小肝癌中端粒酶蛋白hTRT基因检测与P53,N—ras,nm23H1,PCNA？…

目的：研究小肝癌中端粒酶白ｈＴＲＴ基因与Ｐ５３蛋白、Ｎ－ｒａｓ蛋白、ｎｍ２３Ｈ１蛋白、ＰＣＮＡ表达及其相关性。方法：在２０例小肝癌中用原位杂交,免疫组化方法检测ｈＴＲＴ基因与Ｐ５３蛋白、Ｎ－ｒａｓ蛋白、ｎｍ２３Ｈ１蛋白、ＰＣＮＡ的表达。结果：ｈＴＲＴ阳性信号检出率８０％（１６／２０）,其余蛋白检出阳性率Ｐ５３为３５％（７／２０）,Ｎ－ｒａｓ为９０％（１８／２０）,ｎｍ２３Ｈ１为８５％（１７／２０）     

小肝癌中端粒酶蛋白hTRT基因检测与P53、N-ras、nm23H1、PCNA表达及其相关性研究

目的 :研究小肝癌中端粒酶蛋白 h TRT基因与 P5 3蛋白、N- ras蛋白、 nm2 3H1蛋白、PCNA表达及其相关性。方法 :在 2 0例小肝癌中用原位杂交 ,免疫组化方法检测 h TRT基因与 P5 3蛋白、N- ras蛋白、nm2 3H1蛋白、PCNA的表达。结果 :h TRT阳性信号检出率 80 % (16 / 2 0 ) ,其余蛋白检出阳性率 P5 3为 35 % (7/ 2 0 ) ,N- ras为90 % (18/ 2 0 ) ,nm 2 3H1为 85 % (17/ 2 0 )及 PCNA强阳性率为 5 5 % (11/ 2 0 ) ;癌中 h TRT阳性信号、P5 3蛋白、PCNA表达强度显著高于癌旁非癌组织 (P<0 .0 5 ) ;癌不同分化组中 P5 3蛋白、nm2 3H1、PCNA表达有显著差异 (P<0 .0 5 ) ;癌中 h TRT阳性信号分布有膜型和浆型两种形式 ,其分布形式、信号强度均与 PCNA阳性强度密切相关 (P<0 .0 1) ,但未检出与 P5 3、N- ras、nm 2 3H1有明显相关性。 nm2 3H1,N- ras在癌与非癌中表达较高。结论 :肝癌发生发展不同阶段有多种基因各自发挥着不同的作用 ,P5 3异常表达是肝癌多基因变化的基础。端粒酶活化发生在肝癌早期 ,是肝细胞增生和恶性转化所必需 ,其检出结果对鉴别肿瘤恶变有重要意义。     

子宫颈病变中端粒酶表达的原位研究

目的　探讨端粒酶在宫颈癌发生发展过程中的作用 ,为宫颈癌的早期诊断、治疗和判定预后提供一定的理论基础。方法　采用原位杂交方法对 10例正常对照、6例重度不典型增生、10例原位癌、2 5例宫颈癌组织中端粒酶的表达进行检测。结果　端粒酶在正常对照组呈阴性表达 :在重度不典型增生组中有强弱不等的表达 ;90 %的原位癌有表达 ,与重度不典型增生组间有显著性差异 (P <0 .0 1) ,10 0 %宫颈癌中端粒酶有表达 ,与原位癌组间有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　端粒酶在宫颈癌中呈现高表达 ,有望成为临床检测宫颈癌发生的重要标志物和作为判定预后的有效方法     

原位检测大鼠肝癌发生过程中端粒酶活性

目的 在大鼠实验性肝癌发生过程中原位显示端粒酶及其变化。方法 用含０．０５％ ３‘－甲基－４－二甲基氨基偶氮苯的玉米粉喂饲大鼠１２周以制备肝癌模型。组织冰冻切片酶催化端粒延伸－ＰＣＲ（原位ＴＲＡＰ）法检测端粒酶活性。结果 正常肝细胞、胆管细胞以及汇管区细胞一般均为阴性。肝纤维化、早期肝硬化病变中一小部分肝细胞呈弱阳性,间质内增生的肌纤维母细胞端粒酶活性较强,增生的胆管细胞和结节状增生肝细胞显示弱至     

