节脂代谢,降低血清游离脂肪酸,减轻高胰岛素血症,提高胰岛素敏感性,且表现为剂量-效应关系。与正常组相比,模型组肝脏IGF-1 mRNA表达水平及骨骼肌GLUT4含量及胰岛素敏感指数明显下降(P＜0．01)；与模型组相比,桑精胶囊组肝脏IGF-1 mRNA及骨骼肌GLUT4含量表达明显上升(P＜0．01或P＜0．05)。结论桑精胶囊能改善2型糖尿病大鼠之胰岛素抵抗,并可能与其改善脂代谢,降低游离脂肪酸有关,其分子机制可能与增加骨骼肌GLUT4蛋白含量,上调肝脏IGF-1 mR- NA表达水平有关。     

降糖消渴颗粒对糖尿病大鼠骨骼肌AMPK信号通路的影响

目的:探讨肝脾肾同治的组方降糖消渴颗粒对糖尿病(DM)大鼠血糖及骨骼肌AMPK信号通路的影响。方法:SD大鼠高脂饲料喂养4周后结合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)30 mg·kg~(-1),建立2型糖尿病大鼠模型,将成模的大鼠按血糖随机分为模型组、阳性对照组(吡格列酮片1.5 mg/kg BW)、降糖消渴颗粒组(9 g生药/kg BW),并设正常对照组。干预前及干预2周、4周后,分别检测大鼠空腹血糖(FBS),实验结束后实时荧光定量PCR法检测大鼠肌肉组织AMPKα、葡萄糖转运子4(GLUT4)、胰岛素受体底物1(IRS-1)mRNA表达,Western Blot法检测AMPKα、p-AMPKα、GLUT4、IRS-1蛋白表达。结果:降糖消渴颗粒组大鼠空腹血糖水平均明显低于模型组大鼠(P0.05),且该效果存在时-效关系。降糖消渴颗粒能上调DM大鼠骨骼肌组织AMPKαmRNA及蛋白表达,且p-AMPK蛋白量亦明显增加(P0.01),同时提高DM大鼠骨骼肌组织GLUT4、IRS-1 mRNA及蛋白表达量(P0.01)。结论:立足于肝脾肾三脏同治的中药复方降糖消渴颗粒能通过激活骨骼肌AMPK信号通路相关蛋白,达到改善DM大鼠糖代谢,提高骨骼肌胰岛素敏感性的作用。     

加减抵当汤对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌GLUT4基因表达的影响

目的：探讨加减抵当汤对IR大鼠骨骼肌GLUT4mRNA表达的影响。方法：造模大鼠随机分成正常组、模型组、加减抵当汤高、中、低剂量组、文迪雅组,用RT-PCR方法检测加减抵当汤对IR大鼠骨骼肌GLUT4mRNA表达的影响。结果：加减抵当汤高、中剂量组能明显上调IR大鼠骨骼肌GLUT4mRNA的表达（P〈0.05和P〈0.01）。结论：加减抵当汤能上调GLUT4mRNA的表达,可能是其改善IR的机理之一。     

益精杞菊地黄颗粒对慢性高眼压大鼠视网膜RGCs凋亡相关因子表达的影响

目的观察益精杞菊地黄颗粒对慢性高眼压大鼠视网膜RGCs凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响。方法选用健康雄性的SD大鼠60只,随机平均分为5组,空白组、模型组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组。除空白组,其余4组均采用烧灼巩膜上静脉法,建立慢性高眼压模型。干预1个月后,分别采用免疫组化染色法检测视网膜RGCs层Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA、Bax mRNA、Caspase-3 mRNA的相对表达量。结果 (1)免疫组化染色法检测,中药治疗组、模型组大鼠RGCs中Bcl-2、Bax、Caspase-3较正常组均有统计学差异(P0.01);与模型组相比,中剂量中药组的Bcl-2表达显著增多(P0.01),Bax、Caspase-3的表达显著减少(P0.01);Bcl-2、Bax、Caspase-3表达,高、低剂量组与模型组比较,无统计学意义(P0.05)。(2)RT-PCR检测显示,中、低剂量中药组的Bcl-2 mRNA相对表达量较模型组增多(P0.01),高剂量中药组较模型组,无统计学意义(P0.05);中、低剂量中药组Bax mRNA相对表达量均较模型组减少(P0.05),而高剂量组较模型组无统计学意义(P0.05);中剂量中药组的Caspase-3 mRNA相对表达量较模型组减少(P0.01),而高、低剂量组与模型组比较无统计学意义(P0.05)。结论益精杞菊地黄颗粒剂对慢性高眼压大鼠RGCs凋亡有保护作用,其机理可能与Bcl-2蛋白的表达上调,Bax和Caspase-3蛋白的表达下调有关,中剂量中药组的作用比较明显。     

