铁皮石斛原球茎高效再生体系的研究

目的以铁皮石斛Dendrobium officinale实生种子为外植体,研究铁皮石斛原球茎的增殖、分化、诱导生根等条件,筛选出适宜铁皮石斛原球茎高效再生的诱导条件,建立高效的再生体系。方法以铁皮石斛种子为外植体,在培养基上诱导产生原球茎,经过增殖培养后,转移到分化培养基中诱导芽苗分化,待分化的芽苗长到1~2 cm时,转移到生根培养基诱导生根,最终长成完整的再生植株。结果适宜铁皮石斛生长的基本培养基为1/2 MS;原球茎诱导的培养基为1/2 MS+1.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA+50 g/L土豆泥;原球茎增殖的最适培养基为1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,最高增殖系数达23;最佳分化培养基为1/2 MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,平均分化率最高达95%;最佳生根培养基为1/2 MS+0.3mg/L NAA+50 g/L土豆泥,生根率达100%。结论铁皮石斛实生种子是铁皮石斛离体繁殖的优良外植体来源。以铁皮石斛种子诱导获得的高效再生技术体系可以为铁皮石斛快速繁殖和工厂化生产提供理论基础。     

铁皮石斛茎段原球茎的诱导增殖与分化

目的:探讨植物生长调节剂、基本培养基、蔗糖质量浓度以及相关添加物对铁皮石斛茎段原球茎的诱导、增殖、分化以及根部生长等方面的影响。方法:通过正交试验方式,要求没有添加激素下,对铁皮石斛茎段原球茎进行消毒处理、试验培养基的配备、对原球茎进行诱导、对原球茎进行增殖和分化处理、生根的培养等,分析不同植物生长调节剂、基本培养基配比对于茎段原球茎的诱导影响,不同基本培养基、马铃薯泥以及蔗糖浓度增殖分化原球茎效果,以及香蕉泥、萘乙酸(NAA)和马铃薯泥对铁皮石斛茎段原球茎生根效果。结果:1)最适宜诱导铁皮石斛茎段原球茎的培养基组合是NAA 0.1 mg/L+1/2MS(Murashige and Skoog)培养基+6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)4 mg/L。2)铁皮石斛茎段原球茎增殖最佳的培养基是:MS+蔗糖30 g/L;分化的最佳培养基是:马铃薯泥10%+蔗糖10 g/L+1/2 MS。3)铁皮石斛茎段原球茎的生根最佳培养基组合是马铃薯泥10%+1/2 MS+NAA 1 mg/L+香蕉泥10%。结论:在没有添加激素的前提下,基于正交试验方式发现变化蔗糖含量和基本培养基能够对铁皮石斛茎段原球茎增殖和分化效果进行调节,并找出了最理想的组合模式。     

铁皮石斛快繁技术体系研究

目的以铁皮石斛Dendrobium officinale带芽茎段为材料,对铁皮石斛的组织培养进行系统研究,以期建立铁皮石斛的快繁技术体系。方法采用植物组织培养的方法对铁皮石斛外植体的消毒方法、原球茎的诱导、增殖、分化、幼苗生根及瓶苗移栽等进行研究。结果铁皮石斛外植体最佳的消毒方式为75%乙醇消毒30 s,再用0.1%HgCl2消毒10 min;铁皮石斛带芽茎段原球茎诱导的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+2 g/LAC,诱导率达到34.98%;原球茎增殖的最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.8 mg/L 2,4-D+2 g/LAC,增殖率达到89.6%;原球茎分化的最佳培养基为MS+1.2mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA+2 g/L AC,分化率达到89.6%;幼苗生根的最佳培养基配方为1/2 MS+2.5 mg/L NAA+15%土豆汁+2 g/LAC,生根率达到90.4%～92.8%;瓶苗移栽最佳方式为大苗、树皮块苔藓草做基质、基质中添加0.03 mg/L赤霉素,并接种适量菌根真菌Epulorhiza sp.。结论建立了铁皮石斛的快繁技术体系,为铁皮石斛的工业化生产奠定技术基础。     

