芪珠方对肝纤维化模型大鼠TGF-β1/Smad信号通路的作用

目的观察芪珠方的不同提取物对大鼠肝脏TGF-β1,Smad4,Smad 7蛋白与mRNA表达的影响,探讨芪珠方抗肝纤维化的作用机制。方法 70只大鼠随机分为正常组,模型组,芪珠方醇提高剂量组,芪珠方醇提低剂量组,芪珠方水提高剂量组,芪珠方水提低剂量组,秋水仙碱组。除正常组外,其余各组大鼠皮下注射40%四氯化碳(CCl_4)橄榄油造模,首次5ml·kg~(-1),以后每次3ml·kg~(-1),每周2次,共8周。于造模开始次日给药,芪珠方高,低剂量组16.2,9.72g·kg~(-1)ig,秋水仙碱组5ml·kg~(-1)剂量ig,每日1次,连续8周。造模结束后所有大鼠处死,肝脏组织学观察,Western-blot检测TGF-β1, Smad4,Smad 7蛋白表达,荧光定量PCR检测TGF-β1,Smad4,Smad 7 mRNA表达。结果模型组大鼠肝组织纤维化程度,炎症程度高于正常组,肝组织内TGF-β1,Smad4的表达增加, Smad7的表达减少(P0.05);经过芪珠方治疗后,治疗组与模型组相比肝组织纤维化和炎症程度降低,肝组织中TGF-β1,Smad4的表达降低,Smad7的表达增加(P0.05)。结论芪珠方抗大鼠肝纤维化有显著效果,其作用机制与其能影响TGF-β1/Smad信号传导通路相关因子表达有关。     

复方芪珠方对肝纤维化大鼠4种细胞因子表达的影响

目的:观察复方芪珠方的不同提取物对大鼠肝脏肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-4(IL-4)、白介素-8(IL-8)、白介素-10(IL-10)表达的影响,探讨复方芪珠方抗肝纤维化的作用机制。方法:70只大鼠随机分为空白、模型组、复方芪珠方水提高、低剂量组、复方芪珠方醇提高、低剂量组,秋水仙碱组。除正常组外,其余各组大鼠皮下注射40%四氯化碳(CCl4)橄榄油造模,首次5 mL.kg-1,以后每次3 mL.kg-1,每周2次,共8周。于造模开始次日给药,复方芪珠方高、低剂量组16.2,9.72 g.kg-1ig,秋水仙碱组0.5 mg.kg-1ig,每日1次,连续8周。造模结束后所有大鼠处死,肝脏组织学观察,测定肝脾指数,酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测TNF-α,IL-4,IL-8,IL-10在肝内的表达。结果:模型组大鼠肝组织炎症程度及纤维化程度均高于正常组,且肝组织中TNF-α,IL-4,IL-8的表达也明显增加,IL-10的表达则显著减少;应用复方芪珠方后,肝组织炎症和纤维化程度降低,同时相对模型组,肝组织中TNF-α,IL-4,IL-8的表达减少,IL-10的表达增加。结论:复方芪珠方用于大鼠肝纤维化有显著效果,其机制可能与其能影响TNF-α,IL-4,IL-8,IL-10等细胞因子在肝组织的表达有关。     

