新生大鼠HIBD后海马p-Tau蛋白与脑神经元凋亡表达变化

目的:观察微管相关蛋白磷酸Tau( p-tau)在缺氧缺血性脑损伤( HIBD)新生大鼠脑组织中的表达变化. 方法:将80只7日龄SD清洁级大鼠随机分为假手术组40 只和HIBD组(均按处死时间点分为3、6、12、24、48 小时5 个亚组)40只. 参照Rice法建立HIBD动物模型,假手术组仅暴露左颈总动脉,不作缺氧处理,2 组均于HIBD手术结束后3、6、12、24、48小时5个时间点断头取脑. 并分别取其脑组织切片,采用免疫组化S-P法检测其脑室周围白质区 p-tau 的表达,末端脱氧核苷酸转移酶缺口标志 ( TUNEL) 法检测其神经细胞凋亡. 结果:假手术组海马区有部分 p-tau蛋白表达及少量凋亡细胞, 各时间点无明显变化. HIBD组 p-tau的表达在3 小时后开始增加,12 小时达表达高峰后即开始呈下降趋势,与假手术组比较差异均有统计学意义 (F=95.67,p=0.000 <0.05) ;细胞凋亡在处理后3 小时即开始增加,至24小时小时达表达高峰,与假手术组比较差异均有统计学意义(F=18.829,p=0.001 <0.05). 结论:HIBD可造成新生大鼠海马区p-tau蛋白及神经元凋亡表达增加.     

神经生长因子对新生大鼠HIBD后海马区凋亡相关蛋白表达的影响

目的:应用新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,观察神经生长因子对海马区细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2和Bax的影响,探讨其神经保护作用的分子生物学机制. 方法:72只大鼠随机分为对照组、HIBD组和NGF治疗组. 应用改良RICE法制作大鼠HIBD模型,TUNEL法检测各组动物海马区细胞凋亡数,免疫组化染色观察Bcl-2, Bax蛋白的表达. 结果:与假手术组相比,新生大鼠HIBD后海马区存在不同程度的细胞凋亡,Bcl-2表达轻度升高,Bax表达明显升高. 与HIBD组比较,NGF治疗后,凋亡细胞减少(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.01),Bax表达下降(P＜0.01). 结论:HIBD后,新生大鼠海马区细胞存在细胞凋亡,NGF治疗增强Bcl-2表达,减少损伤基因Bax表达,抑制细胞凋亡,具有脑保护作用.     

微管相关蛋白Tau蛋白及Tau病的研究进展

Tau蛋白是微管相关蛋白家族的主要成员,其磷酸化水平的增高与多种中枢神经系统疾病密切相关,如阿尔茨海默病(Alzeimer's disease,AD)、癫痫、额颞叶痴呆、皮质基底节变性(corticobasal degeneration,CBD)、进行性核上性麻痹(progressive supranuclear palsy,PSP)、朊蛋白病等.Tau病是以异常磷酸化Tau蛋白聚集为病理特点的年龄相关性神经变性病.Tau病根据微管相关蛋白Tau(microtubule-associated proteins tau,MAPT)基因剪切不同分为6种同型异构体,外显子9、10、11、12各编码一个微管结合模序氨基酸重复序列,有外显子10编码氨基酸序列的Tau蛋白异构体为4R,其他的异构体为3R.皮克病(Pick's disease,PiD)中3R占优势,而皮质基底节变性和进行性核上性麻痹中4R占优势,根据MAPT中基因突变的位置,额颞叶痴呆FTLD-tau可以出现3R、4R或二者均有.本文综述了近年来在Tau蛋白及Tau病相关领域的研究进展.     

