Retinoic acid receptor β is required for anti-activator protein-1 activity by retinoic acid in gastric cancer cells

Objective To investigate the role of retinoic acid receptor β (RARβ) in mediating inhibitory effect of all-trans retinoic acid (ATRA) on activator protein-1 (AP-1) activity in gastric cancer cells. Methods Transient transfection and chloramphenicol acetyltransferase (CAT) assay, Northern blot, gene transfection, 3-［4,5-dimethylthiazol-2-yl］-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay, and anchorage-independent growth assay were used.Results Transient transfection of RARβ expression vector into MKN-45 cells resulted in the RARβ concentration-dependent repression of AP-1 activity induced by 12-o-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA), regardless of the presence of ATRA. When the c-jun and c-fos expression vectors were cotransfected with the RARβ expression vector into MKN-45 cells, AP-1 activity was also obviously repressed. The inhibitory effect, again, was RARβ-concentration-dependent. The stable transfection of the RARβ gene into MKN-45 cells led to cell growth inhibition and colony formation inhibition by ATRA. Furthermore, Cotransfection of both RARβ/DNA binding domain (DBD) and reporter gene could not alter AP-1 activity, even in the presence of ATRA. However, when the cotransfection was substituted with the RARβ/ligand binding domain (LBD), the inhibition was significantly enhanced by ATRA. Conclusion RARβ might be required for anti-AP-1 activity, and contribute to growth inhibition of gastric cancer cells by ATRA.     

Growth inhibition of gastric cancer cells by all-trans retinoic acid through arresting cell cycle progression

目的　探讨ATRA调节胃癌细胞生长的作用机理。方法　Westernblot测定蛋白表达水平 ,免疫沉淀测定蛋白激酶活性 ,MTT方法检测细胞生长和流式细胞术分析细胞周期。结果　ATRA有效地诱导细胞滞留G0 /G1期并抑制胃癌细胞生长。ATRA通过依赖P5 3和非依赖P5 3途径诱导ATRA敏感细胞的P2 1WAF1/CIP1表达 ,由此导致CDK4 和CDK2 活性下降 ,但对CDK4 和CDK2 蛋白表达没有影响。另外 ,由于ATRA抑制CDK4 和CDK2 活性 ,导致Rb蛋白去磷酸化水平上升。结论　ATRA通过调节细胞周期进程的相关蛋白而抑制胃癌细胞生长。     

维甲酸和干扰素联合应用诱导膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的 :研究维甲酸和干扰素联合应用对膀胱癌细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用及其可能分子机制。方法 :应用全反式维甲酸 (ATRA)和 9-顺式维甲酸 (9cRA)联合干扰素α 2a(IFNα 2a)作用于 4组膀胱癌细胞 ,运用TUN NEL、FCM、RT PCR及Western等技术观察维甲酸、干扰素单独或联合应用对不同膀胱癌细胞株的生长抑制、诱导凋亡的影响以及核维甲酸类受体、STAT1蛋白等方面的改变。结果 :ATRA和 9cRA对所有膀胱癌细胞的抑制生长和诱导凋亡作用均不明显 ,而IFNα 2a能增强ATRA和 9cRA对膀胱癌的这种作用 ,且联合应用ATRA和IFNα 2a能诱导膀胱癌细胞RARβ和Stat1的表达。结论 :IFNα 2a能协同ATRA和9cRA对膀胱癌细胞生长抑制和凋亡诱导效应 ,上调STAT1基因表达可能是其主要分子机制 ,实验显示了维甲酸和干扰素联合应用治疗膀胱移行细胞癌的协同作用。     

