髓清丸对内皮细胞增殖影响的血清药理学研究

目的研究中药复方髓清丸是否对内皮细胞的增殖有影响。方法采用血清药理学方法,以含髓清丸药物兔血清,体外培养观察内皮细胞系 ECV304的增殖、细胞周期及 DNA 含量等细胞学指标变化。结果与正常胎牛血清对照组和兔血清对照组比较,含髓清丸低、高剂量组的活细胞百分率、活细胞浓度均降低(P<0.05,P<0.01);含髓清丸血清低、高剂量组的培养液孵育的内皮细胞 OD 值呈不同程度的降低(P<0.01),高剂量组细胞毒活性>20%;髓清丸高、低剂量组内皮细胞 G_1期百分率均明显高于胎牛血清和正常兔血清组(P<0.01),而 S 期和 G_2期百分率也均较胎牛血清组和正常兔血清组有减低趋势。结论髓清丸体外有一定的抑制内皮细胞增殖的活性。     

补肾活血方含药血清对卵巢颗粒细胞ActA/Smads信号通路的影响

目的探讨补肾活血方含药血清对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞增殖分化及ActA/Smads信号传导通路的影响。方法采用机械分离法建立SD大鼠卵巢颗粒细胞体外培养体系。大鼠随机分为中药组,FSH组,胎牛血清组,无血清组。中药组再分为1%、5%、10%、15%、20%不同浓度含药血清培养液组,FSH组含FSH 25ng/ml,胎牛血清组含15%胎牛血清。ELISA检测E_2、P的分泌量。另设体外培养的颗粒细胞含药血清高、中、低剂量组,生理盐水组、FSH组、无血清组,空白组,分别于1h、2h、6h、12h、24h、48h后ELISA法测定ActA分泌量及免疫组化SP法测定ActRⅡA、Smad2、Smad3表达量。结果免疫组化FSHR阳性率大于95%。15%BSHX含药血清E_2分泌量最高,各组差异有统计学意义,P0.05;各组P分泌量无显著差异,P0.05。BSHX含药血清组ActA分泌量与时间存在一定的依赖性,12h后出现峰值,最佳剂量为中剂量组;各BSHX含药血清组中ActRⅡA、Smad2、Smad3免疫染色主要位于细胞核,且均与时间存在一定的依赖性,12h后出现峰值。结论 BSHX含药血清能促进体外培养的卵巢颗粒细胞增殖和分化,促进其E_2、P的分泌。通过促进ActA的分泌量和上调ActRⅡA、Smad2、Smad3表达来影响ActA/Smads信号通路的传导。     

CCK-8法检测牛膝醇提物体外诱导兔BMSCs增殖活性的研究

目的:研究牛膝醇提物含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖的影响。方法:采用高、中、低剂量牛膝醇提物以及等体积生理盐水对SD级新西兰大白兔进行灌胃,从中提取含药血清,同时采用贴壁筛选法培养兔骨髓间充质干细胞,并以4种不同浓度的含药血清及胎牛血清分别干预第三代骨髓间充质干细胞。于干预后第3、6、9天分别3次采用CCK-8法测定细胞光密度值(OD),比较各组间的差异。结果:高剂量组牛膝醇提物含药血清刺激骨髓间充质干细胞增殖,并促进细胞分化,其OD均值与其他组相比较最高,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:牛膝醇提物含药血清具有促进BMSCs增殖作用,其中高剂量作用最强。     

三七总皂苷含药血清对溶血磷脂酸诱导血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制研究

目的:观察三七总皂苷含药血清对溶血磷脂酸(LPA)诱导的血管平滑肌细胞增殖效应的影响,分析该作用与细胞外信号调节激酶ERK信号通路的关系。方法:采用贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞;以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察不同分组对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量。结果:空白血清+LPA组较空白血清组OD值升高(P<0.05),S期指数升高(P<0.01);三七总皂苷含药血清+LPA组与卡托普利含药血清+LPA组比较OD值降低(P<0.05),S期指数无差异;三七总皂苷含药血清+LPA+PD98059组较空白血清组OD值降低(P<0.05),S期指数无差异。结论:三七总皂苷对LPA诱导的VSMC增殖有拮抗作用,且作用强于卡托普利,其作用机制可能与抑制LPA对ERK信号通路的激活,从而抑制DNA合成,阻止细胞进入S期有关。     