清化颗粒对糖尿病小鼠葡萄糖转运因子的影响

目的探讨清化颗粒治疗2型糖尿病的可能作用机制。方法 24只db/db糖尿病小鼠随机分为模型对照组和清化颗粒低、中、高剂量组各6只,另设6只db/m小鼠为空白对照组。清化颗粒低、中、高剂量组分别给予清化颗粒3.77、7.54、15.08 g/(kg·d)灌胃,模型对照组给予生理盐水10 ml/(kg·d)灌胃,空白对照组不做其他处理。各组均连续观察4周。实验结束后检测各组小鼠空腹血糖、血清糖化血红蛋白(Hb A1c)含量及血清胰高血糖素样肽1(GLP-1)浓度,并检测小鼠回肠组织中葡萄糖转运因子2(GLUT2)mRNA和蛋白水平。结果与空白对照组比较,模型对照组小鼠空腹血糖和Hb A1c含量明显升高,血清GLP-1浓度及回肠组织中GLUT2 mRNA和蛋白表达均明显降低(P0.01)。与模型对照组比较,清化颗粒低、中、高剂量组均能下调空腹血糖和Hb A1c含量,上调血清GLP-1浓度及回肠组织中GLUT2mRNA和蛋白表达,并且以清化颗粒高剂量组效果最好(P0.05或P0.01)。结论清化颗粒能降低db/db糖尿病小鼠空腹血糖和Hb A1c水平,促进GLP-1分泌,其作用机制可能与上调回肠组织中GLUT2的表达有关。     

痛风宁含药血清对尿酸诱导HK-2中尿酸盐转运体的影响

目的:从肾脏尿酸盐转运体角度探讨痛风宁降低血尿酸的机制。方法:将人肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为正常组,模型组,痛风宁低、中、高剂量组(7. 65,15. 3,30. 6 g·kg-1),苯溴马隆组(50μmo1·L-1),分别予不同培养液进行干预。于干预24 h后收集HK-2及上清液,采用蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组HK-2中尿酸盐转运蛋白1(URAT1),葡萄糖转运体9(GLUT9),有机阴离子转运体1(OAT1),有机阴离子转运体3(OAT3)和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)蛋白及mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组URAT1,GLUT9蛋白及mRNA表达显著升高(P 0. 01),ABCG2蛋白及mRNA表达显著下降(P 0. 01);与模型组比较,痛风宁各剂量组和苯溴马隆组URAT1,GLUT9蛋白及mRNA表达均明显下降(P 0. 01),且痛风宁各剂量组优于苯溴马隆组,痛风宁各剂量组ABCG2蛋白及mRNA表达显著升高(P 0. 01);与痛风宁中剂量组比较,痛风宁低、高剂量组URAT1,GLUT9蛋白及mRNA表达明显升高,ABCG2蛋白及mRNA表达明显下降(P 0. 01)。OAT1和OAT3蛋白及mRNA于各组均无表达。结论:痛风宁可通过下调HK-2中URAT1,GLUT9蛋白及mRNA表达,上调ABCG2蛋白及mRNA表达,调节肾小管对尿酸的重吸收和分泌,促进尿酸在肾脏的排泄,降低血尿酸水平。提示对肾脏尿酸转运体蛋白的调节可能是痛风宁发挥利湿排浊功效而降低血尿酸的具体机制之一,OAT1和OAT3蛋白及mRNA在体外培养的HK-2中无表达。     