铁皮石斛原球茎的诱导与增殖影响因素研究

目的:研究铁皮石斛原球茎诱导与增殖的最适培养基配方。方法:以铁皮石斛种胚为材料,以MS培养基为基本培养基,研究不同植物激素6-苄基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)和激动素(KT)或其组合及马铃薯提取液(PE)、香蕉提取液(BE)、苹果提取液(AE)和椰乳(CM)等有机添加物对铁皮石斛原球茎诱导和增殖的影响。结果:6-BA与NAA配比不利于种胚萌发,萌发度均低于MS培养基;添加10%的PE、CM有利于原球茎诱导;2,4-D对原球茎的生长和增殖不利,一定浓度的BA、KT和NAA有利于原球茎的增殖;KT浓度为1.0 mg/L时,原球茎40 d增殖倍数最高,达9.0;PE、CM、AE都能不同程度的促进原球茎的增殖,以10%的CM效果最好。结论:适宜铁皮石斛原球茎的诱导培养基为MS+10%CM+1.0 g/L AC;适宜铁皮石斛原球茎增殖的培养基为MS+1.0mg/L KT+0.2mg/L NAA+10%CM。     

响应面试验优化铁皮石斛组培苗生根培养基

目的:为提高铁皮石斛组培苗移栽成活率,利用响应面法对其生根培养基条件进行了优化。方法:通过单因素试验确定6-BA的浓度、NAA的浓度、马铃薯的量和香蕉泥的量对苗生长状况的影响,利用Box-Behnken试验设计和响应曲面法分析。结果:确定其最优生根培养基为1/2MS+6-BA 0.24 mg/L+NAA 0.52 mg/L+香蕉泥87.63 g/L+马铃薯89.30 g/L+蔗糖20.0 g/L+活性炭4.0 g/L+琼脂7.0 g/L,pH 5.8,光照强度2 000 Lx。结论:通过响应面法建立的模型预测性良好,可用于铁皮石斛组培生根培养基条件的优化。     

紫花羊耳蒜原球茎诱导与分化研究

目的研究基本培养基与添加物及植物激素对紫花羊耳蒜种子原球茎诱导与分化。方法比较不同培养基与添加物对原球茎生长分化的作用,用正交实验探索不同激素对原球茎生长分化最佳浓度配比。结果在1/2MS、MS、KC培养基中,1/2MS最适于紫花羊耳蒜种子萌发;添加椰乳100 ml/L、AC 0.05%对萌发及分化均有促进作用;植物激素6-BA、NAA对原球茎生长分化有显著影响,KT无明显效果。结论紫花羊耳蒜种子原球茎诱导分化适宜基本培养基为1/2MS,最佳激素组合为6-BA3.0 mg/L+NAA0.5mg/L。     

生长调节物质对霍山石斛试管苗生根的影响

目的 研究不同生长调节物质和有机添加物对霍山石斛原球茎试管再生苗生根的影响。方法 将试管苗分别培养在添加不同浓度的NAA，IBA，BA，KT，香蕉泥或氨基酸的MS基本培养基中诱导生根，观察并统计试管苗生根状况。结果 不同NAA，IBA，BA，KT，香蕉泥或氨基酸添加浓度对试管苗生根率、根长、生根数及长势的影响有明显差异，它们的适合浓度分别为0．2，0．1，0．8，0．8mg／L，20％和0．1％。结论 NAA，IBA和香蕉泥对霍山石斛原球茎试管再生苗生根影响较大；氨基酸，BA和KT对生根作用不明显；KT有持绿作用。     

球花石斛的离体快繁体系研究

目的建立球花石斛离体快繁研究体系。方法利用球花石斛种子为外植体,采用种子培养方式开展繁育试验研究。结果球花石斛种子接种MS+香蕉泥13%的培养基上,可成功诱导其原球茎;MS+0.1mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA+香蕉汁13%为球花石斛增殖的最佳培养基,增殖系数为7.9;无根苗生根的适宜培养基为1/2 MS+0.1mg/L NAA+2mg/L 6-BA+香蕉汁13%+土豆汁10%+活性炭2mg/L,生根率达到95%,平均根数为6.3条;组培养移栽到松树皮+水苔(3∶1)的栽培基质上,成活率为100%,且植株长势良好。结论寻找到球花石斛离体繁育研究中各阶段最佳培养基,建立了该植物的离体快繁体系。     

