大蒜提取物二烯丙基化三硫对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

目的:研究大蒜提取物二烯丙基化三硫(diallyl trisulfide,DATS)在体外对T24细胞凋亡的诱导作用,并探讨其诱导凋亡的分子机制.方珐:应用荧光染色形态学观察DATS作用后T24细胞凋亡形态学改变.并应用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化.采用蛋白质印迹法检测不同浓度DATS作用后T24细胞中caspase-3、PARP蛋白的表达,并进一步研究其分子机理.结果:DATS可明显诱导T24细胞细胞凋亡并呈显著剂量依赖性.DATS作用于T24细胞后,procaspase-3表达减少,同时出现PARP的裂解片段,并呈显著的剂量依赖性.DAlS作用于T24细胞后,p-PDK1,p-Ser 473-Akt的表达逐渐降低,呈剂量依赖性,但t-Akt的表达不受影响.DATS作用于T24细胞后,Bax表达逐渐增高,Bcl-2的表达逐渐降低,呈显著的剂量依赖性.结论:DATS能诱导T24细胞凋亡,凋亡的诱导作用呈显著剂量依赖性.DATS诱导产生凋亡的机理可能通过抑制124细胞PI3K/Akt信号通路的激活从而调节Bcl-2家族蛋白,并最终诱导凋亡发生.     

片仔癀通过PI3K/Akt信号通路诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡

目的探讨片仔癀诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）途径的关系。方法采用不同浓度片仔癀（0.4，0.8，1.2mg/mL）作用U2OS细胞，采用MTT法检测片仔癀对U2OS细胞增殖的影响；Hoechst 333258染色观察细胞凋亡情况；Western blot检测PI3K调节亚基p85α（PI3K p85α）、磷酸化PI3K调节亚基p85α（p-PI3K p85α）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、核多聚（ADP-核酶）聚合酶（PARP）、裂解PARP（Cleaved PARP）等PI3K/Akt途径相关蛋白的表达。结果片仔癀可明显抑制U2OS细胞的增殖，呈时间和浓度依赖性，诱导U2OS细胞凋亡；Western blot显示p-PI3K p85α、p-Akt蛋白表达明显下调，Cleaved PARP表达量增加，与空白对照组相比有明显差异（P<0.05）。结论片仔癀可通过抑制PI3K/Akt信号途径PI3K p85α、Akt磷酸化，促进PARP裂解，诱导骨肉瘤U2OS凋亡。     

塞来昔布通过调节PI3K/Akt通路活化影响人膀胱肿瘤细胞株T24的增殖和凋亡

探讨PI3K/Akt通路在选择性环氧化酶2(Cox-2)抑制剂塞来昔布抗膀胱肿瘤机制中的可能作用。方法常规培养的贴壁生长的T24细胞,加入不同浓度PI3K抑制剂LY294002共培养,MTT法测定其对T24细胞增殖活性的影响;贴壁生长及悬浮培养的T24细胞,分别加入塞来昔布、PGE2、LY294002等共培养,流式细胞仪测定T24细胞凋亡率。Western blot检测塞来昔布及PGE2作用后悬浮生长的T24细胞Akt活化情况。结果塞来昔布对贴壁及悬浮培养的T24细胞均可诱导其凋亡;PGE2及LY294002均对贴壁的T24细胞增殖和凋亡无明显影响,但PGE2对悬浮生长的T24细胞可减少其凋亡,而LY294002可显著增加T24细胞的失巢凋亡率。Western blot结果提示塞来昔布显著降低而PGE2增加Akt的活化。结论塞来昔布对PI3K/Akt信号通路的主要作用是阻遏Akt的磷酸化,通过阻止Akt活化抑制T24细胞增殖并诱导其产生凋亡。更多还原     