扶脾柔肝方对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨扶脾柔肝方对肝纤维化(HF)大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路的干预作用。方法将SD大鼠随机分为7组:正常对照组,模型组,秋水仙碱组(0.2 mg·kg~(-1)),扶正化瘀组(0.415 g·kg~(-1)),扶脾柔肝方低、中、高剂量组(20,40,80 g·kg~(-1))。采用大鼠背部皮下注射(sc)50%四氯化碳和灌胃(ig)30%乙醇的方法诱导HF,造模10周,成功建立大鼠HF模型,其后给予相应药物10 m L·kg~(-1),每日1次,连续4周,正常对照组、模型组给予等量生理盐水。检测大鼠血清TGF-β1;HE染色和Masson染色观察肝组织病理学变化;免疫组化法检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;同时,采用荧光定量PCR方法及免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中TGF-β1、Smad 3、Smad 4、Smad7 mRNA及蛋白的表达。结果模型组的HF程度较其余组明显严重,与正常对照组比较,模型组大鼠血清TGF-β1明显升高(P0.01),肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达升高Smad 7表达降低(P0.01);与模型组比较,扶脾柔肝方各组大鼠血清TGF-β1明显降低(P0.05,P0.01),肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达下调(P0.01),Smad 7 mRNA及蛋白表达升高(P0.05,P0.01)。结论扶脾柔肝方下调HF肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达水平,上调Smad7 mRNA及蛋白表达水平,可能是其抗HF作用机制之一。     

复方丹参片通过调控TGF-β1/Smad 通路及基质金属蛋白酶水平对肾纤维化大鼠的作用机制研究

目的基于TGF-β1/Smad 通路和基质金属蛋白酶水平探讨复方丹参片对肾纤维化大鼠的保护作用及相 关机制。方法采用灌胃腺嘌呤（250 mg·kg-1）的方式制备肾纤维化大鼠模型。将大鼠随机分为正常组、模型 组、氯沙坦组（0.09 g·kg-1）及复方丹参低（0.3 g·kg-1）、高（0.6 g·kg-1）剂量组。各组大鼠给予相应剂量灌胃给 药,每日1 次,连续干预4 周。检测大鼠血清Cr、BUN 水平;采用HE 及Masson 染色法观察肾脏组织病理形 态及纤维化程度;采用免疫组织化学法检测肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7 蛋白表达水平;采用 Western Blot 法检测肾脏组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大 鼠血清Cr、BUN 水平明显升高（P＜0.05）;肾脏出现明显纤维化病变;肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、 TIMP-1 蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）,Smad7、MMP-2、MMP-9 蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。与模 型组比较,低、高剂量复方丹参片均能明显降低大鼠血清Cr、BUN 水平（P＜0.05）;明显改善肾脏纤维化病 变;降低肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、TIMP-1 蛋白表达水平（P＜0.05）,升高Smad7、MMP-2、 MMP-9 蛋白表达水平（P＜0.05）。结论复方丹参片可能通过抑制TGF-β1/Smad 通路及提高基质金属蛋白酶 水平来实现对肾纤维化大鼠的保护作用。     

柴竭抑肝纤对硫代乙酰胺诱导的大鼠肝纤维化的影响

目的:研究中药复方柴竭抑肝纤(Chaijie Yiganxian,CJYGX)对抗大鼠肝纤维化的作用及其机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,阳性组(鳖甲煎丸),CJYGX高、中、低剂量组。除正常组外,其余5组通过腹腔注射硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导建立肝纤维化模型。自造模第4周开始,阳性组给予鳖甲煎丸1 g·kg~(-1)·d-1灌胃,CJYGX高、中、低剂量组分别给予CJYGX 7.96,3.98,1.99 g·kg~(-1)·d-1灌胃,模型组灌服生理盐水,每日灌胃1次,共5周。于末次灌胃24 h后,水合氯醛轻度麻醉大鼠,留取血清及肝组织,称肝脏湿重并计算肝脏指数;全自动分析法检测大鼠肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST),碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP);酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝纤维化血清学标志物层粘连蛋白(laminin,LN),透明质酸酶(hyaluronidase,HA),Ⅳ型胶原(Ⅳcollagen,CⅣ),Ⅲ型前胶原(procollagenⅢ,PCⅢ);马松(Masson)染色观察肝脏纤维化程度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝脏组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),Smad2,Smad3,Smad4,Smad7 mRNA表达;免疫组化检测肝脏组织血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)和TGF-β1蛋白表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组肝脏指数显著升高;肝功能指标ALP,AST,ALT的含量显著升高;肝纤维化指标LN,HA,Ⅳ-C,PCⅢ和HYP显著升高; Masson染色观察到肝纤维化程度显著增加; TGF-β1,Smad2,Smad3,Smad4 mRNA表达显著升高,Smad7 mRNA表达显著降低; TGF-β1,PDGF和α-SMA蛋白表达显著升高(P0.01)。与模型组比较,各剂量的CJYGX能不同程度的降低肝功能指标ALP,AST,ALT的水平;肝纤维化指标LN,HA,Ⅳ-C,PCⅢ和HYP都明显的降低; Masson组织观察到肝纤维化程度显著减轻; TGF-β1,Smad2,Smad3,Smad4 mRNA表达明显下调,Smad7 mRNA表达明显上调; TGF-β1,PDGF和α-SMA蛋白表达显著下调(P0.05,P0.01)。结论:中药复方"柴竭抑肝纤"可能通过干预TGF-β1/Smad信号通路,保护TAA诱导的大鼠肝纤维化损伤。     

