皮内针刺激足三里对STZ诱导的2型糖尿病大鼠损伤的影响

目的观察皮内针刺激足三里对STZ诱导的2型糖尿病大鼠损伤的影响。方法雄性Wistar大鼠30只,分为A组(正常组)、B组(模型组)、C组(皮内针组),采用尾静脉注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)结合高脂饲料建立2型糖尿病大鼠模型,检测大鼠空腹血糖、血清中活性氧(reactive oxygen species, ROS)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)及胰岛素(Insulin)水平。采用HE染色法观察各组大鼠胰岛组织的变化情况,采用PCR法检测p22phox、NOX4的m RNA水平。采用Western blot法检测各组大鼠氧化应激相关蛋白p22phox、NOX4的表达情况。结果结果显示,B组、C组与A组比较,ROS、MDA水平明显升高,而SOD及胰岛素水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。C组与B组比较,ROS、MDA水平降低(P0.05),SOD及胰岛素水平明显升高(P0.05)。HE染色结果显示,A组胰腺胰岛内细胞排列整齐,大小一致,分布均匀;B组胰岛内细胞分布稀疏,形状不规则,排列紊乱,可见空泡样变;C组胰岛内细胞结构明显改善。PCR结果显示,B组、C组p22phox、NOX2 mRNA含量与A组比较差异有统计学意义(P0.05)。C组p22phox、NOX2m RNA水平明显低于B组(P0.05)。Western blot结果显示,B组、C组p22phox和NOX2蛋白含量与A组比较差异有统计学意义(P0.05)。C组p22phox、NOX2蛋白含量比B组明显减少(P0.05)。结论皮内针刺激足三里对STZ诱导的T2MD大鼠的损伤有改善作用,其作用机制是通过缓解机体的氧化应激起作用。     

蒺藜超微粉对血管紧张素Ⅱ诱导的下丘脑神经元细胞损伤IKK-β/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨蒺藜治疗高血压病的可能作用机制。方法 体外原代培养Wistar乳鼠下丘脑神经元细胞,并以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导细胞损伤即高血压细胞模型。药效学观察时细胞分为5组,模型组(2×10-6mol/L AngⅡ)、蒺藜低剂量组(3μg/ml蒺藜预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、蒺藜高剂量组(30μg/ml蒺藜预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、缬沙坦组(10-5mol/L缬沙坦预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、正常组(无任何干预),分别于AngⅡ作用24、48、72 h时检测各组细胞绝对数量、神经元轴突长度、胞体面积、存活率、凋亡率,并于72 h时检测细胞因子IKK-α、IKK-β、NF-κB p65、IκBα、JAK2、STAT3、AT1、GnRH、PKC、PI3K的mRNA表达;药理学观察时细胞分为6组,模型组(2×10-6mol/L AngⅡ)、蒺藜组(30μg/ml蒺藜预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、缬沙坦组(10-5mol/L缬沙坦预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、拮抗剂组(20μmol/L TPCA-1预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、蒺藜+拮抗剂组(30μg/ml蒺藜+20μmol/L TPCA-1预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、正常组(无任何干预),根据药效学观察结果确定AngⅡ作用时间及相关细胞因子,并检测各组细胞相关因子mRNA及蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组从AngⅡ干预24 h开始的各时间点细胞绝对数量、胞体面积、存活率、凋亡率均显著升高,神经元轴突长度显著降低;与模型组比较,蒺藜高剂量组、缬沙坦组各时间点细胞绝对数量、胞体面积、存活率、凋亡率均显著下降,神经元轴突长度增加(P0.05)。与正常组比较,模型组IKK-β、NF-κB p65、JAK2、STAT3、AT1、GnRH、PKC、PI3K表达显著上调,IKK-α、IKBα表达显著下调(P0.05)。与模型组比较,蒺藜高剂量组IKK-β、NF-κB p65、JAK2、AT1、GnRH、PKC表达下降,IKK-α、IκBα表达升高;蒺藜低剂量组IKK-β、NF-κB p65、AT1、PKC表达下降,IKK-α、IκBα表达升高;缬沙坦组IKK-β、NF-κB p65、AT1、GnRH、PKC表达下降,IKK-α、IκBα表达上调(P0.05)。根据以上结果确定药理学观察时AngⅡ干预时间为24 h,相关细胞因子为IκBα、IKK-β、NF-κB p65、NF-κB p50。与正常组比较,模型组下丘脑神经元细胞IKK-β、NF-κB p50、NF-κB p65mRNA和蛋白表达上调,IκBα表达下调;与模型组比较,缬沙坦组和蒺藜组NF-κB p50、NF-κB p65、IKK-β的表达下调,IκBα表达上调;与缬沙坦组比较,蒺藜组NF-κB p65、IKK-β表达下调,IκBα表达上调(P0.05)。结论 蒺藜可有效维持血压调节中枢功能,其降压机制可能与调节下丘脑IKK-β/NF-κB信号通路活性有关。     

