miRNA-381靶向PTEN对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制研究

目的 探讨与研究miRNA-381靶向10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失基因(PTEN)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制。方法 将处于对数生长期的BGC-823细胞平均分为三组:对照组、实验1组与实验2组,分别转染miRNA NC 20 nmol/L与miRNA-381 mimic 20 nmol/L、40 nmol/L。采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞迁移情况,实时定量PCR检测miRNA-381表达情况,Western blotting检测PTEN蛋白表达情况。结果 转染后24 h、48 h,实验1组与实验2组的细胞增殖指数、细胞迁移指数、miRNA-381表达量高于对照组,差异均具有统计学意义(P 0. 05);实验2组高于实验1组,两组比较差异具有统计学意义(P 0. 05)。实验2组与实验1组的细胞凋亡指数、PTEN蛋白相对表达量均显著低于对照组,实验2组也较实验1组显著降低,差异均具有统计学意义(P 0. 05)。与转染后24 h相比,转染后48 h三组细胞增殖指数、凋亡指数、迁移指数以及miRNA-381相对表达量均显著增加,而PTEN蛋白相对表达量仅对照组显著增加,两个实验组均显著降低(P 0. 05)。结论 在胃癌细胞中,miRNA-381可通过靶向抑制PTEN表达,从而促进胃癌细胞增殖与迁移,抑制胃癌细胞的凋亡。     

miR-21对晶状体上皮细胞增殖、迁移的影响

目的探讨miR-21对晶状体上皮细胞增殖、迁移的影响。方法人晶状体上皮细胞(HLE-B3)随机分为三组,实验组转染miR-21模拟剂(mimic),对照组转染miR-21阴性对照(NC),空白组加入等剂量的磷酸盐缓冲液(PBS)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,双染法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移,Western-blot检测细胞Bcl-2、Akt蛋白表达。对三组上述各指标进行比较。结果转染48 h后,实验组中miR-21相对表达水平显著上升,与空白组、对照组比较差异均有统计学意义(P 0. 05)。转染24 h、48 h后,实验组的细胞增殖活性显著低于空白组与对照组(P 0. 05);转染48 h后,实验组的细胞凋亡率显著高于空白组与对照组(P 0. 05),迁移距离与过膜细胞数都显著少于空白组与对照组(P 0. 05)。转染48 h后,实验组的Bcl-2、Akt蛋白表达水平显著低于空白组与对照组(P 0. 05),空白组与对照组对比差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 miR-21能通过调节晶状体上皮细胞中Bcl-2、Akt蛋白的表达,从而抑制细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对慢性粒细胞白血病模型小鼠的治疗作用及可能机制

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对慢性粒细胞白血病(CML)模型小鼠的治疗作用,并分析可能机制。方法将CML小鼠随机分为对照组及EGCG治疗组(EGCG组)。EGCG组小鼠接受EGCG治疗,具体为:EGCG15 mg/kg,腹腔注射,每周2次,共治疗4周。对照组接受等量的生理盐水腹腔注射。观察小鼠体重变化及肿瘤大小。采用免疫组化及Western bolt法检测并比较两组小鼠肿瘤组织中Bcr/abl融合基因蛋白(BCR-ABL)、肿瘤组织中含SH2结构域的蛋白质酪氨酸磷酸酶1(SHP-1)的表达。采用Western bolt法检测两组小鼠SHP-1、STAT3、半胱天冬酶-3(Caspse-3)、半胱天冬酶-6(Caspase-6)及半胱天冬酶-9(Caspase-9)的表达。结果治疗结束后,EGCG组小鼠体重显著高于对照组(P 0. 05,且肿瘤重量显著低于对照组(P 0. 05)。EGCG组小鼠肿瘤组织BCR-ABL表达量显著低于对照组(P 0. 05)。EGCG组小鼠肿瘤组织内SHP-1表达量显著高于对照组(P 0. 05)。EGCG组小鼠肿瘤组织内p-STAT3水平显著低于对照组小鼠(P 0. 05)。EGCG组小鼠肿瘤组织内Caspase-3及Caspase-9水平显著高于对照组小鼠(P 0. 05)。两组Caspase-6水平比较差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 EGCG可抑制CML模型小鼠的肿瘤生长,该作用可能是通过激活SHP-1/STAT3信号通路实现的。     

姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法将人类绒毛膜癌细胞JEG-3细胞株随机分为对照组和姜黄素干预组。姜黄素干预组加入100μl不同浓度的姜黄素与细胞孵育24 h;对照组只加入PRMI 1640培养液与等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT检测检测细胞抑制率。姜黄素干预组加入100μl姜黄素(终浓度为40μmol/L)与细胞孵育24 h后,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot检测增殖相关蛋白Ki-67和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达,以及凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(Bax)的表达。结果与对照组相比,姜黄素干预组JEG-3细胞培养24 h后吸光度显著下降(P 0. 05);姜黄素对JEG-3细胞抑制作用呈药物浓度依赖性,半抑制浓度(IC50)为(39. 33±1. 02)μmol/L;与对照组相比,JEG-3细胞的凋亡率明显升高,增殖相关蛋白Ki-67和Cyclin D1的表达显著降低(P 0. 05),凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的蛋白表达量显著升高(P 0. 05),Bcl-2的表达量显著降低(P 0. 05)。结论姜黄素可以下调人类绒毛膜癌细胞增殖相关蛋白的表达,上调凋亡相关蛋白的表达,调控其增殖和凋亡。     

iNOS在EGCG促A549细胞凋亡中的作用

目的观察诱导型一氧化氮合酶（iNOs）在表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）促A549细胞凋亡中的作用。方法体外培养A549细胞,随机分为对照组、EGCG组,MTT方法检测筛选EGCG最佳作用浓度,流式细胞仪检测EGCG促A549细胞凋亡作用,免疫组化染色法、蛋白质印迹定量分析法与Real time—PCR方法检测各组中iNOS蛋白和mRNA的表达情况。结果200mg／L的EGCG组细胞增殖活性与其他组比较差异有显著意义（F—1000．35,q=3．43～60．00,P〈0．05）。EGCG组晚期A549细胞凋亡率与对照组比较,差异有显著性（x2 =65．23,P〈0．05）。与对照组比较,EGCG同样可以降低A549细胞中iNOS蛋白与mRNA的表达量,差异有显著性（t=9．4、5．7,P〈0．05）。结论EGCG促A549细胞凋亡可能与下调iNOS蛋白与mRNA的表达量有关。     

LncRNA PVT1在结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移中的作用

目的探讨长链非编码RNAs(lncRNAs)浆细胞瘤多样异位基因1(PVT1)在结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移中的作用。方法结直肠癌细胞株HT-29分为三组,干扰PVT1(si-PVT1)组转染si-PVT1,干扰对照(si-NC)组转染si-NC,空白组不进行转染。采用CCK-8法检测24 h、48 h细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭。结果转染后24 h、48 h,与空白组和si-NC组相比,si-PVT1组的LncRNA PVT1表达量显著减少(P 0. 05),细胞增殖抑制率显著降低(P 0. 05),细胞凋亡率显著降低(P 0. 05),细胞划痕愈合率、细胞侵袭率都显著增加(P 0. 05)。结论 LncRNA PVT1在结直肠癌中可发挥抑癌基因的作用,抑制LncRNA PVT1的表达从而促进结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移,抑制细胞凋亡。     

BCL-6对血管平滑肌细胞增殖和氧化应激的影响

目的探讨原癌基因BCL-6对血管平滑肌细胞增殖和氧化应激的影响。方法人主动脉平滑肌细胞株(HA-VSMCs)随机分为三组:对照组、空载组和BCL-6组。对照组不进行转染,空载组转染空载体pcDNA3. 1 2μg,BCL-6组转染pcDNA3. 1-BCL-6 2μg。MTT法检测细胞增殖,二氯荧光素双醋酸盐法检测活性氧(ROS)水平,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot检测BCL-6及α-SMA蛋白表达。结果转染后24 h与48 h,BCL-6组的细胞增殖指数显著高于对照组与空载组(P 0. 05),BCL-6组的ROS水平均显著对照组与空载组(P 0. 05)。转染后48h,BCL-6组的GO/G1期比率、α-SMA蛋白相对表达量显著低于对照组与空载组(P 0. 05),S期比率、BCL-6蛋白相对表达量显著高于对照组与空载组(P 0. 05)。对照组与空载组对比差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 BCL-6可抑制血管平滑肌细胞α-SMA蛋白的表达,抑制细胞周期由G2期向M期转变,激活氧化应激反应,从而促进细胞增殖。     

