内源性1,25（OH）2D3缺乏对哺乳期小鼠牙齿矿化和牙本质形成的影响

目的:研究内源性1,25(OH)2D3缺乏对哺乳期小鼠牙齿矿化和发育的影响。方法:利用X线检测、HE染色、组织化学、免疫组织化学以及real-time RT-PCR等方法检测2周龄同窝的WT和1α(OH)ase-/-小鼠下颌牙齿。结果:和2周龄WT小鼠相比,1α(OH)ase-/-小鼠下颌磨牙的X线透光率明显增加;1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙及下颌切牙前期牙本质厚度与WT小鼠厚度有统计学差异。1α(OH)ase-/-小鼠下颌磨牙总胶原阳性面积与WT小鼠有统计学差异;1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙牙本质I型胶原阳性面积与WT小鼠有统计学差异(P<0.05);OCN在1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙的牙本质和牙髓相对阳性面积与WT小鼠相对阳性面积有统计学差异(P<0.01);Biglycan在1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙的牙本质相对阳性面积与WT小鼠相对阳性面积有统计学差异(P<0.01);OCN与ALP在1α(OH)ase-/-小鼠下颌切牙牙髓细胞中mRNA的表达水平较WT小鼠有明显降低,有统计学差异(P<0.05)。结论:内源性的1,25(OH)2D3缺乏导致哺乳期小鼠牙齿的牙本质矿化不良和牙本质的形成减少。     

1,25(OH)2D3激动髁突软骨细胞内Ca2+释放及其机制的研究

目的：探讨1，25(OH)2D3激动体外培养的兔髁突软骨细胞内Ca^2 的释放及其通道。方法：消化法培养2周新西兰白兔的髁突软骨细胞，分别进行20g／L肝素、1g／L普鲁卡因细胞内Ca^2 通道阻断处理，经钙荧光指示剂Fluo-3负载后，用激光扫描共聚焦显微镜测定l，25(OH)2D3刺激前后髁突软骨细胞内Ca^2 随时间变化情况。结果：10^-8mol／Ll，25(OH)2D3100μL刺激后对照组细胞内荧光强度随时间明显升高；普鲁卡因处理组变化与其相似，而肝素处理组在刺激前后细胞内荧光强度无明显的变化。结论：1，25(OH)2D3能激动髁突软骨细胞内三磷酸肌醇受体(IP3R)Ca^2 释放通道开放，使细胞内Ca^2 水平显著升高。     

1,25-(OH)2 Vit D3对小鼠牙囊细胞分化的影响

目的:探讨1,25-(OH)2V it D3对小鼠牙囊细胞向成骨细胞(成牙骨质细胞)分化能力的影响。方法:第3代小鼠牙囊细胞与10-8mol/L的1,25-(OH)2V it D3共孵育3、5、7、9 d后,测定其对牙囊细胞增殖、碱性磷酸酶(alkaline phosphotase,ALP)活性、蛋白含量及骨钙素(osteocalc in,OC)表达的影响。结果:在5~7 d的时间范围内,1,25-(OH)2V it D3能显著促进牙囊细胞的增殖(P<0.05),在5~9 d内能提高ALP活性(P<0.01),增加OC阳性细胞率(P<0.05),但在9 d时能使总蛋白含量下降(P<0.05)。结论:1,25-(OH)2V it D3能促进牙囊细胞的增殖及向成骨细胞方向分化,但对蛋白合成有抑制作用。     

渐进性咬合紊乱对大鼠髁突软骨中骨形成蛋白2表达的影响

目的：探讨渐进性咬合紊乱所致大鼠髁突软骨改建中骨形成蛋白2（BMP-2）的变化情况及其意义。方法：建立幼年和成年大鼠渐进性咬合紊乱模型,应用免疫组化SABC法检测大鼠髁突软骨中BMP-2的表达变化,并作图像分析和统计学处理。结果：幼年和成年实验组大鼠左右侧髁突软骨中BMP-2的表达差异无统计学意义。与对照组相比,幼年和成年实验组中BMP-2的表达于实验4周时均低于对照组（P〈0.01）,之后出现回升,8周时两组均高于对照组（P〈0.05）。不同时间点比较,幼年与成年实验组中BMP-2的表达在2~8周的时间内均出现先降低再增高的趋势。结论：BMP-2参与了髁突软骨随咬合变化而发生的改建活动。     