蠲痹历节清方对痛风细胞模型中TLR4/NF-κB信号通路主要元件的影响

目的:研究蠲痹历节清方对痛风作用及对TLR4/NF-κB信号通路主要元件的影响。方法:实验分为两部分,①不添加TLR4受体抑制剂部分;②添加TLR4受体抑制剂部分。每部分利用单钠尿酸盐(MSU)结晶诱导巨噬细胞产生痛风模型,随机分正常对照组、模型组、蠲痹历节清方组,并分别干预。用Westen-blot法测定干预后巨噬细胞中髓样分化分子88(MyD88)、IκB激酶-β(IKK-β)、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达,RT-PCR测定干预后各组巨噬细胞中Toll样受体4(TLR4)基因表达;免疫荧光法检测巨噬细胞核转录因子kappa B(NF-κB)核移位情况;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:不添加TLR4受体抑制剂部分:与正常对照组相比,模型组MyD88蛋白、IKK-β、TLR4 mRNA表达含量明显升高;TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高;IκB-α蛋白明显降低。与模型组比较,蠲痹历节清方组中MyD88蛋白、IKK-β、TLR4 mRNA表达含量明显降低;TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显降低;IκB-α蛋白含量明显升高。正常对照组血清组中NF-κB p65主要集中在细胞浆,细胞核中表达较少,模型组中NF-κB蛋白表达呈猩红色明显增强,主要集中在细胞核中,细胞浆中较少,表明NF-κB核移位明显;蠲痹历节清方组NF-κB主要在细胞浆中,细胞核中相对较少,未出现明显NF-κB核移位情况。同步使用通路阻断剂TAK-242(TLR4受体抑制剂)进行试验对照,上述通路及其上下游各分子(因子)水平均受到明显抑制。各组巨噬细胞NF-κB表达明显受到抑制。结论:蠲痹历节清方可改善痛风细胞模型炎症因子情况,抑制TLR4 mRNA及MyD88、IKK-β蛋白表达和上调IκB-α蛋白表达、抑制NF-κB活化作用,因此推测蠲痹历节清方治疗急性痛风性关节炎局部组织炎症的部分作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路表达有关,可能是以通路中MyD88依赖性信号转导经典途径。     

苗族药金乌健骨汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞NF-κB p65,IKK-α及IKK-β表达的影响

目的:探讨苗族药金乌健骨汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞核转录因子-κB p65(NF-κB-p65),IκB激酶-α(IKK-α)及IκB激酶-β(IKK-β)表达水平的影响,并探讨其作用机制。方法:通过细胞培养,在体外构建类风湿关节炎滑膜成纤维细胞模型,将3~5代细胞随机分为6组,分别是空白组、苗族药金乌健骨汤含药血清冻干粉高、中、低剂量(28.8,9.6,3.2 g·kg~(-1))组、雷公藤多苷(3 mg·kg~(-1))组和泼尼松(1.5 mg·kg~(-1))组,用各药物含药血清冻干粉对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞进行干预24 h后,观察类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的形态学改变,采用流式细胞仪检测各组类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中NF-κB p65,IKK-α及IKK-β蛋白表达水平。结果:与空白组比较,类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡随着金乌健骨汤浓度的升高,凋亡率明显升高(P0.05),类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中IKK-α,IKK-β及NF-κB p65的表达水平明显下调(P0.05)。结论:苗药金乌健骨汤能够诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡,下调NF-κB p65,IKK-α及IKK-β的表达水平。     

