沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的探讨沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法将卵巢癌细胞分为Blank组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照(siRNA-NC)组和携带wee1基因片段(siRNA-wee1)组,利用siRNA技术在卵巢癌细胞中沉默wee1基因,采用实时荧光定量PCR、免疫印迹法(WB)检测3组卵巢癌细胞wee1 RNA及蛋白表达水平,采用细胞划痕试验、Transwell试验观察卵巢癌细胞平板集落形成数及卵巢癌细胞迁移、侵袭能力,采用WB观察卵巢癌细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)、基质金属蛋白酶7(MMP-7)的表达情况。结果siRNA-wee1组卵巢癌细胞wee1 RNA和蛋白表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05),卵巢癌细胞集落形成数少于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),卵巢癌细胞迁移、侵袭能力低于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-catenin、Cyclin-D1和MMP-7表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05)。结论沉默wee1基因可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,进而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

罗哌卡因通过Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87增殖、迁移和侵袭的机制

目的 探讨罗哌卡因通过Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87增殖、迁移和侵袭的机制.方法 采用罗哌卡因细胞培养液培养胃癌细胞NCI-N87,并分为对照组(0μg/mL罗哌卡因)、ROP-L组(160 μg/mL罗哌卡因)、ROP-M组(320μg/mL罗哌卡因)、ROP-H组(640 μg/mL罗哌卡因)、ROP-H+ Licl(640 μg/mL罗哌卡因、Wnt信号激活剂Licl)组.MTIT法检测细胞增殖活性;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭的能力变化;Westem blot方法分析基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)、钙黏蛋白(N-cadherin)、Wnt1的蛋白表达水平.结果 与对照组比较,ROP-L组、ROP-M组、ROP-H组胃癌细胞迁移和侵袭数目逐渐降低,增殖活性降低,细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平逐步减少,细胞中E-cadherin蛋白表达水平逐步增加,N-cadherin、Wnt1、β-catenin蛋白表达水平逐渐降低(P＜0.05).与ROP-H组比较,ROP-H+ Licl组胃癌细胞迁移数目和侵袭数目升高,MMP-9、MMP-2、N-cadherin、Wnt1、β-catenin蛋白水平升高,E-cadherin蛋白水平降低(P＜0.05).结论 罗哌卡因通过下调Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87的增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT).     

PCI-24781抑制上皮性卵巢癌SKOV-3细胞Wnt/β-catenin信号通路的研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACis)PCI-24781对上皮性卵巢癌SKOV-3细胞增殖、迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法采用xCELLigence RTCA检测SKOV-3细胞的增殖与迁移,流式细胞仪DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)的生成情况,免疫蛋白印迹法(Western blot)检测Ac-H3、Ac-H4、β-catenin、P53的表达。结果 PCI-24781对上皮性卵巢癌SKOV-3细胞呈剂量-时间依赖性抑制细胞增殖,差异有统计学意义(P0.05),其48h的半数有效抑制水平(IC50)值为0.193 0μmol/L。PCI-24781对上皮性卵巢癌SKOV-3细胞迁移影响不明显,各组Cell Index差异无统计学意义(P0.05)。PCI-24781可提高细胞内ROS水平(P0.05),且高水平组的PCI-24781提高细胞内ROS水平更明显增加。Western blot检测可见随PCI-24781水平升高,β-catenin表达水平减弱、Ac-H3、Ac-H4、P53表达水平增强。结论 PCI-24781可增加细胞内ROS水平,上调组蛋白乙酰化水平,促进抑癌基因P53表达,抑制经典Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制细胞增殖,产生抗肿瘤作用。     

昆布多酚通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖侵袭的研究

目的 研究昆布多酚是否通过调控Wnt/β-catenin通路影响人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖和凋亡。方法昆布多酚提取物分别配制成高剂量组（100μg/mL）、中剂量组（50μg/mL）、低剂量组（25μg/mL）与MCF-7细胞株共培养48h后,采用MTT法检测昆布多酚对MCF-7增殖抑制率;TUNEL法检测昆布多酚对MCF-7细胞凋亡指数的影响;Transwell侵袭小室实验、划痕实验观察MCF-7侵袭迁移能力;Western blot检测MCF-7细胞中增殖、凋亡相关总蛋白和核蛋白的表达量。结果 MTT结果显示,昆布多酚提取物显著抑制人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的增殖（P<0.05）,且呈剂量依赖;TUNEL结果显示,昆布多酚促进MCF-7凋亡,凋亡指数随着昆布多酚提取物剂量的增加而递增（P<0.05）;Transwell侵袭小室实验、划痕实验结果显示昆布多酚显著抑制MCF-7侵袭和迁移（P<0.05）;Western blot结果显示,随着昆布多酚浓度的增加,总蛋白β-catenin表达不受影响（P>0.05）,细胞核中β-catenin表达逐渐减少（P...     

