宽体金线蛭越冬保种技术研究和越冬蛭生产性能测定

目的:研究宽体金线蛭在土质和水质环境下越冬情况,为宽体金线蛭成蛭越冬提供方案,促进宽体金线蛭人工养殖持续发展。方法:将收集的野生宽体金线蛭成蛭分成带土越冬组和带水越冬组,每组设三个平行试验,统计越冬成活率及越冬产茧率,比较越冬蛭子代生长差异。结果:带土越冬组和带水越冬组越冬繁殖成活率分别为69.45%和78.73%,相对产茧率分别为11.37%和12.94%,二组之间无显著差异(P0.05);带土越冬组和带水越冬组产茧后亲蛭平均体重分别为6.46 g/尾和8.79 g/尾,0.5 kg蛭茧分别有593枚和518枚,二者之间差异显著(P0.05);带土越冬组宽体金线蛭子代生长速度快,与带水越冬组子代之间差异极显著(P0.01)。结论:宽体金线蛭在土质和水质环境下均能安全越冬,越冬后亲蛭均能正常繁殖,带土越冬宽体金线蛭子代生长性能更优。     

宽体金线蛭选育群体生产性状的选择效应

目的:为选育经济性状优良的宽体金线蛭新品种。方法:以江苏里下河地区野生宽体金线蛭为材料,以生长速度为指标,选择个体体重18.00 g以上构建宽体金线蛭选育群体,比较选育群体与普通群体繁殖及F1代养殖生产性状。结果:选育群体每10㎏亲蛭产茧1.81㎏,较普通群体提高了63.04%,卵茧规格较普通群体明显增大(P0.01),亲蛭体重下降率及卵茧平均出苗率选育群体与普通群体无明显变化(P0.05);选育群体F1养殖产量、均重及成活率较普通群体分别提高了55.69%、17.18%和33.17%,差异极显著,特定生长率及增重率明显高于普通群体(P0.01),而干物质比2个群体F1代差异不显著(P0.05)。结论:通过群体选育可以有效提高宽体金线蛭繁殖和养殖性能。     

宽体金线蛭产茧后生长特性及主要消化酶活性研究

目的:研究宽体金线蛭产茧后生长特性及主要消化酶活性,为产茧后亲蛭处理提供理论依据。方法:选择性成熟宽体金线蛭利用网箱进行人工繁殖,繁殖结束后在室内条件下开展为期20 d的养殖实验,实验分饥饿组和对照组,养殖期间定期测量体重和统计成活率,养殖结束后测定出干率和主要消化酶活性。结果:饥饿组在实验期间不断死亡,最后平均成活率为51.67%;对照组前期亲蛭少量死亡,实验中后期持续死亡,养殖平均成活率为65.00%,与饥饿组之间差异显著。饥饿组实验初期体重迅速增长,之后逐渐下降,最后基本恢复到实验前水平,实验期间体重平均增长率为-0.53%;对照组在实验前期体重增加后出现小幅下降,之后体重持续增加,最后恢复到产茧前水平,实验期间体重平均增长率为40.23%。产茧结束后亲蛭出干率为22.14%,饥饿实验结束后饥饿组和对照组出干率分别为13.30%和12.75%,二者之间差异不显著,但与亲蛭产茧结束时出干率之间差异极显著。宽体金线蛭胰蛋白酶活性高于淀粉酶和脂肪酶活性,饥饿处理引起宽体金线蛭胰蛋白酶活性增强、淀粉酶活性下降,二者在饥饿组和对照组中差异显著。结论:宽体金线蛭产茧后短期养殖体重可以恢复到产茧前水平。     