选择性抑制剂celecoxib诱导肝癌细胞凋亡及其相关分子机制的实验研究

研究环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂celecoxib抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡过程中的作用及其可能的机制。方法：采用celecoxib作用于Bel．7402、SMMC-772l的2种肝癌细胞株，以四甲基偶氮唑蓝(MTY)法测定肿瘤细胞的增殖抑制率、TUNEL实验、流式细胞术检测细胞凋亡率、免疫细胞化学和Westernblot实验测定细胞凋亡及Akt信号转导途径相关蛋白的激活状态。结果：Mrrr法显示celecoxib可抑制上述两株肝癌细胞增殖；TUNEL实验及流式细胞术结果证实，celecoxib处理后的肿瘤细胞可发生细胞凋亡；免疫细胞化学及Westernblot实验显示，celecoxib诱导凋亡主要是通过抑制Akt的Thr308磷酸化，进而激活caspase-9、caspase-3进行的。结论：celecoxib明显抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡，其主要机制可能通过Akt信号转导途径、激活caspase通路实现的。     

氧化苦参碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的可能机制

目的:观察氧化苦参碱(OM)对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法:用不同浓度的OM处理HepG-2细胞,MTT法检测OM对HepG2细胞生长增殖的抑制作用;应用Hochest荧光染色法观察OM处理后细胞形态的变化;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;免疫印迹法检测OM处理后细胞凋亡相关蛋白磷酸化Akt、caspase-3、Bax、Bcl-2和Bcl-XL.的表达.结果:OM抑制HepG2细胞的增殖并呈一定的量效和时效关系;HepG2细胞与OM作用后出现典型的凋亡细胞形态改变,细胞凋亡率增高;OM处理HepG2细胞后,磷酸化Akt蛋白表达下降,caspase-3可被蛋白酶水解形成相对分子质量17 000活性片段,Bax蛋白表达增强,Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达下调.结论:OM可诱导HepG2细胞凋亡,可能与其调节P13K/Akt信号通路,抑制Bcl-2和Bcl-xL的活性,激活caspase-3有关.     

PI-3K和MEK1/ERK信号通路在碱性纤维母细胞生成因子诱导乳腺癌细胞低氧诱导因子活化中的作用及机制

目的 探讨碱性纤维母细胞生成因子(bFGF)活化低氧诱导因子(HIF—1)的机制及其参与的信号通路,为抗肿瘤血管生成的研究提供新的实验依据。方法 以人乳腺癌细胞系T47D为对象,采用Western印迹方法检测细胞内HIF-let及磷酸化Akt,ERK1／2,p38蛋白质的表达;采用双萤光素酶系统检测HIF-1转录活性。结果 bFGF以时间和剂量依赖性的方式诱导HIF—1α蛋白表达,同时激活PI-3K／Akt和MEK1／ERK信号通路。分别应用FGFR1阻断剂SU5402以及PI-3K激酶抑制剂LY294002,MEK1激酶抑制剂PD98059,p38激酶抑制剂SB203580可以明显阻断bFGF对PI-3K／Akt,MEK1／ERK及p38信号通路的激活,但只有SU5402和LY294002可以阻断bFGF对HIF-1α蛋白表达的刺激作用,阻断效率达100％。bFGF增加HIF-1的转录活性,这一作用分别被PI-3K和MEK1激酶抑制剂抑制,抑制率分别为94．8％和81．7％。结论bFGF对HIF-1有明显活化作用。PI-3K／Akt和MEK1／ERK信号通路以不同机制共同调节这一过程,其中PI-3K／Akt信号通路起着更为重要的调节作用。     