白介素-6与1,25(OH)_2维生素D_3联合作用下大鼠骨髓破骨细胞的体外诱导培养

目的观察联合应用白介素(IL)-6和1,25(OH)2D3对大鼠骨髓破骨细胞生成诱导的影响。方法采用4周龄SD大鼠无菌条件下取出股骨,剪去两骺端,以α-MEM培养液将骨髓细胞冲出,然后将细胞悬液接种于预置盖玻片或牙本质片的24孔培养板内,24 h后换液。试验分为4组,A组:不加任何诱导因子;B组:加入IL-6(10 U/ml);C组:加入1,25(OH)2D3(1×10-8mol/L);D组:加入IL-6(10 U/ml)和1,25(OH)2D3(1×10-8mol/L)。每组各6孔,于培养的第7天进行多核细胞计数。结果培养1周左右IL-6与1,25(OH)2D3在体外均可单独诱导骨髓破骨细胞的形成,但D组多核细胞数与B、C组相比差异有显著性(P<0.05)。结论IL-6与1,25(OH)2D3联合作用下对骨髓破骨细胞生成的诱导效果明显高于单因素诱导效果。     

咬合紊乱与去除咬合紊乱对大鼠髁突软骨中骨形成蛋白-2表达的影响

目的探讨咬合紊乱与去除咬合紊乱大鼠髁突软骨内骨形成蛋白- 2（BMP- 2）的变化。方法幼年和成年雌性大鼠各9只,等分为咬合紊乱组、去除咬合紊乱组和对照组。咬合紊乱组在建立咬合紊乱8周后处死,去除咬合紊乱组在建立咬合紊乱6周时拔除造成紊乱的双侧第一磨牙,2周后处死。对照组不作任何处理,同环境饲养、同期处死。测量各组髁突组织切片上软骨前、中、后部的厚度,SABC法检测软骨前、中、后部BMP- 2的表达。结果成年咬合紊乱组髁突软骨中部变薄,后部增厚;去除咬合紊乱后后部恢复正常,中部仍薄于对照组（P<0.05）。幼年髁突软骨的前、中、后部厚度三组间未见显著性差异（P>0.05）。幼年髁突软骨前、中、后部咬合紊乱组BMP-2表达高于去除咬合紊乱组和对照组（P<0.05）,成年髁突软骨中部咬合紊乱组和去除咬合紊乱组均高于对照组（P<0.05）,后部咬合紊乱组高于和去除咬合紊乱组,后者高于对照组（P<0.05）,前部无差异。结论咬合紊乱可导致幼年和成年大鼠髁突软骨BMP- 2高表达,成年大鼠髁突软骨对咬合紊乱的适应能力较幼年大鼠差,中部尤为明显。     

功能性矫治器引导下颌后退对大鼠髁突软骨新骨形成影响的实验研究

目的探讨功能性矫治器引导下颌后退所致的髁突软骨新骨形成的影响。方法选用4周龄SD雄性大鼠45只,分为实验组及对照组,每组5只。实验组模拟临床功能性矫治器引导大鼠下颌后退。分别在0、3、7、14及21 d全麻下处死动物各5只。苏木精-伊红染色观察细胞形态反应,PAS染色观察新骨形成量。结果大鼠在下颌持续后退情况下,实验组髁突后份软骨组织增殖层和成熟层明显变薄,移行区可见破骨细胞增加,此区附近的骨小梁骨沉积减少;实验第3天及第7天,实验组和对照组髁突软骨新骨形成的量有明显区别,第14天和第21天,二者间的差别趋于减小。结论后退大鼠下颌后,髁突软骨后份新骨形成量减少。     

浓缩生长因子与1,25二羟基维生素D3对骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响

目的:研究浓缩生长因子(concentrated growth factor,CGF)及其与1,25二羟基维生素D3(1,25(OH)_2VD_3)联合应用时,对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的影响。方法:全骨髓培养法提取、分离SD大鼠股骨BMSCs,分别采用6种不同培养液而分为6组。使用SD大鼠血液在Medifuge离心机中制备CGF,并收集CGF浓缩液。实验A、B、C组,分别为采用含5%、10%和20%浓度CGF的L-DMEM培养液组,单独使用1,25(OH)_2VD_3(10~(-10)mol/L)的为D组。B组与D组混合为E组。F组为空白对照组。采用上述6组培养基孵育BMSCs 7 d。采用CCK-8实验评价大鼠BMSCs在不同条件下的生长增殖情况;ALP活性染色实验检测各组ALP的生成,实时定量PCR检测成骨分化标志物基因OCN、Col-1和Runx2共3种成骨分化标志物基因的表达情况。结果:5%和10%的CGF浓缩液能促进大鼠BMSCs增殖,且10%浓度优于5%浓度。而20%CGF和1,25(OH)_2VD_3(10~(-10)mol/L)都抑制了大鼠BMSCs的增殖。1,25(OH)_2VD_3(10~(-10)mol/L)与CGF(10%)浓缩液联合应用时,细胞增殖介于两者之间。A、B、C组ALP活性及OCN、Col-1和Runx2的mRNA表达均受到了抑制。D组和E组均促进了大鼠BMSCs的ALP活性,并提高了OCN、Col-1和Runx2的mRNA表达水平。结论:CGF浓缩液(10%)与1,25(OH)_2VD_3(10~(-10)mol/L)的联合应用,可促进大鼠BMSCs的增殖,并对其成骨分化具有促进作用。     

1,25(OH)2D3对2型糖尿病伴牙周炎患者中性粒细胞凋亡及炎性介质表达的影响

目的:探讨1,25(OH)₂D₃对2型糖尿病伴牙周炎患者中性粒细胞(Polymorphonuclear leukocytes,PMN)凋亡及炎性介质表达的影响。方法:采用密度梯度离心法分离2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN,然后于含或不含1,25(OH)₂D₃培养液中培养24 h,分别运用流式细胞术(FCM)检测PMN凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)的含量变化。结果:与1,25(OH)₂D₃未干预组相比,1,25(OH)2D3干预组PMN凋亡率均升高,P<0.05; 1,25(OH)2D3干预组两两比较发现,10-8 mol/L干预组PMN凋亡率＞10^-6 mol/L干预组＞10^-10 mol/L干预组(P<0.05)。ELISA检测PMN上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的结果显示,1,25(OH)₂D₃干预组TNF-α、IL-1β、IL-6、NE的水平均较未干预组低(P<0.05)。结论:1,25(OH)₂D₃能够促进PMN凋亡,下调炎性介质的表达,在2型糖尿病伴牙周炎的发生、发展中可能起免疫调节作用。     

不同浓度1,25-二羟基维生素D3对体外培养破骨样细胞骨吸收作用的影响

目的:观察不同浓度的1,25-二羟基维生素D3对体外培养破骨样细胞骨吸收作用的影响.进一步阐述骨吸收刺激因子在正畸牙周组织改建中的作用.方法:应用不同浓度的1,25-二羟基维生素D3(0、10-10、10-8、10-6mol/L)诱导大鼠骨髓破骨样细胞的形成,观察细胞在牙本质片上形成骨吸收陷窝的数目以及陷窝面积的大小;并采用原位杂交技术检测大鼠骨髓细胞的ODF mRNA表达.结果:随着1,25-二羟基维生素D3浓度的增加,骨陷窝数明显增多,陷窝面积增大;ODF mRNA表达的阳性信号显著增强.结论:在体外,1,25-二羟基维生素D3可以调节大鼠骨髓破骨样细胞的形成及骨吸收活性.     

1,25-二羟维生素D3对骨髓破骨细胞形成和破骨细胞分化因子mRNA表达的影响

目的：观察不同浓度的1，25-(0H)2D3对骨髓单个核细胞诱导形成破骨细胞和对单个核细胞ODF mRNA表达的影响。进一步阐明骨吸收刺激因子在破骨细胞性骨吸收中的作用机制。方法：应用不同浓度的1，25-(0H)2D3(0、10^-10、10^-8、10^-6moL／L)诱导大鼠破骨细胞的形成，观察形成破骨细胞的数目，并采用原位杂交技术检测骨髓细胞ODF mRNA的表达。结果：随着l，25-(0H)：D，浓度的增加，多核细胞计数增多；ODF mRNA表达的阳性信号显著增强。结论：1，25-(0H)2D3通过调节骨髓细胞ODF mRNA的表达，影响破骨细胞的形成和功能，进而调节局部骨微环境内骨吸收与骨形成平衡的变化，影响骨组织改建。     