丙泊酚通过上调microRNA-218的表达抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭、迁移和凋亡

目的探讨丙泊酚对人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法采用对数生长期的人胶质瘤细胞U251,分别给予不同浓度(0. 5mM、2mM、5mM)的丙泊酚处理,分组为对照组、丙泊酚0. 5mM组、丙泊酚2m M组、丙泊酚5mM组。CCK-8检测细胞毒性;丙泊酚分别处理细胞24 h、48 h、72 h、96 h后检测各组细胞活力; Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力;检测凋亡相关蛋白Caspase-3 mRNA、Caspase-9 mRNA、迁移相关蛋白血管内皮生长因子(VEGF) mRNA和miRNA-218的表达情况。结果 CCK-8细胞毒性试验表明,0. 5mM丙泊酚、2mM丙泊酚以及5mM丙泊酚均不能达到对U251细胞的细胞毒性(P 0. 05),10mM丙泊酚的细胞毒性明显大于5mM丙泊酚(P 0. 05),当丙泊酚≥10mM以上时,显示出对U251细胞有明显细胞毒性(P 0. 05)。与对照组相比,丙泊酚(0. 5mM、2mM、5mM)可显著抑制U251细胞的增殖、侵袭和迁移能力(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P0. 05),凋亡相关蛋白Caspase-3mRNA和Caspase-9mRNA的表达水平上升(P 0. 05);丙泊酚可显著上调U251细胞microRNA-218的表达,抑制VEGF表达(P 0. 05)。结论丙泊酚可抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与上调microRNA-218、Caspase-3mRNA和Caspase-9mRNA以及下调VEGFmRNA的表达有关。     

miR-543调控肾透明细胞癌细胞增殖和侵袭的机制分析

目的探讨与分析miR-543调控肾透明细胞癌(CCRCC)细胞增殖和侵袭的机制。方法 CCRCC细胞系ACHN随机分为三组:空白组、阴性对照(NC)组与miR-543组,NC组与miR-543组分别转染照NC与miR-543模拟剂,空白组不进行转染。MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞转移与侵袭比率,Western blot检测蛋白表达水平。结果转染后24 h与48 h,与NC组与空白组相比,miR-543组的细胞增殖抑制率显著增加(P0. 05),细胞凋亡率显著增加(P 0. 05),细胞转移与侵袭相对数显著降低(P 0. 05),SDF-1、CXCR7蛋白相对表达量显著降低(P 0. 05),NC组与空白组比较差异无统计学意义(P 0. 05)。且miR-543对细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、细胞转移与侵袭、SDF-1和CXCR7蛋白相对表达量的影响均不具有时间依赖性。结论 miR-543能抑制调控肾透明细胞癌细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡,且不具有时间依赖性,其作用机制可能与抑制SDF-1/CXCR7表达有关。     

沉默HDAC4抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用机制的研究

目的探究沉默组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)基因表达对多发性骨髓瘤LP-1细胞增殖、凋亡的影响以及作用机制。方法脂质体Lipofectamine 2000转入LP-1细胞中,实验分为对照组(不做任何处理)、阴性组(转入siRNA NC)、siRNA HDAC4组(转入siRNA HDAC4)。CCK-8法检测细胞的增殖活性,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡率,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中HDAC4、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达量。结果转染siRNA HDAC4后,LP-1细胞中HDAC4蛋白的表达量显著低于对照组(P 0. 05);与对照组相比,siRNA HDAC4组细胞的增殖活性显著降低(P 0. 05);而凋亡率显著增加(P 0. 05); siRNA HDAC4组细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05),但Bcl-2蛋白水平显著降低(P 0. 05)。结论沉默HDAC4基因可抑制多发性骨髓瘤LP-1细胞增殖,诱导其凋亡,可能通过降低Bcl-2水平,促进Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9表达发挥作用。     