莪术油抑制小鼠HepA肝癌细胞增殖及其分子机制

目的 研究莪术油抑制小鼠HePA肝癌细胞增殖及其分子机制。方法 构建小鼠HePA肝癌模型,进行莪术油抑癌试验,并用免疫组化法检测不同组别间细胞增殖核抗原(RCNA)、视网膜母细胞瘤蛋白(RB蛋白)的表达,比较其变化,探讨莪术油抑制肝癌的分子机制。结果 莪术治疗组的瘤重、PCNA标记指数均低于生理盐水组、RB蛋白标记指数高于生理盐水组、且差异有非常显著性(P<0.01),而与5-FU组相比,3种指标的差异均无显著性(P>0.05)。结论 莪术油可能是通过上调RB蛋白的表达,抑制PCNA的阳性表达率,进而抑制肿瘤的生长。     

甲状腺癌中端粒酶逆转录酶mRNA和Survivin的表达及意义

目的: 探讨甲状腺癌(TC)中端粒酶逆转录酶(TERT)mRNA和survivin蛋白的表达与细胞增殖和凋亡的关系.方法:采用原位杂交法、末端脱氧核苷酸酶标记法及免疫组化技术检测46例TC中TERT mRNA、细胞凋亡、增殖细胞核抗原(PCNA)和survivin蛋白的表达,20例良性病变作为对照.结果: TC的TERT mRNA和survivin的表达阳性率,增殖指数(PI),凋亡指数(AI)均显著高于对照组;TC中TERT mRNA和survivin的表达均与临床分期有关,survivin还与淋巴结转移有关;二者的表达呈显著正相关;TERT mRNA和survivin阳性表达的TC组织AI明显低于阴性组,而PI均显著高于阴性组(P＜0.05).结论: TERT和survivin特异性的表达于TC组织中,可能通过促细胞增殖和抗凋亡途径,参与TC的发生发展.     

男性不育症患者睾丸组织中端粒酶RNA表达状况的研究

目的 为探讨人端粒酶RNA（hTR)基因在男性不育症患者睾丸组织中的表达及其意义。方法 应用核酸原位杂交技术对47例男性不育症患者睾丸组织和10例正常睾丸组织中端粒酶hTR基因的表达进行检测和定位，并应用HPIAS-1000高清晰度图像处理系统对hTR阳性信号进行图像分析，结果 端粒酶hTR基因阳性表达与生殖细胞（精原细胞、精母细胞、精子细胞）的分布定位一致，在精细胞不发育（唯Sertoli细胞综合征）患者睾丸组织中无端粒酶hTR基因的表达。结论 提示端粒酶活性的缺乏可能是生殖细胞发育停滞的原因，但不是唯一的原因。可能还有端粒酶以外的因素起作用，对端粒酶研究有助于了解它在男性生殖中的作用，并为男性不育症在端粒酶途径的基因治疗提供理论和实验依据。     

放射线对肝癌细胞中端粒酶启动子活性的影响

目的:研究放射线对不同的肝癌细胞株中人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子活性的影响。方法:报告质粒phTERTp-Luc经脂质体METAFECTENE介导瞬时转染4种不同的肝癌细胞株后,给予2 Gyγ射线照射,观察照射组与非照射组中荧光素酶的表达。结果:瞬时转染4种不同的肝癌细胞株后,检测到照射可经hTERT启动子而诱导荧光素酶的表达增强,即hTERT启动子在2 Gy照射组中比在非照射组中具有更高的活性。结论:2Gyγ射线可以诱导肝癌细胞中hTERT启动子活性增强,有望用于增强肝癌细胞中hTERT启动子介导的靶向基因治疗,并为进一步深入研究奠定了基础。     

化疗药物诱导肝癌细胞凋亡过程中端粒酶、端粒酶逆转录酶活性的变化

目的:探讨hTERT和端粒酶在化疗药物诱导凋亡过程中的作用及其意义。方法选择IC50剂量的三尖杉酯碱、长春新碱和足叶已甙处理肝癌细胞,采用TRAP法检测药物处理前后肝癌细胞端粒酶活性;应用流式细胞学检测细胞周期和细胞凋亡率;并利用Western Blotting检测药物作用后hTERT蛋白水平变化。结果三尖杉酯碱、长春新碱作用于肝癌细胞,明显降低hTERT蛋白表达水平,下调胞内端粒酶活性,并诱导细胞凋亡及周期阻滞;足叶已甙对肝癌细胞端粒酶活性及hTERT蛋白水平无明显抑制作用;化疗前后胞内hTERT水平和细胞凋亡率的变化呈明显负相关。结论化疗药物可能通过降低hTERT蛋白水平而下调了端粒酶活性,并诱导凋亡;hTERT蛋白水平可作为化疗敏感性指标。     

