黄芩苷体外抗白念珠菌生物膜作用的研究

目的研究黄芩苷对体外白念珠菌生物膜的影响。方挂采用XTT减低法评价黄芩苷对白念珠菌的生物膜及黏附性的影响；镜下观察该药对白念珠菌生物膜的形态学影响；细胞毒试验检测该药的毒副作用。结果 各黄芩苷对白念珠菌生物膜的SMIC50、SMIC80分别是1000μg／ml、2000μg／ml;2000μg／ml及200μg／ml的黄芩苷对白念珠菌的早期黏附及菌丝生长有抑制作用；黄芩苷对人细胞毒性较弱。结论 黄芩苷对体外白念珠菌生物膜有较强的抑制作用。     

黄芩苷对白念珠菌芽管形成及黏附性的影响

目的:研究黄芩苷对白念珠菌芽管形成、对白念珠菌黏附人口腔上皮细胞及阴道上皮细胞的影响.方法:将100,50,10 mg·L-1黄芩苷分别与白念珠菌悬液、白念珠菌与口腔上皮细胞混合液、白念珠菌与阴道上皮细胞混合液共同孵育,显微镜下计数芽管形成率、白念珠菌对口腔上皮细胞及阴道上皮细胞的黏附百分率.结果:100,50,10 mg·L-1黄芩苷均能抑制白念珠菌芽管形成及对口腔上皮细胞和阴道上皮细胞的黏附;白念珠菌标准株与临床株之间无显著性差异.结论:黄芩苷对体外白念珠菌的芽管形成及黏附性有较强抑制作用.     

黄芩苷对白色念珠菌酶活性的影响

目的运用分光光度法检测黄芩苷作用白色念珠菌后,其琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素C氧化酶(CCO)、Ca2 -Mg2 -ATPase活性的改变,以探讨黄芩苷抗白色念珠菌作用靶位,为探索中药活性成分抗真菌作用机理提供依据。方法收集经黄芩苷作用了相应时间的白色念珠菌,制备菌悬液,反复冻融研磨,差速离心法提取白色念珠菌线粒体;Lowry法检测线粒体蛋白质含量;分光光度法检测SDH酶、CCO酶、Ca2 -Mg2 -ATPase活力。结果①0.25,0.5,1mg/ml黄芩苷浓度组白色念珠菌SDH活力明显低于0mg/ml黄芩苷浓度组(P<0.05),且出现黄芩苷浓度越高SDH活力越低的趋势。不同作用时间组间白色念珠菌SDH活力差异无统计学意义(P>0.05)。②白色念珠菌经不同浓度黄芩苷作用不同时间后,其CCO酶活力均无明显差异(P>0.05)。③0.25,0.5,1mg/ml黄芩苷浓度组与0mg/ml黄芩苷浓度组比较,Ca2 -Mg2 -ATPase活力差异显著,黄芩苷浓度越高,Ca2 -Mg2 -ATPase活力越低,作用时间对Ca2 -Mg2 -AT-Pase活力没有明显影响(P>0.05)。结论①黄芩苷具有明显的抗白色念珠菌作用;②黄芩苷可降低白色念珠菌SDH酶活力;③黄芩苷对白色念珠菌CCO酶活力未见明显影响;④黄芩苷可降低白色念珠菌Ca2 -Mg2 -ATPase活力。     

黄芩苷对非白念珠菌生物膜抑制作用的研究

目的:研究黄芩苷对光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌等非白念珠菌生物膜的影响.方法:96孔微量培养板上构建4种非白念珠菌生物膜;微量稀释法检测黄芩苷对4种非白念珠菌最低抑菌浓度(MIC);XTT减低法评价黄芩苷对4种非白念珠菌生物膜SMIC及菌细胞黏附性的影响.结果:4种非白念珠菌在96孔板中可形成成熟的生物膜;黄芩苷对4种非白念珠菌MIC分别是125,250,125,62.5 mg·L~(-1);黄芩苷对4种非白念珠菌生物膜的SMIC50分别是＞1 000,500,125,250 mg·L~(-1);SMIC80均大于或等于1 000 mg·L~(-1).黄芩苷对4种非白念珠菌的黏附有一定的抑制效应.结论:黄芩苷对近平滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌生物膜有较强的抑制作用.     