和厚朴酚通过降低Wnt/β-catenin信号通路活性抑制前列腺癌细胞的上皮-间充质转化过程

目的:检测和厚朴酚对前列腺癌细胞PC3的上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的影响并探讨其作用机制。方法:将不同浓度的和厚朴酚(0,10,20,40μmol/L)作用于PC3细胞24 h后,通过细胞划痕试验和Transwell小室试验检测和厚朴酚对细胞的迁移和侵袭能力的影响;将不同浓度的和厚朴酚(0,10,20,40μmol/L)作用于PC3细胞48 h后,采用蛋白质印迹法检测和厚朴酚对PC3细胞内E-cadherin,N-cadherin,vimentin及β-catenin蛋白质表达的影响,RT-RCR检测和厚朴酚对细胞β-catenin和MMP-9 mRNA相对表达量的影响。结果:经和厚朴酚作用后的PC3细胞与对照组(和厚朴酚0μmol/L)相比迁移与侵袭能力显著降低,细胞内N-cadherin,vimentin及β-catenin蛋白表达显著下降,E-cadherin蛋白表达显著升高,β-catenin和MMP-9 mRNA相对表达量显著降低,且上述结果呈剂量依赖性。结论:和厚朴酚能抑制PC3细胞的迁移和侵袭,该作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性,从而降低EMT活性而产生的。     

MiR-144调控Wnt4/β-catenin信号通路抑制多发性骨髓瘤细胞恶性生物学行为的研究

目的:探讨miR-144对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制。方法:RT-PCR检测miR-144在多发性骨髓瘤细胞及多发性骨髓瘤(MM)患者血浆中的表达情况;MTT法检测miR-144模拟物转染至骨髓瘤细胞后细胞的增殖情况及细胞克隆形成能力;流式细胞术检测过表达miR-144的骨髓瘤细胞周期分布情况;Tunel法检测过表达miR-144的骨髓瘤细胞的凋亡情况;Transwell细胞侵袭实验与迁移实验检测过表达miR-144的骨髓瘤细胞的侵袭及迁移能力;Western blot法检测过表达miR-144的骨髓瘤细胞的MMP-9、MMP-2的蛋白表达水平及Wnt4/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平。结果:MM细胞株及MM患者血中miR-144表达水平明显低于正常对照组(P0.05)。过表达miR-144的骨髓瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力明显降低(P0.05),细胞凋亡水平增加(P0.05)。过表达miR-144的骨髓瘤细胞的MMP-9、MMP-2、Wnt4/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平均明显低于对照组(P0.05)。结论:MiR-144能抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导其凋亡,其具体机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性有关。     

过表达lncRNA-p21通过介导Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌MGC-803细胞的生长与转移

目的:探讨lncRNA-p21在调控胃癌MGC-803细胞生长与转移作用中的作用及Wnt/β-catenin信号通路在其中的功能。方法:在人胃癌MGC-803细胞中转染慢病毒以过表达lncRNA-p21。观察细胞形态、细胞增殖以及体内外迁移和侵袭能力,检测Wnt/β-catenin信号通路是否参与lncRNA-p21介导的抑制胃癌细胞增殖和生长作用。最后使用LiCl对Wnt/β-catenin信号通路进行验证。结果:LncRNA-p21过表达的胃癌MGC-803细胞发生了形态学的改变,表现为由纺锤状或星状形态变为较圆的低侵袭状态。LncRNA-p21在体内外均抑制了胃癌MGC-803细胞增殖和生长,体外实验表现为lncRNA-p21过表达减弱了胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力。LiCl实验验证了Wnt/β-catenin信号通路介导了lncRNA-p21对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。结论:LncRNA-p21可在体内外显著抑制胃癌MGC-803细胞的生长与转移,且该抑制作用可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路介导。     