芍芪多苷对肝纤维化大鼠肝脏星状细胞基质金属蛋白酶13及组织金属蛋白酶抑制因子1表达的影响

目的:研究芍芪多苷(SQDG)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝组织和转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的肝星状细胞(HSC)基质金属蛋白酶13(MMP-13)、组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)表达的影响,探讨SQDG抗肝纤维化作用的可能机制。方法:CCl4皮下注射建立大鼠肝纤维化模型,设立正常对照组、模型组、SQDG给药组(42.5,85,170 mg.kg-1)。放免法检测血清中I型胶原(C-I)水平;Masson染色对肝脏组织作病理检查;免疫组化法检测肝组织MMP-13,TIMP-1的表达。采用Western blot探讨SQDG体外对TGF-β1刺激的HSC MMP-13,TIMP-1及C-I表达的影响。结果:SQDG可显著降低纤维化大鼠血清中C-I含量;病理组织学检查发现,SQDG可降低化学性肝纤维化大鼠的纤维化程度,与模型组相比,纤维沉积、肝小叶的破坏等均有所减轻。免疫组化结果显示,SQDG(85,170 mg.kg-1)可显著升高肝纤维化大鼠肝脏局部MMP-13水平,降低TIMP-1水平。进一步研究发现,SQDG体外可明显抑制TGF-β1刺激的HSC-T6 TIMP-1表达,促进MMP-13的表达,同时降低C-I的表达水平。结论:SQDG可能通过调节肝纤维化大鼠肝组织MMP-13和TIMP-1的异常表达,促进HSCMMP-13的表达,抑制TIMP-1的表达,促进胶原降解而发挥抗肝纤维化的作用。     

肝乐颗粒对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的调控作用

目的:明确肝乐颗粒对转化生长因子(TGF)-β_1/Smad信号通路的干预作用,探讨其防治肝纤维化的分子学机制。方法:SD大鼠随机分为正常组,模型组,肝乐颗粒(1.5,3.0,6.0 g·kg~(-1))和秋水仙碱(1.0×10~(-4)g·kg~(-1))。采用50%四氯化碳每周2次,连续12周皮下注射的方法,诱导肝纤维化大鼠模型。造模第7周起,给药组分别灌胃给予相应剂量的肝乐颗粒和秋水仙碱,每天1次,连续6周。末次给药8 h后,处置大鼠,取固定部位肝脏组织,苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察肝脏病理组织学损伤程度,免疫组化和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测肝组织中Ⅰ型胶原(CollagenⅠ),Smad2,TGF-β_1或TGF-βI型受体(TβRⅠ)蛋白的表达,实时定量荧光PCR(Real-time PCR)检测肝组织中CollagenⅠ,Smad2,TGF-β_1mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝纤维化损伤程度,肝组织中CollagenⅠ,TGF-β_1,Smad2,TβRⅠ蛋白及mRNA的表达明显增加(P0.01);与模型组比较,肝乐颗粒中、高剂量组不仅可减轻肝组织病理损伤程度,减少胶原沉积,还可显著降低CollagenⅠ,TGF-β_1,Smad2,TβRⅠ蛋白及mRNA的表达(P0.05,P0.01)。结论:肝乐颗粒对肝纤维化大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与调控TGF-β_1/Smad信号通路,从而抑制HSC活化,减少细胞外基质过度沉积有关。     