吲哚美辛诱导的HL-60白血病细胞凋亡与JNK信号转导途径活化

目的：观察吲哚美辛对HL-60白血病细胞增殖的抑制作用及细胞凋亡的诱导作用，了解c-Jun N-末端激酶(JNK)信号转导途径在介导吲哚美辛诱导的HL-60细胞凋亡中的活化状态，揭示吲哚美辛诱导HL-60细胞凋亡的分子机制。方法：以台盼蓝染色检测药物干预后的HL-60细胞活力；分析HL-60细胞的增殖能力；DNA梯状胶电泳及吖啶橙／溴化乙锭染色形态学分析鉴定细胞凋亡；Western印迹检测凋亡信号蛋白caspase-9，-3和PARP的裂解激活以及JNK信号途径蛋白质MEK4，JNK，P-JNK，P-C-Jun的表达及活化状态。结果：200～400txmol的吲哚美辛能够显著抑制HL-60细胞增殖和诱导HL-60白血病细胞凋亡，并呈浓度和时间依赖性；HL-60细胞凋亡伴有easpase-9，3和PARP的表达上调及裂解激活；MEK4蛋白表达呈浓度依赖性上调；磷酸化JNK和磷酸化C-Jun呈浓度依赖性上调。结论：吲哚美辛可抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞凋亡；JNK信号途径活化介导了吲哚美辛诱导的凋亡。JNK途径的活化导致了下游caspase途径的活化。     

肝纤维化自发逆转的相关信号转导通路研究

探讨肝纤维化自发逆转过程中不同信号转导通路的改变。方法通过四氯化碳（CCl4）注射SD大鼠8周，随后停药6周建立肝纤维化自发逆转的动物模型。采用cDNA微阵列杂交、逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）等检测多种信号通路成员的表达变化。结果除MAPK／EKR信号通路外，与肝纤维化自发逆转相关的差异表达基因属于数条信号转导通路，包括：SAPK／JNK信号通路中的SAPKβ．Jun B原癌基因．Jun D原癌基因、p53；MEK5信号通路中的MAPKK5；P13K／Akt信号通路中的1，4，5-三磷酸肌醇3-激酶、1，4，5-三磷酸肌醇3-激酶B、HSP90β、v—akt；Notch信号通路中的PS2。针对SAPK β、MAPKK5、1，4，5-三磷酸肌醇3-激酶及PS2的RT—PCR检测，结果与cDNA微阵列杂交相吻合。SAPK／JNK及Notch信号通路中的关键基因表达降低，MEK5、P13K／Akt信号通路中的核心激酶表达水平上升，均可能促进肝细胞增殖、抑制其凋亡，从而诱导肝纤维化逆转。结论SAPK／JNK、MEK5、P13K／Akt及Notch信号通路可能通过协同效应，在肝纤维化的自发逆转过程中发挥重要作用。     

槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞自噬及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路的影响

目的 观察槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞活力、凋亡、自噬及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法 体外培养PC-3细胞,采用CCK-8法检测PC-3细胞活力,TUNEL染色检测PC-3细胞凋亡,吖啶橙染色观察PC-3细胞自噬小泡,GFP-LC3质粒转染分析观察PC-3细胞自噬小体,Western blot分析检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3融合蛋白(LC3)、Beclin-1和PI3K/Akt/mTOR 信号通路蛋白的表达。结果 槲皮素以浓度-时间依赖性的方式抑制PC-3细胞活力,并诱导细胞凋亡;能够增加PC-3细胞自噬小泡和自噬小体的数量;能够升高PC-3细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及Beclin-1表达,同时降低磷酸化-PI3K、磷酸化-Akt和磷酸化-mTOR的表达。结论 槲皮素可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR 信号通路诱导PC-3细胞发生自噬。     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶/核转录因子κB信号通路对细胞凋亡影响的研究进展

磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路是有核细胞内重要的传导通路之一,在调节细胞增殖、凋亡中起着重要作用。大量研究证明PI3K/Akt/NF-κB信号通路的激活可以影响细胞凋亡。本文就PI3K/Akt/NF-κB信号通路对细胞凋亡影响作用进行综述。     

