整合素αv重组腺病毒的构建和鉴定及对人肝癌细胞黏附特性的影响

目的 构建表达人整合素αv亚基（整合素αv）重组腺病毒，并在人肝癌细胞株sMMC-7721细胞中表达，探讨整合素αv对肝癌细胞黏附特性的影响。方法将人整合素αv cDNA克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTraek-巨细胞病毒（CMV）启动子下游，与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌内同源重组，在HEK-293A细胞中包装成整合素a，重组腺病毒。以重组腺病毒感染SMMC-7721细胞24h后，用蛋白质免疫印迹法（western blot）检测整合素αv的表达；通过黏附实验研究其对SMMC-7721细胞黏附的影响。结果构建了整合素αv重组腺病毒载体并制备出高滴度重组腺病毒。重组腺病毒感染SMMC一7721细胞后．整合素a，能够正确表达，并且SMMC-7721细胞黏附率显著高于对照组和空白组（P〈0．01）。结论整合素αv基因在SMMC-7721细胞的黏附中起重要作用，是肿瘤转移的重要分子基础。     

人牙髓干细胞的体外培养及神经样诱导分化

背景：牙髓组织来源干细胞的发现及概念的确立有助于从细胞水平上认识牙齿发育和再生修复机制。目的：了解人牙髓干细胞向神经元样细胞诱导分化能力和诱导分化条件。方法：取健康青年人的第三磨牙的牙髓组织后,制成单细胞悬液,加入含有体积分数为15%胎牛血清α-MEM培养基在6孔板培养,传代培养后加入丁羟基茴香醚、forskolin、β-巯基乙醇、碱性成纤维细胞生长因子诱导剂进行培养。结果与结论：免疫荧光和反转录-聚合酶链反应检测显示,诱导2周后人牙髓细胞除了stro-1,Col-Ⅰ,牙本质涎蛋白表达阳性外,还有巢蛋白,神经元特异性烯醇化酶的表达也是阳性,而牙龈纤维细胞表达均为阴性。说明人牙髓组织中存在成体干细胞,在一定的诱导培养条件下,牙髓干细胞有向神经元样细胞分化的潜能。     

富血小板血浆对人乳牙牙髓干细胞的 增殖与向成骨分化的调控作用

目的探讨富血小板血浆(m PRP)对人乳牙牙髓干细胞(SHED)的增殖与向成骨分化的调控中的作用。方法收集陕西省宝鸡市中医医院门诊6～8岁儿童拔除的乳牙,酶消化法培养SHED,将细胞随机分为:对照组、3μmol/L组和10μmol/L组,依照分组依次以0μmol/L、3μmol/L、10μmol/L m PRP作用于SHED。采用MTT法检测m PRP对SHED增殖能力的影响,采用碱性磷酸酶(ALP)试剂盘检测m PRP作用于SHED后ALP活性的改变,RT-PCR方法检测细胞内骨涎蛋白与骨钙素mRNA含量的改变。结果①采用m PRP培养的SHED生长形态良好,单细胞形式的成纤维细胞样形态,体积较小,大多数细胞为长梭型或多角型,有些细胞呈现出立方形,细胞胞质均匀,胞体丰满。每5～7天汇合可传代。②m PRP对SHED细胞具有促进其增殖的能力,3μmol/L组与10μmol/L组SHED细胞测得的OD值均高于对照组(P 0. 05)。随着m PRP浓度的升高,测得的OD值增大(P 0. 05)。③ALP活性方面,在3μmol/L组和10μmol/L组,测得的OD值均随着时间的变化,OD值增大,且差异具有统计学意义(P 0. 05)。3μmol/L组与10μmol/L组测得的OD值在不同时间点上均高于对照组,且差异具有统计学意义(P 0. 05)。④3μmol/L组及10μmol/L组SHED细胞中骨涎蛋白和骨钙素的mRNA含量均高于对照组,且随着m PRP的浓度升高,促进作用逐渐增强(P0. 05)。结论 m PRP对SHED细胞的增殖和向成骨分化均具有一定的促进作用,随着浓度的增大和作用时间的延长,其促进增殖的能力也随之增强,可见m PRP促进SHED的增殖和向成骨分化具有一定效果。     