1,25二羟维生素D3缺乏对小鼠继发性牙本质生成、矿化和龋损的影响

目的探讨1,25二羟维生素D3[1,25（OH）2D3]对小鼠继发性牙本质生成和矿化的作用。方法利用苏木精-伊红（HE）染色、免疫组织化学染色和碱性磷酸酶（ALP）组织化学染色方法,比较分析6周龄野生型和1α 羟化酶基因敲除小鼠[1α（OH）ase-/-小鼠]下颌骨矿化的差异。结果与野生型小鼠相比,1α（OH）ase-/-小鼠下颌第一磨牙龋损明显增加,面继发性牙本质面积明显减少,Ⅰ型胶原及OCN在继发性牙本质的阳性比例明显减少,Biglycan在继发性牙本质的阳性比例明显增加,ALP明显减少。结论1,25（OH）2D3缺乏会导致小鼠继发性牙本质生成、矿化减少和龋损增加。     

人牙乳头细胞分化过程中胞内Ca~(2 )浓度变化和1,25(OH)_2D_3对Ca~(2 )影响

目的 :探讨人牙乳头细胞不同分化阶段和 1,2 5 (OH) 2 D3 作用下细胞内Ca2 的变化。方法 :体外培养人牙乳头细胞 ,利用激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca2 浓度的变化。结果 :具有某些成牙本质细胞表型的细胞 (2 1d)胞内Ca2 浓度比无分化表型的细胞 (14d)高约 2倍 ;1,2 5 (OH) 2 D3 使 2 1d组细胞胞内Ca2 明显升高 ,而 14d组则无明显变化。结论 :人牙乳头细胞在分化过程中胞内Ca2 浓度上调 ;1,2 5 (OH) 2 D3 能提高牙乳头细胞静息内Ca2 水平以达新的Ca2 稳态 ,促进牙乳头细胞分化     

1,25-(OH)2D3作用下人牙周膜细胞破骨细胞分化因子及破骨细胞发生抑制因子的表达及意义

目的观察1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对体外人牙周膜细胞(HPDLC)破骨细胞分化因子(ODF)mRNA及破骨细胞发生抑制因子(OCIF)mRNA表达的影响,探讨正畸牙周组织改建的分子机制。方法以不同浓度的1,25-(OH)2D3(0、1×10-10、1×10-8、1×10-6mol/L)作用于体外培养的人牙周膜细胞,利用原位杂交染色及RT-PCR检测技术,检测不同浓度的1,25-(OH)2D3作用于体外培养人牙周膜细胞ODF、OCIFmRNA表达的强度变化。结果随1,25-(OH)2D3浓度的升高,人牙周膜细胞ODFmRNA的表达升高,而OCIFmRNA的表达降低。结论1,25-(OH)2D3在体外可影响人牙周膜细胞ODFmRNA和OCIFmRNA的表达,从而通过调节ODF和OCIF相对含量的变化,影响牙周组织改建过程。     

Effects of 1,25 - （OH） 2 D3 on Stimulation of Osteoclast - like Cells Formationand Expression of ODF mRNA in Murine Marrow Cells in Vitro

目的：观察不同浓度的1，25-(OH)2D3对破骨细胞形成及对骨髓细胞ODFmRNA表达的影响：进一步阐明骨吸收刺激因子在正畸牙周组织改建中的作用。方法：应用不同浓度的1，25-(OH)2D3(0、10^-10、10^-8、10^-6mol／L)诱导大鼠骨髓细胞破骨样细胞的形成，采用体外破骨细胞溶骨模型，观察牙本质片上骨吸收陷窝数目，采用原位杂交技术检测骨髓基质细胞ODF的mRNA表达。结果：随着1，25-(OH)2D3浓度的增加，骨陷窝数明显增多，陷窝面积增大；ODF mRNA表达的阳性信号显著增强。结论：在体外，1，25-(OH)2D3可以调节破骨细胞的骨吸收活性，进而调节局部骨微环境的骨吸收及骨形成平衡的变化。