CCR3在肾透明细胞癌中的表达及对肾透明细胞癌细胞侵袭、转移能力的影响

目的研究CCR类趋化因子受体3(CCR3)在肾透明细胞癌中的表达及对肾透明细胞癌细胞侵袭、转移能力的影响。方法回顾性选取2019年4月至2020年4月在湖南中医药高等专科学校附属第一医院就诊的肾透明细胞癌组织标本50例,选取50例癌旁组织为对照,进行免疫组化染色。选取人肾透明细胞癌细胞系786-0和人肾透明细胞癌细胞系A498,细胞培养,检测CCR3 mRNA表达水平。构建CCR3沉默慢病毒载体作为CCR3抑制组,对照组中加入一段无义序列,空白组只加生理盐水。细胞迁移、侵袭实验观察细胞迁移、侵袭能力,蛋白质印迹(Western blotting)检测磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平。结果CCR3在肾透明细胞癌组织中阳性表达比率(48.00%)低于癌旁组织阳性表达(12.00%),差异有统计学意义(P <0.05)。A498人肾透明细胞癌细胞系中CCR3 mRNA表达量高于786-0人肾透明细胞癌细胞系中表达量,差异有统计学意义(P <0.05)。与空白组相比,对照组癌细胞迁移、侵袭数量增加,CCR3抑制组癌细胞迁移、侵袭数量减少(P <0.05);与对照组相比,CCR3抑制组癌细胞迁移、侵袭数量减少,差异有统计学意义(P <0.05)。与空白组相比,对照组p-ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平升高,CCR3抑制组p-ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P <0.05);与对照组相比,CCR3抑制组p-ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 CCR3在肾透明细胞癌细胞中显示高表达,抑制CCR3表达通过调控p-ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白,从而抑制肾透明细胞癌细胞侵袭和迁移。     

外源性一氧化氮调控MEK/ERK信号通路促进胃溃疡大鼠黏膜修复的实验观察

目的观察外源性一氧化氮(NO)通过调控丝裂原细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路促进胃溃疡(GU)大鼠黏膜修复作用。方法取40只大鼠以冰醋酸法建立GU大鼠模型,并将其随机分为模型组、低、中、高剂量组,另取10只大鼠注射生理盐水,设为对照组。术后低、中、高剂量组腹腔注射NO外源性供体硝普钠(SNP) 2 mg/kg、4 mg/kg、6 mg/kg,对照组和模型组腹腔注射等体积生理盐水,2次/d,连续3 d。第4天处死大鼠,进行组织病理学观察,对比溃疡面积、溃疡抑制率,并对比表皮生长因子受体(EGFR)、大鼠肉瘤相关因子(Raf)、MEK、ERK mRNA相对表达量、磷酸化EGFR(pEGFR)/EGFR、磷酸化Raf(pRaf)/Raf、磷酸化MEK(pMEK)/MEK、磷酸化ERK(pERK)/ERK及紧密连接蛋白1(ZO-1) mRNA和蛋白相对表达量。结果组织病理学观察发现,3剂量组炎性细胞浸润程度较模型组减轻,且中剂量组减轻程度最为明显;溃疡面积组间比较,中剂量组最低、低、高剂量组其次、模型组最高,除低、高剂量组比较差异无显著性(P 0. 05)外,每两组间比较差异有显著性(P 0. 05),中剂量组溃疡抑制率显著高于低、高剂量组(P 0. 05),低、高剂量组溃疡抑制率比较无显著性(P 0. 05);溃疡组织EGFR、Raf、MEK、ERK mRNA相对表达量、pEGFR/EGFR、pRaf/Raf、p MEK/MEK、pERK/ERK及ZO-1 mRNA和蛋白相对表达量组间比较,对照组最高、中剂量组其次、低、高剂量组稍高、模型组最低,除低、高剂量组比较无显著性(P 0. 05)外,每两组间比较差异均有显著性(P 0. 05)。结论外源性NO供体SNP可促进GU大鼠黏膜修复,其中4 mg/kg的SNP促进效果最佳,推测与上调EGFR、Raf、MEK、ERK mRNA,ZO-1 mRNA和蛋白相对表达量,pEGFR/EGFR、pRaf/Raf、pMEK/MEK、pERK/ERK,激活MEK/ERK信号通路有关。     

