生物素标记HBV DNA探针在肝石蜡切片上作原位杂交技术的研究——Ⅱ、与斑点杂交、吸印杂交的比较

对生物素标记HBV DNA探针的原位杂交与~(32)P标记的HBV DNA探针的斑点杂交和吸印杂交作了比较。三者阳性率分别为33.33％(25/75)、36.36(16/44)和15.38％(4/26),三者无统计学差异。16例同时用原位杂交和吸印杂交检测,4例二者均为阳性,9例二者均为阴性,原位杂交多检出3例阳性,二者有显著的相关性(p=0.0192)。30例同时作了原位杂交和斑点杂交,其中17例结果一致,13例结果不一致,两者无显著相关性(p>0.05)。并比较了原位杂交与其它两种杂交方法的优缺点。     

简便的生物素标记探针与石蜡组织切片DNA－DNA原位杂交技术

以生物素标记的ＥＢ病毒Ｗ片段为探针，亲和素为检测手段，探索了在常规石蜡切片标本中检测ＥＢ病毒ＤＮＡ的原位分子杂交技术。通过简化标本杂交前的处理过程，较好地保持了细胞的形态，增加了信号定位的准确性。针对生物素检测系统存在非特异性信号的缺点，提出并强调了设立相邻切片无探针对照的必要性。     

光敏生物素标记HBV cDNA及金标链亲和素系统在石蜡切片原位杂交中的应用

核酸分子杂交方法是当今分子生物学研究中不可缺少的一项技术。在组织切片上进行核酸分子原位杂交,是近年来发展起来的一项新方法。应用石蜡包埋组织进行原位杂交DNA检测,取材很少,不需抽提核酸,操作简便,可进行组织内与细胞内定位研究,最大的优点是可应用长期保     

生物素标记HBV DNA探针在肝石蜡切片上作原位杂交技术操作和经验体会

在肝组织切片上作HBV DNA的原位杂交实验,是 Soathern blot分子杂交方法(吸印法)之后发展起来的又一种新方法。原位杂交法与吸印法相比有其优点:首先,它是在肝组织切片上进行,不仅可观察HBVDNA的分布和数量等,还可观察HBV DNA与细胞病变的关系,这是吸印法所不及的;其次,原位杂交法所需肝组织少,而吸印法     

肝细胞内HBV DNA原位杂交的研究

应用生物素标记HBV DNA(乙肝病毒脱氧核糖核酸)作探针,对129例肝病患者肝组织作原位杂交研究。HBV DNA在慢性活动性肝炎中检出率最高(80.7％),显著高于肝硬化、慢性小叶性肝炎、急性肝炎及原发性肝癌组。具有乙肝复制指标阳性患者的肝细胞内HBV DNA检出率(82.0％)明显高于非复制组(63.0％),P<0.05。本研究观察到;HBB DNA阳性肝细胞与肝细胞坏死灶关系密切,多位于肝细胞坏死灶中间或(和)周边,其中以局灶型分布的HBVDNA阳性肝细胞与肝细胞坏死灶关系密切。提示HBV复制与肝细胞坏死有关。     

生物素标记HBVDNA探针在肝石蜡切片上作原位杂交技术的初步研究

应用生物素标记探针的原位杂交技术,检测肝石蜡切片上HBVDNA,国内尚未见报道。本文用美国Enzo Biochem公司生产的生物素标记HBVDNA探针,成功地用原位杂交技术,观察了75例慢性乙型肝病患者肝石蜡切片上HB V DNA的定位和形态。 操作步骤参照M.Rijntjes方法,并作部分修改。简述如下:肝切片常规脱蜡至80％酒精去内源酶     

生物素标记HBVDNA探针原位杂交碱性磷酸酶过氧化物酶显色检测肝内HBVDNA

本研究应用国产生物素标记HBVDNA探针,于福尔马林固定,石蜡包埋肝组织切片上,建立了碱性磷酸酶过氧化物酶显色的原位杂交技术,在此过程中发现,蛋白酶的消化是杂交能否成功的关键因素,酸、三乙醇酐、洋地黄的预处理,能促进探针参入,降低非特异背景,减低蛋白酶作用浓度或作用时间,因而提高实验稳定性、特异性。并用这一技术检测了34例肝活检和4例尸检肝组织,结果:尸肝组织均检出了HBV—DNA,其中2例核型见于肝硬化,肝癌旁组织,而2例浆型HBV—DNA见于慢活肝,亚重肝。34例肝活检组织中,只检出12例浆型HBV—DNA,其中CAH—CPH无症状携带者中检出率分别为42.9％,38.8％,33.3％,均明显高于肝硬化组织(16.7％)(P<0.05)。由此可见浆型HBV—DNA分布同病变轻重程度的关系可能并不密切,不同分布型的HBV—DNA可能只反映HBV的复制状态。     