不同亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的探讨不同亚低温干预对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用.方法Wistar 7 d龄新生大鼠,随机分为缺氧缺血后29 ℃干预组、31 ℃干预组、34 ℃干预组、常温(37 ℃)恢复组、正常对照组(假结扎组).各组取20只动物于缺氧缺血后78 h处死,测定脑组织含水量及微管相关蛋白-2免疫组化染色;10只于生后42 d用迷宫实验检测其学习和记忆能力.结果与常温恢复组相比亚低温干预各组大鼠脑组织含水量及脑损伤程度显著降低,且随着温度的降低,脑组织含水量及脑损伤程度逐渐降低(P<0.05).亚低温干预各组大鼠学习和记忆能力显著高于常温恢复组(P<0.05),且随着温度的降低逐渐提高(P<0.05).结论亚低温干预可减轻新生大鼠HIBD,且随着温度的降低,效果越好,29 ℃亚低温干预短期效果优于31 ℃、34 ℃低温干预.     

IGF-1对缺氧缺血新生大鼠总Tau蛋白的影响

目的:本研究利用经典的新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)动物模型,观察应用胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)前后脑白质微管相关蛋白(microtubule-associated protein,MAP)总Tau水平的改变,探讨新生大鼠HIBD早期应用IGF-1后总Tau蛋白水平的改变与脑损伤的关系。方法:7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和用药组,分别给予同等剂量的磷酸盐缓冲液PBS(假手术组、模型组)和IGF-1(用药组)腹腔注射,给药后24小时采集标本。HE及嗜银染色法光镜下分别观察脑神经细胞和神经纤维的病理变化;免疫组化和Western Blot方法检测脑白质总Tau蛋白水平的表达。结果:(1)假手术组HE染色后脑白质神经细胞形态正常,轮廓清晰,核仁核膜明显,大小无变化,未见明显损伤性改变;模型组新生大鼠脑组织HE病理检测可见明显的毛细血管出血,细胞核固缩、核碎裂明显,模型建立成功。(2)假手术组脑神经细胞染色分布均匀,树突轴突沿其走行分布;模型组嗜银染色示神经纤维增粗,部分神经纤维呈缠结状;用药组神经纤维稍增粗,未见明显的神经纤维缠结。(3)免疫组化和WesternBlot检测用药组总Tau蛋白的值低于模型组(p(0.05),但高于假手术组(p(0.05)。结论:HIBD新生大鼠早期应用IGF-1对脑白质神经细胞和神经纤维具有保护作用,总Tau蛋白水平下降。     

新生大鼠脑白质损害时神经细胞凋亡及Nogo-B蛋白的表达变化

目的 探讨Nogo-B蛋白在新生大鼠脑白质损害(WMD)时的表达变化及意义.方法 将2日龄SD大鼠(n=90),随机分为实验组和对照组各45只,制成WMD模型;采用TUNEL法测定神经细胞凋亡及免疫组化(SP)法检测Nogo-B蛋白在脑室周围白质区不同时间点的表达变化.结果 实验组神经细胞凋亡在低氧缺血后3d达到高峰.与对照组比较,在4、12、24h、3、7d有统计学意义(0.05).实验组Nogo-B蛋白在低氧缺血后4h表达增加,3d达高峰,在4h、12h、3d、7d的表达与对照组相比,差异有统计学意义(0.05).结论 新生大鼠脑白质损害时,Nogo-B蛋白可能参与诱导脑白质神经细胞凋亡.     

缺血致新生大鼠脑室周围白质软化和远期神经行为变化

目的:建立新生大鼠脑白质损伤模型,探讨脑白质损伤后少突胶质细胞(OL)凋亡和远期神经行为的变化.方法:5日龄新生大鼠随机分为实验组和对照组,制作缺血性脑白质损伤动物模型;术后不同时间点观察生长发育,HE染色、免疫荧光标记观察脑组织病理形态改变、细胞变化,悬吊试验、旷场试验、拒俘反应测试神经行为学改变.结果:实验组生长发育明显慢于对照组,HE染色脑室周围白质疏松,侧脑室增大,髓鞘磷脂蛋白(MBP)免疫荧光标记实验组阳性细胞数较对照组明显减少(P<0.05),神经行为学检测实验组大鼠神经行为能力减退.结论:成功建立5日龄新生大鼠脑白质损伤模型,显示新生大鼠脑白质损伤是以脑白质少突胶质细胞损伤为主的病变.     