芪蚣抗纤方中活血化瘀药对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1及Smad2/3的影响

目的:观察芪蚣抗纤方(QF)活血组对免疫损伤性肝纤维化大鼠转化生长因子(TGF-β1)及Smad2/3的影响.方法:猪血清腹腔注射法复制免疫损伤性肝纤维化大鼠模型,分为正常对照组,模型组、活血低剂量组、活血高剂量组,用双抗夹心法(ELISA法)测定血清TGF-β1含量;免疫组化法检测肝组织TGF-β1,Smad2,Smad3的表达.结果:①血清学指标:模型组血清TGF-1含量较其他组明显升高(P＜0.01).与模型组比较,活血组血清TGF-β1含量显著下降(P＜0.01),并具量效关系.②免疫组化检测:模型组肝组织TGF-β1,Smad2,Smad3表达明显,活血组肝组织中TGF-β1,Smad2,Smad3表达明显低于模型组(P＜0.01).结论:芪蚣抗纤方活血组通过降低TGF-β1,减少Smad2/3的激活,从而抑制肝纤维结缔组织增生,减轻肝损伤及肝纤维化程度.具有抑制肝纤维化的作用.     

抗纤抑癌方对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶表达的影响

目的:研究抗纤抑癌方对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1及TIMP-1表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法:以复方鳖甲软肝片和秋水仙碱为对照药,观察抗纤抑癌方对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化模型大鼠肝脏组织病理的影响,并通过免疫组化方法测定各组大鼠肝脏MMP-1、TIMP-1的表达。结果:与模型组相比,抗纤抑癌组MMP-1表达显著升高,TIMP-1表达明显降低;鳖甲软肝组和秋水仙碱组MMP-1表达均显著高于模型组。与各治疗组相比,抗纤抑癌组MMP-1表达高于鳖甲软肝组。结论:抗纤抑癌方具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与增加MMP-1表达、降低TIMP-1表达、促进细胞外基质降解等有关。     

中药乙肝散逆转实验性肝纤维化的机理研究

目的:探讨乙肝散逆转免疫损伤性肝纤维化的作用.方法:雄性Wistar大鼠尾静脉注射白蛋白建立免疫损伤性肝纤维化模型后,用含乙肝散颗粒饲料喂养12周,应用流式细胞仪定量分析术、免疫组织化学及纤维化学染色结合血清学纤维化指标,动态观察不同时期肝组织TGF-β1、TIMP-1、MMP-2基因表达量及肝纤维化组织变化.结果:乙肝散组肝组织TGF-β1、TIMP-1表达量较模型对照组明显降低,MMP-2变化无统计学差异;同时肝组织Ⅰ胶原、Ⅲ胶原、Ⅳ胶原水平和肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量明显降低.结论:乙肝散逆转肝纤维化过程中抑制肝组织TGF-β1、TIMP-1基因表达,TGF-β1、TIMP-1在肝纤维化的逆转中起重要作用.     