RBM5、EGFR和KRAS在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的检测非小细胞肺癌组织RBM5、EGFR及KRAS表达水平,并进一步分析上述三种基因表达与非小细胞肺癌患者临床、病理相关性,为肺癌早期诊断及分子靶向治疗提供依据。方法收集2017年8月至2018年8月在吉林大学第二医院接受手术的42例NSCLC患者癌组织及癌旁组织标本,采用Western blot及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测RBM5、EGFR和KRAS蛋白及mRNA相对表达水平,同时采用ELISA方法检测44例患者外周血清中上述基因表达水平,并进一步分析其临床病理相关性。结果在组织学分析中,与癌旁组织比较,肺癌组织中RBM5mRNA表达水平降低(P0.05),降低水平与吸烟史、淋巴结转移等相关;EGFR mRNA表达水平升高(P0.05),其中伴有淋巴结转移组中EGFR相对表达量高于无淋巴结转移组(P0.05);KRAS mRNA表达水平增高与临床分期、淋巴结转移等相关。在血清学ELISA分析中,与健康人比较,肺癌患者血清中RBM5表达水平降低(P0.01),其中伴有淋巴结转移组中RBM5表达量低于无淋巴结转移组(P0.05);EGFR和KRAS表达水平升高(P0.01),表达水平的升高与肺癌患者临床分期及淋巴结转移无显著相关性。结论肿瘤抑制基因RBM5在NSCLC发生发展过程中起到负性调控作用,而EGFR和KRAS起到正性调控作用;血清中RBM5和EGFR可能成为判断肺癌早期诊断及预测转移的新指标,提供肺癌治疗新靶点。     

Gadd45α mRNA和蛋白在子痫前期胎盘组织中表达及转染siRNA对滋养细胞侵袭能力及侵袭相关分子的影响

目的分析生长阻滞和DNA损伤45α(Gadd45α)蛋白和mRNA在子痫前期(PE)胎盘组织中的表达情况及转染siRNA对滋养细胞侵袭能力及侵袭相关分子的影响。方法回顾性选取咸宁市中心医院收治的40例PE胎盘组织为病例组,30例正常胎盘组织为对照组。通过免疫印迹法对两组Gadd45α蛋白表达水平进行检测,并用实时荧光定量PCR法对两组Gadd45α mRNA的相对表达量进行检测。对滋养细胞HTR8/Svneo进行培养,以转染阴性对照的siRNA为对照siRNA组,转染Gadd45α的siRNA为Gadd45α-siRNA组。在转染Gadd45α的siRNA后对滋养细胞侵袭数量和侵袭相关分子基质金属蛋白酶(MMPs)的表达水平进行检测。结果相比对照组,病例组Gadd45α蛋白表达水平明显升高(P 0. 01),Gadd45α mRNA的相对表达量明显上调(P 0. 01)。相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组滋养细胞HTR8/Svneo中Gadd45α蛋白表达水平显著下降(P 0. 01),Gadd45α mRNA的相对表达量亦显著下调(P 0. 01)。随着转染siRNA时间的增加,对照siRNA组与Gadd45α-siRNA组细胞侵袭数量明显增多(P 0. 05);相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组同时间点滋养细胞HTR8/Svneo侵袭数量明显增多(P 0. 01)。相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组滋养细胞HTR8/Svneo侵袭相关分子MMP-1、MMP-2、MMP-3及MMP-9的表达水平均显著升高(P 0. 05)。结论 Gadd45α高表达于PE胎盘组织,而通过阻滞滋养细胞HTR8/Svneo中Gadd45α的表达水平可诱导细胞侵袭,提高侵袭相关分子MMPs的表达量。     