宽体金线蛭室内产茧、孵化及仔蛭饥饿研究

目的：建立宽体金线蛭室内网箱湿土养殖新模式,为中药材生产质量管理规范及规模化繁养殖提供参考依据。方法：以野外采捕的具有生殖环带的宽体金线蛭为试验材料,在室内采用网箱湿土法养殖,进行宽体金线蛭产茧、卵茧孵化及仔蛭饥饿试验研究。结果：亲蛭采用网箱湿土法养殖17d,其平均成活率为90％;产茧前具有生殖环带（土黄色）,产茧后生殖环带消失;亲蛭产卵茧后平均体重下降率达（29．94±0．01）％;产卵茧期间共收获卵茧79枚,平均产茧量为1．8枚／条,卯茧平均重量为（0．50±0．21）g／枚,平均长径和短径分别为（1．75±0．31）cm／枚和（1．10±0．18）cm／枚;卵茧在室温下（14—33℃）孵育34d,共孵出仔蛭865条,每枚卵茧孵出（11．4±2．0）条仔蛭,卵茧孵化率达92．57％。初孵仔蛭平均个体体重为（0．0205±0．0084）g。饥饿试验表明,在140d时,对照组存活11条水蛭,成活率仅22％,其平均个体体重为（0．1084±0．0877）g,仔蛭个体体重有随日龄的增加而增加趋势;饥饿组仔蛭在140d时全部死亡。结论：在适宜的条件下,采用网箱湿土养殖法,宽体金线蛭可在室内产茧,卵茧集中孵育及亲蛭和仔蛭分开饲养。     

微山湖地区宽体金线蛭的群体考察与产茧后药材质量评价

目的:建立科学的宽体金线蛭种蛭筛选原则,并对产茧后药材进行质量评价。方法:从微山湖地区采集野生宽体金线蛭1193条,对体质量和生殖环带发育等群体特征进行考察。将种蛭分为10、15、20 g 3个试验组,建立卵茧成熟度观察方法以判断适宜的挖茧时机,通过产茧数、茧体积、出苗数等指标考察体质量对宽体金线蛭繁殖性能的影响。依照2015年版《中华人民共和国药典》对产茧后水蛭药材的性状和抗凝血酶活性进行质量评价。结果:微山湖地区宽体金线蛭野生种群的体质量普遍较小,15 g及以上的种蛭仅占样本群体的19.53%;宽体金线蛭的繁殖性能随种蛭体质量的增加而显著提高,20 g试验组的产茧数(5.9个)和出苗数(37.3条)分别是10 g试验组的1.59倍和1.45倍。产茧后种蛭的死亡率和体质量损失率可高达37%和59%,药材厚度仅为产茧前的49%～72%,腥味散失严重、脆度下降,但产茧前后抗凝血酶活性变化不大,均为3～5 U·g~(-1)。结论:微山湖地区野生宽体金线蛭的种群有退化趋势,建议使用15 g及以上的种蛭进行繁殖生产。产茧后药材的商品规格和等级较低,不适宜作为饮片直接用于临床。     

中国水蛭人工养殖的现行模式调研

为明确我国水蛭现有的人工养殖模式,历时近3个月的时间,对搜集的业内信息和网络宣传的重庆、湖北等9个省市的34个水蛭人工养殖基地实地考察。结果表明,水蛭的人工养殖基地主要分布在我国东南部江南水乡一带的江苏和安徽;以散户小面积养殖为主;养殖的品种以宽体金线蛭为主;养殖方式以“池塘+网箱”为主;“生产+收购+技术培训”是水蛭人工养殖基地的主要经营方式;预测未来一段时间内在全国各地会涌现更多以个体户小面积养殖为主的宽体金线蛭养殖基地。市场上流通的宽体金线蛭成品以水货主,并主要销往国内相关药企。江苏、安徽和湖北部分水蛭养殖基地的设施设备体系最完善,生产和研究实力相对最强。     

