杏仁核参与大鼠哮喘发作及其机制探讨

为探讨杏仁核是否参与大鼠哮喘发作及其机制,采用卵蛋白致敏哮喘大鼠模型,运用WGA-HRP逆行追踪与免疫组织化学染色相结合的双重标记方法,在光镜下观察向下丘脑室旁核(PVN)发出投射的杏仁核神经元内Fos蛋白的表达情况。结果显示:杏仁核内可观察到三种阳性细胞,即HRP逆标神经元、Fos阳性神经元和HRP/Fos双标神经元。Fos阳性细胞呈双侧分布,主要分布在杏仁核的内侧亚核(MeA)和中央亚核(CeA);HRP逆标神经元和HRP/Fos双标神经元分布在注射区同侧的内侧杏仁核,内侧杏仁核内HRP/Fos双标神经元占HRP单标神经元的33.55%。本研究结果提示,哮喘大鼠发作时,杏仁核、下丘脑室旁核的神经元兴奋,且杏仁核到下丘脑室旁核的直接投射可能参与了哮喘发作的调控。     

延髓内脏带儿茶酚胺能神经元对LPS免疫刺激的Fos表达

目的　探讨“延髓内脏带 (MVZ)至下丘脑室旁核 (PVN)”的儿茶酚胺能通路在“免疫 脑通讯”中的作用。　方法　应用WGA HRP逆行追踪与抗Fos和抗酪氨酸羟化酶 (TH)抗体双重免疫组织化学相结合的三重标记方法 ,即先将WGA HRP注入大鼠一侧PVN内 ,存活 4 8h后经腹腔注射免疫刺激剂脂多糖 (LPS)诱发免疫反应后 ,观察MVZ中WGA HRP逆标细胞、Fos蛋白和儿茶酚胺能神经元 (以TH为标记物 )的分布及表达状况。　结果　在MVZ内发现 7种阳性神经元 ,即HRP、Fos、TH单标细胞、Fos HRP、Fos TH、HRP TH双标细胞和Fos HRP TH三标细胞。Fos HRP双标记和Fos HRP TH三标记细胞分别占总HRP逆行标记细胞的 12 5 %和 39 6 %。　结论　MVZ对LPS免疫刺激起反应 ,并可能将免疫信息经儿茶酚胺能神经元上传至PVN ;MVZ可能作为“免疫 脑通讯”的一个中继站 ,通过“MVZ→PVN”通路起免疫调节作用。     

含后叶加压素的视上核神经元及含P物质的中缝背核神经元至下丘脑室旁核投射的研究

用HRP逆行追踪与免疫细胞化学结合的方法,对某些投射至大鼠下丘脑室旁核的神经元的化学性质进行了研究.结果显示在视上核内存在三种标记细胞:HRP单标细胞、后叶加压素免疫反应阳性单标细胞和HRP后叶加压素双标细胞.双标细胞为大、中型椭圆形或圆形细胞,约占HRP标记细胞总数的22%.在中缝背核投射至室旁核的神经元中,部分为P物质免疫反应阳性,双标细胞为中小型梭形细胞,约占HRP标记细胞总数的20%.上述结果提示:视上核有后叶加压素能神经元、中缝背核有P物质能神经元投射到室旁核.     

大鼠展神经核和前庭神经核内GABA反应神经元向动眼神经核的投射

用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)逆行标记结合γ-氨基丁酸(γ-amino-butyric acid,GABA)的免疫组织化学双标技术观察大鼠的展神经核和前庭神经核内GABA阳性神经元的分布,以及其向动眼神经核的投射。结果表明:注射HRP于大鼠动眼神经核内直肌亚核后,在对侧展神经核区以及前庭神经核、脑桥旁正中网状结构中发现HRP单标记细胞;在前庭神经核内,可见HRP单标记、GABA阳性和HRP/GABA双标记三类神经元,其中HRP/GABA双标记细胞占HRP标记细胞总数的47.1%。结果表明GABA在前庭神经核向动眼神经核的抑制性投射中起一定作用,而在展神经核向动眼神经核投射的核间通路中,可能不是起主要作用的抑制性神经递质。     