丹参酮ⅡA对脓毒症大鼠肺损伤及p38MAPK/ERK信号通路的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对脓毒症大鼠肺损伤及p38MAPK/ERK信号通路的影响。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、模型组和丹参酮ⅡA组各10只,模型组和丹参酮ⅡA组采用盲肠结扎穿孔手术法制作大鼠脓毒症模型。丹参酮ⅡA组于术后即刻腹腔注射20 mg/kg的丹参酮ⅡA注射液,连续治疗48 h。治疗后,HE染色观察肺组织的病理变化,测定肺组织湿/干质量(W/D)和内毒素(LPS)水平,采用ELISA法测定肺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-6、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)水平,Western blot检测p38MAPK/ERK信号通路的磷酸化水平。结果与对照组相比,模型组和丹参酮ⅡA组肺组织W/D显著升高(P 0. 05),SOD酶活性和GSH水平显著下降(P 0. 01),LPS、MDA、IL-6和TNF-α水平显著升高(P 0. 01),p-p38和p-ERK1/2蛋白的表达显著上调(P 0. 01);与模型组相比,丹参酮ⅡA组肺组织W/D显著下降(P 0. 05),SOD酶活性和GSH水平显著升高(P 0. 01),LPS、MDA、IL-6和TNF-α水平显著下降(P 0. 01),p-p38和p-ERK1/2蛋白的表达显著下调(P 0. 01); HE染色显示肺组织的病理变化明显减轻。结论丹参酮ⅡA可能通过抑制p38MAPK/ERK信号通路,降低脓毒症大鼠炎症因子和氧化应激水平,保护大鼠肺损伤。     

柿叶提取物通过MAPK/ERK1/2通路减轻心肌缺血再灌注损伤

目的探讨柿叶提取物(PEL)减轻心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、心肌缺血再灌注损伤组(MIRI组)、柿叶提取物组(PEL组)、MAPK抑制剂组、MAPK抑制剂+PEL组。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min后再灌注60 min建立心肌缺血再灌注模型。PEL组大鼠灌胃50 mg/(kg·d)柿叶提取物,MAPK抑制剂组大鼠尾静脉注射PD0325901; MAPK抑制剂+PEL组大鼠灌胃50 mg/(kg·d)柿叶提取物前30 min尾静脉注射PD0325901。假手术组和MIRI组灌胃等量生理盐水。每天相同时间给药1次,连续给药21 d。全自动生化分析仪检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)水平,试剂盒检测心肌组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,采用1%氯化三苯基四氯唑测定心肌梗死面积,Western Blot检测心肌组织中Bcl-2、Bax和p-ERK1/2蛋白表达。结果与假手术组比,MIRI组大鼠血清AST和CK含量、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积,心肌组织MDA和LDH含量、Bax蛋白表达均显著升高(P 0. 05),心肌组织SOD和GSH-Px活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达显著降低(P0. 05)。与MIRI组比,PEL组和MAPK抑制剂+PEL组大鼠血清AST和CK含量、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积、心肌组织MDA和LDH含量、Bax蛋白表达均显著降低(P 0. 05),心肌组织SOD和GSH-Px活力、Bcl-2和pERK1/2蛋白表达均显著升高(P 0. 05); MAPK抑制剂组无显著差异(P 0. 05)。与MAPK抑制剂组比,MAPK抑制剂+PEL组血清AST和CK含量、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积、心肌组织MDA和LDH含量、Bax蛋白表达均显著降低(P 0. 05),心肌组织SOD和GSH-Px活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达显著升高(P 0. 05)。结论 PEL可能通过激活MAPK/ERK1/2信号通路减轻心肌缺血再灌注损伤。     

RAS/MAPK通路在食管癌中的活化改变及其意义

目的通过研究细胞外信号调节激酶（ERK）在食管癌组织、癌旁组织、正常组织中的表达和激活情况,探讨RAS／MAPK信号级联在食管癌发生中的意义。方法Western—blot方法检测15例新鲜食管癌组织及相应的13例癌旁组织、14例正常组织中p-ERK、ERK的表达。免疫组化方法检测该批组织石蜡切片中p-ERK的表达及其细胞定位。结果Western—blot显示全部组织均表达ERK和p-ERK,统计分析表明,ERK在3种组织中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）;p-ERK在正常组织、癌旁组织、癌组织中的表达有下降趋势,其在癌组织中的表达显著低于正常组织（P〈0．05）。免疫组化则显示全部组织均表达p-ERK,阳性信号主要位于食管黏膜上皮细胞和癌细胞的胞核。结论RAS／MAPK信号转导通路的活化存在于所有食管癌组织、癌旁组织和正常组织,食管癌中该通路的活化水平显著低于正常组织,该通路活化水平的改变可能与食管癌的发生有关。     