宽体金线蛭仿生酶解液物质基础分析

目的 对宽体金线蛭仿生酶解液进行物质基础分析。方法 采用化学定性和定量的方法,对固形物、无机盐、肽、氨基酸等物质进行含量测定,并进行核苷特征图谱及肽特征图谱研究。结果 通过对15批宽体金线蛭仿生酶解液中各物质含量测定及特征图谱研究,确定固形物、无机盐、肽、游离氨基酸、总氨基酸的质量浓度分别为75.5～79.7、10.7～12.7、42.6～49.4、1.9～3.1、49.4～51.6 mg·mL^–1。建立宽体金线蛭仿生酶解液核苷特征图谱,共标定和归属了4个特征峰;建立宽体金线蛭仿生酶解液肽特征图谱,共标定6个特征峰。结论 建立了宽体金线蛭仿生酶解液中各物质含量测定及特征图谱的研究方法,简便快捷、重复性好,可用于对其进行质量控制。     

不同基质和亲本密度对宽体金线蛭繁殖性能的影响北大核心

目的:探明不同基质和亲本密度对宽体金线蛭繁殖性能的影响,为促进宽体金线蛭规模化人工繁殖提供参考依据。方法:分别设置5种基质处理组:土壤组(A)、稻草组(B)、牛粪组(C)、土壤与稻草混合组(体积1∶1,D)、土壤与牛粪混合组(体积1∶1,E)和6个亲本密度处理组:30、60、90、120、150、180尾/m^(2),经过25 d的繁殖以及15 d的卵茧孵化后,观察其亲本存活率、产茧率、卵茧规格、卵茧的孵化率和孵化量等指标的变化。结果:不同基质对宽体金线蛭亲本存活率、产茧率、卵茧的孵化量有显著性影响(P<0.05),但对卵茧规格和卵茧的孵化率无显著性影响(P>0.05),其中基质D组亲本存活率(100.00%)和产茧率(3.70枚/尾)最高,基质B组卵茧的孵化量(32.2尾)最高。不同亲本密度对宽体金线蛭亲本存活率、产茧率有显著性影响,但对卵茧规格无显著性影响,其中,亲本密度30、60尾/m^(2)时,亲本存活率、产茧率最高(P<0.05)。结论:土壤与稻草(体积1∶1)混合基质是宽体金线蛭最适合的繁殖基质,稻草是其卵茧最适合的孵化基质。从经济效益角度考虑,宽体金线蛭亲本放养密度应以60尾/m^(2)较为适宜其人工繁殖。     

正交试验法优选菲牛蛭饲料配方研究

目的 优化菲牛蛭Poecilobdella manillensis的人工饲料3种主要成分配比,确定饲料的最佳配方。方法 采用湿土网箱法养殖菲牛蛭,以存活率和个体体质量增长率为考察指标,采用L₉(3⁴) 正交试验法,考察血球蛋白粉（NP-90）、血浆蛋白粉（NP-2002）和维生素C（VC）3个因素,优选菲牛蛭人工饲料。采用层次分析法统计正交试验,分析各因素各水平对试验结果的影响权重。结果 以菲牛蛭存活率为考察指标时,3种因素对成活率的影响为VC＞NP-90＞NP-2002,以0 NP-90、1% NP-2002和0.05% VC组合为最佳;以菲牛蛭个体体质量增长率为考察指标时,3种因素对个体体质量增长率的影响大小依次为NP-2002＞NP-90＞VC,饲料配方以0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC组合为最优。层次分析表明,各因素对正交试验的指标值影响的主次顺序为NP-90＞NP-2002＞VC,0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC的权重最大,正交试验的最优方案为0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC。按0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC及其他成分配制饲料饲喂菲牛蛭,进行验证试验,结果饲料组菲牛蛭成活率达100%,个体体质量增长率达19.91%。结论 按0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC及其他成分配制饲料可作为菲牛蛭人工饲料。     

海葡萄主要营养成分的比较分析

目的测定广东养殖的海葡萄中多糖、多酚、粗脂肪、粗蛋白、灰分、水分的含量,并比较4个产区的10批不同附着基质和养殖周期的海葡萄样品中上述营养成分的含量差异,探讨影响海葡萄中营养成分含量高低的因素。方法运用苯酚硫酸比色法测定海葡萄中多糖的含量;以紫外分光光度法测定海葡萄中多酚的含量;采用索氏抽提法,凯氏定氮法,灼烧法,直接干燥法分别测定海葡萄中粗脂肪、粗蛋白、灰分以及水分含量并比较分析其差异。结果 10批海葡萄样品中主要成分的质量分数均值分别为:水分为94.38%,灰分为33.12%,粗脂肪为0.70%,蛋白质为11.76%,多糖为31.19%,多酚为0.60%。其次,除水分之外的其他5种成分,在不同批次海葡萄之间的含量差异具有显著性。结论不同批次海葡萄之间成分含量的显著性差异,与产区、附着基质以及养殖周期等因素有关。     