杜仲多糖对肝纤维化模型大鼠Ⅰ，Ⅲ型胶原蛋白，MMP-1，TIMP-1及TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:探讨杜仲多糖治疗肝纤维化(HF)作用,并探讨其相关的作用机制。方法:将60只健康SD大鼠随机分成2组,正常组(10只)和肝纤维化造模组(50只)。造模组采用40%四氯化碳(CCl4)腹腔注射制备HF动物模型,造模成功后将其随机分为5个组,分别为模型组,杜仲多糖高、中、低剂量组及秋水仙碱组每组10只。秋水仙碱组(1.0×10-4g·kg~(-1)),杜仲多糖高、中、低剂量组(0.14,0.07,0.035 g·kg~(-1))分别连续灌胃给药8周后收集样本,测定法大鼠体质量及计算肝脏系数;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清白细胞介素-6(IL-6),高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1,HMGB1),脂多糖(LPS),肝组织基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)水平;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分析各组大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白,MMP-1,TIMP-1及转化生长因子-β_1(TGF-β_1)mRNA表达情况。结果:与正常组比较,CCl_4能显著降低实验大鼠体质量(P0.01),提高肝脏系数(P0.01);杜仲多糖能显著增加HF模型的体质量(P0.01),显著降低HF模型肝脏系数(P0.01);ELISA检测表明,杜仲多糖能显著降低肝纤维化大鼠血清IL-6,HMGB1及LPS含量(P0.01);RT-PCR检测结果显示,杜仲多糖及秋水仙碱能显著降低HF肝脏中Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白,TIMP-1及TGF-β_1mRNA含量(P0.05),明显提高MMP-1含量(P0.05,P0.01),且呈量效关系。结论:杜仲多糖具有显著的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与抑制降低HF肝脏中Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白,TIMP-1及TGF-β_1mRNA表达有关。     

四逆散加味抗肝纤维化的作用及机制研究

目的:研究四逆散加味对肝纤维化转化生长因子-β1(TGF-β1)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和基质金属蛋白酶(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)的作用及其相关性,探讨其抗肝纤维化的作用机制.方法:70只Wister大鼠随机分为7组:正常对照组、病理模型组、四逆散组、四逆散加味高、中、低剂量组、四逆散预防组.除正常对照组外,其余各组均采用猪血清ip诱发肝纤维化,0.5 mL/只,2次/周,连续10周,5周后即可形成肝纤维化.预防组于造模同时给药(以四逆散加味7 g·kg-1),各治疗组于造模第6周给药,连续10周.四逆散组4g·kg-1,四逆散加味高、中、低剂量组(14,7,3.5 g·kg-1).采用免疫组化S-P法检测肝组织TGF-β1,p-p38MAPK,α-SMA,MMP-13和TIMP-1蛋白阳性染色吸光度(A).结果:正常组与模型组的TGF-β1依次为[(0.75±0.25)vs(8.67±0.64),P＜0.01],p-p38MAPK[(21.71 ±0.37)vs(80.25 0.53),P ＜0.01],α-SMA[(3.32±0.64)vs(10.55 ±0.34),P ＜0.05]和TIMP-1[(25.57±6.46) vs(200.25±20.36),P＜0.01]蛋白表达均显著减弱.四逆散加味中剂量与模型组比较TGF-β1[(5.19±2.33)vs(8.67±0.64),P ＜0.05],p-p38MAPK[(47.55 ±0.58)vs(80.25 ±0.53),P ＜0.05],α-SMA (6.21 ±0.78)vs(10.55±0.34),P＜0.01)和TIMP-1 [(86.02 ±51.37)vs(200.25 ±20.36),P＜0.01]蛋白表达显著减弱;MMP-13 [(109.59 ±33.21)vs(35.87±6.35),P＜0.01]蛋白表达显著增强.结论:四逆散加味有明显的抗肝纤维化作用.其机制可能经TGF-β/p38MAPK信号转导通路抑制肝星状细胞(HSC)活化,使HSC低表达TIMP-1,高表达的MMP-13促进基质降解有关.     

