mm—LDL对内皮细胞转录因子NF—kB活性的影响

目的 研究轻微修饰低密度脂蛋白（mm-LDL）激活内皮细胞转录因子NF－kB的信号传导途径以及NF－kB对血小板源性生长因子B链（PDGFb）表达的调控作用。方法 以FeSO4修饰法制备mm-LDL,以正常LDL（n-LDL）作对照,作用于培养内皮细胞后提取核蛋白,用凝胶阻滞实验检测转录因子NF－kB停车场 及结合活性的变化。观察自由基清除剂probucol及PDTC对mm-LDL激活内皮细胞转录因子NF－kB的影响。通过检测报告基因探讨核因子诱导激酶（NIK）和核因子－kB抑制亚基激酶（IKK）在激活内皮细胞转录因子NF－kB的信号传导途径中的作用以及mm-LDL激活的NF－kB对PDGFb基因启动子的作用。结果 mm-LDL能激活培养内皮细胞转录因子NF－kB,自由基清除剂probucol和PDTC对mm-LDL激活内皮细胞转录因子NF－kB还能增加带有PDGFb基因上游调控序列（－189／＋43)的报告基因荧光素酶的活性。Slot blot结果显示变异型NIK能显著减少受mm-LDL刺激的内皮细胞PDGFb mRNA含量。结论 mm-LDL可通过NIK－IKK途径激活内皮细胞转录因子NF－kB并促进PDGFb基因表达。     

L—EGCG对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增生影响

OBJECTIVE: To determine the effect of L-epigallocatechins gallic acid ester (L-EGCG) on glomerular mesangial cells (GMCs) proliferation, and to make clear the possible mechanism. METHODS: We investigated the effect of different doses of L-EGCG on GMCs proliferation at 24 h, 48 h and 72 h respectively, and screened the best dosage and time point. GMCs were divided into 5 groups: control, L-EGCG group, LPS group, dexamethasone group, and L-EGCG plus dexamethasone group. At the end of the experiments, the cultured GMCs and its suspension were collected, the positive rate of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) was taken count of by immunohistochemical assay, the rate of effective apoptosis of GMCs by terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick endlabeling (TUNEL) assay, and -OH, malonydialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD) by biochemical assay. RESULTS: L-EGCG of 200 mg/L had the most strong inhibitory effect on GMCs at 48 h. The levels of -OH, and MDA in the L-EGCG group was significantly lower than those in the LPS group (P < 0.01), while the level of SOD in the L-EGCG group was significantly higher than that in the LPS group (P < 0.01); the PCNA positive rate of GMCs in the L-EGCG group was significantly lower than that in the LPS group (P < 0.01), and the effective apoptosis of GMCs in the L-EGCG group were significantly higher than that in the LPS group (P < 0.01). The PCNA positive rate of GMCs was positively correlated with the level of -OH and MDA, while negatively correlated with the level of SOD. CONCLUSION: The suppressive effect of L-EGCG on the abnormal proliferation of GMCs might be that L-EGCG could weaken the suppressive effect of -OH on the SOD activity, decrease the accumulation of MDA, and increase the apoptosis of GMCs.     

低密度脂蛋白对肾小珠系膜细胞,TGF—β和FN mRNA表达的影响

目的：观察低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭＳＣ）生长及转化生长因子β（ＴＧＦ－β）和纤维连接蛋白（ＦＮ）基因表达的影响。方法：体外培养的ＭＳＣ培养液中加入ＬＤＬ共同孵育,采用＾３Ｈ－ＴｄＲ渗入法检测ＭＳＣ增殖情况,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＴＧＦ－β ｍＲＮＡ、ＦＮ ｍＲＮＡ的表达,应用斑点杂交法检测抗ＴＧＦ－抗体对ＦＮ ｍＲＮＡ表达的影响。结果（１）ＬＤＬ刺激ＭＳ     