槲皮素对人脑胶质瘤干细胞生物学行为及miR-29s家族的影响分析

目的探讨槲皮素对人脑胶质瘤干细胞生物学行为及微小RNA-29s(miR-29s)家族的影响。方法采用悬浮细胞培养人脑胶质瘤SHG44干细胞。根据槲皮素浓度不同分为0μg/ml(对照组),6μg/ml组、12μg/ml组、24μg/ml组、48μg/ml组、96μg/ml组,采用MTT法检测人脑胶质瘤SHG44增殖活性。用0μg/ml、12μg/ml、24μg/ml、48μg/ml培养48 h,采用细胞迁移实验和细胞侵袭实验检测细胞迁移数目和细胞侵袭数目;采用RT-PCR检测miR-29s家族表达。结果培养24 h和48 h,槲皮素各组抑制率高于对照组,且随着浓度增加抑制率不断增加,差异均有统计学意义(P 0. 05);培养48 h,槲皮素各组抑制率高于培养24 h,差异均有统计学意义(P 0. 05)。与对照组比较,槲皮素各组细胞迁移数目和细胞侵袭数目减少,差异均有统计学意义(P 0. 05);槲皮素48μg/ml组细胞迁移数目和细胞侵袭数目少于12μg/ml组和24μg/ml组,且24μg/ml组少于12μg/ml组,差异均有统计学意义(P 0. 05)。与对照组比较,槲皮素各组miR-29a和miR-29b表达升高,差异均有统计学意义(P 0. 05);槲皮素48μg/ml组miR-29a和miR-29b表达高于12μg/ml组和24μg/ml组,且24μg/ml组高于12μg/ml组,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论槲皮素对人脑胶质瘤干细胞SHG44具有良好抑制作用,且具有剂量依赖性,降低体外迁移及侵袭能力,及促进miR-29a和miR-29b表达。     

siRNA 干扰的 DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的影响及机制研究

目的：探讨DKK1 siRNA干扰的DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法瞬时转染DKK1 siRNA至培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞;应用实时定量PCR和蛋白免疫印迹方法分别检测转染前后细胞中DKK1的mRNA和蛋白表达;应用Transwell实验检测癌细胞侵袭、迁移能力。应用荧光显微镜观察转染前后Wnt/β-catenin信号通路中活性β-catenin、MMP14表达情况。结果转染DKK1 siRNA至Ishikawa细胞使细胞中DKK1基因表达水平降低21.00%（t＝3.05,P＜0.05）, DKK1蛋白表达降低39.35%（t＝40.97,P＜0.01）。侵袭实验中DKK1 RNAi组的细胞均数140.8±4.733,高于空白对照组的细胞均数123.7±6.700,癌细胞的侵袭能力增强13.82%。迁移实验中DKK1 RNAi组细胞均数（152.0±3.528）高于空白对照组（130.6±4.061）,癌细胞的迁移能力增强16.39%。DKK1 siRNA处理后,细胞中活性β-catenin、MMP14荧光增强,提示表达水平上升。结论 DKK1具有抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的作用。Wnt/β-catenin信号通路参与了DKK1这一作用过程。DKK1不失为抑制子宫内膜癌转移的有效治疗靶点。     

CircKRT17与miR-485-5p互作调控Wnt/β-catenin通路影响胃癌发生发展的机制研究

目的探讨circ KRT17在胃癌中的表达水平,并对circ KRT17在胃癌中的临床意义、生物学功能及内在机制进行评价。方法 2013年5月至2018年3月获得67例临床胃癌样本和对应的癌旁正常组织标本,并采用qRTPCR检测circ KRT17在胃癌组织和不同胃癌细胞株中的表达情况;分析circ KRT17的表达与胃癌患者临床病理学特征之间的关系;CKK-8法和平板克隆实验检测circ KRT17对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测circ KRT17对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响;裸鼠成瘤实验检测circ KRT17对胃癌细胞肿瘤异种移植的影响;荧光素酶报告基因检测circ KRT17与miR-485-5p以及miR-485-5p与Wnt3a之间的相互作用。结果 circ KRT17在胃癌组织中表达上调,与肿瘤分期、转移及患者预后不良密切相关。此外,降低circ KRT17表达显著抑制了胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导了细胞凋亡。体内实验显示,敲低circ KRT17表达抑制肿瘤生长。机制上,研究发现circ KRT17作为miR-485-5p的海绵,增加Wnt3a的表达,从而激活Wnt/β-catenin信号。结论 circ KRT17/miR-485-5p/Wnt3a/β-catenin信号对胃癌的发生、发展至关重要。     