1,25（OH）2D3和ATRA对HO8910生长的协同抑制作用

目的：通过单独或联合使用1,25-二羟维生素D3[1,25-dihydroxy vitaminD3,1,25（OH）2D3]和全反式维甲酸（all trans rinoic acid,ATRA）,研究其对人卵巢癌细胞HO8910生长、细胞周期和细胞凋亡的影响,以及维生素D受体（vitamin D recept VDR）及维甲酸α受体受体（retinoic acid receptorα,RARα）mRNA的表达变化,探讨其作用的分子机制。方法：选用人卵巢癌细株HO8910在体外进行培养,培养时分别添加1,25（OH）2D3、ATRA或二者联合,采用MTT比色法测定细胞生长抑制率,流式细胞术（flow cytometry,FCM）进行细胞周期和细胞凋亡分析,用RT-PCR检测VDR及RARαmRNA的表达。结果：结果是单独或联合使用1,25-二羟维生素D3和全反式维甲酸诱导后,HO8910细胞生长均受到不同程度的抑制（P〈0.05）,并呈时间依赖关系;能够引起细胞周期时相的改变,G1细胞增多（P〈0.05）;能够诱导细胞产生细胞凋亡（P〈0.05）;能够上调VDR及RARαmRNA的表达（P〈0.05）,进而抑卵巢癌细胞增殖,其中以联合用药组最为显著。结论：说明1,25-二羟维生素D3和全反式维甲酸能抑制人卵巢癌细胞株HO8910生长;诱导细胞周期发生G1期阻滞,同时产生细胞凋亡作用;通过上调VDR及RARαmRNA的表达,从而抑制癌细胞增当1,25-二羟维生素D3与全反式维甲酸联合用药时,能够对HO8910细胞生长产生协同抑制作用。     

视黄酸-AP-1信号通路对视网膜色素上皮细胞分泌TGF-β2的调控机制

【目的】研究上调视黄酸（RA）信号以及抑制活化蛋白-1（AP-1）转录活性对RPE分泌转化生长因子β2（TGF-β2）的影响以及可能的作用途径。【方法】①检测ATRA干预的作用,将ARPE-19细胞分为：正常对照组和6、12、24、48h组,用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、western blot和免疫荧光检测RARβ和c-Fos的表达。②检测RARβ抑制剂LE540对ATRA诱导后细胞表达RARβ和c-Fos的影响,将ARPE-19细胞分为：正常对照组,ATRA组,LE540组和ATRA+LE540组,用RT-qPCR和western blot检测RARβ和c-Fos的表达。③检测AP-1抑制剂T-5224干预的作用,将ARPE-19细胞分为：正常对照组和12、24、48h组,用电泳迁移率变动分析法（EM?SA）检测RPE细胞中AP-1活性。④检测LE540和T-5224对ATRA诱导后细胞表达和分泌TGF-β2的影响,将ARPE-19细胞分为正常对照组,ATRA组,ATRA+LE540组和ATRA+T-5224组,用western blot和酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测TGF-β2的表达和分泌量。【结果】ATRA干预24和48h后,RARβ的表达较对照组明显升高（P＜0.05）,c-Fos的表达先升后降,ATRA干预6和12h后,c-Fos表达明显升高（P＜0.01）,而干预48h后,c-Fos表达下降,与对照组相比无统计学差异（P＞0.05）;T-5224干预24和48h后,AP-1的转录活性明显下降（P＜0.01）。用LE540和T-5224干预48h后,ATRA+LE540组和ATRA+T-5224组TGF-β2的表达较ATRA组明显下降（P＜0.05）。【结论】ATRA通过RARβ影响AP-1的转录活性,进而促进ARPE-19细胞分泌TGF-β2。     

全反式维甲酸对人胃腺癌细胞株SGC-7901凋亡的影响

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对胃腺癌细胞系SGC-7901凋亡的影响,并初步探讨其可能的分子机制.方法 ATRA处理SGC-7901细胞,Hoechst染色检测ATRA对SGC-7901细胞凋亡的影响,Western blot法检测ATRA对凋亡相关蛋白表达情况的影响.结果 ATRA可诱导SGC-7901细胞的凋亡,且下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,对促凋亡蛋白Bax的表达和酶原形式的Caspase-3的表达没有影响.结论 ATRA促进SGC-7901细胞的凋亡,其分子机制可能是下调Bcl-2的表达,使Bcl-2/Bax的值降低进而促进细胞凋亡.     