黄芩苷对大鼠肝细胞凋亡的影响

目的 :研究黄芩苷对体外培养大鼠肝细胞凋亡的影响。方法 :将黄芩苷作用于体外培养的大鼠肝细胞 ,以肿瘤坏死因子 (TNF-α)和放线菌素D(Act D)诱导细胞凋亡 ,MTT法检测细胞活性 (A值 ) ;溴甲酚绿法检测细胞功能 (ALB值) ;琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测法定性定量检测细胞凋亡情况。结果 :经 0.2,2.0μg·ml^-1浓度黄芩苷作用后肝细胞活性 (A值)及分泌白蛋白功能 (培养上清中ALB值 )均高于凋亡模型组 (A值P<0.05,ALB值P<0.01) ,其中 0.2μg·ml-1浓度组肝细胞的ALB值比空白对照组还高 (P<0.01) ;琼脂糖凝胶电泳显示 :只有凋亡模型组出现了典型的”梯状”条带 ;流式细胞术检测结果表明 :各中药组的凋亡率与凋亡模型组相比均有显著性差异 (P<0.01)。结论 :不同浓度的黄芩苷均对TNF-α和ActD所诱导的肝细胞凋亡有抑制作用。     

黄芩苷诱导前列腺癌细胞株DU145凋亡的体外研究

目的 :探讨黄芩苷诱导前列腺癌细胞株DU14 5凋亡的作用机制。方法 :采用不同浓度的黄芩苷处理细胞后 ,用流式细胞仪检测前列腺癌细胞DU14 5的凋亡率及细胞周期分布 ;电镜下观察细胞超微结构 ;免疫组织化学染色检测凋亡相关蛋白的表达。结果 :5 0 ,12 5 μmol·L^-1黄芩苷能诱导前列腺癌细胞DU14 5凋亡 ,凋亡率与剂量正相关 ;DU14 5随药物浓度及作用时间变化 ,细胞周期分布呈现G₁期细胞比例逐渐增高 ,并出现典型的凋亡峰 ;电镜下可见特征性的凋亡小体 ;免疫组织化学染色提示bcl 2在药物处理的DU14 5中表达下调 ,Bax表达缺失 ,Fas表达上调。结论 :黄芩苷能诱导前列腺癌细胞凋亡 ,并明显抑制癌细胞增殖 ,具有直接抗肿瘤作用。     

黄苓苷体外抗白念球菌生物膜作用的研究

目的 研究黄芩苷对体外白念珠菌生物膜的影响.方法 采用XTT减低法评价黄芩苷对白念珠菌的生物膜及黏附性的影响;镜下观察该药对白念珠菌生物膜的形态学影响:细胞毒试验检测该药的毒副作用.结果 各黄芩苷对白念珠菌生物膜的SMIC50、SMIC80分别是1 000μg/ml、2 000 μg/ml;2 000μg/ml及200μg/ml的黄芩苷对白念珠菌的早期黏附及菌丝生长有抑制作用:黄芩苷对人细胞毒性较弱.结论 黄芩苷对体外白念珠菌生物膜有较强的抑制作用.     