慢病毒介导RNAi干扰β-catenin对小鼠骨髓间充质干细胞生物学行为的影响

本研究通过构建β-连环蛋白（β-catenin）特异的RNAi慢病毒表达载体,探讨阻断Wnt／β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞（MSC）生物学行为的影响。设计3对针对β-cateninmRNA不同位点的shRNA编码序列,分别连接到慢病毒载体质粒PLB中,构建PLB-β-catenin／shRNAl,PLB-β-catenin／shRNA2和PLB-β-catenin／shR-NA3;将重组质粒与慢病毒包装质粒及包膜蛋白质粒共转染293FT细胞,收获病毒颗粒,浓缩后测定病毒滴度,感染Msc细胞,并应用流式细胞术分选GFP阳性细胞,Westernblot和RT-PCR验证其对细胞内β-catenin基因表达的抑制效果,筛选干扰效率最高质粒;CCK-8法检测细胞增殖,Annexin-V／7-AAD法检测干扰后细胞凋亡情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测MSC迁移能力。结果表明：构建的特异性慢病毒siRNA干扰组（PLB-β-catenin／shRNA2）能有效抑制β-catenin的mRNA和蛋白表达,并抑制细胞的增殖;而空载体对照组（PLBgroup）和正常对照组（controlgroup）细胞增殖无明显变化,两组之间无显著的统计学差异（P〉0．05）;流式细胞术检测结果显示,采用血清饥饿法处理后,干扰组细胞的凋亡率明显增加,但两对照组之间无统计学差异（P〉0．05）;细胞划痕和Tran-swell实验显示,干扰组MSC的迁移能力明显降低,对照组细胞迁移能力无明显变化。结论：构建的特异RNAi慢病毒能够有效抑制β-catenin基因的表达,减少细胞内目的基因mRNA和蛋白的水平,从而对MSC细胞的增殖、凋亡和迁移能力产生重要影响。     

miR-15b-5p通过靶向LATS2基因调控 前列腺癌细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的探讨miR-15b-5p靶向大肿瘤抑制分子(LATS2)基因对前列腺癌PC-3细胞侵袭、迁移及凋亡的影响及机制。方法将anti-miR-15b-5p及anti-miR-15b-5p+si-LATS2(同时抑制miR-15b-5p和LATS2表达)转染前列腺癌PC-3细胞,48 h后,通过qRT-PCR检测miR-15b-5p mRNA表达,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。双荧光素酶报告系统检测miR-15b-5p与LATS2的靶向关系。Western blotting检测LATS2、β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达。结果 PC-3细胞转染anti-miR-15b-5p后,miR-15b-5p mRNA表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P 0. 05)。miR-15b-5p与LATS2存在靶向关系,抑制LATS2表达后可明显减弱anti-miR-15b-5p对PC-3细胞侵袭、迁移、凋亡及β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达的影响(P 0. 05)。结论抑制miR-15b-5p可明显降低前列腺癌PC-3细胞的侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其机制与靶向LATS2抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

持续 Wnt 信号通路激活促进胚胎干细胞源造血干细胞的增殖简

背景：如何提高胚胎干细胞诱导效率、促进胚胎干细胞源造血干细胞体外增殖成为目前急需解决的课题。目的：以外源性Wnt3a作为诱导剂,激活培养中的小鼠胚胎干细胞Wnt/β-catenin信号通路,观察该通路的激活是否促进胚胎干细胞向造血祖细胞的定向分化。方法：用外源性wnt3a（100μg/L）持续作用ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞21 d,通过细胞免疫荧光及蛋白免疫印迹检测细胞内β-catenin蛋白含量,QRT-PCR检测Wnt下游靶标基因的表达量来确定经典Wnt/β-catenin信号通路是否被激活,然后采用单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化,流式细胞仪检测造血发育相关表面标志CD34＋/Sca-1＋,同时以QRT-PCR法检测造血相关基因的表达情况。结果与结论：ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞经wnt3a（100μg/L）连续培养21 d后发现β-catenin蛋白在细胞内积累;Wnt信号通路的下游靶标基因Pitx2、Frizzled、Sox17、Oct4的表达量均出现不同程度的增加,可见经典 Wnt/β-catenin 信号通路有被激活;单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化的过程中检测到CD34＋/Sca-1＋细胞含量在14 d时占总细胞量高达20.2%,而对照组的仅占11.9%。造血相关基因骨形态发生蛋白4、FLK2及CD34的表达量均增加,而Smad5的表达则明显受到抑制。说明Wnt3a持续作用可激活Wnt/β-catenin信号通路,并促进ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞向造血干细胞的定向分化。     