蝙蝠葛碱对人食管癌细胞Eca-109的增殖和凋亡影响的实验研究

目的研究蝙蝠葛碱对人食管癌细胞Eca-109的增殖和凋亡的影响。方法 12 h、24 h、48 h采用MMT实验检测0μM、20μM、40μM、80μM的蝙蝠葛碱作用于人食管癌细胞Eca-109增殖的抑制率,并经流式细胞仪对人食管癌细胞Eca-109凋亡周期、早期凋亡率进行检测,同时应用Western blot法对细胞凋亡基因Caspase-3、Bax、Bcl-2表达进行检测。结果与0μM蝙蝠葛碱比较,20～80μM蝙蝠葛碱均能对Eca-109细胞的增殖进行抑制,并细胞生长抑制率随着蝙蝠葛碱浓度增加、作用时间延长而增高,差异有统计学意义(P 0. 05);相较于0μM蝙蝠葛碱,20μM、40μM、80μM蝙蝠葛碱的G1期细胞均增加,并G1期细胞随着蝙蝠葛碱浓度的逐渐增加而不断增多,差异有统计学意义(P 0. 05); G2M期细胞随着蝙蝠葛碱的浓度增加而呈增多趋势; 20～80μM蝙蝠葛碱对人食管癌Eca-109细胞凋亡均具有促进作用,且细胞凋亡率随着蝙蝠葛碱应用浓度增加而不断升高,差异有统计学意义(P 0. 05); 20～80μM蝙蝠葛碱作用24 h后Caspase-3蛋白活性、Bax蛋白的表达均增强,而Bcl-2蛋白的表达减少,差异有统计学意义(P0. 05)。结论 20～80μM蝙蝠葛碱能对人食管癌细胞Eca-109增殖进行抑制,促进Eca-109细胞凋亡,并呈剂量、时间依赖性,分析原因可能与上调Caspase-3、Bax蛋白表达、下调Bcl-2表达有关。     

Akt特异性抑制剂MK2206诱导U937及RS4;11细胞凋亡及其机制

目的:本研究探讨Akt激酶抑制剂MK2206对U937及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:以不同浓度MK2206处理U937及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;Annexin V/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记法分析细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测Bax、Bcl-2、XIAP、CDK1、caspase-3基因mRNA表达的变化。结果:MK2206对U937及RS4;11细胞增殖具有抑制作用,且抑制效应呈一定的时间和剂量依赖性,U937细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.48±0.15)和(0.09±0.01)μmol/L,RS4;11细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.91±0.02)和(0.68±0.11)μmol/L。0.5μmol/L MK2206作用于U937细胞及1.0μmol/L MK2206作用于RS4;11细胞24 h、48 h,Annexin V/7-AAD标记的阳性细胞升高,U937细胞组24 h细胞凋亡率为(4.18±0.70)%,48 h细胞凋亡率为(22.53±4.67)%,均高于对照组的(1.35±0.34)%(P0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P0.05);RS4;11细胞组24 h和48 h细胞凋亡率分别为(5.74±0.58)%和(10.07±1.24)%,均高于对照组的(1.32±0.31)%(P0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P0.05)。流式细胞术检测细胞周期结果显示,U937细胞组G2/M期细胞比例为(96.78±9.11)%,高于对照组的(9.64±0.91)%(P0.05);RS4;11细胞组G2/M期细胞比例为(14.19±3.82)%,高于对照组的(5.75±1.28)%(P0.05)。荧光定量PCR检测结果示,两种细胞中Bax、caspase-3 mRNA相对表达水平升高,而Bcl-2、XIAP表达水平降低,同时伴CDK1 mRNA水平的减少,与各自对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:MK2206能有效抑制U937及RS4;11细胞增殖及促进细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,其促凋亡机制与上调Bax与caspase-3基因表达、下调Bcl-2与XIAP基因表达有关,细胞周期G2/M期阻滞与CDK1基因表达水平下降有关。     