补肝健腰方对腰椎间盘突出大鼠NF-κB信号通路的影响

目的:观察补肝健腰方对腰椎间盘突出大鼠NF-κB信号通路的影响。方法:取SD大鼠100只,随机分为正常对照组、假手术组、模型对照组、补肝健腰方组、塞来昔布组各20只。补肝健腰方组、塞来昔布组制备大鼠腰椎间盘突出模型成功后分别予补肝健腰方、塞来昔布灌胃。干预前、干预后第1、2、3周,各组随机选取5只大鼠处死,检测核因子κB(NF-κB)mRNA、IκB激酶β(IKK-β)mRNA以及下游产物肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果:在干预前,补肝健腰方组、塞来昔布组大鼠腰椎间盘突出局部组织NF-κB mRNA、IKK-βmRNA及TNF-α表达与模型对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);干预第1、2、3周,补肝健腰方组大鼠NF-κB mRNA、IKK-βmR NA及TNF-α表达均低于模型对照组(P0.05)。补肝健腰方组大鼠干预第1、2、3周的NF-κB mRNA、IKK-βmRNA及TNF-α表达均低于干预前(P0.05)。结论:补肝健腰方具有调控腰椎间盘突出大鼠NF-κB信号通路的作用,可减少NF-κB mRNA、IKK-βmRNA及TNF-α表达,这可能为其治疗腰椎间盘突出症的作用机制。     

基于JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路探究八桂止痛散对脂多糖诱导脊髓星形胶质细胞凋亡的影响

目的:基于JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路探究八桂止痛散对脂多糖(LPS)诱导的脊髓星形胶质细胞凋亡的影响。方法:从SD乳鼠脊髓中分离星形胶质细胞并鉴定。CCK-8法检测不同浓度八桂止痛散(2.5、5、10、20、40、80 mg/ml)对细胞存活的影响;随后分别设置对照组、LPS组、LPS+药物-L组、LPS+药物-M组、LPS+药物-H组、LPS+药物-H+Anisomycin组。CCK-8法、流式细胞术检测细胞存活、凋亡;ELISA法检测细胞中白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;qRT-PCR检测细胞中JNK、p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达水平;Western blot检测JNK/p38 MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果:与对照组相比,LPS组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、JNK mRNA、p38 MAPK mRNA、NF-κB p65 mRNA表达、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著增加...     

基于TLR4/NF-κB/iNOS通路的截断逆挽方药物血清对L02细胞氧化应激损伤的影响

目的 观察截断逆挽方药物血清对D-氨基半乳糖（D-GaLN）诱导的L02细胞氧化应激损伤的影响,从TLR4/NF-κB/iNOS通路探讨其作用机制。方法 体外培养L02细胞,D-GaLN诱导L02细胞损伤模型,将细胞分为正常组、模型组、截断逆挽方药物血清组、N-乙酰半胱氨酸组。CCK-8法检测细胞存活率,丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）检测试剂盒检测细胞MDA和GSH含量,流式细胞术检测细胞活性氧（ROS）含量,Western blot检测Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组L02细胞存活率明显降低（P<0.01）,ROS、MDA含量明显增加,GSH含量明显减少,TLR4、NF-κB p65、iNOS蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,截断逆挽方药物血清组L02细胞存活率明显升高（P<0.01）,ROS、MDA含量明显减少,GSH含量明显增加,TLR4、NF-κBp65、iNOS蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义（P<0.01）...     