地高辛标记探针与生物素标记探针用于斑点杂交检测HBV DNA的初步研究

为研究地高辛标记和生物素标记核酸探针斑点杂交检测ＨＢＶ ＤＮＡ的敏感性、特异性和稳定性，用两种探针和＾３２Ｐ标记探针进行平行检测对照。结果表明，地高辛探针检测灵敏度为０．１Ｐｇ，已达到＾３２Ｐ标记探针水平。生物素探针为１￣１０Ｐｇ。两种探针与＾３２Ｐ标记探针相比。符合率分别９６．６５％和８９．１３％；敏感性分别为９４．４４％和８３．３３％；特异性分别为９６．４３％和９２．８６％。两种探针在－２０℃     

电泳印迹和分子杂交技术在肝内HBV DNA研究中的应用

应用DNA电泳转移、生物素探针Southern杂交及不同探针重复杂交等3项新技术研究肝炎肝癌的肝内HBV DNA分子状态。经过方法学比较以电泳印迹取代毛细渗吸法对65例肝炎肝癌病人的101份肝内组织DNA进行尼龙膜快速转移和HBV DNA杂交,结果检出HBV DNA分子状态里整合型15份、游离型31份、整合型合并游离型30份。其中12例乙型肝炎标本为经生物素探针杂交检测,结果全部检出游离型HBV DNA。还有3例乙型肝炎标本和2例其它肝炎标本为经重复杂交检测,即先用~(32)P探针杂交继去探针再用生物素探针杂交,结果乙型肝炎标本两次杂交HBV DNA都阳性,其它肝炎标本两次均阴性。阳性者表现为3.2kb和2.3kb电泳位置呈现杂交带,代表HBV之松弛环状和超螺旋状结构。由于两种探针各含不同序列,故结果可对待检基因进行初步序列分析。本实验表明,上述3项技术对临床医学研究有广泛的应用价值。     

Preliminary Studies of in situ Hybridization in Routine Paraffin Embedded Liver Tissue Sections with iotinylated HBV DNA Probe:Localization and Morphology of HBV DNA in Various Types of Liver Diseases

The in situ hybridization of HBV DNA with biotinylated probe informalin-fixed and paraffin-embedded liver tissue sections was performed and thelocalization and morphology of HBV DNA in various types of chronic liver diseases wereobserved.25 out of the 75 cases studied were HBV DNA positive (33.3%).HBV DNA inhepatocytes was demonstrated as numerous coarse grains in cytoplasm and occasionally afew grains in individual nuclei.The distribution of the HBV DNA positive hepatocytes inthe sections was in 3 types,i.e.,the diffuse type (Type I,4/25,16%),the focal type (Type Ⅱ,20/25,80%),and the scattered type (Type Ⅲ,1/25,4%).The HBV DNA grains incytoplasm might be condensed (Type a) or sparsed (Type b) depending on the number of theHBV DNA grains.The different distribution patterns and the amount of HBV DNAgrains might be a reflection of the replication activity and the state of infectivity of HBV.HBV DNA positive hepatocytes were found only in the tissues contiguous to the cancertissue in cases with hepatocellular carcinoma with cirrhosis.     

地高辛配基标记HBV DNA探针与生物素标记探针用于肝组织原位杂交的探讨

作者应用地高辛配基标记HBV DNA探针进行原位杂交,检测16例(重症肝炎10例、HBsAg阳性3例、非肝脏疾病3例)肝组织标本内HBV DNA。结果表明:HBV DNA阳性物质在肝细胞内的分布有全胞浆型、包涵体型、全胞核型及核仁-核膜型4种方式。进一步说明地高辛配基标记探针原位杂交可以在一定程度上反映HBV DNA在细胞内的存在状态。作者将地高辛配基标记HBV DNA探针原位杂交与生物素标记探针进行比较,结果前者较后者灵敏度高、特异性强、实用性好,是理想的检测HBV DNA的新一代非同位素探针。     

抗HBe阳性慢性肝炎患者的HBV感染状态研究

本文结合肝内HBsAg与HBcAg的表达情况对15例抗-HBe阳性慢性肝炎患者进行了肝细胞内HBV DNA原位杂交分析。发现其HBV感染状态可分为3种类型;①HBV活动复制型(4例,26.7％),肝内HBV DNA、HBsAg、HBcAg三者或HBsAg、HBcAg阳性;②HBV不完全复制或表达型(8例,53.3％),肝内HBV DNA、HBsAg阳性;③HBV非复制型(3例,20.0％),肝内HBV DNA及HBV标志均阴性。提示:在血清HBeAg向抗-HBe转换的病例中,HBV感染状态不尽相同,部分患者仍存在HBV活动性复制,少数病例的HBV复制已停止,半数病例处于由活动性复制相向非复制相过渡阶段。     