补肾舒脊颗粒对人骨髓间充质干细胞BMP-4、Smad-4 mRNA及蛋白表达的影响

目的研究补肾舒脊颗粒对人骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白(BMP)通路BMP-4、Smad-4mRNA及蛋白表达的影响。方法体外培养人骨髓间充质干细胞,并将其分为空白组、西药组、模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组,向成骨细胞诱导,干预28天后提取mRNA及蛋白,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测BMP-4、Smad-4 mRNA及其蛋白的表达。结果(1)RT-PCR结果发现,与模型组比较,中药低剂量组BMP-4 mRNA表达水平降低(P0.05),中药中、高剂量组BMP-4、Smad-4 mRNA表达水平降低(P0.05)。与西药组比较,中药低、中、高各剂量组BMP-4、Smad-4 mRNA水平均降低(P0.05)。与中药低剂量组比较,中药中剂量组BMP-4 mRNA表达水平降低(P0.05),中药高剂量组BMP-4、Smad-4 mRNA表达水平降低(P0.05)。(2)Western blot结果发现,与空白组比较,模型组BMP-4蛋白表达降低(P0.05);与模型组比较,西药组、中药低、中剂量组BMP-4、Smad-4蛋白表达均降低(P0.05);与西药组比较,中药中剂量组BMP-4、Smad-4蛋白表达水平降低(P0.05)。结论补肾舒脊颗粒可能通过BMP通路抑制BMP-4及Smad-4的表达,从而起到延缓强直性脊柱炎异位骨化的作用。其中中药低剂量组可以降低BMP-4表达水平,而中、高剂量组可以降低BMP-4、Smad-4表达水平。     

益气活血通腑法对类2型糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4表达的影响

目的：研究益气活血通腑中药(加味桃核承气汤)对类2型糖尿病大鼠的作用及骨骼肌葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRNA表达的影响。方法：采用低剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射加高热量饲料喂养导致大鼠类2型糖尿病模型，灌胃给药4周，检测糖耐量、空腹血清胰岛素及骨骼肌GLUT 4mRNA表达量的变化。结果：造模后大鼠注射葡萄糖后30、60、120min血糖显著升高，血清空腹胰岛素水平无明显变化，骨骼肌GLUT4 mRNA表达量显著降低。给药4周后，各药对空腹血清胰岛素水平和注糖后30、60min血糖无明显影响，但中药低剂量、二甲双胍、罗格列酮可使注糖后120min血糖下降；罗格列酮尚可降低空腹血糖。二甲双胍可使骨骼肌GLUT4mRNA表达量明显升高，中药高剂量可防止GLUT 4mRNA表达量的降低，但罗格列酮对GLUT4 mRNA表达量的降低无影响。结论：低剂量STZ腹腔注射加高热量饲料喂养可导致大鼠类2型糖尿病胰岛素抵抗样改变，益气活血通腑中药可改善此模型的糖耐量异常，其作用与增强其骨骼肌GLUT4基因表达，促进骨骼肌对葡萄糖的摄取和利用有关。     

银杏叶提取物对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌 GLUT4 表达的影响

 目的 观察银杏叶提取物对高脂饮食所诱导的胰岛素抵抗大鼠骨骼肌葡萄糖转运蛋白 4 （ GLUT4 ）表达的影响,探讨银杏叶提取物改善胰岛素敏感性的分子机制。 方法 采用高脂喂养的方法建立胰岛素抵抗大鼠模型,并给予为期 4 周的不同剂量银杏叶提取物腹腔注射干预,以罗格列酮作为阳性对照。干预后测定大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、空腹血糖、空腹胰岛素等指标,高胰岛素 - 正常葡萄糖钳夹实验评价银杏叶提取物的胰岛素增敏作用。 Western Blot 测定大鼠骨骼肌 GLUT4 蛋白水平,实时荧光定量 RT-PCR 测定大鼠骨骼肌 GLUT4 mRNA 表达。 结果 高脂饮食成功建立胰岛素抵抗大鼠模型,与正常对照组相比,葡萄糖输注率显著下降,空腹血糖、空腹胰岛素、总胆固醇、甘油三酯升高 ( P<0.01) ,骨骼肌 GLUT4 蛋白水平下降 ( P<0.05) ,骨骼肌 GLUT4 mRNA 下降 ( P<0.01) 。银杏叶提取物干预使葡萄糖输注率增加,并不同程度地降低总胆固醇、甘油三酯、空腹血糖、空腹胰岛素,同时骨骼肌 GLUT4 表达上调,中、高剂量银杏叶提取物对上述指标的改善更加明显,优于低剂量组。 结论 银杏叶提取物能够改善高脂饮食诱导的胰岛素抵抗状态,其胰岛素增敏机制与增加骨骼肌 GLUT4 的表达有关。     