黄芩苷对白色念珠菌细胞周期的影响

目的:检测黄芩苷对白色念珠菌的MIC值,研究经黄芩苷作用后细胞周期的变化,为探索中药活性成分抗真菌作用机理提供依据。方法1参照美国国家临床实验标准化委员会NCCLS M-27A方案推荐的《酵母菌液基稀释法抗真菌药物敏感实验》,检测黄芩苷对白色念珠菌的MIC:2收集经黄芩苷作用了相应时间的白色念珠菌,制备菌悬液,反复冻融后,加入PI综合染液,4℃染色数小时,去除PI,300目尼龙网过滤,流式细胞术检测其细胞周期。结果1黄芩苷对白色念珠菌的MIC为0.5mg/ml。2随着黄芩苷浓度的升高,白色念珠菌处于G0/G1期的细胞数比例增加,细胞增殖指数(PI)下降(P<0.01)。结论1黄芩苷具有明显的抗白色念珠菌作用;2黄芩苷能抑制白色念珠菌增殖。     

黄芩苷对体外肿瘤坏死因子α诱导培养人早孕绒毛细胞滋养层细胞凋亡的影响

目的：研究肿瘤坏死因子α（TNF-α）对人早孕绒毛细胞滋养层细胞（CTB）细胞活力的影响及黄芩苷对体外TNF-α诱导培养CTB凋亡的影响。方法：选取不同浓度的TNF-α作用于CTB,四甲基偶氮唑盐（MTT）比色实验分析TNF-α对CTB细胞活力的影响。选取TNF-α作用浓度10ng/ml造模及0.04ng/ml的黄芩苷浓度作用于CTB,MTT和流式细胞术分析黄芩苷对CTB凋亡的影响荧光显微镜进行CTB凋亡的形态学观察。结果：TNF-α作用后的CTB活性（A值）均低于空白对照组,并且随着TNF-α浓度越大,A值越小。10、20ng/ml浓度TNF-α作用后CTB与空白对照组比较差异有显著性,P〈0.05。经TNF-α诱导培养24 h的CTB加入黄芩苷后的细胞活性均高于凋亡模型组,差异具有显著性,P〈0.05。流式细胞术示黄芩苷作用后的CTB凋亡率低于凋亡模型组。在荧光显微镜下,凋亡的CTB细胞核变小皱缩,可见致密强荧光。结论：TNF-α明显抑制细胞增殖分裂的过程。黄芩苷对TNF-α诱导培养的CTB凋亡有抑制作用。     

黄芩苷对Hela细胞凋亡的影响

目的探讨黄芩苷诱导Hela细胞的凋亡作用及对PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法培养Hela细胞后分为空白组、卡铂组(40μg/mL)及黄芩苷低、高剂量组(40、80μmol/L),处理24 h。MTT法检测细胞增殖,Annexinv-FITC/PI双染色和hoechst 33342染色检测细胞凋亡,Western blot法检测p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达。结果与空白组比较,黄芩苷(40、80μmol/L)能抑制细胞增殖(P<0.01),增加细胞凋亡率(P<0.01),抑制p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达(P<0.01),且细胞出现明显的染色质凝集、核萎缩、凋亡小体增多现象。结论黄芩苷可能通过下调PI3K/AKT/mTOR通路,从而具有抑制HeLa细胞增殖、促进凋亡的作用。     

白色念珠菌凋亡机制现代研究进展

参考国内外文献,以白色念珠菌的生物学特性、致病机制为铺垫;重点阐述白色念珠菌的凋亡机制,以期在后期实验研究以及临床用药方面,能够进一步深入研究。     

Inhibitive effect on phagocytosis of pretreatment with quercetin via actin Candida albicans induced by cytoskeleton interference

OBJECTIVE： To investigate the anti-inflammatory effect of pretreatment with quercetin on macro- phages after Candida albicans infection. METHODS： RAW 264.7 macrophages were used as a target cell line. Cell viability after treatment with quercetin at different time points was detected by Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester. Phagocytic function of macrophages was deter- mined by a fluorometric assay. Cytokine tumor ne- crosis factor a （TNF-a） production was measured by enzyme-linked immunosorbent assay. F-actin cy- toskeleton of L929 cells was stained by Alexa Fluor 488-phalloidin. RESULTS： Pretreatment with quercetin decreasedcell viability only at the highest concentration of 37 μg/mL 2, 24, and 48 h after the treatment. The phagocytic efficiency of macrophages pretreated with quercetin was significantly decreased in a time- and dose-dependent manner. F-actin label- ing showed that the actin cytoskeleton of the cells started to break down 2 h after treatment. More- over, it notably inhibited cytokine TNF-a produc- tion after Candida albicans infection. CONCLUSION： Pretreatment with quercetin in- duced an anti-inflammatory effect against Candida albicans infection in macrophages.     