华蟾素抗胶质瘤的作用及机制研究

目的 研究华蟾素对U87胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响,并初步探讨其中的分子机制。方法 不同浓度的华蟾素（0.5~20 μmol/L）处理U87细胞6 h、12 h、24 h、48 h后,用CCK-8试剂盒进行做细胞活性检测,观察华蟾素对U87胶质瘤细胞活性的影响。不同浓度的华蟾素（1~20 μmol/L）分别处理12 h、24 h后,用Hochest33342试剂检测U87胶质瘤细胞的凋亡情况。免疫荧光染色观察华蟾素处理24 h后与细胞增殖相关蛋白p-AKT(T308)的表达情况。Western blot检测不同浓度的华蟾素（1~20 μmol/L）处理24 h后与细胞增殖相关蛋白｛磷酸化的磷脂酰肌醇激酶（p-PI3K）、苏氨酸308位点磷酸化的蛋白激酶B〔p-AKT(T308)〕、丝氨酸473位点磷酸化的蛋白激酶B〔p-AKT(S473)〕、磷酸化核糖体S6蛋白激酶（PS6）、磷酸化的真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(p-4EBP1)｝和凋亡相关蛋白（BAX、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9）的表达情况。结果 华蟾素可抑制U87 胶质瘤细胞的活性、诱导U87胶质瘤细胞的凋亡,呈浓度和时间依赖性反应。华蟾素作用后可使凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3、BAX 的表达水平增高, PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT(T308)的表达水平降低。结论 华蟾素可抑制U87 胶质瘤细胞的增殖、诱导U87胶质瘤细胞的凋亡,这可能经由影响PI3K-AKT-4EBP1与BAX-caspase的信号通路实现。     

EGCG经PI_3K-AKT信号通路诱导人胃癌BGC-823细胞G1期阻滞

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate，EGCG）通过PI3K-AKT通路对人胃癌BGC-823细胞周期调控的分子机制。方法采用噻唑蓝比色法（MTT）检测BGC-823细胞的存活率；碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（flow cytometry，VCM）检测EGCG处理前后BGC823细胞周期的变化；Western blot检测PI3K-AKT信号传导通路相关蛋白的表达。结果EGCG能够抑制BGC823细胞的生长，且这种抑制作用与诱导BGC823细胞G1期阻滞有关。EGCG可以下调巩K-AKT信号通路蛋白Akt的磷酸化表达，对通路下游周期相关蛋白cyclinD1的表达也有抑制作用。结论EGCG能够通过活化PLK-AKT信号通路发挥诱导人胃癌BGC823细胞G1期阻滞的作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对高糖促血管平滑肌细胞增殖的抑制效应

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对高糖诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制效应及其作用机制。方法以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞)为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)和细胞计数方法测定细胞增殖状况,免疫印迹检测EGCG对高糖促增殖中的1-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT信号途径的影响。结果不同浓度高糖(15、30、50mmol/L)可以促进A10细胞增殖;50μmol/L EGCG对A10细胞具有一定的抑制增殖作用;EGCG(50μmol/L)与高糖(30mmol/L)共作用A10细胞后,可明显抑制高糖促VSMCs增殖作用;EGCG(50μmol/L)能够降低高糖(30mmol/L)对PI3K/AKT信号的激活效果。结论 EGCG对高糖促VSMCs增殖具有明显抑制效应,该作用可能与PI3K/AKT信号途径有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯增强低剂量顺铂对小细胞肺癌H446细胞株的细胞毒作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]联合顺铂(Cisplatin,DDP)对小细胞肺癌细胞株H446的细胞毒作用及其机制。方法采用MTT法检测EGCG及DDP影响H446细胞增殖的量效和时效关系。采用流式细胞仪检测不同浓度EGCG、DDP及二者联合作用于H446细胞对细胞周期及凋亡的影响。结果 EGCG和DDP均可抑制H446细胞增殖,该增殖抑制作用呈浓度及时间依赖模式。不同浓度的EGCG(80、160μmol/L)与DDP(1.0μg/ml)联合应用时,可使H446细胞阻滞于G2/M期。EGCG可诱导H446细胞凋亡,并能增强DDP诱导H446细胞凋亡的作用。结论 EGCG能够抑制H446细胞增殖,诱导H446细胞凋亡,增强DDP诱导H446细胞凋亡的作用,其机制可能与G2/M期阻滞有关。     