大鼠牙髓干细胞的基本细胞学特征以及增殖和矿化能力：分化为牙本质样细胞的可能性

目的：实验观察大鼠牙髓干细胞的基本细胞学特征和增殖及矿化特性。方法：实验于2003-07／10在军事医学科学院组织工程研究中心实验室完成。采用光学显微镜观察大鼠牙髓干细胞生长变化。①细胞爬片固定后用苏木精-伊红染色观察细胞的基本形态，②采用四甲基偶氮唑盐法对大鼠牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞的生长及增殖能力进行检测比较。③应用矿化液对大鼠牙髓干细胞进行诱导并采用Von Kossa染色的方法检测大鼠牙髓干细胞矿化能力。结果：①大鼠牙髓干细胞基本形态特征：为成纤维细胞样生长。细胞呈梭形，密集区细胞形态多样，可见多角形或椭圆形细胞密集排列。②细胞生长曲线及群体倍增时间：大鼠牙髓干细胞群体倍增时间为：58．3h；骨髓间充质干细胞的生长较牙髓干细胞旺盛，其群体倍增时间为：41．8h。③大鼠牙髓干细胞矿化能力：Von Kossa染色可见细胞密集区为黑褐色，呈结节状分布，表明有钙化结节形成。结论：大鼠牙髓干细胞形态正常，虽比骨髓间充质干细胞稍弱，但仍具有较强的增殖性能，还有一定的矿化能力，说明在一定条件下可向牙本质样细胞分化。     

N-乙基-N-亚硝基脲对兔牙髓干细胞侵袭和黏附能力诱变的体外研究

目的：通过体外诱瘤技术,利用N-乙基-N-亚硝基脲（ENU）,诱导兔的牙髓干细胞形态学和生物学行为发生变化。方法：在兔牙髓干细胞经ENU诱导后,通过增殖曲线、侵袭和黏附实验对诱导后的牙髓干细胞进行形态学和生物学行为观察。结果：牙髓干细胞诱变后增殖、侵袭和黏附能力都明显增强,细胞形态改变明显。结论：ENU有将牙髓干细胞诱导成为成釉细胞瘤肿瘤干细胞的趋势。     

酶解组织块法原代培养人牙周膜干细胞和牙髓干细胞

背景:酶解组织法是一种高效的原代细胞培养方法,利用该法可提高牙周膜干细胞和牙髓干细胞的培养成功率。目的:比较牙周膜干细胞和牙髓干细胞的原代培养成功率、细胞形态、生长特征,并对其进行多种细胞标志的鉴定。方法:取因正畸需要拔除健康牙20颗,其中16颗用于牙周膜干细胞原代培养,4颗用于牙髓干细胞培养。酶解组织块法培养两种细胞,MTT法检测两种细胞的生长曲线,利用RT-PCR法、细胞免疫组化法、细胞免疫荧光法鉴定两种细胞的标志。结果与结论:牙髓干细胞的原代培养成功率明显高于牙周膜干细胞,显示更快的生长能力。通过酶解组织法分离纯化的两种干细胞均显示正常的细胞形态和生长特征,表达相应的细胞标志CD105,CD73,波形丝蛋白vimitin,Stro-1,不表达角蛋白CK-17和CD45。提示酶解组织块法是一种高效的原代培养牙周膜干细胞和牙髓干细胞的方法。     