丙泊酚对食管癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制研究

目的探讨丙泊酚对食管癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制。方法 CCK8实验检测5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L的丙泊酚处理人食管癌细胞EC9706 48 h及80μmol/L的丙泊酚处理细胞12h、24 h、48 h、72 h的细胞增殖情况;80μmol/L的丙泊酚处理细胞72 h后,Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞的侵袭及凋亡情况;Western blot检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-13、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase 3)、β-catenin、细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达。结果 40μmol/L、80μmol/L的丙泊酚处理组细胞存活率显著低于0μmol/L组(P0.05),在24 h、48 h、72 h的细胞存活率显著低于对照组0 h(P0.05);丙泊酚组细胞侵袭数及MMP-2、MMP-13、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率和Cleaved caspase 3蛋白显著高于对照组(P0.05)。结论丙泊酚可通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制食管癌细胞增殖及侵袭能力,诱导细胞的凋亡。     

吲哚美辛对结肠癌细胞HCT116的影响及机制探讨

目的:研究吲哚美辛对结肠癌细胞株HCT116增殖及体外侵袭的影响并对其机制进行探讨。方法:应用WST-8法和体外侵袭小室测定吲哚美辛对结肠癌细胞株HCT116增殖和侵袭能力的影响;Westen-blotting方法检测吲哚美辛作用后HCT116细胞β-连环素(β-Catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase-7,MMP-7)蛋白的表达。结果:吲哚美辛能够明显抑制结肠癌细胞株HCT116的增殖,呈时间-剂量依赖性,作用24、48、72h的IC50值分别为440.36、323.90、254.37μmol/L;吲哚美辛能够明显抑制结肠癌细胞株HCT116的体外侵袭,呈剂量依赖性;吲哚美辛作用24、48、72h后,β-Catenin、CyclinD1、MMP-7蛋白表达均有下降。结论:吲哚美辛能抑制结肠癌细胞株HCT116的增殖与迁移,其作用机制之一可能是通过Wnt/β-catenin信号通路。     

淫羊藿素对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的 探索淫羊藿素对人舌鳞癌细胞CAL-27的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及可能作用机制。方法 分别采用0、10、20、40μmol/L浓度的淫羊藿素干预人舌鳞癌细胞CAL-27。采用CCK-8法及克隆形成实验检测细胞增殖;采用划痕实验检测细胞迁移;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。采用分子对接预测淫羊藿素与舌鳞癌目的基因结合效果,采用逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)进行验证。结果 淫羊藿素对CAL-27细胞作用24 h的半数抑制浓度(IC₅₀)为33.37μmol/L, 48 h IC₅₀为15.57μmol/L。与0μmol/L浓度淫羊藿素相比,40μmol/L浓度的CAL-27细胞克隆形成率降低,细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.001)。淫羊藿素浓度增加时,CAL-27的迁移、侵袭数呈淫羊藿素剂量依赖性抑制;细胞内AR、ESR1、PRKACA、PTGS2的相对表达量呈淫羊藿素剂量依赖性减少。结论 淫羊藿素可抑制人舌鳞癌细胞CAL-27的增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,...     