荔枝核总黄酮对大鼠肝纤维化TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:观察荔枝核总黄酮(total flavone from Litchi chinensis Sonn,TFL)对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝纤维化大鼠肝脏组织转移生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路中关键信号传导分子TGF-β1,Smad3,Smad7表达水平的变化,探讨TFL抗纤维化的作用机制.方法:SD大鼠ip DMN 4周建立大鼠肝纤维化模型,以ig水飞蓟宾为阳性对照50 mg· kg-1组,用不同剂量的TFL(400,200,100 mg·kg-1·d-1)ig给药,造模当日开始分组给药,每日1次,共给药6周.于实验第6周末处死大鼠,抽取下腔静脉血检测天冬氨酸转氨酶(AST),丙氨酸转氨酶(ALT),留取肝脏同一部位行HE,Masson染色观察大鼠病理改变及肝纤维化程度,采用RT-PCR法检测TGF-β1,Smad3,Smad7 mRNA的表达.结果:与空白对照组比较,模型组大鼠的肝纤维化程度明显增加,血清AST,ALT均显著升高,肝组织TGF-β1,Smad3 mRNA的表达明显增强(P＜0.05),Smad7 mRNA的表达显著减弱(P＜0.05);与模型组比较,TFL各剂量组和水飞蓟宾组血清AST,ALT均明显低于模型组,肝脏TGF-β1,smad3的表达明显降低(P＜0.05),而smad7则有所升高.结论:荔枝核总黄酮可减轻实验性大鼠肝损伤及改善肝纤维化程度,其作用机制可能与抑制TGF-β1,Smad3 mRNA的表达,上调Smad7 mRNA的表达有密切关系.     

补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β_1-Smads信号通路的干预作用

目的探讨补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β_1-Smads信号通路的影响。方法将53只Wistar大鼠随机分成空白组8只、模型组15只、补肾柔肝方组15只和秋水仙碱组15只。除空白组外,其余组均首次在背部皮下注射纯四氯化碳5 m L/kg,3 d后注射40%CCl4花生油3 m L/kg,每周注射2次,连续8周。第9周开始,补肾柔肝方组和秋水仙碱组分别给予补肾柔肝方流浸膏5 m L/(kg·d)、秋水仙碱溶液5 m L/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,共8周。然后取各组大鼠肝组织,分别采用免疫组化法和逆转录多聚酶链式反应检测肝组织中TβRⅠ、TβRⅡ蛋白,Smad2和Smad3磷酸化水平及TGF-β_1、TβRⅠ、TβRⅡmRNA的表达情况。结果与空白组比较,模型组肝组织中TβRⅠ、TβRⅡ蛋白及TGF-β_1、TβRI、TβRⅡmRNA表达水平均显著升高(P均0.05),Smad2和Smad3磷酸化水平无明显变化(P均0.05);与模型组比较,补肾柔肝方组和秋水仙碱组TβRⅠ、TβRⅡ蛋白以及TGF-β_1、TβRⅠ、TβRⅡmRNA表达水平均显著降低(P均0.05),Smad2和Smad3磷酸化水平无明显变化(P均0.05)。结论在TGF-β_1-Smads信号通路中,补肾柔肝方主要是通过抑制TβRⅠ、TβRⅡ表达,无法磷酸化的Smad2和Smad3失去活性,从而阻断信号通路传导发挥抗纤维化的作用。     

三甲散加减方对实验性肝纤维化大鼠TGF—β1／Smads信号通路的影响

目的：观察三甲散加减方对肝纤维化大鼠转化生长因子β1（TGF—β1）、Smad2、Smad3、Smad7,即TGF-β1／Smads信号转导通路的影响。方法：用CCl4油液诱导大鼠肝纤维化模型,随机分为4组,正常组对照组,病理模型组,阳性对照组,透邪通络组。造模的同时予药物灌胃治疗,正常组和模型组予生理盐水灌胃,10mL（kg·d）,阳性对照组予秋水仙碱0．5mg／（kg·d）,透邪通络组予三甲散加减方浸膏1．1mL／（100g·d）。8周后,处死各组大鼠,取肝组织,光镜下观察纤维化程度和免疫组化法检测TGF-β1、Smad2／3及Smad7的表达。结果：病理学观察和免疫组化检测显示,三甲散加减方能逆转CCl4诱导的肝纤维化,能显著降低TGF—β1和Smad2／3的表达,明显增高Smad7的表达,且效果优于秋水仙碱。结论：三甲散加减方能减轻肝纤维化大鼠的病理损害,有效降低肝组织TGF-β1、Smad2、Smad3的表达,增高Smad7的表达,从而减轻或逆转肝纤维化。其机制可能与阻断TGF-β1／Smads信号转导通路有关。     