牙髓干细胞的研究与进展

综合分析牙髓干细胞的研究现状及发展方向，以期更好地分离鉴定牙髓干细胞，提高牙髓干细胞的体外增殖活性。通过对入选文献进行分析整理，将牙髓干细胞从干细胞理论、牙髓干细胞概念、牙髓干细胞生物学特性及牙髓干细胞培养4方面进行分析。虽然目前对牙髓干细胞的生物学特性、培养方法及应用前景已有一定了解，但牙髓干细胞的体外培养扩增、鉴定和分子机制等问题尚未完全清楚，这对牙髓干细胞的应用起到决定性作用。牙髓组织取材容易，利用牙髓干细胞研究牙齿器官发育、牙髓损伤修复的分子机制，以期最终能寻找更好地解决牙髓组织损伤修复的治疗方法。     

牙髓干细胞的研究与进展

综合分析牙髓干细胞的研究现状及发展方向，以期更好地分离鉴定牙髓干细胞，提高牙髓干细胞的体外增殖活性。通过对入选文献进行分析整理，将牙髓干细胞从干细胞理论、牙髓干细胞概念、牙髓干细胞生物学特性及牙髓干细胞培养4方面进行分析。虽然目前对牙髓干细胞的生物学特性、培养方法及应用前景已有一定了解，但牙髓干细胞的体外培养扩增、鉴定和分子机制等问题尚未完全清楚，这对牙髓干细胞的应用起到决定性作用。牙髓组织取材容易，利用牙髓干细胞研究牙齿器官发育、牙髓损伤修复的分子机制，以期最终能寻找更好地解决牙髓组织损伤修复的治疗方法。     

干细胞因子促进牙髓干细胞增殖与骨向分化能力

背景:干细胞因子作为对干细胞的增殖分化具有一定促进作用的因子,是否影响牙髓干细胞的生物学特性从而在牙齿再生中发挥重要作用尚不清楚.目的:观察干细胞因子对人牙髓干细胞增殖与骨向分化能力的影响.方法:采用酶消化法培养因正畸需要拔H{的健康人牙的牙髓组织,接种于培养板,加入含1,10 μmol/L干细胞因子的培养液,以正常培养液作为对照.MTT法检测细胞增殖,real-time PCR检测成骨相关基因骨唾液蛋白、骨钙素Mrna的表达,碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性.结果与结论:干细胞因子对牙髓干细胞的增殖具有促进作用,干细胞因子上调了骨唾液蛋白、骨钙素Mrna的表达,增强了牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性,且具有随浓度增加促进作用增强的趋势.提示干细胞因子可以促进人牙髓干细胞的增殖及骨向分化能力.     

骨形态发生蛋白4调节人牙髓干细胞在脱细胞的牙髓基质中促进成骨/成血管分化的研究

目的 探究骨形态发生蛋白4(BMP4)与脱细胞人牙髓细胞外基质是否共同调节人牙髓干细胞(hDPSCs)介导的成骨/成血管分化.方法 从健康的人第三磨牙中分离出牙髓,改良组织块法培养hDPSCs并进行鉴定,用十二烷基硫酸钠(SDS)和Triton X-100制作脱细胞化细胞外基质(dECM),电子显微镜观察其结构,Cel...     

大鼠牙髓干细胞的基本细胞学特征以及增殖和矿化能力分化为牙本质样细胞的可能性

目的实验观察大鼠牙髓干细胞的基本细胞学特征和增殖及矿化特性.方法实验于2003-07/10在军事医学科学院组织工程研究中心实验室完成.采用光学显微镜观察大鼠牙髓干细胞生长变化.①细胞爬片固定后用苏木精-伊红染色观察细胞的基本形态.②采用四甲基偶氮唑盐法对大鼠牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞的生长及增殖能力进行检测比较.③应用矿化液对大鼠牙髓干细胞进行诱导并采用Von Kossa染色的方法检测大鼠牙髓干细胞矿化能力.结果①大鼠牙髓干细胞基本形态特征为成纤维细胞样生长,细胞呈梭形,密集区细胞形态多样,可见多角形或椭圆形细胞密集排列.②细胞生长曲线及群体倍增时间大鼠牙髓干细胞群体倍增时间为58.3 h;骨髓间充质干细胞的生长较牙髓干细胞旺盛,其群体倍增时间为41.8 h.③大鼠牙髓干细胞矿化能力Von Kossa染色可见细胞密集区为黑褐色,呈结节状分布,表明有钙化结节形成.结论大鼠牙髓干细胞形态正常,虽比骨髓间充质干细胞稍弱,但仍具有较强的增殖性能,还有一定的矿化能力,说明在一定条件下可向牙本质样细胞分化.     