小剂量茶碱对大鼠气道上皮细胞NF—kB活性的影响

目的 :观察小剂量茶碱是否对体外培养的哮喘模型大鼠气道上皮细胞中NF κB的活性存在影响。以进一步阐明茶碱类药物抗炎作用和免疫调节作用的机制。方法 :雄性Wistar大鼠随机分为 2组 ,对照组 (5只 ) ,哮喘模型组 (15只 ) ;模型组以卵清蛋白致敏和激发 ,建立哮喘模型。体外培养哮喘模型组和对照组大鼠的气道上皮细胞。分别观察加入脂多糖 (LPS)刺激前后NF κB活性的变化 ;在哮喘模型组大鼠的气道上皮细胞中加入不同浓度的氨茶碱与LPS(1μg·ml- 1 )共同培养 4h后 ,以及加入同一浓度氨茶碱和LPS(1μg·ml- 1 )共同培养不同时间后NF κB活性的变化。NF κB活性采用免疫组织化学方法检测 ,以细胞核染色作为阳性标准 ,以细胞核阳性的百分比表示NF κB的活性。结果 :经LPS刺激前 ,对照组和哮喘组大鼠气道上皮细胞胞浆NF κB均有一定程度的表达。细胞核表达的细胞 ,哮喘组为 (6 .4 %± 1.2 ) % ,而对照组为 (4 .7%± 1.7) % ,二者相比较 ,其差异具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。经 1μg·ml- 1 脂多糖刺激 2h后 ,两组细胞胞核NF κB表达均明显上升 ,哮喘组为 (82 .5± 5 .2 ) % ,对照组为(79.3± 3.4 ) % ,两者相比 ,无统计学差异 (P >0 .0 5 )。在哮喘组大鼠上皮细胞中加入 1μg·ml- 1 脂多糖及各种浓度氨茶碱     

氧化低密度脂蛋白诱导人肾小球系膜细胞凋亡机制的研究

肾小球硬化的重要病理特征是进行性肾小球细胞外基质积聚和细胞的丧失。在肾小球炎症过程中 ,细胞过度凋亡导致细胞减少是肾小球硬化的重要原因[1] 。氧化低密度脂蛋白(Ｏｘ -ＬＤＬ)是引起肾小球硬化的重要因素[2 ,3] ,低浓度的Ｏｘ-ＬＤＬ(<10 0 μｇ/ｍｌ)抑制系膜细胞增殖 ,促进系膜细胞凋亡[4 ] ,但Ｏｘ -ＬＤＬ诱导系膜细胞过度凋亡的机制尚不清楚。我们利用体外培养的人肾小球系膜细胞进行实验 ,以探讨Ｏｘ-ＬＤＬ诱导系膜细胞凋亡的可能机制 ,为寻找延缓肾小球硬化的有效方法提供新思路。1　材料与方法1.1　实验材料　Ｂａｘ及Ｂｃ…     

VLDL对大鼠系膜细胞分泌FN以及TGFβ1 mRNA转录的作用

文献报道高甘油三酯血症Wistar大鼠可出现肾脏损害。提示甘油三酯具有肾脏毒性作用。极低密度脂蛋白（very low density lipoprotein）是体内富含甘油三酯的脂蛋白，因此高TG血症可能通过VLDL造成肾脏损害。为此，本研究应用VLDL与系膜细胞共孵育，观察其对系膜细胞FN分泌以及对长因子-β1（TGF-β1）基因表达的作用，进而探讨VLDL对系膜细胞的毒性作用。     