新生大鼠缺氧缺血脑组织水肿及水通道蛋白-4的表达变化

目的 探讨新生SD大鼠缺氧缺血不同时间点脑组织水肿及水通道蛋白-4 (AQP-4) 表达的功能意义。 方法 健康3 d龄SD大鼠60只, 分为对照组 (12只) 和缺氧缺血脑损伤模型 (HIBD)组 （48只)。HIBD 组行右侧颈总动脉结扎后,分为吸入80 mL/L O2+920 mL/L N2 4 h、8 h、16 h、24 h 四个亚组,每组12只大鼠。对照组仅行假手术, 不予右颈总动脉结扎和缺氧缺血。HIBD各亚组分别于持续缺氧缺血4 h、8 h、16 h、24 h后处死动物,对照组于手术后12 h处死。取脑组织分别进行HE染色观察脑组织病理改变、脑含水量测定、实时荧光定量PCR检测大脑海马AQP-4 mRNA表达。 结果 HE染色示:随着缺氧缺血时间延长,右脑神经细胞与胶质细胞肿胀进行性加重,24 h组神经细胞溶解损伤明显,胶质细胞稀疏变性。HIBD 组右侧大脑持续缺氧缺血8 h、16 h和24 h脑组织含水量均较对照组增加, 差异有统计学意义 (P<0.05);实时荧光定量PCR显示右脑海马AQP-4 mRNA表达较对照组减少 (P<0. 05)。 结论 新生大鼠缺氧缺血后脑组织水肿,海马AQP-4表达下调,提示AQP-4与脑组织水肿有关。     

高压氧对HIBD新生大鼠凋亡的影响

目的利用新生大鼠HIBD动物模型,观察HIBD后不同时间caspase-3（半胱氨酸蛋白酶3）的表达变化,TUNEL检测的凋亡灰度值的变化,探讨HBO与细胞凋亡的关系。方法7日龄大鼠,根据实验设计,观察caspase-3的表达和TUNEL测定凋亡灰度值的变化。结果凋亡灰度值和caspase-3的表达均于HIBD后24h达高峰,72h仍有少量表达。高压氧使凋亡减轻。结论HBO稳压30min和60min均可能通过抑制凋亡发挥神经保护作用。     

微管相关蛋白与肿瘤关系的研究进展

微管是由微管蛋白及微管辅助蛋白组成的中空管状结构,在细胞增殖、分化、迁移和肿瘤的发生中具有十分重要的作用。近年来研究表明,大多数肿瘤细胞中某些微管相关蛋白的异常表达引起微管动态系统的失衡,对肿瘤的发生发展起关键作用,因而成为肿瘤研究的热点。文中就微管相关蛋白与肿瘤的关系作一综述。     

海马区Bcl-2蛋白在新生大鼠脑缺血后的表达

目的：通过研究新生大鼠脑缺血时Bcl-2蛋白在海马区的表达特点,探讨Bcl-2蛋白在缺血缺氧性脑损伤的作用。方法：48只7日龄新生SD大鼠随机分为1个对照组和7个实验组。给动物吸入含有92%氮气和8%氧气混合气体建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）动物模型,分别在脑损伤后不同时间点（0.5、1、3、6、12、24、48、72 h等）断头处死动物,取海马组织,用免疫组织化学方法检测海马脑神经细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达情况。结果：TUNEL染色的阳性细胞数与Bcl-2蛋白阳性的细胞数在HIBD后的不同时间点出现分别有显著差异,海马区Bcl-2蛋白阳性细胞在HIBD后立即出现,6 h达到高峰。结论：Bcl-2蛋白强表达于海马缺血区和缺血周边区的神经元,与神经元的存活或死亡有一定联系。     