KRAS突变对肺损伤大鼠蛋白激酶信号途径的影响

目的 研究鼠类肉瘤病毒癌(KRAS)基因突变对肺损伤大鼠蛋白激酶信号途径的影响。方法 建立大鼠急性肺损伤模型。根据组织芯片KRAS蛋白表达分组,KRAS阴性组:KRAS蛋白表达H-score计分<3分),KRAS阳性组(KRAS蛋白表达H-score计分> 3分)。KRAS突变型组:突变型KRAS蛋白的表达H-score计分<3分,KRAS野生型组:突变型KRAS蛋白的表达H-score计分> 3分。采用免疫组化法检测10种肺损伤相关蛋白[磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K),KRAS,KRAS突变蛋白,NRAS,BRAF,丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK),细胞外信号调节激酶(ERK),磷酸化MEK1(p MEK1),磷酸化MEK2(p MEK2)和磷酸化ERK1/2(p ERK1/2)]的阳性表达,采用组织化学评分法(H-score)对蛋白表达情况进行定量并分组,比较各组KRAS下游蛋白及MEK2/ERK通路蛋白的表达情况。结果①与KRAS阴性组相比,KRAS阳性组该基因下游蛋白中BRAF、MEK、ERK表达显著上升(P <0. 05),而NRAS无显著差异(P> 0. 05);②与KRAS野生型相比,KRAS突变型基因下游蛋白中BRAF、MEK、ERK表达显著上升(P <0. 05),而NRAS无显著差异(P> 0. 05);③与KRAS阴性组相比,KRAS阳性组pMEK2,pERK1/2蛋白表达显著上升(P <0. 05),而p MEK1无显著差异(P> 0. 05)。结论 KRAS蛋白阳性大鼠肺损伤组织中,该蛋白下游蛋白BRAF、MEK和ERK(RAS/RAF/MEK/ERK信号通路的下游蛋白)在KRAS基因突变的肺损伤组织中的表达量显著增加,且MEK2/ERK通路蛋白MEK、p MEK2和ERK表达率也显著增加,提示KRAS蛋白通过调控其下游蛋白表达调控肺组织损伤,该过程可能与MEK2/ERK通路相关。     

miR-543调控肾透明细胞癌细胞增殖和侵袭的机制分析

目的探讨与分析miR-543调控肾透明细胞癌(CCRCC)细胞增殖和侵袭的机制。方法 CCRCC细胞系ACHN随机分为三组:空白组、阴性对照(NC)组与miR-543组,NC组与miR-543组分别转染照NC与miR-543模拟剂,空白组不进行转染。MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞转移与侵袭比率,Western blot检测蛋白表达水平。结果转染后24 h与48 h,与NC组与空白组相比,miR-543组的细胞增殖抑制率显著增加(P0. 05),细胞凋亡率显著增加(P 0. 05),细胞转移与侵袭相对数显著降低(P 0. 05),SDF-1、CXCR7蛋白相对表达量显著降低(P 0. 05),NC组与空白组比较差异无统计学意义(P 0. 05)。且miR-543对细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、细胞转移与侵袭、SDF-1和CXCR7蛋白相对表达量的影响均不具有时间依赖性。结论 miR-543能抑制调控肾透明细胞癌细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡,且不具有时间依赖性,其作用机制可能与抑制SDF-1/CXCR7表达有关。     