肺癌发生发展中cJun、cFos的表达

目的:探讨肺癌发生发展过程中cJun、cFos表达水平.方法:收集42例人肺癌标本,其中10例可观察到肺癌癌前病变组织,运用免疫组织化学的方法,研究cJun、cFos在上述组织中的表达水平.结果:42例肺癌组织中cJun、cFos的阳性表达率分别为83.2%和59.5%,其中鳞癌为88.0%和56.0%,腺癌为69.2%和53.8%,小细胞肺癌均为100.0%.正常肺组织cJun、cFos表达阴性.在4例癌前组织中,cJun表达为75%;9例癌前病变组织中,cFos表达为77.8%.结论:在肺癌组织中,有cJun、cFos的高表达,同时,cJun的表达可能介导肺癌的促癌过程.     

全反式维甲酸对人胃癌细胞株caveolin-1表达和定位的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对人胃癌细胞株SGC7901的增殖及对胞膜蛋白caveolin-1表达和定位的影响。方法 MTT法检测不同浓度(5、10、25μmol/L)ATRA对SGC7901细胞增殖的影响;免疫荧光法检测cavolin-1在细胞中的定位,Western blot检测caveolin-1的表达。结果 ATRA可明显抑制人胃癌细胞株SGC7901的增殖。ATRA处理3 d后,SGC7901细胞caveolin-1的表达无明显变化,但caveolin-1在胞浆中的分布明显降低,胞膜上分布明显增加。结论 ATRA可明显抑制SGC7901的增殖,促进caveolin-1在细胞膜上定位。     

全反式维甲酸对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对人胃癌细胞增殖和细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法用不同浓度的全反式维甲酸处理人胃癌细胞AGS,采用MTT法观察处理前后细胞增殖的变化,应用流式细胞仪和Western印迹杂交法检测细胞凋亡。结果 ATRA显著抑制胃癌细胞增殖,具有时间和浓度依赖性。在0.5、1.0和5.0μmol/L浓度ATRA作用下,胃癌细胞增殖明显受到抑制,且随着作用时间的延长和浓度的增加,抑制作用越明显。ATRA 5.0μmol/L处理细胞72 h后,胃癌细胞凋亡率为15.32%,而对照组为3.31%,差异有统计学意义(P<0.01);并且ATRA处理后可观察到聚二磷酸腺苷核糖多聚酶(PARP)的剪切降解,以及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3,-8和-9的激活。结论全反式维甲酸可抑制胃癌细胞的增殖,并诱导胃癌细胞凋亡,其机制与Caspases的活化有关。全反式维甲酸在胃癌的治疗中可能具有潜在的应用前景。     

丙戊酸钠联合全反式维甲酸促进子宫颈癌细胞衰老的发生

目的：研究丙戊酸钠( VPA)联合全反式维甲酸( AT-RA)诱导子宫颈癌细胞衰老作用,并探讨其分子机制。方法实验分为对照组、VPA组、ATRA组、VPA+ ATRA组,采用3 mmol/L VPA、1μmol/L ATRA单独或联合作用于人子宫颈癌HeLa及 SiHa细胞,对照组仅加溶媒;采用 CellTiter 96? AQueous 法检测细胞增殖;β-半乳糖苷酶化学染色法检测细胞衰老;Q-PCR和Western blot法分别检测衰老相关基因P16、P63、hTERT的mRNA和蛋白表达变化。结果 VPA对HeLa及SiHa细胞均有生长抑制作用,与ATRA联合抑制效果明显优于单独用药( P <0．05);β-半乳糖苷酶染色显示,VPA+ATRA 组衰老细胞比例显著增加,与对照组及VPA组、ATRA 组比较,差异有统计学意义( P <0．05);Q-PCR和Western blot法结果显示,VPA单独和联合ATRA可上调P16、P63的表达,降低hTERT的表达,且联合用药优于单独用药及对照组( P<0．05)。结论 VPA联合ATRA可抑制子宫颈癌细胞增殖,上调 P16和 P63的表达,下调hTERT的表达,可能是其诱导细胞衰老的分子机制。     