肺癌患者外周血中端粒酶活性表达与临床相关性研究

目的 探讨肺癌患者外周血循环癌细胞端粒酶活性与临床的相关性。方法 采取患者外周血经Ficoll度离心分离单个核细胞组分，再应用PCR-TRAP法检测56例原发性肺癌、32例良性肺部疾病患者外周血中端粒酶活性。结果 56例原发性肺癌患者中39例端粒酶活性明显升高，阳性率达69．6％，其中小细胞肺癌和鳞癌端粒酶活性表达阳性率较高，而腺癌较低。20例肺癌合并肺外转移病例端粒酶活性表达明显高于无肺外转移病例。结论 端粒酶活性变化与肺癌组织类型和肺外转移情况相关，对肺癌的诊断有重要意义。     

p27kip1与肝癌细胞增殖和凋亡的关系

目的: 探讨p27kip1对肝细胞癌增殖和凋亡的影响. 方法: 利用DNA缺口末端标记技术(TUNEL)检测52例肝细胞肝癌(HCC)组织中的凋亡细胞,同时采用免疫组织化学方法检测p27kip1和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达. 结果: 在包膜受侵犯者及低分化的肝癌组织中p27kip1蛋白表达和凋亡指数明显降低,而PCNA的表达却明显增高(P<0.05). 进一步的观察显示,在p27kip1高表达的HCC中其凋亡指数(0.56±0.27)明显高于低表达组(0.39±0.21, P<0.05),而PCNA的阳性指数却显著降低(29±7 vs 33±5, P<0.05). 结论: 随着HCC恶性程度的增高,p27kip1基因的表达降低,提示p27kip1蛋白表达降低可能是导致肝癌细胞的过度增长和凋亡机制缺陷的因素之一.     

膀胱移行细胞癌中端粒酶逆转录酶的表达及意义

目的　研究端粒酶逆转录酶 (hTRT)在膀胱移行细胞癌BTCC中的表达及其与肿瘤分级、分期、复发之间的关系。方法　采用原位核酸分子杂交法 ,对 5 2例BTCC和 10例正常膀胱中hTRT的表达情况进行检测 ,分析其在膀胱癌和非癌膀胱组织中的表达以及与肿瘤病理学分级、分期和患者复发情况的关系。结果　 5 2例BTCC中hTRT表达均较正常膀胱黏膜增高 ,阳性率为 90 4 % (P <0 0 0 1) ;hTRT的表达随BTCC的病理分级、分期的增高而相应增高 ,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中表达率分别为 80 0 %、95 8%、10 0 % ,浅表性 (Tis T1 )、浸润性 (T2 T4 )中表达率分别为 87 0 %、93 1% ,初发BTCC、复发BTCC表达率为 87 5 %、95 0 % (P<0 0 5 ) ;结论　人端粒酶逆转录酶 (hTRT)在BTCC中表达上调 ,提示hTRT可能通过激活端粒酶 ,使细胞无限增殖 ,对BTCC的发生发展起重要作用 ;hTRT随BTCC病理分级、分期增高而表达增高 ,并与肿瘤复发有关 ,hTRT有可能作为判断分级、分期 ,监测复发的指标 ;hTRT可能为膀胱癌基因治疗提供新的合理靶点。     