上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭的影响及与VEGF和P53蛋白表达的关系研究

目的研究上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭的影响及与血管内皮生长因子(VEGF)和P53蛋白表达的关系。方法前瞻性收集新疆维吾尔自治区人民医院的卵巢癌组织标本112例(A组)、卵巢癌旁组织标本85例(B组)及正常卵巢组织标本75例(C组)。采用实时荧光定量PCR法对三组标本中的miRNA-22表达量进行检测。将卵巢癌SKOV-3细胞株分为转染miRNA-22-mimic(转染组)、miRNA-22-NC(空白载体组)及正常对照组。采用实时荧光定量PCR法对各组细胞中的miRNA-22表达量进行测定,通过Transwell小室法对各组细胞的侵袭能力进行检测,并用Western blot法对各组细胞中的P53及VEGF蛋白表达情况进行检测。结果 A组miRNA-22表达量较B、C组均明显下降(P 0. 05),而B、C组miRNA-22表达量的比较,并无显著差异(P 0. 05)。相比正常对照组与空白载体组,转染组细胞中的miRNA-22表达量明显升高(P 0. 05),而正常对照组与空白载体组细胞中miRNA-22表达量的比较,无显著差异(P 0. 05)。Transwell小室法检测结果发现,转染组卵巢癌SKOV-3细胞株侵袭能力较正常对照组与空白载体组明显减弱(P 0. 05),而正常对照组与空白载体组侵袭细胞数的比较,无显著差异(P 0. 05)。Western blot法检测结果发现,转染组细胞中P53和VEGF蛋白表达水平较正常对照组与空白载体组明显下降(P 0. 05),而正常对照组与空白载体组细胞中P53和VEGF蛋白表达水平的比较,无显著差异(P 0. 05)。结论上调miRNA-22表达可起到阻滞卵巢癌SKOV-3细胞株侵袭的作用,其机制可能与P53和VEGF蛋白表达水平下降密切相关。     

苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响

目的探讨苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及其机制。方法采取体外培养MDA-MB-231细胞进行分组,苦瓜多糖组给予不同浓度苦瓜多糖(0μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml),空白组(苦瓜多糖0μg/ml)培养基中含有与苦瓜多糖组等浓度的DMSO,将各组细胞孵育分别培养至12 h、24 h、48 h处理。MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测后细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体变化,Trans well法检测细胞迁移率,免疫组化检测Ki67与Caspase-3阳性率,Western-blot检测MMP-9、Bcl-2、Bax表达水平,RT-PCR检测细胞周期蛋白(CyclinD1)、血管内皮生长因子(VEGF)表达量;体内建立移植瘤裸鼠模型,试验组裸鼠采用苦瓜多糖(120μg/ml)灌胃治疗,早晚一次,1 ml/次,对照组裸鼠灌胃等体积的生理盐水,两组裸鼠治疗6周后测量肿瘤质量、观察肿瘤体积变化。结果与空白组相比,苦瓜多糖组癌细胞增值率与迁移能力随苦瓜多糖剂量增加而降低(P 0. 05),细胞凋亡率、凋亡小体数量随着药用剂量增加而升高(P 0. 05); Western-blot检测结果显示苦瓜多糖组MMP-9、Bcl-2表达水平低于空白组(P 0. 05),Bax表达水平高于空白组(P 0. 05); RT-PCR结果显示苦瓜多糖组CyclinD1、VEGF表达量显著低于空白组(P 0. 05)。试验组肿瘤组织中的Ki67蛋白水平、肿瘤体积、肿瘤质量显著低于对照组(P 0. 05),而试验组肿瘤组织中Casppase-3蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05)。结论苦瓜多糖可以通过调控细胞周期、凋亡、迁移侵袭相关蛋白及基因表达,进而调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为。     