黑逍遥散对阿尔茨海默病大鼠海马基因表达谱的影响

目的观察黑逍遥散对Aβ25-35诱导阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠模型海马基因表达谱的影响。方法选择雌性SD大鼠,以海马注射Aβ25-35淀粉样蛋白建立AD模型,并设立假手术组、模型组、西药组及中药高、中、低剂量组,每组14只。大鼠造模7天后连续灌胃[3 m L/(kg·d)]28天,假手术组与模型组给予生理盐水,西药组给予石杉碱甲片水溶液[0.02 mg/(kg·d)],中药高、中、低剂量组分别给予黑逍遥散水煎液[17.00、8.50、4.25 g/(kg·d)]。灌胃结束后处死大鼠解剖取得大鼠海马组织,并提取组织RNA,利用大鼠基因表达谱芯片筛选差异表达的基因,而后对获得的部分剂量依赖性变化的差异表达基因进行qRT-PCR验证。结果与假手术组比较,模型组583个基因表达上调,579个下调,wisp1、crebbp、igfbp-1、znf483、zfp37及zic4 mRNA表达升高,casq2、bcl-2 mRNA表达降低(P0.05)。与模型组比较,中药高、中、低剂量组276个基因表达上调,170个下调,其中71个基因剂量依赖性上调表达,70个基因剂量依赖性下调表达,西药组igfbp-1、znf483、zfp37及zic4 mRNA降低,casq2、bcl-2 mRNA升高(P0.01);中药高剂量组wisp1、crebbp、igfbp-1、znf483、zfp37及zic4降低(P0.01),casq2、bcl-2 mRNA升高(P0.01);中药中剂量组crebbp、igfbp-1、znf483、zfp37及zic4降低(P0.01,P0.05),casq2、bcl-2 mRNA升高(P0.01,P0.05);中药低剂量组igfbp-1、znf483、zfp37及zic4 mRNA降低(P0.01)。与中药高剂量组比较,中药中剂量组crebbp、zfp37、zic4 mRNA升高(P0.01),igfbp-1、bcl-2 mRNA降低(P0.01,P0.05);中药低剂量组crebbp、znf483、zfp37 mRNA升高(P0.01,P0.05),igfbp-1、bcl-2、zic4 mRNA降低(P0.01)。与中药中剂量组比较,中药低剂量组casq2、bcl-2、zic4 mRNA降低(P0.01,P0.05)。结论黑逍遥散可通过调控zfp37、znf483、zic4表达影响AD发生;通过抑制wnt信号通路相关基因wisp-1、crebbp、igfbp-1、casq2的表达而影响Aβ代谢和Tau蛋白异常磷酸化。     

电针调节2型糖尿病大鼠血清tnf-α、il-6、il-1β及胰岛素抵抗的机制研究

目的:观察电针对2型糖尿病大鼠血清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β、空腹血糖(FBG)、胰岛素抵抗水平及骨骼肌IRS-1 Ser~(307)、GLUT4蛋白表达的影响,从而探讨电针足三里、三阴交、脾俞及胃脘下俞穴治疗2型糖尿病的可能机制。方法:以7只雄性ZL大鼠作为空白组,14只雄性ZDF大鼠随机分为2型糖尿病模型组和电针组(每组各7只)。干预4周,每周末检测空腹血糖,4周后取血清,放免法检测TNF-α、IL-6、IL-1β及胰岛素,取骨骼肌进行Western Blot检测IRS-1 Ser~(307)、GLUT4蛋白表达,并计算胰岛素抵抗相关指标。结果:电针组、模型组与空白组相比,TNF-α、IL-6、IL-1β水平均显著升高(P 0.05);电针组与模型组相比,TNF-α、IL-6、IL-1β水平均明显下降,差异有统计学意义(P 0.05);电针组、模型组与空白组相比,空腹血糖均显著升高(P 0.05);电针组与模型组相比,空腹血糖水平下降,但差异无统计学意义(P 0.05);电针组与空白组比较,骨骼肌IRS-1 Ser~(307)、GLUT4蛋白表达有所提高,但差异无统计学意义(P 0.05);电针组与模型组比较,骨骼肌IRS-1Ser~(307)蛋白表达明显下降(P 0.05),而GLUT4蛋白表达明显提高(P 0.05);电针组、模型组与空白组相比,大鼠胰岛素抵抗指数水平明显提高(P 0.05);电针组与模型组相比,血清胰岛素抵抗指数水平差异有统计学意义(P 0.05)。结论:电针可调节2型糖尿病大鼠血清炎性因子、IRS-1 Ser~(307)、GLUT4蛋白表达,其可部分解释电针对IR以及2型糖尿病的作用机制及作用途径。     