全反式维甲酸诱导中脑神经干细胞向多巴胺能神经元分化的作用

目的：观察全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）体外对大鼠中脑神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的诱导分化作用及其可能的分子机制。方法：分离培养孕14～15 d大鼠中脑NSCs,使用1.0μmol/L ATRA诱导1、3、5和7 d,以免疫组织化学染色观察ATRA对NSCs分化为多巴胺能神经元的影响;RT-PCR分析维甲酸（retiadic acid,RA）各受体表达情况。结果：ATRA诱导后多巴胺能神经元特异性酪氨酸羟化酶（TH）染色呈阳性,细胞有多个细长突起,与对照组比较,诱导7 d后多巴胺神经元特异性TH染色阳性细胞率均明显升高（P〈0.01）;各诱导组RA受体βmRNA的表达量均明显升高（P〈0.01）,而且存在时间依赖性。结论：ATRA能显著提高NSCs分化为多巴胺能神经元的比例,同时发现细胞维甲酸A受体（RAR）βmRNA表达增加,RARβ激活可能促进NSCs向多巴胺神经元方向的分化。     

维甲酸抑制对不同分化程度甲状腺肿瘤细胞体外侵袭转移能力的影响

目的 研究维甲酸对人甲状腺肿瘤细胞体外侵袭转移能力的影响,初步探讨其分子机制.方法 对4种人甲状腺肿瘤细胞予一定浓度的维甲酸处理,以Transwell试验验证维甲酸对细胞侵袭能力的影响,黏附试验判断维甲酸作用机制环节,最后以RT-PCR及Western印迹法检测侵袭相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)及其受体(uPAR)的基因及蛋白表达变化.结果 维甲酸处理5 d后,4种甲状腺肿瘤细胞体外侵袭能力均低于乙醇对照组,差异有统计学意义,其中FTC-133为91±9比118±10,C643为92±17比164±21,HTH74为87±18比169±15,XTC.UC1为95±23比136±15,差异均有统计学意义(均P<0.05),同时发现除FTC133以外的3种肿瘤细胞的黏附能力均较对照组高.其中未分化癌细胞C643、HTH74 uPA和uPAR mRNA及蛋白表达均低于对照组,同时E-cadherin表达较对照组高;滤泡癌细胞FTC-133和Hürthle癌细胞XTC.UC1中,uPAR和MMP2 mRNA及蛋白水平低于乙醇对照组,uPA和E-cadherin表达无显著改变.结论 维甲酸可能通过上调E-cadherin表达,降低uPA、uPAR及MMP2等多种蛋白溶解酶活性,显著抑制人甲状腺肿瘤细胞体外侵袭转移能力.     

口腔鳞癌中CD24的表达、作用和治疗靶点价值

目的：明确口腔鳞癌组织和细胞中黏液素样细胞表面黏附分子CD24的表达模式、作用及其作为治疗靶点的潜在价值。方法：利用免疫组化、real-time RT-PCR和Western blot方法,明确CD24在78例人口腔组织标本和59例动物模型金地鼠（Hamster buccal）颊囊组织标本,以及口腔癌前病变上皮细胞DOK4、口腔鳞癌细胞CAL-27和WSU-HN6中的表达模式;以CAL-27和WSU-HN6细胞为模型,明确在常规和无血清成球培养条件下,全反式维甲酸（all-trans retinoic acid, ATRA）和CD24抗体对CAL-27和WSU-HN6细胞及肿瘤球生长的影响,并观察它们是否影响这两种细胞中CD24的表达。结果：人和金地鼠组织的免疫组织染色结果显示,在正常/单纯增生组织、轻度/中度异常增生组织、重度异常增生和鳞癌组织中均依次呈现CD24表达递增的现象(P＜0.05);与DOK细胞相比较,CAL-27和WSU-HN6口腔鳞癌细胞中CD24表达上调(P＜0.05)。相对于癌前病变细胞DOK,口腔鳞癌细胞CAL-27和WSU-HN6具有更强的增殖和肿瘤球成球的潜能(P＜0.05)。ATRA能够有效地抑制这两种口腔鳞癌细胞的CD24表达、体外增殖和肿瘤球形成的能力(P＜0.05),而CD24抗体虽然也一样能够抑制口腔鳞癌细胞的增殖和肿瘤球形成(P＜0.05),但却不影响其CD24的表达。结论：CD24在口腔鳞癌中表达上调,具有促进口腔鳞癌细胞增殖和肿瘤球形成的作用,维甲酸和CD24抗体皆能以CD24为靶点有效地抑制口腔鳞癌细胞的增殖和肿瘤球形成。     