干扰miR-21调控人前列腺癌 细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的实验研究

目的观察干扰微小RNA-21(miR-21)对人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的影响,并初步探讨其调控机制。方法收集对数期生长PC-3细胞株及人前列腺正常上皮细胞株RWPE-1,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并对比其miR-21基因表达情况。取对数期生长PC-3细胞株,采用脂质体转染法将miR-21抑制剂(inhibitor)及NC inhibitor质粒转染至PC-3细胞,分别设为干扰组和空载组,另取不做处理PC-3细胞为空白组。采用倒置荧光显微镜检测转染效率;采用MTT法检测并对比各组不同时刻吸光度(OD值);采用划痕试验及Transwell试验检测并对比三组穿膜细胞数及迁移率;采用RT-PCR法检测并对比三组miR-21、基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测并对比三组TIMP3、MMP-9蛋白表达水平。结果 PC-3细胞miR-21相对表达量显著低于RWPE-1细胞(P 0. 05);倒置显微镜下检测转染24 h后干扰组和空载组转染效率分别为(82. 16±8. 20)%、(80. 23±8. 69)%;干扰组MTT实验不同时刻OD值均显著低于空白组和空载组(P 0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P 0. 05),三组MTT实验OD值均随时间延长呈显著升高趋势(P 0. 05);干扰组12 h、24 h迁移率均显著低于空白组和空载组(P 0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P 0. 05),三组24 h迁移率显著高于12 h(P 0. 05);干扰组穿膜细胞数显著少于空白组和空载组(P 0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P 0. 05);干扰组miR-21相对表达量、MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量显著低于空白组和空载组(P 0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P 0. 05);干扰组TIMP3 mRNA和蛋白相对表达量显著高于空白组和空载组(P 0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P 0. 05)。结论前列腺癌细胞miR-21异常高表达,干扰miR-21可抑制人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭能力,可能与上调TIMP3 mRNA和蛋白、下调MMP-9 mRNA和蛋白有关。     

LncRNA PVT1在结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移中的作用

目的探讨长链非编码RNAs(lncRNAs)浆细胞瘤多样异位基因1(PVT1)在结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移中的作用。方法结直肠癌细胞株HT-29分为三组,干扰PVT1(si-PVT1)组转染si-PVT1,干扰对照(si-NC)组转染si-NC,空白组不进行转染。采用CCK-8法检测24 h、48 h细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭。结果转染后24 h、48 h,与空白组和si-NC组相比,si-PVT1组的LncRNA PVT1表达量显著减少(P 0. 05),细胞增殖抑制率显著降低(P 0. 05),细胞凋亡率显著降低(P 0. 05),细胞划痕愈合率、细胞侵袭率都显著增加(P 0. 05)。结论 LncRNA PVT1在结直肠癌中可发挥抑癌基因的作用,抑制LncRNA PVT1的表达从而促进结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移,抑制细胞凋亡。     

胃癌患者基质金属蛋白酶-9的表达水平的变化及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在胃癌中的表达及其与侵袭、转移的关系。方法采用ELISA法及免疫组织化学SP法检测60例胃癌患者血清MMP-9水平及胃癌组织中的MMP-9表达,分析与淋巴结转移、浆膜浸润程度及分期的关系。结果胃癌患者术前血清MMP-9水平显著高于对照组及术后1周(P＜0．05),Ⅲ、Ⅳ期,有淋巴结转移及T3 T4患者血清MMP-9水平均分别显著高于Ⅰ、Ⅱ期,无淋巴结转移及T1 T2患者(P＜0．05),而高、中分化胃癌患者血清MMP-9水平与低分化无显著性差异(P＞0．05)。MMP-9表达强度与胃癌细胞分化程度无明显相关(P＞0．05),而与胃癌的病期、浸润程度和淋巴结转移密切相关(P＜0．05)。结论MMP-9表达与胃癌的浸润和淋巴结转移密切相关,亦是判断预后的有用指标。     