肝心宁对大鼠肝纤维化α-SMA、MMP-13及TIMP-1蛋白表达的影响

目的 研究肝心宁对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达的影响.方法 采用四氯化碳皮下注射并给予高脂低蛋白饲料、30%酒精诱导大鼠肝纤维化模型.将68只雄性SD大鼠随机分为正常组11只,模型组15只,阳性对照组14只,肝心宁高剂量组14只,肝心宁低剂量组14只.6周末用免疫组织化学染色法检测肝组织中α-SMA、MMP-13及TIMP-1蛋白表达情况.结果 与模型组比较,肝心宁高、低剂量组肝纤维化程度明显减轻,α-SMA及TIMP-1蛋白表达均明显降低,MMP-13表达明显升高.结论 肝心宁抑制大鼠肝纤维组织形成作用可能与其降低α-SMA、TIMP-1蛋白表达并促进MMP-13蛋白表达有关.     

血府逐瘀汤对肺纤维化大鼠肺组织上皮间质转化的影响及其机制研究

目的:研究血府逐瘀汤对肺纤维化(PF)大鼠肺组织上皮间质转化(EMT)的影响,并探讨其可能机制。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组(0.000405 g·kg~(-1)·d~(-1))和血府逐瘀汤高、中、低剂量组(14.04、7.02、3.51 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组8只。除正常组外,其余各组大鼠均于气管内滴注博来霉素溶液建立PF模型。造模后第2天开始灌胃给药,正常组和模型组予蒸馏水溶液(10 m L·kg~(-1)·d~(-1));各给药组灌胃相应药物,每日1次,连续28 d。末次给药24 h后,采用免疫组化法检测大鼠肺组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况,采用Western blot法检测大鼠肺组织中TGF-β1、Smad3的表达情况。结果:模型组大鼠肺组织E-cadherin表达显著低于正常组(P 0.01),而α-SMA、TGF-β1、Smad3表达均显著高于正常组(P 0.01);与模型组比较,血府逐瘀汤高、中、低剂量组肺组织E-cadherin表达显著升高(P 0.05或P 0.01),而α-SMA、TGF-β1、Smad3表达均显著降低(P 0.05或P 0.01);与地塞米松组比较,血府逐瘀汤低剂量组的E-cadherin表达显著降低(P 0.05),而α-SMA、TGF-β1、Smad3表达均显著升高(P 0.05或P 0.01)。结论:血府逐瘀汤可通过干预上皮间质转化来减轻肺纤维化,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路有关。     

柴胡疏肝散对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨柴胡疏肝散对肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的作用机制。方法:60只Wistar大鼠被随机均分为6组:正常组、模型组、柴胡疏肝散高、中、低剂量组、柴胡疏肝散预防组。除正常组外,其余各组均采用猪血清ip诱发HF,0.5 m L/只,2次/周,连续10周,5周后即可形成HF。预防组于造模同时给药(以柴胡疏肝散6.3 g·kg-1),柴胡疏肝散高、中、低剂量组[(12.6,6.3,3.15)g·kg-1]于造模第6周给药,连续10周。采用RT-PCR法检测各组肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1),Smad2,Smad3,Smad4和Smad7的mRNA表达,免疫组化法分别检测肝组织TGF-β1,磷酸化Smad 2/3(p-Smad 2/3)和Smad7蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组TGF-β1,Smad2,Smad3的mRNA和TGF-β1,p-Smad 2/3蛋白表达均显著增加(均P0.01),Smad7基因表达显著降低(均P0.01);与模型组比较,柴胡疏肝散中剂量组TGF-β1和Smad3 mRNA表达均显著降低,p-Smad 2/3和TGF-β1蛋白表达显著减弱(P0.05,P0.01),Smad7基因表达显著增加(P0.01)。结论:柴胡疏肝散有明显的抗HF作用,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。     