用生物素标记的DNA探针检测尖锐湿疣和宫颈癌中的人类乳头瘤病毒DNA序列

用生物素标记的HPV6/11DNA和HPV16/18DNA探针,对尖锐湿疣和宫颈癌标本进行原位杂交。结果大多数尖锐湿疣含HPV6/11DNA,所以尖锐湿疣的主要致病因子是H2V6/11.HPV6/11DNA阳性细胞主要位于上皮的表层,少数位于深层。个别合并HPV16/18感染,或仅为HPV16/18所感染的病人恶变的可能性大。大多数宫颈癌病人含HPV16/18DNA,提示宫颈癌的主要致病因子为HPV16/18。一些病人合并HPV6/11感染。在未找见HPV16/18DNA的病例中,可能存在其它致癌因子。     

用生物素标记的DNA探针检测尖锐湿疣和宫颈癌中的人类乳头瘤病毒DNA序列

用生物素标记的HPV6/11DNA和HPV16/18DNA探针,对尖锐湿疣和宫颈癌标本进行原位杂交。结果大多数尖锐湿疣含HPV6/11DNA,所以尖锐湿疣的主要致病因子是H2V6/11.HPV6/11DNA阳性细胞主要位于上皮的表层,少数位于深层。个别合并HPV16/18感染,或仅为HPV16/18所感染的病人恶变的可能性大。大多数宫颈癌病人含HPV16/18DNA,提示宫颈癌的主要致病因子为HPV16/18。一些病人合并HPV6/11感染。在未找见HPV16/18DNA的病例中,可能存在其它致癌因子。     

A study on the Appearance of HBV DNA in the Liver and Serum of Patients with HDV/HBV Infection

The appearance of HBV DNA in the liver and serum of 15 patients with hepatitisB conifected with HDV was observed and compared with that of 13 HDV-negative cases.Itwas found that HBsAg titer was lower than or equal to 1:4 in 8 HDV-positive patients,inwhom it was temporally negative in 5,and negative during the,two-day hospitalization in 1.No similar result could be observed in the HDV-negative cases.The detection rate of HBVDNA in both the HDV positive and negative groups was 20.0％ (3/15) and 25％ (3.12) in se-rum,and 46.7％ (7/15) and 61.5％ (8/13) in the liver rcspectively.There was no signif-icant statistical difference between the 2 groups.The HBV DNA grains detected with in situ hybridization,with biotinylated HBV DNAprobe were demonstrated in the sparse type of distribution in 3 cases and lightly stained in 2.Itis believed that HBV DNA replication activity might be suppressed by HDV.However activeHRV DNA replication was also present in some HDV-positive patients and HBV DNA was posi-tive in both the liver and serum in 3 such patients.It was concluded that the difference of the detection rate of HBV DNA in HDV-positivepatients might be related to the different stages of HDV infection.     

乙肝病毒相关性肾炎肾组织中HBVDNA分布的分子生物学检测

应用原位杂交（ＩＳＨ）技术观察１２例血清乙肝病毒（ＨＢＶ）标志物阳性的肾炎病人肾组织中ＨＢＶＤＮＡ的存在状况。结果表明，采用地高辛素（Ｄｉｇ）标记ＨＢＶＤＮＡ全长段探针ＩＳＨ时１０例肾组织中显示有ＨＢＶＤＮＡ。这１０例用Ｓ＋Ｃ段探针检测仍阳性者８例，ＨＢＶＤＮＡ最常见于肾小管上皮细胞内，呈核型或浆核型，其次是肾小球系膜区和毛细血管袢。ＬＳＡＢ免疫组化法示ＨＢｓＡｇ与ＨＢＶＤＮＡ的存在部位相吻合。提示ＨＢＶ引起的肾脏病变不仅是免疫介导的损害，亦可能有病毒直接侵犯，从分子病理水平为探讨ＨＢＶ相关性肾炎发病机理提供了新的依据。     

乙型肝炎病人血清HBV DNA水平与血清标志物的关系

目的研究乙型肝炎病人血清标志物与HBV DNA的关系。方法血清HBV DNA定量检测应用FQPCR法,抗原、抗体检测应用ELISA法。抗原、抗体分别与DNA定量进行相关性分析。结果HBeAg的OD值与DNA定量呈正相关（P＜0.001）,HBeAg的OD值与HBV DNA定量不相关（P＜0.2）,抗-HBe与DNA定量呈负相关（P＜0.001）。结论血清HBeAg的OD值可很好反映体内HBV的复制程度,HBeAg的OD值与病毒复制程度无关。HBeAg转化为抗-HBe后病毒复制水平下降。