丙泊酚对人骨肉瘤细胞增殖、侵袭及整合素聚集的影响及机制分析

目的 研究丙泊酚对人骨肉瘤细胞的增殖、侵袭及整合素聚集的影响,并分析其作用机制。方法 体外培养人骨肉瘤细胞,将其分为5组,分别是:空白对照组(不做处理,CK组)、阴性对照组(用脂肪乳处理,NC组),丙泊酚低、中、高浓度组(低:60. 0μg/L;中:100. 0μg/L;高:120. 0μg/L),根据各组浓度设置选择对数期细胞将丙泊酚加入6孔板进行干预,各组处理时长均为72 h。MTT(四氮唑盐)法检测细胞增殖、细胞克隆形成实验检测细胞的生长与克隆形成、Transwell法检测细胞的迁移与侵袭、Western blot(蛋白免疫印记)法检测丙泊酚对人骨肉瘤细胞相关蛋白表达的影响;免疫荧光检测整合素蛋白α5β1的表达。结果 培养12 h、24 h,48 h,72 h后,相比于CK与NC组,低、中、高浓度的丙泊酚组人骨肉瘤细胞吸光值明显减少(P 0. 05),并呈现浓度依赖性(P 0. 05),且随着丙泊酚作用时间的延长,人骨肉瘤细胞增值率显著降低(P 0. 05)。人骨肉瘤细胞的克隆、迁移及侵袭数目、迁移与侵袭相关蛋白纤维连接蛋白(NF蛋白)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白9(MMP-9)、高迁移率族盒蛋白4(SOX4)以及整合素蛋白α5β1的表达水平在不同不浓度丙泊酚组中均明显低于CK与NC组,并呈现浓度依赖性(P 0. 05)。结论 丙泊酚对人骨肉瘤细胞的增殖、侵袭及整合素聚集具有抑制作用,抑制机制可能是下调SOX4蛋白的表达,且在本研究浓度及作用时间范围内,其作用效果随剂量和时间的增加而增强。     

MicroRNA-664对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究microRNA-664(miR-664)对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用Lipofectamine 2000脂质体法将miR-664模拟剂(miR-664 mimics)、miR-664抑制剂(miR-664 inhibitor)转染至人脑胶质瘤细胞U251中,并设置相应对照组(miR-NC、anti-NC);采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-664的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况,划痕实验及Tanswell小室法检测各组细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞中核蛋白(Ki67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及MMP-9的表达。结果与miR-NC相比,转染miR-664 mimics后明显上调U251细胞中miR-664的表达,并促进U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著上调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05);与anti-NC相比,转染miR-664 inhibitor后明显下调U251细胞中miR-664的表达,并抑制U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著下调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05)。结论 miR-664可能通过上调Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达,促进人脑胶质瘤细胞U251细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为潜在的肿瘤标志物。     

靶向沉默Pax6基因表达抑制视网膜母细胞瘤增殖侵袭的机制研究

目的探讨抑制Pax6基因表达对视网膜母细胞瘤增殖侵袭的影响及机制。方法 RT-PCR检测视网膜母细胞瘤及瘤旁组织中Pax6基因的mRNA表达;Control组(不经任何处理)、阴性对照组(转染NC-siRNA)和Pax6沉默组(转染Pax6-siRNA)转染人视网膜母细胞瘤HXO-RB44,转染48 h后Western blot检测各组细胞中Pax6、ki67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)蛋白表达;CCK8和Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力。结果视网膜母细胞瘤中Pax6基因的mRNA表达显著高于瘤旁组织(P0.01);转染Pax6-siRNA后HXO-RB44细胞中Pax6的蛋白表达显著降低(P0.01);与Control组及NC-siRNA组比较,Pax6-siRNA组细胞存活率及细胞侵袭数显著降低,ki67、MMP-2、PI3K、p-AKT蛋白表达均显著下调,差异有统计学意义(P0.01)。结论抑制Pax6基因表达可显著降低视网膜母细胞瘤增殖和侵袭能力,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关。     

Ⅳ型胶原及其调节因子表达与喉癌预后的关系

目的探讨声门上型喉癌组织中Ⅳ型胶原及其调节因子一Ⅳ型胶原酶、TIMP-l的表达与预后的关系.方法采用SP免疫组化方法,对3l例声门上型喉鳞状细胞癌标本中的Ⅳ型胶原、Ⅳ型胶原酶(包括基质金属蛋白酶2、9,MMP-2和MMP-9)及组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的表达进行检测,分析其表达与喉癌病人预后的关系.结果与预后较好的声门上型喉癌相比,预后较差组织中Ⅳ型胶原的表达明显降低(P＜0.01),MMP-9的表达(P＜0.05)及(MMP-2 MMP-9)/TIMP-1比值明显增高(P＜0.01),而MMP-2和TIMP-l在两组间的表达差异无显著性(P＞0.05).结论Ⅳ型胶原及其调节因子的表达与声门上型喉癌病人预后相关,可作为评估预后的参考指标.     