大鼠骨髓间充质干细胞血管细胞黏附分子1及细胞间黏附分子1的表达(英文)

背景:骨髓间充质干细胞系统性输注后,何种因素促使其迁移到正确部位尤为关键,目前认为黏附分子在介导骨髓间充质干细胞向缺血或损伤组织迁移过程中起重要作用.目的:观察血管细胞黏附分子1与细胞间黏附分子1在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达.方法:采用直接贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,免疫细胞化学染色检测血管细胞黏附分子1及细胞间黏附分子1蛋白的表达,应用免疫荧光直标法在流式细胞仪上检测血管细胞黏附分子1及细胞间黏附分子1抗原的表达率,RT-PCR半定量分析血管细胞黏附分子1及细胞间黏附分子1 mRNA的表达.结果与结论:免疫细胞化学染色结果显示,骨髓间充质干细胞血管细胞黏附分子1呈弱阳性表达,细胞间黏附分子1呈强阳性表达.流式细胞仪检测结果显示,血管细胞黏附分子1表达率为6%,细胞间黏附分子1表达率为100%.RT-PCR检测结果显示,血管细胞黏附分子1 mRNA呈微弱表达,细胞间黏附分子1 mRNA呈高度表达.提示在生理状态下,体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞低表达血管细胞黏附分子1,高表达细胞间黏附分子1.     

整合素连接激酶对脐带间充质干细胞向神经干细胞样细胞分化的作用

目的研究整合素连接激酶(ILK)对脐带间充质干细胞向神经干细胞样细胞分化的影响。方法分离人脐带间充质干细胞,用表达对照绿色荧光蛋白(GFP)和GFP融合野生型ILK、突变型ILK的质粒转染后,用含碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27 的无血清培养基培养。检测间充质干细胞的增殖速度及向神经干细胞样细胞分化的效率。结果转染ILK 的间充质干细胞中,ILK稳定表达,增殖速度加快,神经干细胞样细胞分化的效率提高;野生型ILK优于突变型ILK。结论ILK促进间充质干细胞向神经干细胞样细胞分化。其作用机制与激酶活性有关。     

改良酶消化法分离培养人乳牙牙髓干细胞

背景：乳牙牙髓干细胞具有极强的增殖活力,可以在短期内获得组织工程需要的细胞量。目的：比较传统酶消化法和改良酶消化法获取人乳牙牙髓干细胞的成功率及生物学特性。方法：取无龋滞留乳切牙12颗,随机数字表法均分为两组,分别应用传统酶消化法和改良酶消化法分离获取乳牙牙髓细胞,在不同代次细胞中检测细胞扩增天数、收获量、生长曲线、倍增时间、克隆形成率、细胞表面特异标记物STRO-1、CD146、CD34和CD45的表达。细胞成骨、成脂诱导分化能力及通过检测碱性磷酸酶和牙本质涎蛋白表达水平,判定细胞牙向分化潜能。结果与结论：两组细胞生长曲线,扩增天数、细胞收获量及细胞倍增时间相比,差异有显著性意义（P〈0.05）;牙向分化实验结果显示,改良酶消化法碱性磷酸酶和牙本质涎蛋白较传统酶消化法和对照组而言呈强阳性表达。然而,两组在克隆形成率、细胞表面特异标记物及多项诱导分化等方面差异无显著性意义（P〉0.05）。说明改良酶消化法与传统酶消法相比,可在较短时间内完成同源乳牙牙髓干细胞体外扩增培养,可为牙齿再生治疗提供高质量种子细胞,是乳牙牙髓干细胞体外培养的可靠方法。     