CRP和LPS致正常人外周血单核细胞NF—kB活化及IL—6合成的比较

目的：观察C—反应蛋白(CRP)和脂多糖(LPS)诱导人外周血单核细胞合成白细胞介素—6水平及两致单棱细胞NF—kB活化的程度，比较其致炎作用。方法：Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单棱细胞，应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法观察CRP和LPS刺激单核细胞产生IL—6的时间效应，比较其峰值。免疫细胞化学观察两致单棱细胞NF—kB活化的程度。结果：CRP和LPS刺激IL—6合成开始的时间分别是4小时和2小时。呈时间依赖性，在24小时达高峰。LPS组峰值高于CRP组。在刺激16小时后，LPS组NF—kB活化的程度高于CRP组。结论：CRP和LPS均能活化NF—kB，并诱导单核细胞产生IL—6：10ng/mlLPSI的致炎作用强于20ug／mlCRP。     

大鼠肾脏系膜细胞转染人TGF—β1基因可增强MMP—2表达

目的 研究转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）对培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）表达的影响。方法 采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将人ＴＧＦ－β１基因转染培养的大鼠ＭｓＣ,经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定其转染成功否;又分别应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ,酶谱分析法检测阳性表达人ＴＧＦ－β１的ＭｓＣＭＭＰ－２ｍＲＮＡ蛋白及酶活性变化。结果成功获得稳定过     

转录活化蛋白在人肾小球系膜细胞表达金属蛋白酶组织抑制物1中的信号转导作用

目的 探讨凝血酶对体外培养的人肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制物1（TIMP1）的影响以及信号转导录活化蛋白（STAT）信号转导途径对这一过程的介导机制。方法 分离提取细胞总RNA,进行TIMP1的Northern杂交分析,制备细胞核蛋白提取物,应用凝胶阻滞试验酸转染技术进行阻断分析。结果在体外培养的人系膜细胞,基础状态下可以表达一定水平的TIMP1 mRNA和STAT－DNA结合活性。不同浓度凝血酶（0．5,1．5,4．5U／ml)后TIMP1 mRNA转录水平分别是对照组的4,1．4和3．7倍。在凝血酶作用下,细胞TIMP1 mRNA表达水平与STAT－DNA结合活性呈一致性变化,凝血酶特异性抑活物－水蛭素可同时抑制IMP mRNA表达水平及STAT－DNA结合活性;细胞转染STAT1和STAT3反义寡苷酸后在降低STAT－DNA结合活性的同时,阻断凝血酶对TIMP1 mRNA表达的诱导作用,结论 STAT参与了解诱导人肾小球系膜细胞TIMP1的基因表达过程。     

α—生育酚抑制高糖诱导大鼠系膜细胞AP—1活性及IGF …

目的 研究α－生育酚对高糖诱导肾小球系膜细胞转录激活蛋白－１（ＡＰ－１）和转化生长因子－β１（ＧＧＦ－β１）的影响,探讨抗氧化剂治疗糖尿病肾病的机制。方法 采用凝胶迁移率实验（Ｇｅｌ ｓｈｉｆｔ ａｓｓａｙ）和超迁移率实验（Ｇｅｌ ｓｕｐｅｒｓｈｉｆｔ ａｓｓａｙ）检测不同浓度及不同时间下葡萄糖对系膜细胞ＡＰ－１活性的影响、ＡＰ－１二聚体中Ｊｕｎ和Ｆｏｓ成分的变化、Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交检测ＴＧＦ－β     

罗格列酮对OX-LDL诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的观察罗格列酮对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的肾小球系膜细胞（RMC）增殖和细胞外基质（ECM）分泌的影响。方法采用RT-PCR法检测正常对照组、ox-LDL组、罗格列酮组、罗格列酮＋ox-LDL组RMC内的转化生长因子β1（TGFβ1）mRNA表达;同时采用MTT法检测各组RMC增殖水平,并予ELISA技术检测上清液中TGFβ1、层粘连蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）蛋白的含量。结果罗格列酮＋ox-LDL组RMC增殖水平较ox-LDL组降低,且RMC表达的TGFβ1 mRNA水平和分泌的TGFβ1、FN、ColⅣ蛋白水平均较ox-LDL组降低（均P〈0.05或0.01）。结论罗格列酮可通过抑制ox-LDL诱导的RMC增殖和ECM及TGFβ1的分泌,从而发挥抗肾纤维化作用。     