Ras基因在肝癌中表达的意义

目的：探讨ras基因家族在肝癌中表达的意义。方法：应用原位杂交与免疫组织化学方法检测肝癌组织与癌旁肝病组织中ras基因蛋白p21及ras家族基因N-ras,H-ras和Ki-ras。结果：肝癌与癌旁肝病组织中ras基因阳性率分别为90％（36／40）和82．3％（28／34）,相对正常组织中ras基因阳性率为33．3％（2／6）,癌与癌旁肝病组织中ras基因阳性率无显著差异,而肝癌、癌旁肝病组织与相对正常肝组织中ras基因阳性率有显著差异（P＜0．01）。且原位杂交方法与免疫组化方法检测ras基因表达无显著差异,原位杂交检测的ras基因家族成员之间亦无显著差异,但ras表达强度与癌分化程度有关,呈抛物型特点。结论:ras基因的表达是肝癌发生的早期事件,是肝癌形态学发生中的分子改变,癌变过程癌细胞合成增加,但在癌分化降低时,活跃增殖的癌细胞中ras合成反而受抑,免疫组化法较原位杂交方法检测ras基因更经济、简便。     

胃癌组织中端粒酶活性与细胞周期蛋白D1表达关系的研究

目的　探索胃癌组织中端粒酶可能的激活途径。方法　利用BoehringerMannhei公司TelomerasePCR ELISAKit测量端粒酶活性 ;利用RT PCRELISA检测细胞周期蛋白D1mRNA表达水平。共检测了 84例胃癌及其相关性的组织标本。统计分析利用STATISTICA/W 5 0软件进行。结果　周期蛋白D1异常高表达在胃良性疾病、胃癌前期病变和胃癌组织中均可检出。而端粒酶活性仅在胃癌前期病变和胃癌组织中检出。胃癌前期病变和胃癌组织中端粒酶活性与周期蛋白D1表达程度明显正相关 (r =0 .713,P <0 .0 5 ,n =5 0 )。结论　至少在胃癌组织中周期蛋白D1异常高表达可能是端粒酶激活的一个途径     

食管癌组织中端粒酶mRNA的原位表达与临床相关性意义

目的:研究端粒酶活性在食管癌、癌旁组织、正常粘膜组织中的表达情况及与食管癌的临床病理联系,探讨食管癌组织中端粒酶活性在食管癌的发生、发展中的作用。方法:运用原位杂交技术检测端粒酶mRNA的表达。结果:在30例食管癌中,端粒酶mRNA的阳性表达率为93.3％,明显高于癌旁组织(阳性表达率为13.3％)和正常粘膜组织(阳性表达率为0％)(P<0.001).端粒酶活性的表达强度与肿瘤的分化程度、浸润深度、临床分期及有无淋巴结转移有显著性相关(P<0.05),与性别、年龄无相关性。结论:端粒酶的激活及表达强度对食管癌的诊断、治疗及预后判断有意义。     

肝癌癌变过程中端粒酶逆转录酶、c-myc、PCNA表达和细胞凋亡观察

目的观察肝癌癌变过程中端粒酶逆转录酶(h-TERT)、c-myc、增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡活性的改变,分析它们在肝癌发生发展过程中的意义。方法所用标本包括47例原发性肝细胞肝癌、52例肝炎性肝硬变及56例慢性病毒性肝炎,采用原位杂交法检测h-TERT和c-mycmRNA表达,免疫组化SP法检测PCNA表达,用3'-OH末端DNA原位标记技术进行凋亡细胞检测。结果在慢性病毒性肝炎、肝炎性肝硬变及原发性肝细胞肝癌中:h-TERT阳性表达率分别为19.6%(11/56)、82.7%(43/52)和93.6%(44/47);c-myc阳性表达率分别为12.5%(7/56)、40.4%(21/52)和55.3(26/47);凋亡细胞阳性率分别为(27.3±4.7)%、(16.5±2.6)%和(8.7±1.3)%;PCNA分别为(l7.1±2.9)%、(49.3±7.8)%和(62.5±9.1)%。h-TERT、c-myc、PCNA及凋亡细胞阳性表达率在慢性病毒性肝炎、肝炎性肝硬变及原发性肝细胞癌各组中未见相关(P>0.05)。结论肝炎及肝硬变的癌变是一个由量变到质变的过程,h-TERT和c-myc基因的过表达、PCNA升高及凋亡活性下降与肝细胞的恶性转化有关。     