补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞矿化结节形成影响的研究

目的观察补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1细胞)矿化结节形成的影响,探讨该方剂促进成骨的作用机制。方法依照体表面积折算成等效剂量的补肾活血固齿方灌胃大鼠,制备含药血清(含药血清组);同等剂量的蒸馏水灌胃大鼠,制备无药血清(无药血清组);胎牛血清作为空白对照(胎牛血清组)。MC3T3-E1细胞分别于补肾活血固齿方含药血清、无药血清、胎牛血清中培养14 d,利用茜素红染色法观察各组矿化结节的形成情况并计数。结果 3组细胞在14 d时均形成矿化结节,含药血清组矿化结节形成数量明显多于无药血清组及胎牛血清组(P均<0.05),无药血清与胎牛血清组矿化结节形成数量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾活血固齿方可促进MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化成熟,通过促进牙周骨组织的再生而发挥其药理作用。     

下瘀血汤对肝癌细胞生物活性及Nanog信号通路表达的影响

目的:研究下瘀血汤对肝癌细胞的作用以及对Nanog信号通路的影响。方法:将HepG2细胞分为空白血清组、低剂量含药血清组、中剂量含药血清组;高剂量含药血清组,通过MTT、流式细胞仪、Transwell测肝癌细胞增殖、凋亡及侵袭情况,实时PCR、蛋白质印迹法测Nanog mRNA、Bcl-2、胱天蛋白酶-3水平。结果:空白血清组肝癌细胞的OD值及侵袭数量高于中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),肝癌细胞凋亡率低于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),高剂量含药血清组肝癌细胞OD值及侵袭数量最少、凋亡最高;空白血清组肝癌细胞中Nanog mRNA及Bcl-2蛋白表达高于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),胱天蛋白酶-3的蛋白表达水平低于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),与低剂量、中剂量剂量含药血清组比较,高剂量含药血清组肝癌细胞中Nanog mRNA及Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),胱天蛋白酶-3蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:下瘀血汤通可抑制肝癌细胞的活性及其侵袭力、促进癌细胞的凋亡,其作用机制可能调控与Nanog信号通路,从而促进胱天蛋白酶-3的表达、抑制Bcl-2水平有关。     

髓清丸对内皮细胞增殖影响的血清药理学研究

目的研究中药复方髓清丸是否对内皮细胞的增殖有影响。方法采用血清药理学方法,以含髓清丸药物兔血清,体外培养观察内皮细胞ECV304的增殖、细胞周期、DNA含量等细胞学指标变化。结果含髓清丸血清高、低量组的活细胞百分率较正常,牛血清对照组和兔血清对照组均低,高、低剂量组的活细胞浓度较正常,牛血清组和兔血清对照组均低;含髓清丸高、低剂量组的培养液孵育的内皮细胞MTT法和A(OD)值呈不同程度的降低,细胞毒活性均>20%;FCM检测内皮细胞DNA含量显示,髓清丸高、低剂量组的内皮细胞的DNA 含量均低于牛血清和正常兔血清组,检测内皮细胞周期发现,髓清丸高、低剂量组内皮细胞G1期百分率均明显高于牛血清和正常兔血清组,而S期和G2期百分率均低于牛血清组和正常兔血清组。结论髓清丸体外有一定的抑制内皮细胞增殖的活性。     