地塞米松预处理对缺氧缺血性新生大鼠脑组织单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

缺氧缺血前地塞米松预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用。而发育脑组织中单核细胞趋化蛋白 1(ＭＣＰ 1)是代表小胶质细胞应答脑缺氧缺血性损伤的一个功能性重要的分子信号[1] 。本实验通过研究地塞米松预处理对缺氧缺血性新生大鼠脑组织中ＭＣＰ 1蛋白表达的影响 ,探讨地塞米松预处理对缺氧缺血性脑损伤保护作用的机制。1　材料和方法1 1　材料48只 7日龄ＳＤ大鼠 ,性别不拘 ,体重 0 .0 10～ 0 .0 15ｋｇ,购自江苏省实验动物中心。一抗为羊抗大鼠ＭＣＰ 1多克隆抗体 (购自ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ,Ｉｎｃ)…     

微管相关蛋白与自噬的研究进展

微管相关蛋白和微管蛋白共同控制微管的组装和稳定性,进而调控一些重要的生理过程,例如:调节细胞物质运输,维持细胞形态,细胞分裂分化,肿瘤的发生及自噬的发生.本综述将重点关注于微管相关蛋白与自噬之间的联系.     

脂多糖对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的增敏作用

目的 :探讨感染是否对缺氧缺血造成的脑损伤有增敏作用。方法 :①用不同剂量脂多糖 (LPS)腹腔注射 7日龄Wistar大鼠 ,观察体温变化以确定引起亚临床感染LPS剂量 ;②用 7日龄Wistar大鼠分别制成缺氧缺血脑损伤 (HIBD)模型 (HI 5 5min)、感染与轻度HI联合作用脑损伤模型 (LPS +HI 2 0min)和对照组 ;③分别用微管相关蛋白 2 (MAP -2 )和肿瘤坏死因子 α(TNF α)免疫组化染色测脑梗塞面积和脑TNF α阳性细胞计数。结果 :①LPS 0 3mg/kg是引起亚临床感染的剂量 ;②LPS +HI 2 0min组与HI 5 5min组脑梗塞面积和脑组织TNF α阳性细胞计数明显增加 ,与对照组相比有显著差异 (P <0 0 5 ) ,LPS +HI 2 0min组与HI 5 5min组相比无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 :LPS对HI引起的脑损伤有增敏作用 ;其增敏作用可能是通过TNF α介导的炎症反应引起的。临床中对轻度窒息儿应警惕感染 /亚临床感染对HI脑损伤的增敏作用     

微管相关蛋白Tau mRNA在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨Tau mRNA在胃癌中的表达及与胃癌临床病理特征的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测10例正常胃组织与60例胃癌组织Tau mRNA的表达。结果:胃癌组织TaumRNA的表达高于明显正常胃组织(P0.05)。低分化胃癌Tau mRNA的表达明显高于高中分化胃癌,有淋巴结转移者Tau mRNA的表达明显高于无淋巴结转移者,TNMⅢ+Ⅳ期者Tau mRNA的表达明显高于Ⅰ+Ⅱ期者(P0.05)。结论:胃癌Tau mRNA的高表达可能在胃癌的分化、转移及侵袭过程中具有重要作用。     

微管相关蛋白在幼犬脑组织的表达

目的：：探讨微管相关蛋白(Doublecortin)在幼犬脑组织不同部位的表达,进一步研究出生后家犬神经发生和神经元迁移机制。方法：4只出生后幼犬给以正常饮食饲养2周,4%多聚甲醛溶液灌注取脑,通过免疫组织化学方法检测微管蛋白在幼犬脑皮层、室管膜下区、白质和海马的分布表达情况,观察不同部位新生神经元的形态和突起的伸展走行分布。结果：微管蛋白在脑皮层、室管膜下区、白质和海马均有分布,室管膜下区和海马齿状回表达最高,神经元突起表达明显,伸展方向较为一致,朝向大脑皮层。脑皮层第Ⅱ层以下层面均有表达。结论：家犬出生后早期脑组织仍有新生神经元产生,神经元生发区位于室管膜下区和海马齿状回,室管膜下区和齿状回新生神经元在迁移的过程中分化成熟,最终迁移至脑皮层,完成神经系统发育。     