Inhibitive effect on phagocytosis of Candida albicans induced by pretreatment with quercetin via actin cytoskeleton interference

Objective

To investigate the anti-inflammatory effect of pretreatment with quercetin on macrophages after Candida albicans infection.

Methods

RAW 264.7 macrophages were used as a target cell line. Cell viability after treatment with quercetin at different time points was detected by Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester. Phagocytic function of macrophages was determined by a fluorometric assay. Cytokine tumor necrosis factor α (TNF-α) production was measured by enzyme-linked immunosorbent assay. F-actin cytoskeleton of L929 cells was stained by Alexa Fluor® 488-phalloidin.

Results

Pretreatment with quercetin decreased cell viability only at the highest concentration of 37 µg/mL 2, 24, and 48 h after the treatment. The phagocytic efficiency of macrophages pretreated with quercetin was significantly decreased in a time- and dose-dependent manner. F-actin labeling showed that the actin cytoskeleton of the cells started to break down 2 h after treatment. Moreover, it notably inhibited cytokine TNF-α production after Candida albicans infection.

Conclusion

Pretreatment with quercetin induced an anti-inflammatory effect against Candida albicans infection in macrophages.     

柠檬醛体外诱导白念珠菌耐药的实验研究

目的探讨柠檬醛体外诱导白念珠菌耐药性的反应情况,进一步评价柠檬醛的临床应用价值。方法①参照NC-CLS M27-A方案中的微量液基稀释法测定柠檬醛和氟康唑对原始白念珠菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC);②采用多步诱导法,观察在含梯度浓度(1~50MIC)柠檬醛培养基上连续转种的白念珠菌MIC的变化情况,以氟康唑作为阳性对照,同时设空白对照和溶媒对照;③将敏感性下降的诱导株在无药培养基上连续转种10次后,检测其MIC值;④测定柠檬醛对氟康唑敏感性下降诱导株的MIC值。结果①柠檬醛和氟康唑对原始白念珠菌的MIC值分别为:0.162μg/ml和2.0μg/ml;柠檬醛对原始白念珠菌的MFC值为0.324μg/ml,氟康唑在实验的最高浓度(64μg/ml)未发现有杀菌作用。②在多步诱导培养过程中,柠檬醛组的MIC值始终保持不变,未诱导出对柠檬醛耐药的白念珠菌菌株,菌株转种至含10 MIC柠檬醛的培养基时,即停止生长,而在含50 MIC氟康唑的培养基上菌株仍能生长。氟康唑诱导组菌株在培养过程中,MIC值逐渐升高,转种至50 MIC时,其MIC(命名为FR株)是其亲株的12倍。③FR在无药培养基上连续转种10次后得到FR',氟康唑在FR'的MIC为20.16μg/m,与FR相比,差异无显著性(P>0.05);④柠檬醛对FR的MIC值为0.189μg/ml,与其相应的原始菌株无差异。结论柠檬醛不易产生耐药性,且对氟康唑敏感性下降的诱导株仍敏感。柠檬醛是一种有良好开发前景的抗系统性念珠菌感染的天然药物。     

Effects of Two Curcuminoids on Candida albicans

Objective To investigate and compare the action of curcuminoids on the causal pathogens of Candida albicans growth.Methods The effects of curcumin (CUR) and demethoxycurcumin (DMC) on C.albicans growth...     