分子生物学技术研究桂枝加葛根汤和独活寄生汤防治颈/腰椎病的机制

目的运用分子生物学技术研究桂枝加葛根汤和独活寄生汤防治颈/腰椎病的起效机制。方法用低、中、高剂量桂枝加葛根汤血清和独活寄生汤血清及空白血清分别干预大鼠颈/腰椎间盘细胞,再采用MTT比色法和Western blotting技术分别检测各组大鼠颈/腰椎间盘细胞生长情况和Ca M、Ca MK、CREB相关蛋白表达水平。结果干预后第1天,5组间颈/腰椎间盘细胞生长情况比色值比较差异无统计学意义(P均0.05);干预后的第2—7天,各中药血清组和胎牛血清组颈/腰椎间盘细胞生长情况比色值均明显高于空白血清组(P均0.05),且随作用时间呈递增趋势。各中药血清组和胎牛血清组颈/腰椎间盘细胞Ca M、Ca MK和CREB蛋白表达量均明显高于空白血清组(P均0.05);中、高剂量中药血清组和胎牛血清组各蛋白表达量比较差异均无统计学意义(P均0.05),但此3组各蛋白表达量均高于低剂量中药血清组(P均0.05),且高剂量中药血清组各蛋白表达量均明显高于中剂量中药血清组(P均0.05)。结论分子生物学技术研究提示桂枝加葛根汤和独活寄生汤可能通过促进颈/腰椎椎间盘细胞的生长及相关蛋白的表达水平达到防治颈/腰椎病的目的,而且其效应过程可能存在一条重要的信号通路即Ca M-Ca MK-CREB通路。     

丹参注射液对人血清培养类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的 探讨丹参注射液对类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）患者血清培养的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA FLSs）增殖的影响。方法 常规培养良好的RA FLSs,传代时用10%未灭活人血清（健康人血清和RA患者血清）作用24 h后,加入终浓度为0.4 mg/mL 丹参注射液,继续培养24 h。以10%胎牛血清作对照,光学显微镜观察人血清培养后和丹参注射液作用后的细胞形态变化;采用MTT法分析其增殖变化;流式细胞仪检测其凋亡;提取各组总RNA并逆转录,荧光定量PCR检测Bax mRNA表达。结果 （1） 无论是加入健康人血清还是RA患者血清后,细胞均能贴壁生长。相比而言胎牛血清组细胞背景较为干净,而人血清组细胞密度较胎牛血清组高,细胞形态无明显改变。（2）与胎牛血清组比较, MTT增殖实验显示, 健康人血清组和RA患者血清组的吸光度（OD）值均明显增高,差异有统计学意义（P<0.01）;加终浓度为0.4 mg/mL丹参注射液后,3组不同来源血清作用的细胞均受到不同程度的抑制（OD值显著降低,P<0.05）,且健康人血清组和RA患者血清组与胎牛血清组比较,OD值显著增加,差异有统计学意义（P<0.01）,健康人血清组与RA患者血清组比较,差异有统计学意义（P<0.05, P<0.01）。（3） 与胎牛血清组比较,RA血清组凋亡率明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）;胎牛血清组和RA患者血清组,经0.4 mg/mL丹参作用后,与相应未加丹参组比较,凋亡率均显著增加,差异有统计学意义（P<0.05）; FLSs经0.4 mg/mL丹参作用后,与胎牛血清组比较,健康人血清组和RA患者血清组的凋亡率均显著降低,差异有统计学意义（P<0.05, P<0.01）。（4） FLSs经0.4 mg/mL丹参作用后,RA血清组和胎牛血清组Bax mRNA表达均增加,差异有统计学意义（P<0.01）; 与胎牛血清组比较,健康人血清组及RA患者血清组,Bax mRNA的表达变化明显,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 （1）虽然健康人血清能更好的利于RA FLSs的生长,但对于特定疾病的细胞生物学研究,如无相应疾病患者血清前提下,胎牛血清更能反映真实结果;（2）丹参注射液可通过促进RA FLSs凋亡而抑制其增殖。     

补肾壮骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖及骨保护素mRNA表达的影响

目的:观察补肾壮骨胶囊含药血清对SD大鼠成骨细胞(OB)增殖、骨保护素(OPG)mRNA表达的影响,探讨其防治骨质疏松的机理。方法:将40只3月龄SD雌性大鼠分为补肾壮骨胶囊灌胃组(高、中、低剂量)和空白对照组制备含药血清和空白对照血清;取1天龄SD大鼠颅盖骨,分离、培养成骨细胞(OB),分别加入各实验血清组培养液培养OB,倒置相差显微镜下观察OB生长情况,MTT法测定OB的OD值,RT-PCR检测各组成骨细胞OPGmRNA表达。结果:3-8天时,补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组成骨细胞OD值均高于空白对照组(P<0.05)。各含药血清组成骨细胞OPGmRNA表达均高于空白对照组(P<0.01);补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组间比较,差异无显著意义(P<0.05)。结论:补肾壮骨胶囊含药血清组能促进OB增殖、上调OPGmRNA表达,可能是其防治骨质疏松的机制之一。     