miR-21对肝癌细胞Keap-1/Nrf2通路的调控作用分析

目的探讨miR-21对肝癌细胞Keap-1/Nrf2通路的调控作用。方法人肝癌细胞株HSMMC-7721随机分为三组,实验组、对照组分别转染miRNA-21模拟剂(mimics)、miRNA-21 NC,空白组不进行转染。采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪实验检测细胞周期,Transwell小室实验检测细胞侵袭,Western blot检测蛋白表达。结果转染后36 h与48 h,实验组的miRNA-21相对表达量显著高于空白组和对照组(P 0. 05),实验组的细胞增殖率、侵袭率显著低于空白组和对照组(P 0. 05);转染后48 h,实验组的S期与G2/M期比率显著高于空白组和对照组,(P0. 05),GO/G1期比率显著低于空白组和对照组,(P 0. 05),空白组和对照组对比差异无统计学意义(P 0. 05)。转染后36 h与48 h,与空白组和对照组相比,实验组的Keap-1、Nrf2蛋白相对表达量显著下降(P 0. 05)。结论miRNA-21高表达能抑制Keap-1/Nrf2通路的激活,可调节肝癌细胞周期,从而抑制肝癌细胞的增殖与侵袭。     

利拉鲁肽对神经母细胞瘤细胞牵张损伤的神经保护作用

目的探讨胰高血糖素样肽-1类似物利拉鲁肽对神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)牵张损伤的神经保护作用。方法本实验以SH-SY5Y细胞作为研究对象,首先采用MTT实验筛选最适宜的利拉鲁肽处理浓度,然后利用可控性细胞损伤装置(CIC-II)建立细胞牵张损伤模型。将实验分为3组,即对照组、细胞牵张损伤组、利拉鲁肽治疗组(1μM利拉鲁肽处理SH-SY5Y细胞24 h)。乳酸脱氢酶(LDH)法检测各组细胞毒性;蛋白免疫印迹实验检测凋亡相关蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和Caspase-3的表达水平。结果 MTT实验显示,利拉鲁肽处理SH-SY5Y细胞适宜的保护性浓度为1μM。LDH实验显示,与对照组相比,牵张损伤组LDH漏出量显著增多;与细胞损伤组相比,利拉鲁肽治疗组细胞LDH漏出量明显降低(P0.05);蛋白免疫印迹实验显示:与对照组相比,细胞损伤组Bax表达水平显著增强,Bcl-2表达显著减少,Caspase-3表达明显增高,细胞凋亡百分比显著增高;与细胞损伤组相比,利拉鲁肽治疗组Bax和Caspase-3蛋白表达水平降低(P0.05),Bcl-2表达显著增多(P0.01),细胞凋亡百分比显著降低。结论利拉鲁肽可以减轻细胞损伤引起的LDH释放水平,利拉鲁肽能显著降低损伤细胞的凋亡。利拉鲁肽通过抑制细胞凋亡进而发挥其神经保护作用。     

苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响

目的探讨苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及其机制。方法采取体外培养MDA-MB-231细胞进行分组,苦瓜多糖组给予不同浓度苦瓜多糖(0μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml),空白组(苦瓜多糖0μg/ml)培养基中含有与苦瓜多糖组等浓度的DMSO,将各组细胞孵育分别培养至12 h、24 h、48 h处理。MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测后细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体变化,Trans well法检测细胞迁移率,免疫组化检测Ki67与Caspase-3阳性率,Western-blot检测MMP-9、Bcl-2、Bax表达水平,RT-PCR检测细胞周期蛋白(CyclinD1)、血管内皮生长因子(VEGF)表达量;体内建立移植瘤裸鼠模型,试验组裸鼠采用苦瓜多糖(120μg/ml)灌胃治疗,早晚一次,1 ml/次,对照组裸鼠灌胃等体积的生理盐水,两组裸鼠治疗6周后测量肿瘤质量、观察肿瘤体积变化。结果与空白组相比,苦瓜多糖组癌细胞增值率与迁移能力随苦瓜多糖剂量增加而降低(P 0. 05),细胞凋亡率、凋亡小体数量随着药用剂量增加而升高(P 0. 05); Western-blot检测结果显示苦瓜多糖组MMP-9、Bcl-2表达水平低于空白组(P 0. 05),Bax表达水平高于空白组(P 0. 05); RT-PCR结果显示苦瓜多糖组CyclinD1、VEGF表达量显著低于空白组(P 0. 05)。试验组肿瘤组织中的Ki67蛋白水平、肿瘤体积、肿瘤质量显著低于对照组(P 0. 05),而试验组肿瘤组织中Casppase-3蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05)。结论苦瓜多糖可以通过调控细胞周期、凋亡、迁移侵袭相关蛋白及基因表达,进而调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为。     

双靶向TRAIL过表达联合辐射对乳腺癌MDA—MB-435细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Egr-1和hTERT双靶向介导TRAIL过表达联合辐射对乳腺癌细胞增殖和凋亡的作用,为肿瘤基因一放射治疗提供必要的参考。方法实验分为正常对照组（Contr01）、CRAd．pEgr-1-TRAIL组、2．0Gy照射组及CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy照射组。病毒感染和X射线照射后,分别采用CCK-8试剂盒和AnnexinV—FITC试剂盒检测细胞增殖和细胞凋亡。结果随着时间延长,各组细胞均表现增殖状态,control和CRAd．pEgr-1-TRAIL组MDA-M昏435细胞增殖较快,且无明显差异,而2Gy和CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy组细胞增殖较慢,且以CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy组更明显,48h时甚至出现增殖抑制;2．0Gy组（24和48h）和CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy组（12,24和48h）均较control组显著增加（P〈0．05,P〈0．01）,而且CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy组（24和48h）也较2．0Gy组显著增加（P〈0．05,P〈0．01）。与control组比较,CRAd．pEgr-1-TRAIL组细胞凋亡无显著变化,而2．0Gy组和CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy组细胞凋亡显著增加（P〈0．05,P〈0．01）,尤其以CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy组更明显,与2．0Gy组比较,具有统计学差异（P〈0．05）。结论电离辐射能诱导MDA—MB-435细胞增殖抑制和凋亡增加,双靶向介导的TRAII．过表达能增强这种作用。     

EGCG 对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡及survivin、VEGF表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及生存素(survivin)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法:体外培养鼻咽癌细胞,以不同质量浓度EGCG处理,采用MTT法检测细胞增殖抑制作用,Hoechst33258染色观察凋亡细胞并计算细胞凋亡率,流式细胞仪检测细胞周期变化,RT-PCR检测survivin和VEGF的表达变化.结果:EGCG处理后,CNE-2细胞增殖明显受到抑制,呈时间和剂量依赖性;CNE-2细胞凋亡率显著升高;CNE-2细胞周期阻滞于G1/G0,表现为浓度依赖性;survivin和VEGF的表达明显下调,随EGCG浓度的增加有下降趋势.结论:EGCG能抑制鼻咽癌细胞增殖、促进其凋亡;机制可能与EGCG下调survivn和VEGF的表达有关.     