肺癌中端粒酶逆转录酶基因与雌、孕激素受体的表达及意义

目的:检测端粒酶逆转录酶基因(hTERT)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)在肺癌和肺良性病变中的表达,探讨hTERT、ER、PR在肺癌发生、发展中的作用,在肺癌中他们的相关性以及与肺癌的组织分化程度、病理分型、TNM分期、淋巴结转移的关系.方法:采用免疫组织化学方法(sp法)检测61例肺癌组织和15例肺良性病变组织中hTERT、ER、PR的表达,并结合临床病理资料进行统计学分析.结果:肺癌组织中hTERT、ER、PR阳性表达率分别为65.6%(40/61)、59.0%(36/61)、65.6%(40/61),肺部良性病变组织中hTERT、ER、PR阳性表达率分别为20.0%(3/15)、6.6%(1/15)、13.3%(2/15).肺癌组织hTERT、ER、PR表达显著高于肺部良性病变组织;肺癌组织不同的病理类型之间、TNM分期之间以及不同分化程度之间hTERT、ER、PR的阳性率未发现明显差异,但hTERT在肺癌淋巴结转移组表达显著高于非淋巴结转移组;hTERT、ER、PR在肺癌组织中的表达之间无明显相关性;ER与PR在肺癌组织中的表达有相关关系.结论:hTERT、ER、PR参与各型、各期和不同分化程度肺癌的发生、发展;hTERT在肺癌组织高表达和在肺良性病变组织低表达的特性,有望使hTERT成为肺癌诊断的一种标志物;hTERT与ER、PR表达无明显相关性,提示肺癌是由多基因参与的疾病;ER与PR协同表达可能二者互为因果,相互促进参与肺癌的发生、发展.     

星形细胞瘤中端粒酶和P53蛋白的表达与意义

目的：研究星形细胞瘤中端粒酶基因与P53蛋白的表达，探讨其在星形细胞瘤诊断和预后中的临床意义。方法：收集经手术切除及病理证实的星形细胞瘤86例标本，8例正常脑组织作对照。用端粒酶原位杂交检测试剂盒检测组织标本端粒酶基因。用SABC法检测P53蛋白的表达。结果：星形细胞瘤中端粒酶基因和P53蛋白的阳性检出率分别为44．2％（38／86）和62．8％（54／86），且随着肿瘤恶性程度的增加，端粒酶基因表达强度升高（P＜0．01），端粒酶表达与P53蛋白表达强度无明显相关性（P＞0．05）。正常组织中未检测出端粒酶基因。结论：端粒酶基因与星形细胞瘤的分化程度有关，可作为星形细胞瘤恶性程度的重要标记物，而P53蛋白可能对端粒酶基因的表达无直接影响。     

MDM2和PTEN表达与肝癌发生发展的相关性研究

目的：探讨小鼠双微体基因(murine double minute 2,MDM2) 和PTEN在原发性肝细胞性肝癌(HCC)中的表达状况,并探讨他们之间的关系及其临床意义。方法: 应用免疫组化S-P法检测原发性肝细胞性肝癌150例、肝硬化50例、肝炎组织50例和正常肝组织10例中MDM2、PTEN的表达。结果：MDM2,PTEN主要表达于细胞浆,MDM2和PTEN原发性肝细胞性肝癌、肝硬化、肝炎和正常肝组织的表达差异有统计学意义,且MDM2在原发性肝细胞性肝癌组织中的表达明显高于在正常肝组织中的表达（χ2=4.57,P< 0.05）,而PTEN的阳性表达率明显弱于正常肝组织（χ2 = 5.74,P< 0.05）。MDM2与PTEN关系密切,呈负相关。结论: PTEN、MDM2的异常表达与HCC的发展密切相关,PTEN的缺失可引起MDM2的表达上调,从而促进HCC的发展。     

胃癌端粒酶活性与肿瘤细胞增殖活性的研究

目的：研究胃癌端粒酶活性和肿瘤细胞增殖活性的关系。方法：用端粒重复扩增-酶联免疫吸附法（TRAP-ELISA）检测40例胃癌及癌旁组织的端粒酶活性。用流式细胞术（FCM）检测肿瘤细胞的增殖指数（PI）和S期细胞比率（SPF）。结果：肿瘤端粒酶阳性率为87.5%,癌旁组织阳性率为5.0%。胃癌端粒酶表达阳性者较阴性者PI和SPF明显升高。结论：胃癌端粒酶活性是判断肿瘤恶性程度的指标。与肿瘤细胞增殖活性有关。