大鼠下丘脑室旁核与orexin神经元的纤维联系及其在癫痫中的活性研究

目的:观察大鼠下丘脑室旁核(PVN)神经元和下丘脑orexin神经元在癫痫发作后的活性变化,以及相互之间的纤维联系。方法:制作匹罗卡品癫痫大鼠模型,免疫组织化学方法检测PVN内神经元和orexin神经元表达c-Fos情况; BDA顺行神经示踪实验观察PVN内神经元的纤维向orexin神经元分布区域的投射情况;CTb逆行神经示踪实验观察orexin神经元向PVN的投射情况。结果:PVN内神经元和orexin神经元在癫痫大鼠中的活性明显提高; PVN神经元向orexin集中分布的区域有大量的神经纤维投射; orexin神经元也可以投射到PVN。结论:PVN神经元和orexin神经元参与癫痫发作,PVN与orexin神经元之间存在相互神经纤维联系,可能在癫痫发作及伴发功能性障碍中发挥着重要的作用。     

下丘脑室旁核对胃食管反流豚鼠咳嗽敏感性的调控机制

目的:探究下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)在胃食管反流(gastro-esophageal reflux,GER)豚鼠咳嗽敏感性增高中的作用及其可能的调控途径。方法:利用健康雄性白化Hartley豚鼠制备GER模型,并通过柠檬酸咳嗽激发试验测定咳嗽敏感性;应用免疫荧光组织化学染色方法分别观察PVN内Fos蛋白和P物质(SP)的表达情况,以及Fos/SP双标神经元的分布;利用假狂犬病毒(PRV)示踪剂进行气管壁逆行神经束路追踪,并结合免疫荧光组织化学染色方法观察追踪剂的分布情况。结果:模型组与对照组相比,咳嗽敏感性明显增高。免疫荧光染色结果显示:Fos表达于PVN神经元的细胞核内,SP免疫阳性物质主要表达于PVN神经元的细胞浆内,模型组Fos和SP的表达显著增多(P0.05),且PVN内部分Fos阳性神经元同时呈SP免疫阳性,这些Fos/SP免疫双标神经元大约占SP单标神经元数量的77.25%。神经束路追踪结果显示:气管壁内注射PRV 48 h后,在延髓迷走复合体(dorsal vagal complex,DVC)内可观察到PRV标记的神经元胞体,72 h后PRV标记的神经元胞体可见于PVN内。结论:PVN在GER豚鼠咳嗽敏感性增高中发挥重要作用,可能是PVN内SP能神经元通过PVN-DVC-气道神经通路调控实现的。     

去除窦弓神经引起下丘脑室旁核小细胞部氮能神经元持续激活(英文)

目的:旨在研究去除窦弓神经是否导致下丘脑室旁核(PVN)氮能神经元处于持续激活状态。方法:成年大鼠行窦弓神经去除术,1周后制备下丘脑脑片,进行还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组织化学结合Fos免疫组织化学染色。结果:在PVN的内侧、背侧和外侧小细胞部有大量Fos阳性神经元分布,并与NADPH-d部分共存,但在PVN的室周和前小细胞部以及大细胞仅观察到弱阳性的Fos信号,偶尔观察到双标记神经元。结论:去窦弓神经大鼠下丘脑室旁核小细胞部氮能神经元处于持续激活状态,可能起代偿性抑制中枢交感活性的作用。     

大鼠下丘脑室旁核GABA_A Rα1阳性神经元参与内毒素诱导的免疫应激反应

为探讨下丘脑室旁核(PVN)内GABAA受体α1亚单位(GABAARα1)阳性神经元是否参与内毒素(LPS)诱导的免疫应激反应,本研究采用腹腔注射LPS建立免疫应激模型,对照组注射等量的生理盐水,应用免疫荧光双标记与激光共聚焦显微镜技术,观察两组大鼠下丘脑PVN内Fos和GABAARα1阳性神经元的形态、分布和数量的变化以及Fos和GABAARα1阳性神经元之间的关系。结果显示:LPS可使大鼠PVN内Fos阳性神经元数量显著增高,GABAARα1阳性神经元的染色增强,且其中的部分神经元同时表达Fos和GABAARα1;经计数Fos/GABAARα1双标阳性神经元的比例占Fos阳性神经元的27%,占GABAARα1阳性神经元的32%。本实验结果提示PVN内的部分GABAARα1阳性神经元参与了由LPS诱导的免疫应激反应,说明GABA可能通过GABAA受体在免疫应激反应中发挥作用。上述结果为阐明免疫应激反应时GABAAR在下丘脑-垂体-肾上腺轴中的作用提供了形态学基础。     