款冬叶柄愈伤组织培养与再生体系建立

以款冬幼嫩叶柄为材料,研究植物生长调节剂对其离休培养与植株再生的影响,建立了款冬离体快繁技术体系。结果表明:款冬叶柄切段较理想的灭菌方法为75%乙醇浸泡30 s,转入饱和漂白粉上清液浸泡15 min;适合愈伤诱导的培养基为MS+6-BA 3.0 mg·L~(-1)+2,4-D 2.0 mg·L~(-1),诱导率96.2%;在培养基MS+ZT 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.3 mg·L~(-1)上芽苗分化效果较好,分化率91%,平均芽数8.26个;较佳的不定芽增殖培养基为MS+KT 1.0 mg·L~(-1)+IBA 0.3 mg·L~(-1),增殖倍数为11.81,平均苗高4.9 cm;生根培养基为1/2MS+IBA 0.2 mg·L~(-1),生根数平均为5.68条,生根率为95.22%以上;瓶苗移栽于河沙-有机肥3∶1的基质中生长良好,成活率达90%以上;大田试验表明:同等栽培条件下款冬组培株、栽培株和野生株在生长量与花粒产量等方面存在显著差异,以组培株生长量与花粒产量相对较高。组培品与野生品有效成分含量基本一致。     

霍山石斛原球茎分化影响因素的探讨

目的以霍山石斛原球茎为试材,以1/2MS为基本培养基,研究不同浓度萘乙酸(NAA)、6-苄氨基嘌呤(简称6-BA)、香蕉泥、土豆泥对霍山石斛原球茎分化的影响。方法试验方案为4因素3水平L_9(3~4)正交设计,数据处理软件为DPS7.05。结果 NAA、6-BA、香蕉泥、土豆泥对原球茎分化苗长势的影响均显著,最优浓度分别为0.5mg/L、1.0 mg/L、0g/L、100g/L;NAA、6-BA、香蕉泥、土豆泥对原球茎分化苗黄化率的影响均显著,最优浓度分别为1.0mg/L、2.0 mg/L、50g/L、100g/L;NAA和土豆泥两个因素对原球茎分化过程重量的增加影响显著,最优浓度分别为0.5mg/L、100g/L,而6-BA和香蕉泥对原球茎分化过程重量的增加影响不显著。结论霍山石斛原球茎分化培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L+香蕉泥50g/L+土豆泥100g/L+食糖20g/L+琼脂6.0g/L时,分化苗长势、黄化率及增重均显著优于其他处理,分化率100%,60d增殖倍数3.13。     

密度与饲料对中华蟾蜍蝌蚪生长发育的影响

该研究分析了4个不同的饲养密度和5种饲料对中华蟾蜍Bufo gargarizans蝌蚪生长发育的影响,以确定最适养殖密度和饲料种类。在饲养密度实验中,中华蟾蜍蝌蚪分别饲养在200,500,1 000,2 000只/m~2的不同密度条件下;在饲料种类实验中,将中华蟾蜍蝌蚪分为5组,分别用5种不同饲料喂食。每隔7 d测量和记录1次蝌蚪的体重、头体长、尾长和死亡个数。结果表明:饲养密度试验和饲料种类试验中,中华蟾蜍蝌蚪临近变态时(变态前)和变态后的成活率分别为68.7%~96.3%,5.7%~36.0%;饲养密度对蝌蚪变态前的成活率没有显著影响,中华蟾蜍蝌蚪在最适养殖密度1 000只/m~2时,蝌蚪具有较大的体重和成活数量;饲料种类对蝌蚪变态前的成活率没有显著影响,喂食饲料Ⅱ(37.9%粗蛋白和5.7%粗脂肪),Ⅳ(25.1%粗蛋白和4.0%粗脂肪)和Ⅴ(鸡蛋黄)的蝌蚪均具有较大的体重,这3种饲料均为中华蟾蜍蝌蚪较为适宜的饲料,人工养殖具体采用何种饲料,可根据饲料的易得性和成本进行选择与组合。     