杜仲含药血清诱导骨髓间充质干细胞定向分化的实验研究

目的 研究补肾中药杜仲含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及定向分化的影响.方法 将第4代MSCs以5×106接种于9块96孔板,3组,每组8孔;2块6孔板,每板3孔,2 d后换液,加入诱导液.分为空白组、地塞米松组、杜仲组.空白组加入含10%胎牛血清(FBS)的 L-DMEM培养基继续培养,地塞米松组在基础培养基加入诱导剂(含β甘油磷酸钠10mmol/L,地塞米松0.1 μmol/L,维生素C 50 mg/L),杜仲组为含10%杜仲含药血清的L-DMEM培养基.分别自加诱导液第1天起,采用MTT法测量96孔板细胞数,每天1块板;在第10天取出1块6孔板做ALP染色;第20天做6孔板茜素红染色.结果 杜仲含药血清组OD值呈现出明显的上升趋势,而空白组和地塞米松组无明显上升趋势;第10天杜仲组及地塞米松组ALP染色阳性,第13天起可见白色钙结节,第20天茜素红染色阳性.结论 杜仲含药血清能促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,并刺激细胞增殖.     

益气活血方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的：探讨益气与活血中药含药血清对骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs ）增殖能力的影响。方法全细胞贴壁培养法获取、纯化BMSCs,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞的培养体系,采集空白对照大鼠、益气药、活血药、益气活血中药灌胃大鼠含药血清,用10%浓度以上不同含药血清培养第三代BMSCs,置于37℃,5% CO2培养箱中孵育。用流式细胞术鉴定BMSCs。噻唑基四唑比色法（ methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）测细胞活性,绘制生长曲线,观察10%益气、活血、益气活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响。结果采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs,经流式细胞术检测,CD44、CD106呈阳性表达,基本不表达CD45、CD34;MTT法检测结果显示,培养第2、4、5天细胞快速增长,均较前一天增长明显（ P 〈0．05）,第6天时活血方血清组与益气活血方血清组细胞增长已呈下降趋势,而其它三组在第6天细胞增长达最大,与前一天比较仍有差异（ P〈0．05）,到第7天呈下降趋势。 BMSCs去除基线增殖率组间比较,培养第2天时,各组间比较虽无差异,但活血方血清组达最大（71．39±177;4．98%）;第4、6天时,益气活血方组达最大（66．40±177;1．47%）,与其它三组比较P〈0．01,活血方血清组次之;培养第6天时,益气方血清组较其它三组大,益气活血方血清组次之,活血方血清组最低。结论全细胞贴壁培养的大鼠骨髓间充质干细胞在细胞形态与表形表达上均具备BMSCs特征;益气活血中药含药血清对培养BMSCs增殖影响最大,活血方含药血清对细胞增殖影响出现最早、益气方含药血清对细胞增殖影响时间最长。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖影响的研究

目的 :从细胞分子学角度探讨骨康方防治骨质疏松症的作用机理。方法 :通过体外分离和培养成骨细胞体系 ,运用MTT法分别测定骨康含药血清、罗盖全含药血清、空白血清对新生大鼠成骨细胞增殖的影响。结果 :用 5 %和 10 %的血清培养第 7天时三组的OD值均为最高 ,而 2 0 %的血清培养第 5天时骨康血清组和罗盖全血清组的OD值最高。结论 :骨康含药血清有恒定的促进新生大鼠成骨细胞增殖的作用。实验研究结果〔1〕已经证实 ,骨康方能提高实验动物的骨矿含量和骨密度 ,改善生物力学性能 ,调节体内激素水平 ,具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用。     

痿症方对嗅鞘细胞增殖影响的药效学研究

目的：探讨痿症方对嗅鞘细胞（Olfactory ensheathingcells OEcs）增殖影响的血清药理学实验方法的建立。方法：采用MTT法检测各组给药剂量、采血时间、血清浓度的痿症方的血清培养大鼠OECs9天后的OD值。结果：5倍剂量组（给药剂量），1小时组（采血时间）的OD值，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），各组培养血清浓度OD值10％组〉20％组〉5％组。结论：痿症方5倍剂量灌胃，末次给药1小时后腹主动脉采血，制备血清后，以10％的浓度培养，能较好的促进大鼠OECs的增殖。     

补阳还五汤含药鼠血清对Rho激酶介导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察益气活血代表方剂补阳还五汤对Rho激酶介导的体外培养的主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:取正常SD大鼠30只,随机分为正常对照组(生理盐水)、补阳还五汤低剂量对照组(10 g/kg)和补阳还五汤高剂量对照组(20 g/kg);另取AS模型大鼠30只,随机分为AS模型组(生理盐水)、补阳还五汤低剂量治疗组(10 g/kg)和补阳还五汤高剂量治疗组(20 g/kg);1次/d,第10天制备含药血清,取血管平滑肌细胞进行细胞培养,随机分为4组:空白对照组、ROCK抑制剂组、ROCK激动剂组、阳性对照组。各组孵育1 d后,分为6个小组,每组6个复孔,分别加入上述步骤中制备的含药血清, 48 h后采用MTT法检测大鼠主动脉平滑肌细胞增殖情况。结果:不同含药血清及不同药物处理后,与正常对照组相比,阳性对照组、ROCK抑制剂组的模型对照组含药血清作用后OD值明显升高,有显著的统计学差异(P0.01);ROCK激动剂组、空白对照组的模型对照组含药血清作用后OD值明显升高,有显著的统计学差异(P0.001);阳性对照组、ROCK激动剂组、ROCK抑制剂组的补阳还五汤高剂量对照组含药血清作用后OD值降低,有统计学差异(P0.05)。与模型对照组相比,阳性对照组、ROCK激动剂组的补阳还五汤高剂量治疗组含药血清作用后OD值降低,有统计学差异(P0.05);空白对照组的补阳还五汤高剂量治疗组含药血清作用后OD值明显降低,有显著的统计学差异(P0.01),ROCK抑制剂组的补阳还五汤高剂量治疗组含药血清作用后OD值明显降低,有显著的统计学差异(P0.001)。结论:补阳还五汤可能通过Rho激酶介导抑制平滑肌细胞增殖,起到抗动脉粥样硬化作用。     

虎潜丸对骨髓基质干细胞增殖及分化的影响

目的:从体外实验探讨中药方剂虎潜丸对骨髓基质干细胞增殖及分化的影响,从细胞学层面阐述该复方治疗骨质疏松症的机制。方法:采用血清药理学方法,利用含有虎潜丸的药物血清与培养基联合培养兔骨髓基质干细胞(BMSC),通过MTT法检测含药血清对BMSC的促增殖作用,通过碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色以及钙结节染色,检测其促BMSC成骨分化能力。结果:MTT结果显示,含虎潜丸药物血清各组OD值明显高于不含药物血清的对照组。碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原染色以及钙结节染色强度的统计结果表明,虎潜丸药物血清各组均优于对照组,而虎潜丸药物血清各组之间没有显著性差异。结论:虎潜丸可通过促进BMSC的成骨分化和增殖作用治疗骨质疏松症。     

补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的观察补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1)碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,探讨其对成骨细胞分化的作用机制。方法将20只SD大鼠随机分为含药血清组和无药血清组,各10只。含药血清组大鼠予补肾活血固齿方灌胃,无药血清组予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃,均灌胃7 d后抽取腹主动脉血制备成含药血清和无药血清。胎牛血清组为直接购买的PAA胎牛血清。分别用含10%含药血清、10%无药血清及10%胎牛血清的培养基培养MC3T3-E1细胞24、48、72 h,检测MC3T3-E1细胞中ALP的含量。结果含药血清组培养24、48、72 h后MC3T3-E1细胞ALP含量均高于胎牛血清组及无药血清组同期水平,比较差异均有统计学意义(P0.05),但胎牛血清组与无药血清组同期差异无统计学意义(P0.05);含药血清组MC3T3-E1细胞ALP含量随培养时间的延长而明显增加(P0.05)。结论补肾活血固齿方可增强MC3T3-E1细胞中ALP活性,促进MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化,且均有一定时间依赖性。     

不同浓度益气活血方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖及VEGF表达的影响

目的探讨不同浓度益气活血方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖活力及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法将8只SD大鼠随机分为空白对照组4只、益气活血方组4只,纯化培养BMSCs,采集空白对照组(灌胃蒸馏水)、益气活血方组(灌胃益气活血方)大鼠血清;将BMSCs分为空白血清对照组、5%、10%、20%益气活血方血清组,分别以含10%空白血清及含5%、10%、20%益气活血方血清培养液干预培养BMSCs。MTT法检测BMSCs增殖活力,ELISA法检测培养BMSCs上清液VEGF水平。结果第2天、第4天、第6天,10%益气活血方血清组BMSCs去基线增殖率较5%益气活血方血清组与20%益气活血方血清组明显增加(P0.05或P0.01);第2天、第4天组间BMSCs上清VEGF水平比较,10%益气活血方血清组明显高于空白血清对照组、5%益气活血方血清组、20%益气活血方血清组(P0.01)。结论 10%益气活血方含药血清可明显提高BMSCs增殖能力,促进VEGF表达。     

术后康复汤对骨髓基质细胞增殖影响的实验研究

目的:通过观察术后康复汤对小鼠骨髓基质细胞(BMSC)增殖的影响,研究该方提升腹部手术后患者血红蛋白含量的作用机理。方法:原代培养小鼠BMSC,分别给予术后康复汤正常剂量含药血清、术后康复汤高剂量含药血清、空白血清和胎牛血清干预,MTT法检测药物作用后24h、48h、72h、96h BMSC的吸光度值。结果:术后康复汤作用后48h、72h、96h骨髓基质细胞活细胞数量均明显高于空白血清组,与胎牛血清组比较差异无统计学意义。结论:术后康复汤可能通过促进BMSC增殖,参与造血调控,进而升高机体血红蛋白含量,促进术后患者康复,发挥益气养血的作用。     

胎牛血清和大鼠血清对体外软骨组织构建的影响

目的观察胎牛血清和大鼠血清对体外构建大鼠软骨组织的效应,为组织工程软骨筛选出合适的培养方法。方法取大鼠原代软骨细胞,离心后,培养箱中放置48 h,细胞团块会自发形成软骨小结。分为胎牛血清组和大鼠血清组。每隔一天换一次液,连续培养2周。取出软骨组织,称量重量,固定于4%多聚甲醛,经过脱水、石蜡包埋、切片后,经HE(苏木素-伊红)染色,甲苯胺蓝和藏红-固绿染色及细胞免疫荧光检测Ⅱ型胶原(Col2a1)、I型胶原(Col1a1)的表达。结果胎牛血清组的软骨组织重量比大鼠血清组的软骨组织明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。HE染色结果表明:大鼠血清组的组织形态呈纤维样结构,而胎牛血清组组织形态呈典型的软骨结构。胎牛血清组的组织甲苯胺蓝和藏红染色明显,而大鼠血清组的组织甲苯胺蓝淡染,固绿深染,提示软骨组织退变或非软骨组织。进一步免疫荧光检测软骨标志基因Ⅱ型胶原和Ⅰ型胶原,胎牛血清组Ⅱ型胶原高表达,而大鼠血清组低表达,Ⅰ型胶原在两组的表达和Ⅱ型的表达呈相反的结果,即在大鼠血清组高表达,在胎牛血清组低表达。结论胎牛血清可促进体外软骨组织的形成,而大鼠血清抑制了软骨组织形成。胎牛血清适合体外构建大鼠软骨组织。