生脉散对糖尿病大鼠胰岛素抵抗的改善作用

目的观察生脉散对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗的改善作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用腹腔注射小剂量链脲佐菌素联合高糖高脂饲料喂养的方法建立胰岛素抵抗型T2DM大鼠模型。将大鼠分为正常组、模型组、二甲双胍组,以及生脉散低、中、高剂量组,每组10只。二甲双胍组给予4.0 mg·kg~(-1)二甲双胍,生脉散各剂量组分别给予50、200、400 mg·kg~(-1)生脉散药液,正常组和模型组给予等量0.9%Na Cl溶液。连续给药6周后,试剂盒检测各组大鼠血清空腹血糖(FBG)和空腹胰岛素(FINS)水平,并计算胰岛素敏感指数(ISI),ELISA法检测各组大鼠血清白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。Western blot检测大鼠骨骼肌组织中胰岛素受体底物-1(IRS-1)、磷脂酰肌醇-3-羟激酶p85亚基(PI3Kp85)和葡萄糖转运蛋白(GLUT4)的表达变化,RTPCR检测骨骼肌组织中Glut4 mRNA表达。结果不同剂量生脉散干预后均可明显降低糖尿病大鼠血清FBG、FINS、TNF-α、IL-6水平(P0.05),同时显著增加骨骼肌组织中IRS-1和PI3Kp85蛋白表达量,上调GLUT4蛋白和mRNA表达水平(P0.05),且呈剂量依赖性。与二甲双胍组相比,生脉散高剂量组对TNF-α、IL-6、PI3Kp85和GLUT4的影响无显著差异。结论生脉散可显著改善糖尿病大鼠的胰岛素抵抗作用,其机制可能与减轻炎症反应,增加IRS-1、PI3Kp85和GLUT4的蛋白表达有关。     

辛润苦泄法对胰岛素抵抗大鼠TNF-α和PPAR-γ表达的影响

目的:研究辛润苦泄法对胰岛素抵抗大鼠肝脏和脂肪组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)表达的影响。方法:采用高糖高脂饲料喂养制作胰岛素抵抗大鼠模型,将成功造模的30只大鼠随机分为模型组、唐旨宁组和文迪雅组,每组10只。药物干预6周后,用ELISA方法定量测定血清中TNF-α水平;免疫组织化学方法检测肝脏和脂肪组织中PPAR-γ蛋白表达;RT-PCR法检测肝脏和脂肪组织中TNF-αmRNA及PPAR-γmRNA的表达。结果:高糖高脂饲料喂养6周后,模型组大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和血清胰岛素(FIN)s均明显高于对照组(P<0.01),胰岛素敏感性指数(ISI)明显低于对照组(P<0.01);药物干预6周后,与模型组比较,唐旨宁组和文迪雅组大鼠血清TNF-α显著降低(P<0.01),肝脏和脂肪组织中PPAR-γ蛋白的表达均显著增高(P<0.01,P<0.05),TNF-αmRNA表达明显减少(P<0.05,P<0.01),PPAR-γmRNA表达显著增加(P<0.01)。结论:唐旨宁能明显改善胰岛素抵抗大鼠的糖脂毒性,其作用机制可能是通过下调TNF-α、上调PPAR-γ的表达而实现的。     

四逆散对2型糖尿病大鼠血糖、11βHSD1及GR的影响

目的观察研究四逆散对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响及作用机制。方法利用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立2型糖尿病大鼠模型。设空白对照组、模型组、四逆散高剂量组及四逆散低剂量组,给药4周后测各组大鼠体质量、空腹血糖(FPG)、随机血糖、血清胰岛素(FINS)水平、血浆皮质酮含量,并计算胰岛素抵抗指数,采用Western blot法检测肝脏组织中11β-HSD1、GR蛋白表达。结果给药后,四逆散可以控制糖尿病大鼠体质量增长(P0.05),具有降低空腹及随机血糖的作用(P0.01),且中药高剂量组降血糖效果更佳,降低血清胰岛素水平、胰岛素抵抗指数水平(P0.05或P0.01),降低血浆皮质酮含量(P0.05)。模型组肝脏11β-HSD1、GR蛋白表达量上调,经中药治疗后两种蛋白的表达量均有所下调(P0.01)。结论四逆散能够改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗,其作用机制可能与下调11β-HSD1、GR蛋白的表达有关。     