玄参组织培养及炼苗技术

目的:以玄参茎段、叶柄、带腋茎段和叶片为外植体,筛选出适宜的植株再生体系以及最佳的炼苗条件。方法:通过L_(16)(4~5)正交试验研究玄参不同外植体、不同激素和不同浓度对丛生芽的诱导和增殖;采用单因素方差分析不同浓度激素对不定芽生根的诱导;同时选择不同基质、不同浇水周期和不同过渡方式对玄参生根苗炼苗关键技术的优选。结果:带腋茎段为最佳外植体,其次依次为茎段,叶片和叶柄;其在MS+6-苄氨基腺嘌呤(6-BA) 0. 5 mg·L~(-1)+萘乙酸(NAA) 0. 2 mg·L~(-1)中不定芽诱导率和芽增殖倍数分别为100%和9. 84;适宜不定芽生根的培养基为1/2 MS+吲哚-3-丁酸(IBA) 0. 2 mg·L~(-1),生根率100%,根数为39. 45条;就基质而言,以营养土-蛭石-珍珠岩(5∶2∶1)为移栽基质,可保持基质中肥力、透气性与保水性适当搭配;浇水周期选择每2 d浇1次水,过渡方式为室内炼苗20 d,室外遮阴大棚炼苗10 d后移栽大田,成活率可达到95%以上。结论:建立玄参无性快速繁殖体系,为提供玄参高效、快速、稳定的植株再生,优质的种苗繁育以及适宜的炼苗条件提供了有效途径。     

金线莲组培快繁技术研究

目的 建立金线莲快繁体系.方法 以茎段为外植体,开展了茎段不同部位、培养基、激素、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗生长的影响研究,并进行了移栽试验.结果 外植体以不含顶芽和长根的中间段茎节为好;不定芽增殖最佳培养基配方为MS(或B5)+BA3.0 mg/L +NAA0.5～1.0 mg/L,两个月增殖倍数达5.0以上;壮苗最适培养基为1/2MS+NAA3.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+香蕉提取物20%(或椰子汁20%);试管苗移栽适宜的基质为菜园土1份+2～3 mm粗砂2份(或1份)+木屑1份(或2份),3个月成活率均达100%,且生长良好.结论 采用上述方法,能实现金线莲幼苗的快速繁殖.     

几种人工栽培“枫斗类”石斛的多糖含量分析

目的:对比不同产地栽培铁皮石斛及其他3种"枫斗类"石斛药材的质量,为药用石斛资源的评价和开发利用提供依据和参考。方法:采用苯酚-硫酸法测定不同来源石斛的多糖含量。结果:来自7个不同产地的人工栽培铁皮石斛多糖含量在24.32%-38.55%之间,以云南普洱样品多糖含量最高,贵州遵义样品多糖含量最低;采用植株分生苗栽培的齿瓣石斛多糖含量要高于组培苗栽培的样品;人工栽培不同品种石斛的平均多糖含量分别为:铁皮石斛29.30%、兜唇石斛50.12%、齿瓣石斛41.89%及晶帽石斛27.98%。结论:栽培在不同地区的铁皮石斛多糖含量有明显差异;以石斛多糖含量为指标,齿瓣石斛和兜唇石斛具有较大开发价值和应用前景。     