大鼠延髓至下丘脑室旁核的儿茶酚胺能投射神经元在胃伤害性刺激后的FOS表达

用ＨＲＰ注入下丘脑室旁核逆行追踪与抗Ｆｏｓ和抗酪氨酸羟化酶（ＴＨ）双重免疫细胞化学相结合的三重标记方法，对大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑室旁核的儿茶酚胺能投射神经元对胃伤害性刺激后的ｃ－ｆｏｓ表达进行了观察，发现孤束核和延髓腹外侧区有７种不同的标记细胞：ＨＲＰ、Ｆｏｓ、ＴＨ单标细胞，Ｆｏｓ／ＨＲＰ、Ｆｏｓ／ＴＨ、ＨＲＰ／ＴＨ双标细胞，Ｆｏｓ／ＨＲＰ／ＴＨ三标细胞。上述７种标记细胞主要分布在延髓中、尾段孤束核的内侧亚核、连合亚核和延髓腹外侧区以及两者之间的网状结构。ＨＲＰ标记细胞以注射侧为主，对侧有少量分布。本文结果证明，大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑室旁核投射的部分儿茶酚胺能神经元可能参与胃伤害性刺激的传导和调控。     

腹腔注射2-脱氧-D-葡萄糖可诱发大鼠视上核和室旁核神经元表达Fos

目的 探讨腹腔注射2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）能否激活大鼠下丘脑视上核（SON）和室旁核（PVN）神经元而表达Fos。方法 健康雄性SD大鼠12只,随机分为腹腔注射2-DG组（6只）、生理盐水对照组（3只）及正常对照组（3只）。各自处理后,应用免疫组织化学方法,观察各组下丘脑SON和PVN内Fos表达及其与催产素（OT）和加压素（VP）的双标情况,同时采用ELISA方法对血清中OT和VP的含量进行检测。 结果与生理盐水对照组和正常对照组相比,2-DG引发的特异性Fos免疫阳性产物主要集中分布于下丘脑外侧区和穹隆周区,在SON、PVN也有密集表达。SON和PVN内的Fos表达与该区的特异性神经活性物质OT和VP有共存。OT/Fos双标细胞率（双标细胞占OT阳性细胞的百分率）在SON和PVN分别为87.10%、90.57%,明显高于VP/Fos在这两个核团的双标率（双标细胞占VP阳性细胞的百分率,68.42%、76.92%）,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。ELISA检测结果显示,2-DG组动物血清中OT和VP水平与对照组相比无明显变化。 结论 腹腔注射2-DG可激活大鼠下丘脑SON和PVN内OT和VP神经元表达Fos,SON和PVN可能参与2-DG诱导的急性应激反应。     

Evidence for the medullary visceral zone as a neural station of neuroimmunomodulation

The aim of the present study was to test the possibility that the catecholaminergic projectional pathway from the vagus nerve to the medullary visceral zone (MVZ) thence to the paraventricular nucleus of hypothalamus (PVN) was involved in the cytokine-to-brain communication. A triple labeling method in which WGA-HRP retrograde tracing was combined with anti-Fos and -TH immunohistochemical staining was used. WGA-HRP was stereotaxically injected into unilateral PVN in the rat, after a survival of 48 h, animals received intraperitoneal injection of lipopolysaccharide (LPS). The distribution of the HRP retrogradely labeled neurons, Fos protein positive and catecholaminergic neurons (tyrosine hydroxylase as marker) in the MVZ was observed. Subdiaphragmatic vagotomy (SDV) and sham surgery were also used to observe the different Fos expression in the MVZ after intraperitoneal administration of lipopolysaccharide (LPS) or pyrogen-free saline (NS). Under light microscope, seven types of positively stained neurons could be distinguished within the MVZ, namely neurons single-labeled with Fos, HRP or TH, respectively; neurons double-labeled with Fos/TH, Fos/HRP or HRP/TH separately; and neurons triple-labeled with Fos, HRP and TH staining. Intraperitoneal LPS caused lots of robust Fos expression within the MVZ in the sham surgery groups and this response in the MVZ was markedly inhibited in the vagotomized rats. The results suggested that some catecholaminergic neurons in the MVZ could send projections to the PVN and this pathway might be involved in the relay of peripheral immune information via vagus nerve. MVZ was a neural relay station in the immune-to-brain communication and might play a significant role in the neuroimmunomodulation via vagus-MVZ-PVN pathway.     