白子菜对HepG2细胞胰岛素抵抗作用的分子机制

目的:观察白子菜对胰岛素抵抗人肝癌Hep G2细胞的胰岛素受体(insulin receptor,InsR),葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter4,GLUT4)mRNA表达和蛋白激酶B(protein kinase B,PKB),糖原合成激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)蛋白表达的影响,探讨其干预胰岛素抵抗的分子机制。方法:用胰岛素诱导Hep G2细胞使其产生胰岛素抵抗,实验分为空白组,模型组,白子菜水提物(Gynura divaricata hot water extracts,GDE)高、低质量浓度(1.0,0.5 g·L-1)组,白子菜总黄酮(G.divaricata flavonoids,GDF)高、低质量浓度(0.2,0.1 g·L-1)组,白子菜总生物碱(G.divaricata alkaloid,GDA)高、低质量浓度(0.1,0.05 g·L-1)组,二甲双胍(1×10-3mol·L-1)组,葡萄糖氧化酶法检测Hep G2细胞培养液上清液中葡萄糖的含量,实时荧光定量聚合酶反应(Real-time PCR)检测Hep G2细胞InsR,GLUT4 mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Hep G2细胞PKB,GSK-3β的蛋白表达。结果:与模型组比较,1.0,0.5 g·L-1GDE组上清液葡萄糖含量极显著降低(P0.01),0.2 g·L-1GDF组上清液葡萄糖含量显著降低(P0.05);GDE,GDF组InsR,GLUT4的mRNA表达显著增加(P0.05);GDE组PKB的蛋白表达显著增加(P0.05),GSK-3β的蛋白表达显著降低(P0.05),GDF组PKB的蛋白表达极显著增加(P0.01),GSK-3β的蛋白表达极显著降低(P0.01)。结论:白子菜可改善胰岛素抵抗Hep G2细胞对葡萄糖的摄取,其机制可能与上调胰岛素抵抗Hep G2细胞InsR,GLUT4 mRNA表达和PKB的蛋白表达及降低GSK-3β的蛋白表达相关。     

黄芪六一汤对2型糖尿病大鼠降糖作用的机制研究

目的:探讨黄芪六一汤对糖尿病大鼠的降糖作用及其机制。方法:采用高脂高糖饲养合并腹腔注射链脲佐菌素(30 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型。造模成功的大鼠随机分为模型组、达格列净阳性对照组及黄芪六一汤低、中、高剂量组。实验期间每周称体质量,尾静脉采血测量空腹血糖、糖化血红蛋白及胰岛素的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定2型葡萄糖转运蛋白(GLUT2)和钠-葡萄糖转运蛋白(SGLT2)的表达;荧光定量PCR分别检测GLUT2、SGLT2 mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低,血糖、糖化血红蛋白水平及SGLT2、GLUT2蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,黄芪六一汤各组糖化血红蛋白、SGLT2蛋白表达均显著降低,GLUT2蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。黄芪六一汤对模型大鼠体质量及GLUT2、SGLT2 mRNA表达无明显影响。结论:黄芪六一汤对高脂高糖饲养合并腹腔注射STZ致糖尿病大鼠具有降糖作用,治疗效果与达格列净相似,其作用机制与抑制SGLT2蛋白功能有关。     

固本化瘀法通过影响多囊卵巢综合征大鼠GLUT4/AKt表达调控胰岛素抵抗作用的机制研究

目的:观察固本化瘀法通过GLUT4/AKt调节肥胖型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠胰岛素抵抗的作用机制。方法:60只SPF级雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。模型组采用高脂加来曲唑复合造模。放射免疫法检测血清性激素水平,ELISA法检测胰岛素抵抗状态,Western blotting检测卵巢GLUT4/AKt蛋白表达变化。结果:模型组血清性激素水平紊乱,胰岛素敏感性降低,各级卵泡出现囊性扩张,闭锁卵泡增多,卵巢局部GLUT4/AKt表达降低显著(P0.05 or P0.01)。中药高、中剂量组血清性激素水平有一定改善,胰岛素抵抗有所抑制,皮质内发育不同阶段的各级卵泡及黄体和闭锁卵泡有所恢复,卵巢局部GLUT4/AKt表达升高显著(P0.05 or P0.01),尤以中剂量组整体恢复效果最佳。结论:肥胖型PCOS大鼠可出现严重的性激素紊乱,伴有全身胰岛素抵抗,卵泡成熟障碍的现象,固本化瘀法可显著改善这些不良症状,GLUT4/AKt可能是临床治疗PCOS患者的有效靶蛋白。