骨肉瘤患者肿瘤组织中PLOD2基因表达水平及其对肿瘤细胞迁移/侵袭的影响

目的探讨骨肉瘤患者肿瘤组织中赖氨酸羟化酶2(PLOD2)基因表达水平及其对肿瘤细胞迁移/侵袭的影响。方法选取西安交通大学第二附属医院骨科采集的95例新鲜骨肉瘤患者肿瘤组织及其癌旁正常组织标本,采用免疫组化染色和实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测其表达水平,分析PLOD2表达与临床病理特征的关系。取对数生长期人骨肉瘤细胞系MG-63,随机分为小干扰RNA(si RNA)-PLOD2组、阴性对照组(NC组)以及空白组,si RNA-PLOD2组转染si RNA-PLOD2干扰序列,NC组转染空载体,空白组不予任何处理。采用RT-PCR方法检测各组PLOD2基因表达水平,观察抑制PLOD2基因表达对骨肉瘤细胞迁移、侵袭能力的影响。结果免疫组化染色结果显示,骨肉瘤肿瘤组织中PLOD2阳性表达率(96. 84%)明显高于癌旁正常组织(7. 37%),差异有显著性(P 0. 05);骨肉瘤肿瘤组织中PLOD2 m RNA表达水平明显高于癌旁正常组织,差异有显著性(P 0. 05); PLOD2表达与TNM分期、软组织浸润、淋巴结远处转移密切相关(P 0. 05),与Ⅰ、Ⅱ期、不存在软组织浸润以及未发生淋巴结远处转移骨肉瘤患者比较,Ⅲ、Ⅳ期、存在软组织浸润以及发生淋巴结远处转移骨肉瘤患者肿瘤组织中PLOD2表达水平明显升高(P 0. 05),而与骨肉瘤患者性别、年龄、肿瘤直径、组织学类型无关(P 0. 05);转染48 h,si RNA-PLOD2组PLOD2基因表达水平明显低于NC组、空白组(P 0. 05),NC组、空白组PLOD2基因表达水平无显著差异(P 0. 05); Transwell侵袭实验以及划痕实验结果显示,si RNA-PLOD2组骨肉瘤细胞穿透基底膜数量、迁移细胞数量明显少于NC组、空白组(P0. 05),NC组、空白组骨肉瘤细胞穿透基底膜数量、迁移细胞数量无显著差异(P 0. 05)。结论骨肉瘤患者肿瘤组织中PLOD2基因表达水平高于癌旁正常组织,其表达水平与骨肉瘤患者肿瘤TNM分期、软组织浸润、淋巴结远处转移有关,抑制PLOD2基因表达可抑制骨肉瘤肿瘤细胞迁移、侵袭。     

表皮生长因子受体活化与胰腺癌细胞解离关系的实验研究

目的 明确表皮生长因子受体(EGFR)活化参与胰腺癌细胞解离调节的分子机制.方法 通过免疫荧光法检测仓鼠高转移株(PC-1.0)和低转移株(PC-1)胰腺癌细胞中EGFR、活化(磷酸化)EGFR (p-EGFR)、活化(磷酸化)丝裂原活化蛋白激酶激酶2 (p-MEK1/2)及活化(磷酸化)细胞外信号调节激酶1/2 (p-ERK1/2)的表达变化及其与胰腺癌细胞解离状态变化的关系.结果 胰腺癌细胞解离因子(DF)明显诱导低转移株胰腺癌细胞(PC-1)中EGFR、p-EGFR、p-MEK1/2和p-ERK1/2的表达,同时诱导其细胞克隆解离.相反,AG1478(EGFR活化抑制剂)明显抑制高转移株胰腺癌细胞(PC-1.0)中EGFR、p-EGFR、p-MEK1/2和p-ERK1/2的表达,同时诱导PC-1.0细胞聚集成细胞克隆.结论 表皮生长因子受体活化后激活MEK/ERK信号通路,从而参与胰腺癌细胞解离的调节.