在呼吸心脏骤停患者中应用参附注射液联合针刺百会穴的疗效

目的:探索参附注射液联合针刺百会空在呼吸心脏骤停急救中的应用价值,提高复苏成功率。方法:以我院抢救的呼吸心脏骤停患者110例为研究样本,按随机数字法分为两组,其中对照组予新版心肺复苏指南标准治疗,治疗组在此基础上加用参附注射液并联合平衡针,采用Utstein模式进行登记,观察并记录复苏成功后的平均动脉压和血氧饱和度,计算患者的复苏成功率和成活率。结果:研究组和对照组的现场复苏成功率分别为43.3%和12.0%,成活出院率分别为5.0%和0。治疗组心肺复苏成功率和成活出院率均显著优于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。平均动脉压方面,治疗组患者在心肺复苏成功12 h、1 d和3 d这3个时间点上均明显高于对照组(P0.05),但在1 h、3 h、6 h这3个时间点上两组患者差异无统计学意义(P0.05)。血氧饱和度方面,治疗组患者在心肺复苏成功1 h、3 h、6 h、12 h、1 d5个时间点上均明显高于对照组(P0.05),但在3 d时间点上两组患者差异无统计学意义(P0.05)。结论:在标准化的心肺复苏中联合使用参附注射液及平衡针,可以明显提高呼吸心脏骤停患者的现场心肺复苏成功率和出院成活率。     

肿瘤抗原穴位注射抑制肿瘤生长的实验研究

目的:探讨肿瘤抗原穴位注射对肿瘤的形成是否产生抑制作用。方法:采用小鼠 S180细胞株粗提物(瘤苗)作为抗原,在后海穴间断免疫后,于小鼠腋下接种10~6个 S180细胞。结果:发现穴位抗原注射组的未荷瘤且生存期达到100天的小鼠只数明显多于对照组。后海穴注射瘤苗和生理盐水(HS180和HNS)及股骨外侧中点肌肉注射瘤苗和生理盐水(MS180和 MNS)各组未荷瘤鼠所占百分比分别为80.0%、21.4%、71.4%、15.3%。HS180组脾细胞培养上清的IL-2水平明显高于其他各组(P<0.05),ConA 和 LPS 诱发脾细胞增殖百分比,前者高于对照的各组,后者则低于 HNS 及 MNS 组(P<0.05)。结论:本法可有效抑制肿瘤的生长,此作用可能是细胞免疫参与所至.     

北柴胡快速繁殖及种子萌发条件研究

目的 建立北柴胡的选优育优技术体系,规模化生产北柴胡优质种苗和种子.方法 应用植物组织培养技术分别对种植于山西陵川、万荣及甘肃陇西、陕西商洛等8个地区的优质北柴胡进行快速繁殖;对种植于山西万荣的中柴1号北柴胡种子进行种皮损伤和植物激素处理,比较各种处理对种子萌发率的影响.结果 附加6-BA 1.0mg/L和KT 0.2 mg/L的B5培养基适合于各地北柴胡芽的快速增殖与生长;附加NAA 0.1 mg/L、IBA 0.5 mg/L和DSC 1.0mg/L的1/2MS培养基对北柴胡试管苗的生根有良好的促进作用;北柴胡试管苗的年繁殖系数超过1×108,移栽成活率达94%～97%.植物激素处理对北柴胡种子萌发无明显作用,打磨损伤处理种皮可使种子的萌发率提高20%,并且能大幅度缩短种子的萌发时间.结论 植物组织培养技术是快速、大量繁殖优质北柴胡的有效手段,一定程度的种皮损伤可以促进北柴胡种子的萌发.     

浙江省不同产地金钱草总黄酮含量的测定

目的:测定浙江省内不同产地金钱草中总黄酮的含量并进行比较。方法:样品制备后,经显色,在波长500 nm下测定吸光度,以芦丁做对照。结果:杭州、宁波慈溪、台州、丽水、衢州和温州瑞安6个产地的金钱草中的总黄酮平均含量分别为0.9664%、0.7465%、0.5948%、0.9547%、2.8524%和4.6157%,几个地区所产的药材含量差异较大。结论:不同产地,因不同的生长环境、温度、湿度等原因对金钱草总黄酮的含量影响较大。