GBE对HIBD新生大鼠脑组织MMP-9及TIMP-1表达影响的研究

目的 通过研究银杏叶提取物(GBE)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响,探讨GBE的脑保护作用及机制.方法 90只新生7dSD大鼠随机分为假手术组(n=30)、HIBD模型组(n=30)、GBE治疗组(n=30).模型制造成功后24 h、72 h、168 h三个时间点,采用干湿质量法测定大鼠脑组织含水量,RT-PCR法检测各组大鼠脑MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达情况.结果 CBE组神经系统异常症状较HIBD组更轻.HIBD组大鼠脑组织含水量在缺氧缺血后逐渐上升,72 h达到高峰,168 h开始下降.各时间点均高于假手术组(P＜0.05).同时,MMP-9及TMP-1mRNA表达量与脑含水量呈正相关.GBE治疗组明显小于HIBD模型组(P＜0.05),高于假手术组(P＜0.05).结论 GBE对HIBD脑损伤的保护作用可能与其调节MMP-9及TIMP-1的表达有关.     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后微管相关蛋白-2表达的影响

目的研究甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后微管相关蛋白-2（MAP-2）表达的影响。方法健康成年wistar大鼠66只,随机取6只作为正常对照组,60只制作成脊髓打击伤动物模型。模型大鼠随机分为甲基强的松龙组和治疗对照组,每组30只,分别于伤后1、3、7、14和28d取材,应用免疫组织化学方法观察MAP-2的表达,用改良的Tarlov评分观察大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复情况。结果大鼠脊髓损伤后7和14d,甲基强的松龙组MAP-2的表达强于治疗对照组;大鼠脊髓损伤后7、14和28d,甲基强的松龙组Tarlov评分大于治疗对照组。结论甲基强的松龙能促进大鼠损伤脊髓表达MAP-2,并能促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复。     

大鼠微管相关蛋白4重组腺病毒载体的构建及在细胞中的表达鉴定

目的构建大鼠微管相关蛋白4(m icrotubu le-ossoc iated prote in 4,MAP4)重组腺病毒载体,并转染新生大鼠体外培养的心肌细胞进行表达和鉴定,为真核表达及有关实验研究提供基础。方法设计1对引物,应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,从大鼠心肌细胞总mRNA中扩增出MAP4 cDNA,并将MAP4 cDNA克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle2中,构建pShuttle2-MAP4表达质粒。将此表达质粒扩增纯化酶切获得含有目的片段MAP4 cDNA的表达盒与Ad-eno-X V iru l DNA重组并线性化后转染HEK293T细胞,包装产生大鼠MAP4重组腺病毒。并且转染新生大鼠原代心肌细胞,应用免疫组化的方法进行表达鉴定。结果扩增所得的MAP4 cDNA片段经酶切鉴定、PCR扩增、DNA测序最终确定为大鼠MAP4基因,所得大鼠MAP4重组腺病毒滴度为2.3×108pfu/m l。转染原代心肌细胞48 h后MAP4表达显著增强。结论为研究MAP4的生物学活性及功能的基因治疗提供了基础。     

氟西汀对抑郁症大鼠杏仁核磷酸化微管相关蛋白-2表达的影响

目的：探讨氟西汀对抑郁症大鼠杏仁核磷酸化微管相关蛋白-2（pMAP-2）表达的影响,为研究氟西汀药效机制提供实验依据。方法：将雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和氟西汀组,采用慢性不可预见性温和应激方法建立抑郁大鼠模型,采用糖水偏好实验、悬尾实验、Morris水迷宫实验进行行为学检测,免疫印迹方法检测pMAP-2蛋白表达,RT-PCR法检测pMAP-2 mRNA表达。结果：模型组和氟西汀组大鼠体质量增长率、糖水偏好百分比低于对照组（P<0.05）,悬尾不动时间和逃避潜伏期高于对照组（P<0.05）;氟西汀组大鼠体质量增长率、糖水偏好百分比高于模型组（P<0.05）,悬尾不动时间和逃避潜伏期低于模型组（P<0.05）。模型组和氟西汀组大鼠杏仁核pMAP-2蛋白和mRNA表达高于对照组（P<0.05）,氟西汀组低于模型组（P<0.05）。结论：氟西汀能逆转应激抑郁大鼠杏仁核组织中pMAP-2的增高。