细胞凋亡信息分子Fas、FasL和NF—kB在氟化物作用后破骨样细胞凋亡过程中的表达

目的：研究氟化物作用后破骨细胞样细胞凋亡过程中细胞凋亡配体Fas、FasL（Fas Ligand)和核因子NF－kB的表达变化,方法：在培养基中分别加入不同浓度的氟化钠培养破骨样细胞,以免疫组织化学染方法观察细胞的Fas、FasL和NF－kB表达,结果：Fas、FasL在破骨样细胞表达量随培养基中氟化钠浓度增高而增高,NF－kB的表达量随培养基中氟化钠浓度增高而降低,两者均具有剂量依赖关系,结论：在氟化钠所致的破骨细胞凋亡过程中,Fas、FasL的表达氟化物浓度增高而加强,而核因子NF－kB的表达随氟化物浓度增高而减弱,两者都具有剂量依赖关系。     

大鼠肾小球系膜细胞的培养与鉴定

培养及鉴定大鼠肾小球系膜细胞。方法首先提取大鼠肾小球并用Ⅳ型胶原酶消化处理,然后体外培养大鼠肾小球,对生长的细胞定期行光镜及免疫化学色等鉴定。结果培养的肾小球３ｄ后可见细胞生长,１４ｄ时镜下细胞多呈星状或纺锤状们有不规则的突起。     

糖肾汤对ox-LDL诱导的大鼠系膜细胞增殖及TGFβ1表达的影响

[目的]观察糖肾汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的大鼠系膜细胞增殖及TGFβ1mRNA表达的作用。[方法]培养大鼠系膜细胞,分为空白对照组、ox-LDL组、糖肾汤高、中、低剂量组和罗格列酮组,培养24h后,采用MTT法检测细胞增殖,用RT-PCR技术检测系膜细胞TGFβ1mRNA表达情况。[结果]50μg/ml的ox-LDL可促进细胞增殖和TGFβ1mRNA表达;糖肾汤和罗格列酮具有明显抑制ox-LDL诱导的MC增殖和TGFβ1mRNA表达增加的作用。[结论]糖肾汤可抑制ox-LDL诱导的MC增殖和TGFβ1表达的增加,从而在糖尿病肾病的治疗中起作用。     

丙丁酚抑制氧化型低密度脂蛋白诱导系膜细胞转化生长因子-β1表达

目的观察丙丁酚对ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性和TGF-β1表达的作用,探讨抗氧化剂治疗脂质肾损伤的分子机制.方法大鼠系膜细胞随机分为正常细胞组、ox-LDL处理组和ox-LDL+丙丁酚处理组.运用凝胶迁移率实验检测AP-1活性变化,Western杂交检测c-Jun、JNK/SAPK磷酸化及TGF-β1蛋白表达水平的改变.运用Northern杂交检测TGF-β1 mRNA表达.结果丙丁酚50 μmol/L预处理系膜细胞20 h,显著降低ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性.丙丁酚浓度为50、100、200 μmol/L时,均显著抑制ox-LDL诱导JNK,/SAPK磷酸化;且ox-LDL+丙丁酚处理组的c-Jun蛋白表达分别为ox-LDL处理组的60%、51%和46%.Northern杂交显示ox-LDL为10 μg/mL时并不激活TGF-β1 mRNA表达(P>0.05);而当ox-LDL浓度增至50、100 μg/mL时,TGF-β1 mRNA表达分别增加1.8和1.9倍.Western杂交显示ox-LDL呈剂量依赖方式增加TGF-β1蛋白质表达.加入丙丁酚后显著降低ox-LDL诱导系膜细胞的TGF-β1 mRNA和蛋白质表达(P<0.05).结论丙丁酚可能通过抑制JNK1/SAPK磷酸化和AP-活性下调ox-LDL诱导系膜细胞TGF-β1表达.     