甘氨酸转运体1抑制剂M22对小鼠癫痫认知损害作用的研究

目的观察甘氨酸转运体1抑制剂(M22)对癫痫小鼠认知损害的作用。方法选取40只C57BL/6小鼠腹腔注射戊四氮建立慢性点燃癫痫模型,将其随机分为模型组(20只)和M22组(20只),另选取10只为对照组,腹腔注射生理盐水2周;随后M22组灌胃40 mg/(kg·d)的M22,模型组和对照组灌胃生理盐水,均2周。Morris水迷宫实验评估小鼠学习及记忆功能:逃避潜伏期、目标象限内停留时间占总时间百分比、目标象限内游泳距离占总距离百分比。处死后取脑组织,对海马区进行组织病理学观察,并检测大脑皮层神经元细胞凋亡情况及大脑皮质凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)表达情况。结果M22组和模型组小鼠逃避潜伏期均显著长于对照组(P 0. 05),M22组显著短于模型组(P 0. 05); 3组逃避潜伏期均随时间的延长显著缩短(P 0. 05); M22组和模型组小鼠目标象限内停留时间占总时间百分比、目标象限内停留距离占总距离百分比、大脑皮质Bcl-2蛋白相对表达量均显著低于对照组(P 0. 05),M22组显著高于模型组(P0. 05);海马组织病理学发现,模型组细胞排列紊乱,结构及轮廓模糊,且出现明显神经细胞空泡样改变; M22组细胞轮廓清晰,少量细胞空泡变性,无明显坏死; M22组和模型组大脑皮质神经元细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白相对表达量显著高于对照组(P 0. 05),M22组显著低于模型组(P 0. 05)。结论 M22可显著改善癫痫小鼠的认知功能损害,其机制可能是通过增强Bcl-2蛋白表达、抑制Bax、Caspase-3蛋白表达,而抑制大脑皮质神经元细胞凋亡。     

PATZ-P53相互作用参与调控宫颈癌细胞凋亡与侵袭的分析

目的探讨PATZ-P53相互作用参与调控宫颈癌细胞凋亡与侵袭的机制。方法宫颈癌Hela细胞株分别给予PATZ处理(人重组PATZ终浓度分别为10 ng/ml,100 ng/ml)与对照处理(含血清的DMEM培养基,不加入任何试剂)。各组细胞均在培养48 h后,采用MTT法检测宫颈癌细胞增殖活性,采用流式细胞仪检测凋亡指数,采用侵袭小室检测侵袭情况,采用Western Blot方法检测P53、Casepase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,PATZ处理48 h后,随着PATZ浓度的增加细胞增殖活性增大,且不同组别的细胞增殖活性比较差异有统计学意义(P 0. 05);随着PATZ浓度的增加细胞凋亡指数减小,不同组别的细胞凋亡指数比较差异有统计学意义(P 0. 05);随着PATZ浓度的增加细胞侵袭穿透指数增加,不同组别的细胞侵袭穿透指数比较差异有统计学意义(P 0. 05); PATZ能够呈现剂量依赖性的抑制Casepase-3与P53蛋白,不同组别的Casepase-3与P53蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(P 0. 05)。结论 PATZ-P53相互作用能抑制宫颈癌细胞凋亡,促进细胞侵袭与增殖,抑制Caspase-3蛋白的表达,从而发挥促癌作用。     

黄岑素联合吉西他滨对宫颈癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨黄芩素联合吉西他滨对宫颈癌细胞凋亡的影响及其潜在作用机制。方法 MTT法检测不同浓度黄芩素(0μM、50μM、100μM、200μM、300μM)、吉西他滨(0μM、0. 2μM、0. 4μM、0. 8μM、1. 6μM)以及黄芩素联合吉西他滨处理后He La宫颈癌细胞的增殖情况;以50μM黄芩素联合0. 2μM吉他西滨处理He La细胞24 h,流式细胞仪、Real-time PCR和Western blot分别检测细胞凋亡和细胞中胱天蛋白酶-3(Caspase-3)在mRNA和蛋白水平的表达。结果与0μM组相比,不同浓度黄芩素均可抑制He La细胞增殖(P 0. 05);吉西他滨处理浓度为0. 4μM、0. 8μM、1. 6μM时对He La细胞增殖有明显的抑制作用(P 0. 05); 50μM黄芩素联合吉西他滨比单独使用吉西他滨对细胞增殖的抑制效果更明显(P 0. 05)。流式细胞仪、Real-time PCR和Western blot检测结果显示,50μM黄芩素联合0. 2μM吉他西滨能有效促进He La细胞凋亡(P 0. 05),抑制Caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达(P 0. 05)。结论黄芩素联合吉西他滨能有效抑制He La宫颈癌细胞增殖,对He La细胞凋亡具有诱导作用,其机制可能与Caspase-3信号通路有关。