转化生长因子-β3对人牙髓干细胞成骨向分化的影响

目的 探讨转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)体外诱导人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)成骨向分化的效果及可能机制.方法 采用免疫荧光技术观察原代hDPSCs基质细胞抗原STRO-1的免疫荧光染色情况,应用流式...     

转化生长因子β3诱导人乳牙牙髓干细胞向成牙本质样细胞的分化

背景：转化生长因子β3与肝素联合作用后对人乳牙牙髓干细胞的增殖和矿化能力的作用目前仍有待研究。目的：探讨转化生长因子β3对人乳牙牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化的作用。方法：采用酶消化法将人乳牙牙髓分离培养,获得人乳牙牙髓干细胞;对体外培养的第3代人乳牙牙髓干细胞单独加入25μg/L重组转化生长因子β3、10 U/mL肝素,或者二者联合进行培养;通过Q-PCR和Western-blotting方法,分别检测乳牙牙髓干细胞中牙本质涎磷蛋白基因及牙本质涎蛋白表达的情况;通过碱性磷酸酶试剂盒检测乳牙牙髓干细胞碱性磷酸酶活性的改变。结果与结论：乳牙牙髓干细胞在诱导体系中生长状态良好。25μg/L转化生长因子β3＋10 U/mL肝素联合作用组的碱性磷酸酶活性明显增强,与转化生长因子β3单独作用组、肝素单独作用组以及对照组相比差异有显著性意义（P〈0.01）;转化生长因子β3＋肝素联合作用组的茜素红染色呈强阳性,Q-PCR和Western-blotting结果均显示,转化生长因子β3＋肝素联合作用组的牙本质涎磷蛋白mRNA和蛋白表达均明显升高。结果可见在转化生长因子β3与肝素联合作用的诱导下,可促进乳牙牙髓干细胞分化为成牙本质样细胞。     

上皮型钙粘蛋白基因稳定转染小鼠胚胎干细胞及对分化细胞黏附能力的影响

背景:在胚胎期,上皮型钙粘蛋白的表达对于肝组织的形成有决定作用.目的:将上皮型钙粘蛋白基因转染小鼠胚胎干细胞,观察其对分化细胞间黏附能力变化的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-12/2008-12在中山大学附属第一医院外科实验室完成.材料:清洁级BALB/c系孕13 d小鼠由中山大学实验动物中心提供.BAL8/c系小鼠胚胎干细胞由中山大学眼科中心黄冰教授建系和保存.含CMV启动子的真核表达质粒pEGFP-N1由中山大学医学院吕志跃博士惠赠.方法:取BALB/c小鼠新鲜肝脏组织,提取总RNA,反转录合成cDNA.以合成的cDNA为模板,进行PCR扩增目的片段,将其和pEGFP-N1双酶切后连接构建pEGFP-上皮型钙粘蛋白,转染小鼠胚胎干细胞并进行体外分化.主要观察指标:RT-PCR及免疫细胞化学检测上皮型钙粘蛋白在分化系统中的动态表达,同时观察分化细胞间黏附能力的变化.结果:基因转染的胚胎干细胞分化后1-17 d稳定表达上皮型钙粘蛋白,而普通胚胎干细胞分化后上皮型钙粘蛋白的表达则逐渐降低.稳定表达上皮型钙粘蛋白的分化细胞间黏附能力明显增强,并在19 d时仍能保持致密的细胞连接和多层生长状态,普通胚胎干细胞则由拟胚体结构逐渐分化为松散的细胞群落.结论:稳定表达上皮型钙粘蛋白的胚胎干细胞分化后,细胞间黏附能力明显增强,并保持多层细胞生长状态.     

牙髓干细胞在组织工程研究中的应用

背景：牙髓干细胞是来源于牙髓组织中的一种成体干细胞,该种细胞具有高度增殖、自我更新的能力和多向分化潜能.通过对牙髓干细胞的深入研究,有助于人类为组织工程研究提供可能的细胞来源,进而指导临床相关治疗与预防.目的：就牙髓干细胞的研究现状及其在组织工程中的应用作一综述.方法：应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中2000年1月至2012年5月关于牙髓干细胞的文章,在标题和中以“牙髓干细胞,诱导,培养,分化”或“dental pulp stem cel s,culture,induced, differentiation”为检索词进行检索.选择文章内容与牙髓干细胞有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章.初检得到205篇文献,根据纳入标准选择关于牙周局部缓释剂的44篇文献进行综述.结果与结论：相比较其他成体干细胞,牙髓干细胞的研究尚面临许多问题.但随着科学技术的日益进步,随着这些问题的深入探讨和逐步解决,牙髓干细胞的研究将日趋完善.牙髓干细胞有望成为牙组织工程、骨组织工程和神经组织工程的种子细胞,在牙髓再生、牙体的修复等方面有着广阔的应用前景.     

间充质干细胞对脐血CD34+细胞体外扩增和黏附分子表达的影响

目的研究间充质干细胞(MSC)对脐血CD34+细胞体外扩增能力和黏附分子表达的影响.方法从正常人骨髓中分离扩增MSC,通过免疫表型和向成骨细胞及脂肪细胞分化能力对其鉴定;将脐血CD34+细胞接种到MSC或其他培养液中,比较不同培养条件对造血细胞扩增能力、集落形成能力及黏附分子表达的影响.结果MSC表达Thy-1、SH2、SB10、CD44、CD13、CD49e和CD29,不表达CD34、CD45、HLA-DR、CD14和CD31,经过诱导可以向成骨细胞和脂肪细胞分化;实验组在MSC和细胞因子作用下,扩增8 d后有核细胞、CD34+、CD34+CD38-、CD34+CD62L+细胞和CFU-Cs分别扩增145.57±17.89,37.47±13.78,69.78±50.07,10.74±5.89和20.73±5.54倍,均显著高于对照组;扩增后CD34+细胞的ALCAM、VLA-α4、VLA-α5、VLA-β1、HCAM、PECAM和LFA-1表达较扩增前无明显变化,虽然ICAM-1和L-选择素表达下降,但实验组CD34+CD62L+和CD34+CD54+细胞的绝对数显著增加.结论MSC可为造血干细胞体外扩增提供适宜的微环境,有助于抑制HSC分化并保持其造血重建潜能和归巢能力.     

整合素α5β1在成骨细胞与生物衍生材料黏附过程中的表达

背景:整合素在细胞与材料的黏附过程中发挥重要作用.目的:了解整合素a5β1 在成骨细胞构建组织工程骨和组织工程骨膜过程中的表达,探讨在成骨细胞与生物衍生材料黏附过程中整合素a5β1 发挥的作用.方法:选用人胚骨膜来源成骨细胞为种子细胞,接种生物衍生骨及羊膜支架材料上,制备组织工程骨及骨膜,分别培养2,4,6,8,10 d.单纯培养的成骨细胞作为对照组.结果与结论:实时定量PCR 测定结果,培养早期整合素a5 表达呈阴性,整合素β1 组织工程骨中的表达略高于组织工程骨膜,培养2,6 d 组比较差异有显著性意义.单纯细胞培养的对照组中,整合素β1 稳定,各时间段比较差异无显著性意义.提示生物衍生材料有利于成骨细胞黏附,但在黏附过程的初期,成骨细胞可能是通过纤维连接蛋白以外的其他蛋白质完成该过程的.