参地颗粒对慢性肾炎脾肾亏虚证患者NF-κB信号通路的干预作用

目的探讨氧化应激介导的NF-κB信号通路对慢性肾炎脾肾亏虚证患者的影响及参地颗粒(茯苓、熟地、五味子、桑螵蛸、川芎)对其的干预作用。方法 50例慢性肾炎脾肾亏虚证患者随机分为贝那普利片组(对照组)和参地颗粒组(治疗组),实际完成对照组24例,治疗组22例,并选取20名健康体检者作为正常组,疗程12周。检测两组临床疗效、治疗前后24 h尿蛋白定量及血清活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平和核因子-κB p65(NF-κB p65)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、纤维连接蛋白(FN)的变化情况。结果治疗组临床疾病总有效率和中医证候疗效总有效率分别为81.82%和77.27%,优于对照组的66.67%和37.50%(P0.05或P0.01)。治疗组和对照组治疗后,24 h尿蛋白定量较治疗前降低,且治疗组的下降幅度大于对照组(P0.05)。两组患者治疗前血清ROS、MDA水平和NF-κB p65、MCP-1水平高于正常组,血清SOD水平和FN水平低于正常组(P0.05);治疗后两组血清ROS、MDA水平和NF-κB p65、MCP-1水平均较治疗前降低,血清SOD水平和FN水平较治疗前升高,治疗组优于对照组(P0.05)。结论参地颗粒能改善患者临床症状,降低24 h尿蛋白定量,其机理与通过抑制CGN脾肾亏虚证患者的氧化应激,增强机体的抗氧化能力,抑制NF-κB信号活化,下调MCP-1表达有关。     

金银花颗粒对调节兔耳痤疮模型NF-κB信号通路的实验研究

目的:观察金银花对兔耳痤疮模型的治疗效果,探讨其对NF-κB信号通路的调节作用。方法:于兔耳内侧涂抹煤焦油,每日1次,持续14日,至其形成痤疮,造模成功后随机分为空白组、模型组、金银花颗粒0.70g/kg、1.40g/kg、2.80g/kg组及异维A酸3.26mg/kg组。通过蛋白质免疫印迹检测NF-κB p65、IKK-α、IKK-β蛋白的表达;通过ELISA检测血清中IL-1β、TNF-α的含量变化。结果:同空白组比较,模型对照组血清IL-1β、TNF-α含量升高显著;同模型组比较,各给药组IL-1β、TNF-α含量均下降明显。兔耳组织NF-κB p65、IKK-α、IKK-β蛋白表达显著降低。结论:金银花颗粒治疗痤疮的疗效确切,在减少兔耳毛囊脂质栓塞,抑制皮脂腺导管上皮增生并减少炎症细胞的浸润。其机制为通过调节NF-κB信号通路来调控细胞内NF-κB p65、IKK-α、IKK-β蛋白浓度及血清TNF-α及IL-1β含量有关。     

天麻素对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激的影响

目的 考察天麻素对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化应激的影响.方法 建立高糖诱导的HUVEC氧化损伤模型,用不同质量浓度的天麻素干预.MTT法检测HUVEC存活率;相关试剂盒测定一氧化碳(NO)的量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)以及总抗氧化能力(T-AOC)的活性、丙二醛(MDA)的量,DCFH-DA染色法检测胞内活性氧(ROS)水平,实时荧光定量PCR法测定细胞中NF-κB基因的表达.结果 与对照组相比,模型组HUVEC氧化应激作用明显增强,而天麻素能提高HUVEC中NO的量及SOD和CAT活性,提高细胞的总抗氧化能力,降低MDA的量与ROS水平,显著降低细胞中NF-κB3基因的表达.结论 天麻素通过提高抗氧化酶活性、降低脂质过氧化产物和ROS水平,抑制高糖诱导的HUVEC氧化应激作用,其作用机制可能与NF-κB通路密切相关.     

NF-κB/IκB在和厚朴酚对磷酯酰乙醇胺诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的表达变化

目的 探讨和厚朴酚(Honokiol)对磷脂酰乙醇胺诱导肝癌HepG2细胞凋亡及对核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制因子(IκB)基因表达的影响.方法 体外培养肝癌HepG2细胞,实验分为对照组、Honokiol组,采用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NF-κB与IκB mRNA表达,Western blot检测NF-κB p65、IκB蛋白表达.结果 与对照组比较,PE组凋亡细胞数增多,细胞凋亡率增加,细胞增殖降低;NF-κB mRNA和蛋白表达增加,IκB mRNA和蛋白表达降低,差异均有显著性(P＜0.01).经Honokiol预处理后,细胞的增殖率较PE组增加,细胞凋亡率减少.NF-κB mRNA和蛋白表达减少,IκB mRNA和蛋白表达增加(P＜0.01).结论 和厚朴酚能抑制PE诱导的肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与调节NF-κB/IκB表达有关.     