小鼠成骨细胞Wnt信号通路相关因子表达与胰岛素样生长因子1的影响

背景:胰岛素样生长因子1可促进细胞增殖、分化,但其具体作用机制尚不清楚。目的:观察胰岛素样生长因子1对小鼠成骨细胞增殖﹑分化的影响,及Wnt信号通路相关因子mRNA的表达。方法:向体外培养的小鼠成骨细胞中加入25μg/L的胰岛素样生长因子1,分别于培养的第1,2,3,4,5天用CCK-8比色法检测细胞增殖率;于培养的第3,6,9天应用酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶活性;细胞培养第3天提取总RNA,采用Real-timeRT-PCR检测Wnt-3a,低密度脂蛋白受体相关蛋白5,β-catenin mRNA的表达。结果与结论:25μg/L胰岛素样生长因子1能够促进成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性,而且明显增加成骨细胞中Wnt-3a、低密度脂蛋白受体相关蛋白5、β-catenin mRNA的表达(P<0.05)。说明胰岛素样生长因子1能够促进成骨细胞的增殖和分化,Wnt信号通路参与了该调控过程。     

替吉奥胶囊对胃癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及机制研究

目的探讨替吉奥胶囊对胃癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及机制。方法 6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的替吉奥处理人胃癌BGC823细胞,不加药物处理的作为空白对照组,48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved caspase3、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Notch1、Hes1蛋白表达。结果 6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的替吉奥处理的细胞的抑制率均显著高于对照组,且具有浓度依赖性(P0.01),选择115μg/ml的替吉奥作为后续实验的研究对象;与对照组比较,替吉奥组细胞抑制率显著升高,细胞侵袭数显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白表达显著上调,MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达显著下调(P0.01)。结论替吉奥胶囊可降低胃癌细胞的增殖及侵袭能力,促进细胞的凋亡,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

异硫氰酸苯已酯抑制T细胞白血病Jurkat细胞Wnt/β-catenin信号通路的研究

本研究目的在于探索研究异硫氰酸苯己酯(PHI)在体外对人类T细胞白血病Jurkat细胞Wnt/β联蛋白(catenin)信号通路及组蛋白调控、细胞凋亡和增殖的影响。用MTT方法检测PHI作用后Jurkat细胞的增殖率变化;用流式细胞术观察细胞凋亡;用Western blot观察Jurkat细胞Wnt/β-catenin信号转导通路相关蛋白β-catenin、TCF、c-myc、cyclinD1水平的变化,以及组蛋白甲基化H3K4,H3K9、乙酰化H3,H4的变化。结果表明,PHI可抑制Jurkat细胞增殖,诱导细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性,48 h的IC50约为20μmol/L;PHI处理3 h后上调组蛋白乙酰化H3、H4和组蛋白甲基化H3K4,下调组蛋白甲基化H3K9,7 h时作用更明显;PHI作用3 hβ-catenin表达水平无变化,7 h后Wnt/β-catenin信号转导通路β-catenin及其周期相关基因TCF、c-myc、cyclinD1表达均下降。结论:PHI抑制Jurkat细胞Wnt/β-catenin信号转导通路,调控组蛋白甲基化、乙酰化,从而诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

长链非编码RNA LINC00222对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及作用机制的研究

目的　检测肺腺癌组织及细胞系中LncRNA LINC00222表达,探究其对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和相关作用机制。方法　采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法和Western blot 实验检测肺腺癌组织及细胞中LINC00222表达;构建LINC00222过表达载体,验证其转染效率;采用CCK-8法、Hoechst 33342/PI 染色法、划痕实验及Transwell实验分别检测过表达LINC00222对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响;采用Western blot 法检测肺腺癌细胞中P-GSK-3β,GSK-3β蛋白及β-catenin核蛋白表达;采用荧光霉素基因实验及RIP实验验证探究LINC00222影响肺腺癌生物学行为的相关作用机制。结果　肺腺癌组织中LINC00222 mRNA和蛋白表达明显低于癌旁正常组织,差异有统计学意义（t=7.388,15.100,均P<0.001）;肺腺癌细胞系中LINC00222表达明显低于人正常肺胚细胞（F=21.926,P<0.001）。过表达LINC00222后,肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力明显抑制,细胞凋亡数目明显增多（P<0.01）。过表达 LINC00222后,GSK-3β磷酸化明显降低, GSK-3β催化活性明显增强,β-catenin 核转位受到抑制（P<0.01）。LINC00222靶向调控结合GSK-3β和GSK-3β蛋白共沉淀中LINC00222表达显著高于IgG蛋白共沉淀（P<0.05）。结论　肺腺癌中LncRNA LINC00222低表达,其过表达可抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡,可能与其调控GSK-3β催化活性,抑制β-catenin 核转位有关。