化肝通络方对胆汁性肝硬化模型大鼠的抗纤维化作用及其机制研究

目的:探讨化肝通络方对胆汁性肝硬化模型大鼠的抗纤维化作用及其机制。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组和化肝通络方高、中、低剂量组,除假手术组外,其余各组大鼠均利用结扎大鼠胆总管方法制造胆汁淤积肝硬化模型。于造模后第2周开始分别给药,给药4周后取大鼠血清测总胆红素(T-Bil)、直接胆红素(D-Bil)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)等肝功能指标,取部分肝脏行HE染色观察肝脏病理形态变化,ELISA法测定血清α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、金属蛋白酶组织抑制因子-1抗体(TIMP-1)、细胞间黏附分子(ICAM-1)的表达,免疫组化方法测定肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)、信号传导蛋白3(Smad3)、Smad7的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠T-Bil、D-Bil、ALT、AST等肝功能指标均明显升高,且血清中α-SMA、TIMP-1、ICAM-1高表达。模型组大鼠肝脏出现炎性细胞活动及纤维组织增生等病理改变。化肝通络方各剂量组、UDCA组与模型组比较,各项肝纤维化指标均有明显下降,肝组织中TGF-β1、Smad3蛋白表达亦明显下降,Smad7表达明显升高。结论:化肝通络方对胆汁性肝硬化模型大鼠具有明显的抗纤维化作用,其机制可能与TGF-β/smad信号通路有关。     

软肝颗粒对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1/Smads信号通路的影响

目的：探讨软肝颗粒对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads 信号通路的影响。方法105只Wistar大鼠,按随机数字表法随机分为正常对照组,模型组,秋水仙碱组,大黄?虫丸组,软肝颗粒高、中、低剂量组,每组15只。采用四氯化碳和高胆固醇饮食诱导肝纤维化。模型制作后,软肝颗粒低、中、高剂量组分别灌胃软肝颗粒混悬液3.600、7.200、14.400 g/(kg?d);大黄?虫丸组灌胃大黄?虫丸混悬液0.180 g/(kg?d);秋水仙碱组灌胃秋水仙碱混悬液0.108 mg/(kg?d);正常对照组和模型组以等体积蒸馏水灌胃。均连续灌胃8周。采用免疫组化染色法检测肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7表达,运用 RT-PCR 技术检测肝组织 TGF-β1、Smad3、Smad7 mRNA 表达。结果与正常对照组比较,模型组TGF-β1[(2.59±0.99)比(0.43±0.21)]、Smad3[(2.56±0.67)比(0.41±0.18)]蛋白及 TGF-β1 mRNA[(2.25±0.21)比(0.71±0.09)]、Smad3 mRNA[(2.34±0.03)比(0.78±0.12)]表达显著升高（P均＜0.01）。与模型组比较,软肝颗粒高剂量组TGF-β1[(1.12±0.27)比(2.59±0.99)]、Smad3蛋白[(1.05±0.34)比(2.56±0.67)]表达下降,Smad7蛋白表达[(2.33±0.62)比(0.36±0.18)]升高（P＜0.01）,TGF-β1 mRNA[(1.09±0.11)比(2.25±0.21)]、Smad3 mRNA[(1.10±0.02)比(2.34±0.03)]表达下降,Smad7 mRNA[(1.18±0.13)比(0.38±0.11)]表达升高（P＜0.05）。结论软肝颗粒可通过下调TGF-β1、Smad3,上调Smad7调节肝纤维化大鼠TGF-β1/Smads信号通路。