黄芩苷对大鼠心肌缺血再灌注时细胞凋亡的影响

目的:研究黄芩苷对大鼠心肌缺血再灌注时细胞凋亡的影响。方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支复制心肌缺血再灌注损伤模型,黄芩苷100mg/kg于冠脉结扎前10min静脉注射后,再灌注结束后称重法检测心肌梗死面积,分光光度法测定组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)活性,原位末端标记(TUNEL)法和HE染色观察凋亡心肌细胞和组织病理学改变。结果:黄芩苷可明显抑制缺血再灌注所致心肌梗死面积增大,降低组织MDA、MPO含量,升高SOD活性,抑制心肌细胞凋亡和炎性细胞浸润。结论:黄芩苷可通过抑制心肌细胞凋亡而保护缺血再灌注心肌。     

散结乳癖膏对白色念珠菌的体外抑菌作用研究

目的研究散结乳癖膏对白色念珠菌的抑菌作用及其作用机制,为临床治疗女性外生殖道感染疾病新制剂的研制奠定基础。方法采用倍比稀释法检测散结乳癖膏最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC);采用MTT法确定散结乳癖膏对白色念珠菌的抑菌率,激光共聚焦显微镜下观察不同浓度药物作用于白色念珠菌后的效果,同时对其进行红绿荧光染色定量分析,观察药物作用后细菌的形态变化。结果倍比稀释法结果显示散结乳癖膏药物对白色念珠菌的最低抑菌浓度为25 mg·mL^-1,最低杀菌浓度为50 mg·mL^-1。MTT法结果显示在本实验所测的浓度范围内,散结乳癖膏药物对白色念珠菌的抑菌率可随着给药浓度的增加而显著增强其抑菌率(P<0.05)。在激光共聚焦显微镜下可清楚观察到散结乳癖膏作用于白色念珠菌,减少生物膜内活菌量并可以使之存活率降低,且破坏白色念珠菌生物膜并使其活性降低(P<0.05,P<0.01)。结论散结乳癖膏药物对白色念珠菌起到了显著的抑制作用,并具有对白色念珠菌生物膜破坏的能力。     

没食子酸抑制白念珠菌生物膜作用的研究

目的:研究没食子酸对体外白念珠菌生物膜的影响.方法:采用XTT减低法评价没食子酸对白念珠菌的生物膜及黏附性的影响;镜下观察没食子酸对白念珠菌生物膜的形态学影响;细胞毒试验检测该药的毒副作用.结果:没食子酸抑制白念珠菌生物膜最低药物浓度SMIC_(50),SMIC_(80)分别是500,1 000 mg·L~(-1);100,1 000 mg·L~(-1) 的没食子酸对白念珠菌的早期黏附及菌丝生长有抑制作用;没食子酸对人细胞毒性较弱.结论:没食子酸对体外白念珠菌生物膜有较强的抑制作用.     

新型抗真菌剂TTS-12对白念珠菌麦角甾醇生物合成相关ERG基因表达的作用研究

 目的 研究刺蒺藜（Tribulus terrestris L.）中分离的皂苷类新型抗真菌剂TTS-12对白念珠菌基因表达谱的影响。方法 采用微量液基稀释法研究了TTS-12 体外MIC₈₀值,并确定合适的作用时间和药物浓度,制备基因芯片,研究了TTS-12对白色念珠菌麦角甾醇生物合成直接相关ERG基因表达的变化,RT-PCR技术验证了芯片结果。结果 TTS-12浓度8 μg·mL-1,35 ℃,250 r·min-1,YNB培养基与SC5314共培养3 h,提取空白菌与药物作用菌mRNA,与白念珠菌芯片杂交;TTS-12作用后,麦角甾醇生物合成直接相关的ACS1、ACS2、ERG1、ERG2、ERG6、ERG7、ERG11、ERG25、ERG26及ERG27基因下调。结论 TTS-12通过与细胞膜上甾醇直接结合,抑制ERG基因表达发挥抗真菌作用。