大鼠下丘脑室旁核的神经支配

本文应用ＨＲＰ追踪、免疫细胞化学与电镜方法研究了大鼠下丘脑室旁核的神经支配。结果显示，中缝背核向室旁核投射的神经元中，部分为５－ＨＴ免疫反应阳性；被盖背外侧核的部分５－ＨＴ神经元也发出纤维投射至室旁核。将ＣＢ－ＨＲＰ注入第三脑室后，电镜下发现室旁核内ＥＶＫ免疫反应阳性树突接受ＨＲＰ反应阳性轴突形成突触，ＨＲＰ免疫反应阳性的树突与阴性轴突的传入形成突触，提示室旁核内ＥＮＫ神经元受触液神经元的突触调控，同时触液神经元又受到其他神经元的突触调控。     

Nigrostriatal projecting neurons express GDNF receptor subunit RET in adult rats

Nigrostriatal neurons expressing RET protein, a receptor protein tyrosine kinase of glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) were investigated in rats using retrograde neural tracing with horseradish peroxidase (HRP) combined with immunohistochemistry. HR/RET double-labeled neurons were abundantly distributed in the substantia nigra pars compacta ipsilateral to the caudate-putamen stereotaxically injected with HRP. Almost all the HRP-labeled neurons in nigra exhibited RET-like immunoreactivity, which however constituted more than half of the RET-immunoreactive cells. Our results present morphological evidence that GDNF-RET interaction plays important roles in physiological processes of nigrostriatal neuronal circuits of mammals.     

Glutamatergic vestibular neurons express Fos after vestibular stimulation and project to the NTS and the PBN in rats

In this study, retrograde tracing method combined with phosphate-activated glutaminase (PAG) and Fos immunofluorescence histochemistry was used to identify glutamatergic vestibular nucleus (VN) neurons receiving vestibular inputs and projecting to the nucleus of the solitary tract (NTS) and the parabrachial nucleus (PBN). Conscious animals were subjected to 120 min Ferris-wheel like rotation stimulation. Neuronal activation was assessed by Fos expression in the nucleus of VN neurons. After Fluoro-gold (FG) injection into the caudal NTS, approximately 48% FG-labeled VN neurons were immunoreactive for PAG, and about 14% PAG/FG double-labeled neurons co-existed with Fos. Following FG injection into the PBN, approximately 56% FG-labeled VN neurons were double-labeled with PAG, and about 12% of the PAG/FG double-labeled neurons also expressed Fos. Careful examination of the typology and distribution pattern of these PAG-immunoreactive neurons indicated that the vast majority of these neurons were glutamatergic rather than GABAergic. These results suggest that PAG-immunoreactive VN neurons might constitute excitatory glutamatergic VN-NTS and VN-PBN transmission pathways and these pathways might be involved in vestibulo-autonomic reflexes during vestibular stimulation.     

猫骶髓“内脏面”L-ENK样神经元的分布和定位投射

应用免疫组织化学和HRP与免疫组织化学双重标记的方法,对骶髓“内脏面”L-ENK样神经元的分布及其与副交感节前神经元和向臂旁外侧核及Barrington核投射的二级传入神经元的关系进行了研究。L-ENK样神经元分布于整个“内脏面”上,尤以中间带外侧核和后连合核为密集。在中间带外侧核内,L-ENK样神经元的分布与向盆神经注入HRP后逆行标记的副交感节前神经元的分布位置重叠,能明显地划分为背侧带和外侧带。在Onuf核及其与骶髓副交感核之间的联系细胞桥上首次发现有L-ENK样神经元存在。将HRP注入盆神经结合L-ENK免疫组织化学反应,在骶髓副交感核外侧带和背侧带均发现大量HRP/L-ENK双标细胞。几乎全部HRP标记细胞均为HRP/L-ENK双标细胞,个别双标细胞出现于中间带外侧核的中间带(interband)内。将HRP注入臂旁外侧核或Barrington核结合L-ENK样免疫组织化学反应,在“内脏面”的中间带外侧核、中介核和后连合核处都发现HRP/L-ENK样双标细胞。上述结果证明猫骶髓“内脏面”、Onuf核及联系细胞桥上均有L-ENK样神经元分布,其中“内脏面”向臂旁外侧核或Barrington核投射的二级神经元有一部分含有L-ENK样活性物质,骶髓副交感核的外侧带、背侧带和中间带均有L-ENK样副交感节前神经元。     

大鼠红核酪氨酸羟化酶、生长抑素和亮啡吠能神经元至延髓外侧网状核的研究

用HRP逆行追踪和免疫细胞化学ABC法相结合研究了红核内酪氨酸羟化酶、生长抑素和亮啡呔免疫活性神经元至延髓外侧网状核的投射.结果表明,红核内HRP标记细胞为对侧性,主要分布于其尾侧2/3,同时,还可见酪氨酸羟化酶、生长抑素、亮啡呔单标细胞及HRP/酪氨酸羟化酶、HRP/生长抑素、HRP/亮啡呔双标细胞,其中HRP/酪氨酸羟化酶双标细胞约占HRP单标细胞25.2%,HRP/生长抑素双标细胞约占21.3%,HRP/亮啡呔双标细胞约占15.4%.红核参与镇痛和心血管活动的调节可能与上述神经递质有关.