阿司匹林抑制胃癌细胞生长及其机制探讨

目的　研究阿司匹林对 SGC- 790 1胃癌细胞生长的影响 ,并初步探讨其作用的分子机制。方法　采用 3H- Td R法及流式细胞术检测不同浓度阿司匹林对胃癌细胞 DNA合成及细胞周期的影响 ;用免疫细胞化学法检测阿司匹林对胃癌细胞 COX- 2表达的影响 ;Western blotting法及 EMSA法检测阿司匹林对胃癌细胞 c- fos表达及 AP- 1活化的影响。结果　胃癌细胞经不同浓度的阿司匹林作用后 ,其 3H- Td R掺入值明显降低 ,且与阿司匹林浓度呈高度负相关 ( r=- 0 .9,P<0 .0 5 )。细胞周期分析显示 ,阿司匹林主要作用于胃癌细胞 S期。免疫细胞化学染色显示 ,阿司匹林能下调胃癌细胞 COX- 2表达 ,且具有良好的量效关系。Western blotting检测表明 ,阿司匹林能降低胃癌细胞 c- fos蛋白的表达。EMSA分析显示 ,阿司匹林能有效抑制血清刺激的 AP- 1的 DNA结合活性。结论　阿司匹林能有效抑制胃癌细胞的生长 ,这种作用可能是其通过抑制胃癌细胞 c- fos表达以及 AP- 1活化 ,进而抑制COX- 2表达所致     

全反式维甲酸对人胰腺癌细胞生长及Survivin基因表达的影响

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)对人胰腺癌细胞株PC-3生长的抑制作用以及细胞株PC-3 Survivin基因表达的变化。方法:应用MTT比色法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR法测定Survivin基因表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:经过ATRA作用后,PC-3细胞增殖受到抑制,呈时间和剂量依赖性。凋亡比例明显增加,Survivin mRNA的表达随着作用时间的延长而呈逐渐下降趋势。结论:ATRA对人胰腺癌细胞株PC-3的生长有抑制作用,同时可诱导其凋亡,提示其可能与Survivin基因表达下调有关。     

三氧化二砷联合全反式维甲酸对小鼠肝癌细胞H22及移植瘤的抑制作用

目的探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)联合全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)在体内和体外对小鼠肝癌H22细胞的抑制作用.方法建立小鼠肝癌H22移植瘤模型,观察As2O3联合ATRA的体内抑瘤作用;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法测定As2O3联合ATRA在体外对小鼠肝癌H22细胞株的生长抑制作用.结果 As2O3联合ATRA在体外能明显抑制H22细胞的生长和增殖,抑制率为52.24%;在体内对H22小鼠的肿瘤体积、重量均有明显的抑制作用,抑制率分别为66.25%、62.07%.结论 As2O3和ATRA在体内和体外对H22肿瘤细胞的生长均有抑制作用,联合应用作用加强,有协同作用.     