甘西鼠尾草愈伤组织诱导、增殖及分化研究

目的考察不同质量浓度激素组合对甘西鼠尾草愈伤组织诱导、增殖及分化的影响。方法以甘西鼠尾草叶片为外植体,采用正交试验研究2,4-D、NAA、6-BA、KT对愈伤组织诱导及增殖的影响,并探讨适宜愈伤组织分化的培养条件。结果以诱导率和相对生长速率为指标,6-BA和2,4-D均对甘西鼠尾草细胞脱分化和细胞增殖具有显著影响,愈伤组织诱导的最佳激素组合为2,4-D 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L,增殖的最佳激素组合为2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L+KT 0.1 mg/L,MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L的培养基有利于不定芽的分化,而1/2 MS+IBA 1.0 mg/L的培养基则有利于不定根的分化。结论本实验所建立的组织培养体系,适宜甘西鼠尾草的植株再生。     

金线莲愈伤组织诱导分化

目的建立金线莲工厂化高效育苗技术。方法以金线莲种子在培养基上萌发获得原球茎、不定芽,通过正交试验对愈伤组织的诱导和分化先行筛选,然后根据响应面分析法中心组合试验,以愈伤组织分化率为响应值,对6-BA、NAA、芋泥3因素进行优化。结果正交试验分析结果表明:影响愈伤组织诱导和分化的关键因子为外植体类型,不定芽类型最易诱导产生愈伤组织,诱导率较高,达到27.64%,筛选出的最优培养基为1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L+芋泥200g/L,在该培养基上继代培养,愈伤组织月增殖系数达50倍。利用响应面优化得到的愈伤组织分化培养基为1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.46mg/L+芋泥200g/L,预测分化率为为83.16%,验证值为81.4%。生根壮苗培养1/2MS+NAA0.5 mg/L+80g/L香蕉+7g/L芋泥。结论因此利用响应面方法可有效优化金线莲愈伤组织分化培养条件,可应用于实际生产。     

栀子叶片愈伤组织诱导优化研究

目的:对栀子(Gardenia jasminoides Ellis)叶片愈伤组织诱导进行优化研究。方法:通过以叶片为外植体,MS和WPM为基本培养基,添加不同激素组合(6-BA、NAA和IBA)进行愈伤组织诱导研究。结果:栀子叶片在WPM+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L以及6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1(或0.5)mg/L中均有100%的诱导率;在MS培养基上,MS+6-BA 1.0(或1.5)mg/L+NAA 0.5 mg/L的诱导率最好,分别为70%和74%。栀子叶片愈伤组织在再分化培养基上均未诱导出丛生芽。结论:WPM培养基比MS培养基更易诱导栀子叶片愈伤组织,且栀子愈伤组织的再分化较困难。     

云南珍稀民族药黑蒴茎芽组织培养快繁体系研究

目的建立黑蒴茎芽愈伤组织诱导、分化及生根组织培养快繁体系。方法以黑蒴带节嫩茎芽为外植体,以MS(1/2MS)为基本培养基,考察不同质量浓度6-BA、NAA对愈伤组织诱导、分化及茎芽生根的影响。结果芽茎诱导愈伤的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+Bn80g/L+Pt50g/L+25g/L蔗糖+6g/L琼脂,愈伤诱导率71.2%;愈伤分化不定芽最佳培养基为1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L+Bn80g/L+Pt50g/L+25g/L蔗糖+6g/L琼脂,芽诱导率为84.2%;茎芽生根培养基为1/2MS+NAA 0.1~0.3 mg/L+Bn80g/L+Pt50g/L+25g/L蔗糖+6g/L琼脂,生根率超过87.2%。结论筛选出茎芽诱导愈伤、分化不定芽、生根的培养基,建立了黑蒴嫩茎芽组织培养快繁体系。     

铁皮石斛种子诱导成苗试验

以铁皮石斛种子为外植体,可获得大量种苗,适于种子萌发的培养基:VW NAA 0.18 mg/L 6-BA0.53 mg/L GA 0.28 mg/L 蔗糖20 g/L 香蕉泥100 g/L 活性炭10 g/L,适于原生苗生根培养基:VW 6-BA0.2 mg/L NAA 1.5 mg/L 蔗糖20 g/L 香蕉泥100 g/L 活性炭10 g/L。     

野生独一味的离体培养及植株再生

目的研究利用组织培养技术快速获得独一味组培苗的方法。方法以野生独一味为外植体,MS为基本培养基,研究不同浓度激素对叶片愈伤组织诱导及分化的影响。结果适宜野生独一味叶片愈伤组织诱导的培养基为MS+NAA0.2mg/L+2.4-D 1.0mg/L+6-BA 2.0mg/L;适宜不定芽分化的培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L;适宜生根培养基为MS+IBA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L。结论通过研究组织培养中不同激素配比,获得了独一味组培苗,初步建立了独一味快繁技术。     

三叶青愈伤组织诱导增殖体系建立及天然有机物促进总黄酮合成的研究

目的建立三叶青愈伤组织诱导增殖体系,探讨不同天然有机物对三叶青愈伤组织中总黄酮生物合成的影响,优化三叶青的培养体系,为植物细胞规模化生产三叶青总黄酮奠定基础。方法以诱导率、增殖率为指标,选择MS、6-BA、NAA浓度作为考察对象,采用正交试验方法确定三叶青愈伤组织最佳诱导增殖培养基;以总黄酮含量为指标,选择椰乳、土豆泥、香蕉泥浓度作为考察对象,研究天然有机物配比的浓度。结果最佳三叶青愈伤组织诱导培养基为2/3MS+2.0mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA,其诱导率为70%,增殖率为85%,愈伤组织膨大,呈青绿色颗粒状,无褐化现象;发现天然有机物椰乳、土豆泥和香蕉泥均能提高三叶青愈伤组织中总黄酮的生物合成,确定最佳天然有机物配比组合为10%椰乳+150 g/L土豆泥+80g/L香蕉泥,其诱导三叶青愈伤组织总黄酮平均含量为59.256mg/g,较不添加天然有机物愈伤组织的总黄酮含量提高了49.88%。结论明确三叶青愈伤组织的诱导培养体系,发现不同天然有机物的配比能有效提高三叶青愈伤组织中总黄酮含量,大幅缩短三叶青总黄酮的生产周期,为规模化生产三叶青总黄酮提供参考依据。     

外源激素配比对药用植物锁阳愈伤组织诱导的影响

目的 筛选最佳激素组合,提高锁阳组织培养效率.方法 以锁阳肉质茎维管组织作为外植体,以MS为基本培养基,基于正交实验设计研究三种外源激素配比(NAA、2,4-D和6-BA)以及蔗糖和琼脂浓度对锁阳愈伤组织诱导的影响.结果 NAA、2,4-D和6-BA三种激素对锁阳愈伤组织诱导均有显著影响,不同激素之间对出愈率的作用效应大小为2,4-D ＞NAA＞6-BA,诱导锁阳愈伤组织最佳激素配比为MS+NAA (1.0mg/L)+2,4-D (1.5mg/L)+6-BA(2.0mg/L).培养基中琼脂浓度和蔗糖浓度对锁阳愈伤组织诱导率有一定影响,蔗糖浓度以30g/L,琼脂浓度以4.5g/L时愈伤组织诱导率最高.结论 锁阳愈伤组织诱导最适培养基为MS+NAA (1.0mg/L)+2,4-D (1.5mg/L)+6-BA (2.0mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(4.5 g/L).     

激素对菘蓝器官分化及愈伤组织诱导的影响

目的研究激素对菘蓝器官分化及愈伤组织形成能力的影响。方法以菘蓝无菌苗的子叶和胚轴为外植体,采用含有不同植物激素配比的培养基培养菘蓝不同外植体,分析在不同激素配比的条件下诱导形成愈伤组织和分化不定根、不定芽的能力。结果在NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.1 mg/L(14d)、NAA 0.5mg/L+6-BA 1.0 mg/L(14d)、NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.1 mg/L(28d)三个条件下子叶的愈伤组织诱导率可达到100%;NAA(0 mg/L～0.1 mg/L)+6-BA1.0 mg/L的激素组合不定芽诱导率可达75%以上;生根培养以1/2MS培养基附加NAA 0.1 mg/L可使不定芽生根率可达100%。结论合适的激素组合,能促进菘蓝愈伤组织的形成和器官的分化。。     

无花丹参的脱毒培养及植株再生

目的:建立应用于无花丹参快速繁殖的组织培养体系。方法:以茎尖为材料,优化其脱毒培养和植株再生的激素浓度组合,筛选出最佳组合。结果:在添加适宜浓度6-BA(1.5 mg/L)和NAA(0.1 mg/L)的MS培养基上能有效诱导茎尖的芽发生,诱导率可达90.8%。丹参叶片愈伤组织诱导与继代增殖的适宜培养基为2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA;最佳分化培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,芽发生率达到90%;1/2MS+0.5mg/L IBA适宜于试管苗生根。结论:所建立的无花丹参植株再生体系可为解决丹参栽培中的资源和质量问题以及在分子水平进行品种改良打下了良好基础。     

植物生长物质对地榆不同性质芽体诱导分化及增殖的影响

目的:研究植物生长物质对地榆不同性质芽体诱导分化及增殖的影响,建立地榆无性系快繁技术体系。方法:采以地榆叶茎和花茎为外植体,接种到添加不同激素的培养基上,分别进行丛生芽途径和愈伤组织植株再生的组培快繁。结果:花茎在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA培养基中诱导丛生芽的生长情况最好,在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA培养基中次之;叶茎在4种诱导丛生芽培养基中均不能诱导出丛生芽。继代增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA,生根培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA,丛生芽均生长情况良好。结论:建立了地榆无性系快速繁殖技术体系。     

白及人工快繁中有效增殖途径的研究

目的:对白及Bletilla striata人工快繁中的增殖途径进行研究,以炼苗成活率为标准,筛选最有效的增殖途径,为白及组培试管苗在生产上的应用提供技术支持。方法:在白及增殖基本培养基(MS+AC 1.0 g/L+香蕉泥50 g/L+蔗糖20 g/L)中,分别添加不同质量浓度2,4-D、6-BA、NAA、KT,以不同增殖代数试管苗为材料,进行单因素实验;在此基础上,选择适宜的植物激素种类进行完全组合实验,观察不同增殖代数中试管苗的增殖方式,确定各增殖代试管苗的最佳增殖途径。结果:1、2代增殖苗适合以愈伤组织-丛生芽增殖,在基本培养基+2,4-D 0.1 mg/L+KT 0.5 mg/L中,增殖系数可达8.32和7.68;3代增殖苗以分蘖繁殖为主、愈伤组织-丛生芽增殖为辅,在基本培养基+6-BA 0.1 mg/L+NAA 1.5 mg/L中,增殖系数为4.73;4代以后增殖苗则以分蘖增殖为主、假鳞茎繁殖为辅,在基本培养基+6-BA 0.1 mg/L+NAA 1.5 mg/L中,增殖系数亦可达3.50以上。在1/2MS+AC 1.0 g/L+蔗糖15 g/L+香蕉泥80 g/L+6-BA 0.01 mg/L+NAA 1.0 mg/L中培养90 d后,可获得根粗苗壮、约70%具假鳞茎的再生植株,生根率100%;再生植株移栽成活率亦达100%。结论:在白及的人工快繁体系中,低代数试管苗适宜采用愈伤组织-丛生芽增殖,而不适宜直接生根培养;高代数试管苗则适合采用分蘖、假鳞茎繁殖方式进行增殖。