制首乌中大黄素对泡沫细胞NF-κB、TNF-α及IL-1β表达的影响

目的探讨大黄素对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞NF-κB、TNF-α及IL-1β表达的影响。方法选用RAW264.7细胞株作为实验对象,ox-LDL诱导其泡沫化并分为空白组,阳性对照组,激动剂组,阻断剂组,大黄素高、中、低剂量组。采用Real-time PCR法检测NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA的表达。结果与空白组相比,大黄素各剂量组均能影响NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA的表达(P0.01)。结论大黄素可能通过NF-κB信号转导途径调节RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA的表达。     

健脾化浊方通过NOX4/ROS/NF-κB通路调节动脉粥样硬化大鼠主动脉炎症及氧化应激反应的研究

目的:研究健脾化浊方通过NAPDH氧化酶4(NOX4)/活性氧簇(ROS)/核因子-κB(NF-κB)通路调节动脉粥样硬化(AS)大鼠主动脉炎症及氧化应激反应的作用。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、健脾化浊方10 g/kg组、20 g/kg组、40 g/kg组和健脾化浊方40 g/kg+内毒素(LPS)150μg/kg组,建立AS模型后灌胃给予不同剂量健脾化浊方或联合NF-κB激动剂LPS腹腔注射。检测主动脉粥样硬化的病理改变、气滞血瘀标志物及主动脉中炎症细胞因子、氧化应激指标、NOX4/ROS/NF-κB通路分子。结果:与模型对照组比较,健脾化浊方10 g/kg组、20 g/kg组、40 g/kg组大鼠的低切血粘度、中切血粘度、高切血粘度、血清中ET-1、GMP-140的含量及主动脉中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、C反应蛋白(CRP)、丙二醛(MDA)、晚期氧化蛋白产物(AOPP)、ROS的含量明显降低、NOX4、NF-κB的蛋白表达均明显下调,血清中一氧化氮(NO)、降钙素基因相关肽(CGRP)的含量及主动脉中总抗氧化力(T-AOC)的含量均明显升高;与健脾化浊方40 g/kg组比较,健脾化浊方40 g/kg+LPS 150μg/kg组大鼠的低切血粘度、中切血粘度、高切血粘度、血清中ET-1、GMP-140的含量及主动脉中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、CRP、MDA、AOPP、ROS的含量明显增加、NOX4、NF-κB的蛋白表达量均明显上调,血清中NO、CGRP的含量及主动脉中T-AOC的含量明显降低。结论:健脾化浊方能够改善AS大鼠主动脉的AS病理改变及气滞血瘀表现,该作用与抑制NOX4/ROS/NF-κB通路介导的炎症反应及氧化应激反应有关。     

龙胆苦苷对脂多糖诱导血管内皮细胞损伤的作用及机制

目的研究龙胆苦苷对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导血管内皮细胞损伤的作用及机制。方法以LPS刺激大鼠主动脉血管内皮细胞RAEC,并给予低、中、高剂量(5、10、20μmol/L)龙胆苦苷进行干预,采用CCK-8法检测细胞增殖情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用试剂盒检测细胞丙二醛水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;采用qRT-PCR法检测细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1βmRNA表达情况;采用Western blotting方法检测细胞中磷酸化p65(p-p65)和剪切型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达情况。RAEC细胞给予核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号激活剂处理,考察NF-κB信号激活剂对龙胆苦苷改善RAEC细胞损伤的影响。结果与对照组比较,模型组细胞活性显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),丙二醛水平显著升高(P0.05),SOD活性显著降低(P0.05),TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA表达水平显著升高(P0.05),cleavedCaspase-3和p-p65蛋白表达水平显著升高(P0.05)。与模型组比较,龙胆苦苷组细胞活性显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.05),丙二醛水平显著降低(P0.05),SOD活性显著升高(P0.05),TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达水平显著降低(P0.05),cleaved Caspase-3和p-p65蛋白表达水平显著降低(P0.05)。NF-κB信号激活剂显著抑制龙胆苦苷改善RAEC细胞损伤的作用(P0.05)。结论龙胆苦苷能够抑制LPS诱导的RAEC细胞凋亡、氧化损伤和炎性因子表达,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