外源性p53基因对人胃癌细胞的放射增敏作用

目的:评价外源性p53基因对人胃癌细胞放射敏感性的影响.方法:以复制缺陷型重组腺病毒为载体,将人野生型p53基因导入不同p53状态的4种人胃癌细胞系,用免疫组化法及Western blot法检测p53基因在胃癌细胞中的表达;用细胞存活份数来表示细胞的生长抑制情况;用流式细胞计数、细胞DNA片段化分析和TUNEL检测细胞凋亡.结果:[ HTSS 在高效靶比病毒剂量下,外源p53基因在4种胃癌细胞的胞核中均高效表达,并可使细胞产生明显的G2/M 阻滞和凋亡,使细胞存活份数明显减少.而且这种作用不依赖细胞内在的p53基因状态.单独照射4 Gy,对野生型p53细胞的生长抑制和致凋亡效应明显,而对其它3种细胞的作用较弱 .照射4 Gy结合Ad-p53时,外源p53基因可显著增强照射引起的G2/M期阻滞和凋亡及生长抑制作用,对4种胃癌细胞放射增效比高达2.3～3.6.结论:腺病毒载体介导的野生型p53基因转染4种胃癌细胞后有明显的放射增敏作用.     

Potentiation of arsenic trioxide-induced apoptosis by retinoic acid in retinoic acid sensitive and resistant HL-60 myeloid leukemia cells

Objective To study the effect of arsenic trioxide (As(2)O(3)) on non-APL acute myeloid leukemia (AML) cells and the interreactive effect between retinoic acid (RA) and As(2)O(3).Methods RA-sensitive (S) and RA-resistant (R) HL-60 non-APL AML cells were used as an in vitro model. Cell number and trypan blue were used to observe cell growth and survival. Apoptosis was determined by morphological changes, using a DNA laddering assay, terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) fragment end labeling assay and a flow cytometry assay. Results As(2)O(3) induced apoptosis in both HL-60S and HL-60R cells, As(2)O(3)-induced apoptosis was both time- and concentration-dependent in a therapeutically-achievable As(2)O(3) range (0.25-4.0 μmol/L). Both all-trans retinoic acid (ATRA) and 9-cis retinoic acid (9cRA) potentiated As(2)O(3)-induced apoptosis, as measured by quantitative TdT fragment end labeling and flow cytometry assays in both HL-60S and HL-60R cells (P&lt;0 .05, for all RA+As(2)O(3) combinations vs As(2)O(3) alone in both sublines). Conclusions As(2)O(3) may inhibit the growth of non-APL AML cells by promoting programmed cell death. RA can potentiate As(2)O(3)-induced apoptosis even in RA-resistant HL-60 cells in which the classical ATRA response pathway is repressed owing to a homozygous inactivating mutation in the retinoic acid receptor α. As[2]O[3] can have clinical activity in non-APL cases of AML and the enhanced activity might result from the combined As(2)O(3)-RA therapy.     

Influence of suppressor gene p16 on retinoic acid inducing cancer cell A549 differentiation

Objective To investigate the role of suppressor gene p16 in the process of differential regulation of retinoic acid (RA) on the A549 lung cancer cells.Methods Tumor suppressor gene p16 was transferred into A549 cells and the cells were treated with all-trans retinoic acid (ATR) at the dosage of 5×10-6 mol/L for 4 d. After that, the proliferation and differentiation of A549 cells were examined by growth curve and cytometry analysis, the change of lung lineage-specific marker MUC1 was tested by immunohistochemical staining. Meanwhile, Western blot was used to observe the change of p16 protein expression in A549 cells treated with ATRA.Results ATRA could obviously inhibit the growth and induce the differentiation of A549 Cells that were transferred with p16 gene. There were more cells arrested in G1/G0 phase and the expression of MUG1 was markedly down-regulated than in control cells. The expression of p16 protein was up-regulated in A549 cells treated with ATRA.Conclusion Suppressor gene p16 could enhance the effects of RA and proliferated suppression and differential induction of A549 cells.     

Combination of all-trans retinoic acid with butyric acid and its prodrugs markedly enhancing differentiation of human acute promyelocytic leukemia NB4 cells

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｕｓｅＮＢ４,ａｎａｕｔｈｅｎｔｉｃｈｕｍａｎａｃｕｔｅｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｉｎｅ,ａｓｗｅｌａｓｔｈｅｍａｒｏｗｃｅｌｓｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｃｕｔｅｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋ...