HH胶囊抗乙肝病毒的体外(2.2.15细胞)实验研究

目的 研究HH胶囊体外抗2.2.15细胞乙肝病毒作用.方法 HepG2.2.15是最常用的乙肝病毒感染的体外实验模型,用不同浓度的HH胶囊干预2.2.15细胞,用CCK-8检测药物细胞毒性,酶联免疫法检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg),荧光定量聚合酶链反应法检测乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA).结果 HH胶囊可以不同程度降低细胞外HBsAg、HBeAg、HBV DNA及细胞内HBV DNA,此作用具有时间和药物浓度依赖性.结论 HH胶囊具有良好的抗HBV作用.     

红背叶根不同提取物体外抑制HBsAg和HBeAg的实验研究

目的 观察红背叶根4种不同提取物对HepG 2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响,探讨红背叶根不同提取物体外抗HBV作用。方法 通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察红背叶根水提取物(WE)、石油醚提取取物(EE)及正丁醇提取物(BE)对HepG 2.2.15细胞的影响,采用ELISA法检测分析红背叶根4种提取物对HepG 2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用。结果 红背叶根正丁醇提取物在无毒浓度下对HepG 2.2.15分泌的HBsAg、HBeAg的抑制率分别达65.2 ％、94.4 ％,治疗指数分别为 > 9.8和 > 67.1;红背叶根乙酸乙酯提取物对HBeAg抑制率达53.4 %,治疗指数 > 2,而对HBsAg的无抑制作用;其他两种提取物对HBsAg、HBeAg则无抑制效果。结论 红背叶根乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物均有抗HBV作用,正丁醇提取物效果比乙酸乙酯效果更好,具有潜在的抗HBV开发前景。     

槐果碱体外对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg HBeAg的影响

目的:探讨槐果碱的体外抗乙型肝炎病毒作用。方法:采用HepG2.2.15细胞模型进行体外培养,给予不同浓度槐果碱,以拉米夫定作阳性对照,作用9天后检测上清液中HBsAg、HBeAg的分泌,观察药物对HepG2.2.15细胞分泌HBV病毒抗原的影响,同时以MTT法检测药物在体外对HepG2.2.15细胞的生长抑制作用,从而评价药物的抗HBV作用。结果:药物作用9天后,槐果碱对HepG2.2.15细胞的50%生长抑制率(TC50)为0.002M,对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的50%抑制率(IC50)为4.9uM,其治疗指数(TI=TC50/IC50)为408.16;而拉米夫定对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的抑制率在所选浓度范围内均低于50%。槐果碱对HepG2.2.15细胞分泌HBeAg的抑制率在所选浓度范围内均低于50%,但明显优于拉米夫定对HepG2.2.15细胞分泌HBeAg的抑制率。结论:槐果碱在体外具有显著的抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的作用,是一个高效低毒的抗乙肝病毒的有效药物。     

Taraffinisoside A对HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg及HBV-DNA表达的影响

目的研究六月青中一种苯乙醇苷taraffinisoside A的体外抗乙肝病毒作用。方法以Hep G2.2.15细胞株为模型,通过MTT法检测taraffinisoside A对Hep G2.2.15细胞的细胞毒作用。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液乙肝表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)表达水平,实时荧光定量PCR法检测细胞上清液HBV DNA的含有量。结果 Taraffinisoside A对细胞分泌HBsAg、HBeAg和HBV DNA具有明显的抑制作用(P0.01,P0.05)。抑制作用随药物浓度的增加而逐渐增强。结论 Taraffinisoside A在体外有明显的抗乙肝病毒作用。     

余甘子等28种藏药提取物体外抗乙型肝炎病毒的实验研究

目的:从28种藏药提取物中筛选体外抗乙型肝炎病毒(HBV)活性。方法:采用CPE法观察药物对HepG2.2.15的无毒浓度(TC0),并在此基础上采用ELISA法检测药物对HepG2.2.15表达乙型肝炎表面抗原(HB-sAg)和乙型肝炎E抗原(HBeAg)的抑制作用。结果:从28种藏药中筛选出余甘子提取物对HepG2.2.15细胞表达的HBeAg和HBsAg有显著的抑制作用,其TC0为15.6μg/mL。以15.6μg/mL的药物作用9 d后,HepG2.2.15细胞表达HBeAg与HBsAg水平分别比对照组下降了41%和28%。结论:通过对28种藏药的筛选,发现余甘子粗提物具有抗乙型肝炎病毒的活性。     

肝必康胶囊体外抗乙肝病毒的实验研究

目的:观察肝必康胶囊对乙肝病毒的抑制作用.方法:采用HepG 2.2.15细胞的培养,MTT比色法检测药物对细胞的毒性,定量PCR检测HBV-DNA,ELISA法检测HBsAg、HBeAg的含量,研究肝必康胶囊对HepG 2.2.15细胞的毒性,HBsAg与HBeAg表达及HBV-DNA含量的影响.结果:肝必康半数细胞毒浓度(TC50)为4.677 mg/mL,最大无毒浓度(TC0)为0.118 mg/mL.各组在用药后72、144 h细胞上清中HBV DNA拷贝数降低,肝必康在0.1 mg/mL时抑制率最高.各组用药后细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg浓度显著降低.肝必康在0.1 mg/mL时抑制率最高.肝必康各组含药血清在用药后72、144 h细胞上清中HBsAg和HBeAg浓度显著降低,高剂量组抑制率最高.显示明显抗HBV的作用,TI均大于2.结论:肝必康胶囊体外培养细胞实验证实其有较强的抗乙肝病毒作用,且毒性较低.     

雪灵芝提取物对HepG2．2．15细胞株HBsAg与HBeAg表达的影响

目的:探讨雪灵芝提取物对HepG2.2.15细胞株HBsAg与HBeAg表达的影响.方法:应用HepG2.2.15细胞系培养系统检测雪灵芝提取物对HBsAg与HBeAg表达的影响.结果:雪灵芝醇提物和水提物各剂量组(50～400 mg/L)孵育HepG 2.2.15细胞株72、96h后抑制了HBsAg和HBeAg的表达(与正常对照组比较,P<0.01),并呈浓度和时间依赖性.其中雪灵芝醇提物在实验72、96h对HBeAg最大抑制率分别为63.2%和90.8%;雪灵芝水提取物在实验96 h对HBsAg和HBeAg的最大抑制率分别为52.5%和72.8%.结论:雪灵芝醇提物和水提物体外均有明显的抗乙肝病毒作用,但醇提物细胞毒性较大,而水提物作用确切且毒性较低.     

中国圆田螺多糖体外抗乙肝病毒的实验研究

目的:探讨中国圆田螺多糖(PCC)体外抗乙肝病毒的生物学活性.方法:以HepG2 2.2.15细胞系为体外实验模型.MTT法检测细胞毒性,将不同安全浓度的PCC及阳性对照药物3TC作用于此细胞系,实验同时设不加药物的细胞对照,第9天收集细胞培养上清液.采用ELISA法测定各组细胞培养上清液中HBsAg,HBeAg水平,荧光探针定量PCR检测HBV-DNA含量.结果:PCC在HepG2 2.2.15细胞培养中的TCo为1g·L-1,TC50 ＞10 g·L-1,对细胞毒性较小.PCC对HepG2 2.2.15细胞HBsAg,HBeAg分泌的IC50分别为0.501,0.401 g·L-1,SI分别为＞19.96和＞24.94.PCC可以有效抑制HBsAg,HBeAg的分泌,且PCC对HBeAg的抑制效果优于HBsAg.PCC在0.1,1g·L-1(P＜0.05)对HepG2 2.2.15细胞中的HBV-DNA有明显的抑制作用.结论:中国圆田螺多糖具有一定的体外抗HBV活性,且毒性较小,具有良好的应用前景.     

蓖麻根提取物对HepG2.2.15HBsAg和HBeAg表达和抗菌作用的研究

目的 探讨蓖麻根提取物对HepG2.2.15细胞株HBsAg和HBeAg表达的影响与抗菌作用.方法 采用HepG2.2.15细胞系培养系统检测蓖麻根提取物对HBsAg和HBeAg表达的影响;用平板法对提取物连续稀释测定其最低抑菌浓度.结果 蓖麻根两种醇提物孵育HepG2.2.15细胞株72 h后均能抑制HBsAg和HBeAg的表达(与正常对照组比较P<0.05或P<0.01),其抑制效应呈浓度依赖性,其中50%醇提物在200 mg/L和100 mg/L抑制HBsAg的表达分别为100%和67.2%.蓖麻根提取物的最低抑菌浓度(MIC), 以50%乙醇提取物对金黄色葡萄球菌第3和4株、表皮葡萄球菌、大肠杆菌第2株的抑制作用较强(MIC均为19.5 μg/ml).其次是金黄色葡萄球菌第2株、大肠杆菌第3株、甲型和乙型链球菌、酿脓链球菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌(MIC均为39.1 μg/ml),而95%醇提物的抑菌作用较弱.结论 蓖麻根醇提物具有体外抗乙肝病毒和抑菌作用.     

鸡矢藤挥发油体外抗乙型肝炎病毒作用研究

目的 对鸡矢藤挥发油抗HBV作用进行体外抗病毒实验研究.方法 采用水蒸气蒸馏法提取鸡矢藤挥发油,以HepG 2.2.15细胞为实验对象,检测鸡矢藤挥发油对HepG 2.2.15肝癌细胞株的细胞毒性.并在最大无毒浓度下观察鸡矢藤挥发油对HepG 2.2.15细胞表达HBsAg,HBeAg的影响.结果 鸡矢藤挥发油在31～2 000 mg/L的浓度范围内,对HepG 2.2.15细胞有明显抑制作用,TC50为1 550 mg/L, TC0为500 mg/L.在最大无毒浓度下,鸡矢藤挥发油对HBsAg最大抑制率为72.49%,治疗指数为6.74,对HBeAg最大抑制率为23.64%.结论 鸡矢藤挥发油对HepG2.2.15细胞HBsAg,HBeAg分泌有较好抑制作用.     

In vitro and in vivo anti-hepatitis B virus activities of the lignan niranthin isolated from Phyllanthus niruri L.

Ethnopharmacological relevance

Niranthin is a lignan isolated from Phyllanthus niruri L. This plant has long been used in folk medicine for liver protection and antihepatitis B in many Asian countries. This study was designed to evaluate the anti-hepatitis B virus activity of niranthin using HepG2.2.15 cells and duck hepatitis B virus (DHBV) infected ducks as in vitro and in vivo models.

Materials and methods

Niranthin was isolated from Phyllanthus niruri L. (Euphorbiaceae) by extraction and chromatographic procedures and the anti-hepatitis B virus activity was evaluated both in vitro and in vivo. The human HBV-transfected liver cell line HepG2.2.15 was used in vitro assay. And the in vivo anti-hepatitis B virus activity was evaluated on the expression of HBV replication, HBsAg, HBeAg, ALT and AST on day 0, 7, 14, 17 after niranthin was dosed intragastricly (i.g.) once a day for 14 days at the dosages of 25, 50 and 100 mg/kg/day in the duck hepatitis B virus (DHBV) infected ducks.

Results

In the human HBV-transfected liver cell line HepG2.2.15, the secretion of HBsAg and HBeAg were significantly decreased after treatment with niranthin for 144 h, with IC₅₀ values for HBsAg of 15.6 µM, IC₅₀ values for HBeAg of 25.1 µM. In DHBV-infected ducklings, niranthin significantly reduced the serum DHBV DNA, HBsAg, HBeAg, ALT and AST. Furthermore, analysis of the liver pathological changes confirmed the hepatoprotective effect of niranthin.

Conclusion

The experimental data demonstrated that niranthin exhibits anti-hepatitis B virus activity both in vitro and in vivo.     

直杆桉果实提取物体外抗单纯疱疹病毒和乙型肝炎病毒的实验研究

目的:研究3种不同溶剂的直杆桉果实提取物体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法:采用MTT法检测药物毒性,CPE法与空斑减数实验检测药物抗HSV-1活性;采用ELISA法检测药物对HepG2.2.15细胞分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎E抗原(HBeAg)的抑制作用。结果:直杆桉叶果实的醋酸乙酯提取物(P18-E1)和甲醇提取物(P18-E2)无明显抗HSV-1的活性,水提物(P18-E3)能明显抑制HSV-1的致病变作用,其TC50为69.20 mg/mLI,C50为126.77μg/mL,治疗指数为545.87;3种不同溶剂的提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg和HBeAg均无明显抑制作用。结论:直杆桉果实的水提物(P18-E3)具有显著的抗HSV-1活性,主要是对病毒有直接灭活作用,也能影响病毒对细胞的吸附。初步推测其抗HSV-1活性的机理是影响病毒的囊膜结构从而使之失活。     

蛞蝓多糖体外抗乙型肝炎病毒作用研究

目的:研究蛞蝓多糖体外抗乙型肝炎病毒的作用。方法:以不同浓度的蜗牛多糖和拉米夫定与HepG2.2.15细胞混合培养,通过MTT法检测药物的细胞毒性,9d后用ELISA法检测细胞培养液中的HBsAg和HBeAg分泌水平,用实时荧光定量PCR技术检测培养液中的HBV-DNA含量。结果:蛞蝓多糖在1mg·mL^-1浓度以下对细胞无毒性。蛞蝓多糖在所稀释的各浓度下,对HBsAg、HBeAg均有抑制作用,最大抑制率分别为56.2%和58.1%;HBsAg、HBeAg的治疗指数分别大于19.98%、22.78%。蛞蝓多糖可抑制HBV-DNA的复制(P<0.05)。结论:蛞蝓多糖在体外具有显著抑制HBV的作用。     

辣蓼醇提液对ＨｅｐＧ２２１５细胞分泌ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的影响

目的：研究辣蓼醇提液对 HepG2.2.15细胞分泌乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎 e 抗原（HBeAg）的影响。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测辣蓼醇提液对 HepG2.2.15细胞的细胞毒作用;采用药物不同浓度处理 HepG2.2.15细胞72h 后,以酶联免疫吸附实验法（ELISA 法）测定细胞上清液中 HBsAg 和 HBeAg 的分泌水平。结果：辣蓼醇提液浓度为1.8、0.9mg／ml 时,对细胞有明显毒性;浓度为0.6、0.3、0.1 mg／ml 的辣蓼醇提液处理 HepG2.2.15细胞株72h 后,对 HBsAg、HBeAg 的分泌有抑制作用（P ＜0.05）,并呈量效关系。结论：辣蓼醇提液具有体外抗 HBV 的作用,同时有一定毒性。     

灵猫方对HepG2.2.15和HepAD38细胞La蛋白表达的影响

目的研究灵猫方对HepG2.2.15和HepAD38细胞cccDNA、pgRNA、sRNA和La-mRNA抑制作用,探讨灵猫方抗乙肝病毒(HBV)的作用机制。方法制备灵猫方水提物,500 mg/L和1 000 mg/L灵猫方水提物分别干预HepG2.2.15和HepAD38细胞,以0.9%Na Cl溶液作为空白对照组,6 d后收集培养液上清,ELISA法检测HBsAg和HBeAg水平;收集细胞提取总RNA,RT-PCR法检测细胞内cccDNA、pgRNA、sRNA和LamRNA表达水平。结果与空白对照组比较,灵猫方组的HepG2.2.15和HepAD38细胞的HBsAg和HBeAg分泌水平明显降低,细胞内cccDNA、pgRNA、sRNA和LamRNA表达水平明显降低(P0.01)。结论灵猫方可能通过抑制HepG2.2.15和HepAD38细胞内La蛋白的表达而促进pgRNA、sRNA和cccDNA的降解,从而抑制HBV的复制。     

Hepatoprotective and antiviral properties of isochlorogenic acid A from Laggera alata against hepatitis B virus infection

Ethnopharmacological relevance

The aim of this study was to determine the anti-hepatitis B effect of isochlorogenic acid A isolated from Laggera alata (Asteraceae), a traditional Chinese herbal medicine.

Materials and methods

The anti-hepatitis B activity of isochlorogenic acid A was evaluated by the d-galactosamine (D-GalN)-induced HL-7702 hepatocyte damage model and the HBV-transfected HepG2.2.15 cells.

Results

Isochlorogenic acid A significantly improved HL-7702 hepatocyte viability and markedly inhibited the productions of HBsAg and HBeAg. The inhibitory rates of isochlorogenic acid A on the HBsAg and HBeAg expressions were 86.9% and 72.9%, respectively. In addition, isochlorogenic acid A declined markedly the content of hepatitis B virus covalently closed circular DNA (HBV cccDNA) and induced significantly the heme oxygenase-1 (HO-1) expression in HepG2.2.15 cells.

Conclusions

Isochlorogenic acid A was verified to possess the potent anti-hepatitis B activity. The anti-HBV target of isochlorogenic acid A is probably associated with blocking the translation step of the HBV replication. Overexpression of HO-1 may contribute to the anti-HBV activity of isochlorogenic acid A by reducing the stability of the HBV core protein and thus blocking the refill of nuclear HBV cccDNA. Additionally, the hepatoprotective effect of isochlorogenic acid A could be achieved by its antioxidative property and induction of HO-1.     

赋肝能抗病毒作用实验研究

 目的研究中药制剂赋肝能(由植物鹅绒蒌陵菜Potentilla asserina L.分离提取而得的主要活性成分)对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用。方法建立以HBV转染的人肝癌细胞系(Hep G2)2.2.15细胞系为体外模型,HBV静脉感染、血清DHBV DNA(duck hepatitis B virus DNA)呈强阳性的北京鸭为体内模型,分别观察2.2.15细胞含药培养基中HBsAg和HBeAg及鸭血清中DHBV-DNA水平。结果 体外实验中,8 d时,各剂量组赋肝能对HBsAg和HBeAg均有明显抑制作用。大剂量赋肝能对HBsAg和HBsAg有显著抑制作用(P＜0.01)。体内实验观察,大剂量和中剂量赋肝能对DHBV-DNA有明显抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),其抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性。结论赋肝能对乙型肝炎病毒具有明显抑制作用,可能成为较好的治疗乙型肝炎的临床用药。     

大黄醇提液对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制作用

目的:研究大黄醇提液的抗乙型肝炎病毒(HBV)作用.方法:分别以大黄醇提液及大黄蒽醌类衍生物作用于体外培养的2.2.15细胞,观察其对2.2.15细胞HBsAg与HBeAg分泌的影响,评价其抗HBV作用.结果:药物作用于2.2.15细胞11d,大黄醇提液对2.2.15细胞的半数毒性浓度为36.69g/L,大黄蒽醌类衍生物(大黄素、大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄)对2.2.15细胞的半数毒性浓度分别为1.57g/L、57.30g/L、3.06g/L、＞63g/L.大黄醇提液对HBsAg、HBeAg的半数抑制浓度分别为3.29g/L、2.34g/L,治疗指数分别为12.06、16.96;大黄蒽醌类衍生物(大黄素、大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄)对HBsAg(HBeAg)的半数抑制浓度分别为1.26(1.74)、3.94(61.16)、0.57(3.54)、1.12(＞63),治疗指数分别为1.24(0.90)、14.54(0.94)、5.37(0.86)、＞52.07(1).结论:大黄醇提液在体外细胞培养中对两抗原的分泌有较好的抑制作用,其作用优于大黄蒽醌类衍生物.