D159687减轻神经元氧化应激损伤的作用机制研究

目的研究D159687对过氧化氢(H_2O_2)所致的小鼠海马神经元HT22细胞损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法实验分为正常对照组、模型组、D159687 0.5μmol/L组、D159687 1μmol/L组、D159687 2μmol/L组、D159687 4μmol/L组。将HT22细胞株接种于96孔板,对照组采用10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养,其他组加入不同浓度的D159687进行干预培养,后经H_2O_2损伤。CCK-8法测定各组细胞存活率,Western blot法检测Caspase-3和NADPH氧化酶亚基gp91phox、p47phox表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况,并测定各组细活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果模型组细胞存活率、SOD活性均显著低于正常对照组(P均0.05),ROS表达水平、MDA含量及Caspase-3、p47phox、gp91phox蛋白表达水平均显著高于正常对照组(P均0.05);D159687 0.5μmol/L组、D159687 1μmol/L组、D159687 2μmol/L组、D159687 4μmol/L组细胞存活率、SOD活性显著高于模型组(P均0.05),ROS表达水平、MDA含量及Caspase-3、p47phox、gp91phox蛋白表达水平均显著低于模型组(P均0.05)。结论在0.5～4μmol/L浓度范围内,D159687浓度依赖性地拮抗H_2O_2所致HT22细胞损伤,同时抑制HT22细胞凋亡,这种作用可能与其抑制NADPH氧化酶关键亚基gp91phox和p47phox蛋白表达有关。     

茯苓多糖提取物调控CYP2E1及NF-κB炎症通路改善小鼠酒精性肝病

建立酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)模型,研究茯苓多糖(Poria cocos polysaccharides,PCP)提取物对ALD小鼠细胞色素P4502E1(CYP2E1)及核因子κB(NF-κB)炎症信号通路的影响,探讨其对ALD的保护作用及机制。60只SPF级雄性C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组(联苯双酯200 mg·kg^-1)、茯苓多糖低剂量组(50 mg·kg^-1)、茯苓多糖高剂量组(200 mg·kg^-1),建立Gao-binge模型并给药。观察肝脏形态及病理学变化,计算脏器指数,检测各组小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,试剂盒分别测定小鼠肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,免疫荧光染色观察巨噬细胞激活情况,Western blot分析主要代谢酶CYP2E1及Toll样受体4(TLR4)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)、核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白的表达。与模型组相比,PCP给药组可显著改善肝组织病理损伤情况。免疫荧光结果显示,与模型组相比,给药组肝组织炎性巨噬细胞数量减少,并且各给药剂量组ALT、AST、MDA、IL-6、TNF-α的含量显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.01)。茯苓多糖提取物对小鼠酒精性肝损伤具有保护作用,其机制可能是调控代谢酶CYP2E1的表达和抑制TLR4/NF-κB炎症信号通路,减轻氧化应激和炎症损伤,抑制ALD的发展。     

化纤煎冻干粉溶液对TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞增殖和分化的影响

目的:观察化纤煎冻干粉溶液对人胚肺成纤维细胞增殖、活化、分泌细胞外基质的影响,并观察其对TNF-α细胞因子和NF-κB信号通路的调控,探讨化纤煎治疗特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法:采用TGF-β_1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、活化,化纤煎冻干粉溶液进行干预,CCK8法检测化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞增殖的影响。qRT-PCR法检测α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA,观察成纤维细胞向肌成纤维细胞转化、分泌细胞外基质情况。qRT-PCR法检测TNF-αmRNA、NF-κB p65 mRNA、IκBαmRNA、IKKβmRNA,Western Blot检测NF-κB p65蛋白,观察化纤煎对炎症反应因子TNF-α与炎症信号通路NF-κB的作用。结果:与空白对照组比较,模型对照组的细胞增殖水平显著增加(P0.01),与模型对照组比较,化纤煎中、高剂量组MRC-5细胞增殖水平均明显下降(P0.01)。模型对照组α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TNF-αmRNA和NF-κB p65 mRNA表达水平显著高于空白对照组(P0.05或P0.01),IκBαmRNA、IKKβmRNA表达水平显著低于空白对照组(P0.01)。与模型对照组比较,化纤煎低、中、高剂量组α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TNF-αmRNA和NF-κB p65 mRNA表达均下降,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),IκBαmRNA、IKKβmRNA表达水平均上升(P0.05或P0.01)。模型对照组NF-κB p65蛋白表达水平显著高于空白对照组(P0.01),与模型对照组比较,化纤煎低、中、高剂量组NF-κB p65蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论:化纤煎冻干粉溶液可能通过抑制炎症因子TNF-α分泌和NF-κB炎症信号通路活化,从而发挥抗纤维化作用。     

基于MAPK/NF-κB通路探究藏红花素对幼年小鼠肺炎模型的治疗作用及分子机制

[目的]探究藏红花素(CRO)对幼年小鼠肺炎模型的治疗作用及其与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子-κB(NF-κB)通路的关系。[方法]采用腹腔注射脂多糖(LPS)构建幼年小鼠肺炎模型,将小鼠随机分为对照组、模型组、DEX(阳性对照-地塞米松)组、CRO低剂量组、CRO中剂量组、CRO高剂量组、MAPK激活剂(Anisomycin)组(CRO高剂量+Anisomycin)。检测小鼠肺湿/干(W/D)比和髓过氧化物酶(MPO)活性,苏木精-伊红(HE)染色观察肺部组织病理变化并进行病理损伤评分,血细胞计数器和吉姆萨染色进行总细胞、中性粒细胞和白细胞计数,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清和肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞因子水平,试剂盒检测血清和BALF中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD),蛋白免疫印迹(Western Blot)检测MAPK/NF-κB通路蛋白表达。[结果]与模型组比较,DEX组和CRO低、中、高剂量组肺组织损伤减轻,W/D比、MPO活性、病理损伤评分、总细胞、中性粒细胞、白细胞计数、白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、MDA、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/IκBα显著下降,SOD显著升高(P＜0.05);而Anisomycin可逆转高剂量CRO对肺炎小鼠的治疗作用(P＜0.05)。[结论] CRO对幼年肺炎小鼠有治疗作用,其作用机制可能与抑制MAPK/NF-κB通路有关。     

乌腺金丝桃与当归配伍对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌HSP70、NF-κBp65表达影响

目的观察乌腺金丝桃与当归配伍(金归)干预后的心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞中HSP70及NF-κBp65的表达,探讨HSP70与NF-κBp65在MIRI大鼠细胞凋亡或脂质过氧化损伤等进程中的调控作用及机制。方法金归2∶1组作用于MIRI大鼠,采用免疫组化法及荧光定量PCR检测方法观察大鼠心肌HSP70、NF-κBp65蛋白及基因表达水平的影响。结果与模型组比较,2∶1组可明显提高HSP70蛋白的表达,减弱NF-κBp65蛋白活化,HSP70mRNA水平上调,NF-κBp65mRNA水平显著降低,差异均具有统计学意义(P0.01)。结论金归2∶1组抗MIRI的机制可能与提高HSP70的表达以抑制NF-κB p65通路、抑制心肌细胞凋亡或脂质过氧化损伤等有关。     

基于清热利湿益气补肾法的中西医结合治疗糖尿病肾病患者的疗效研究

目的：研究基于清热利湿益气补肾法的中西医结合治疗糖尿病肾病(DN)患者的疗效。方法：选取2019年5月至2022年5月诊治的122例DN患者作为研究对象，按照随机数字表法分为观察组(予以尿毒清颗粒联合达格列净治疗)与对照组(予以达格列净治疗),各61例，对比2组中医证候积分、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、估算肾小球滤过率(eGFR)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、miR-21、TLR4、NF-κB mRNA。结果：治疗前，2组肢体浮肿、神疲乏力、口渴多饮等中医证候积分、Scr、BUN、eGFR、SOD、ROS、MDA、miR-21、TLR4、NF-κB mRNA比较，差异无统计学意义(P>0.05);治疗后，观察组的中医证候积分、Scr、BUN、ROS、MDA、miR-21、TLR4、NF-κB mRNA低于对照组，而eGFR、SOD高于对照组(P<0.05)。结论：基于清热利湿益气补肾法的中西医结合治疗DN患者的疗效较好，尿毒清颗粒联合达格列净治疗DN不仅能降低氧化应激及miR-21、TLR4/NF-κB,并且能改善肾功能。