TGF—β1对大鼠系膜细胞增殖和纤溶酶原激活物及其抑制剂表达的影响

目的：通过对大鼠系膜细胞转染TGF－β1基因和反义TGF－β1基因,观察该细胞增殖和纤溶酶原激活物及其抑制剂表达的影响。方法：采用MTT、细胞计数和流式细胞仪检测检测细胞增殖;Northernblot和Western blot法检测其纤溶酶原激活性物质抑制－1（PAI－1）的表达,酶谱分析法检测其纤溶酶原激活物（tPA)活性。结果：过表达TGF－β1的系膜细胞生长受抑制,其PAI－1mRNA和蛋白表达增强,而tPA酶活性则降低;而低表达TGF－β1的系膜细胞增殖加速,其PAI－1mRNA和蛋白表达降低,tPA酶活性增强。结论TGF－β1可通过对大鼠系膜细胞增、纤拳激活性及其抑制因子表达的影响,而促进肾小球纤维化的发性。     

TGF—β1参与全反式维甲酸对大鼠肾脏系膜细胞MMP—2表达的调节

目的 研究全反式维甲酸（ATRA）对于大鼠肾脏系膜细胞表达MMP－2的影响以及转化生长因子－β1在这一过程中的作用。方法 采用Northern blot、Western blot和Zymography法检测ATRA对培养大鼠肾脏系膜细胞MMP－2mRNA、蛋白分泌及酶活性表达变化;ATRA对系膜细胞表达TGF－β1的作用,以及TGF－β1至ATRA调节MMP－2表达的影响。结果 证实ATRA可增加培养大鼠肾脏系膜细胞的MMP－2mRNA表达、MMP－2蛋白分泌和增强MMP－2酶活性。ATRA也可引起TGF－β1多肽呈剂量依赖型增加。反义TGF－β1几乎可以完全阻断活性TGF－β1的分泌。经反义TGF－β1转染的系膜细胞在10^-6mol/L ATRA作用下,其表达MMP－2mRNA的水平不发生变化,但是加入抗TGF－β1抗体时,在10^-6mol/L ATRA作用下系膜细胞表达MMP－2呈剂量依赖型下降。结论 ATRA可上调培养大鼠系膜细胞的MMP－2mRNA、蛋白分泌和MMP－2酶活性的表达;TGF－β1参与ATRA对MMP－2表达的调节,并为ATRA调节MMP－2作用所必需。     

全反式维甲酸可增强大鼠系膜细胞uPA和MMP—2表达

目的 研究全反式维甲酸对体外培养大鼠系膜细胞uPA和MMP－2表达的影响,探讨全反式维甲酸抗肾小球硬化的机制。方法 分别应用Northern blot、Western blot和酶谱法检测全反式维甲酸对培养大鼠系膜细胞uPA和MMP－2表达的影响。结果 ATRA可促进系膜细胞uPA和MMP-2蛋白表达,提高其酶活性,并增强MMP－2mRNA表达。结论 ATRA可增强大鼠系膜细胞的uPA和MMP－2表达,为进一步阐明ATRA拮抗肾小球硬化机制提供了直接的实验依据。     

茶多酚对ox-LDL刺激的系膜细胞NF-κBp65活化的影响

目的观察茶多酚对培养的大鼠肾小球系膜细胞摄取氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)及其NF-κBp65的活化的影响.方法以ox-LDL刺激体外培养的大鼠系膜细胞,用不同浓度的茶多酚干预后,测定系膜细胞内总胆固醇(TC)含量,免疫组化染色检测NF-κBp65的活化.结果 ox-LDL刺激后,系膜细胞内TC含量明显增高,NF-κBp65活化率明显增加;茶多酚干预后系膜细胞内TC含量及其NF-κBp65的活化率明显下降.结论茶多酚可抑制系膜细胞摄取ox-LDL及其诱导的NF-κBp65的活化.