EGCG对人结肠癌细胞株HCT116、SW116增殖、凋亡及JAK／STAT3信号通路的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCC）对人结肠癌细胞株HCT116、SW116增殖、凋亡及JAK／信号转导子与转录激活子3（STA33）信号通路的影响。方法体外培养结肠癌细胞株,采用不同浓度的EGCG对其进行干预。分别采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测磷酸化STAT3（P—STA33）蛋白表达,RT—PCR法检测Bcl-2、Cyclin D1、C—myc mRNA的表达。结果EGCG抑制结肠癌细胞株增殖,促进其凋亡,降低p-STA33蛋白的表达水平,作用呈浓度依赖性;EGCG可以抑制结肠癌细胞株中Bcl-2、Cyclin D1、C-myc mRNA表达水平。结论EGCG抑制结肠癌细胞株增殖、促进其凋亡的机制可能与抑制JAK／STA33信号通路有关。     

系统性红斑狼疮患者外周血T细胞磷酸肌醇3激酶信号通路异常活化

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T细胞中磷酸肌醇3激酶(PI3K)信号通路活化情况及其临床意义.方法 检测28例SLE患者的T细胞PI3K通路活性.8例类风湿关节炎患者为对照,另以15名健康者为正常对照组.外周血T细胞分离采用RosettSep T细胞提取试剂盒提取,PI3K活性采用免疫沉淀和ELISA法,Akt及其磷酸化蛋白运用免疫印迹法,T细胞增殖采用MTT法,细胞因子水平采用ELISA检测.结果 新鲜分离的SLE患者外周血T细胞PI3K和Akt活性均显著高于正常对照组和类风湿关节炎组;SLE患者T细胞在体外培养24 h后PI3K和Akt活性与正常对照组差异无统计学意义,而正常对照组T细胞用SLE患者血清孵育24 h后PI3K和Akt活性显著增高;PI3K特异性抑制剂LY294002显著抑制SLE患者T细胞增殖(125±21 vs 197±26,P<0.05)及分泌白细胞介素(IL)-6和IL-10[分别为(425±69)ng/L vs(816±116)ng/L,P<0.05;(114±18)ng/L vs(207±31)ng/L,P<0.05].新鲜分离的SLE患者外周血T细胞PI3K和Akt活性与SLEDAI无相关关系.结论 SLE患者T细胞存在PDK信号通路异常活化,并与T细胞增殖和细胞因子分泌有关,SLE外周血中可能存在激活该通路的血清因子.     

VEGF经PI3K-Akt-Bad通路降低冻存后EOCs凋亡率

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）对低温冻存内皮生长晕细胞（EOCs）凋亡率的影响及其与PI3K-Akt-Bad信号通路的关系,研究VEGF降低低温冻存EOCs凋亡率的可能机制。方法：采用密度梯度离心法分离人脐带血中的单个核细胞,经体外扩增培养EOCs,用免疫细胞化学染色及荧光染色法鉴定细胞的内皮特性。以扩增后的第二代细胞为生物材料,将其分为W组（wortmannin干预24 h后冻存）、W+V组（wortmannin 干预24 h后+50μg/L VEGF冻存）、BC组（空白对照组）、V组（50μg/L VEGF冻存）,于-80 ℃冻存24 h后复苏。用流式细胞术检测EOCs凋亡率,Western blot法检测p-Akt、Bad、Caspase 3的表达量。结果：采用体外扩增培养的EOCs具有多种内皮细胞特性。低温冻存会增加EOCs的凋亡率（为5.36%±0.27%）,但50μg/L VEGF能够降低低温冻存和复苏过程EOCs的凋亡率（为3.36%±0.27%,P＜0.05）;经wortmannin对PI3K特异性抑制后,VEGF对EOCs的保护作用减弱,细胞的凋亡率增加（为8.34%±0.57%,P＜0.05）;加50μg/L VEGF的EOCs冻存细胞p-Akt表达升高而Bad和Caspase 3表达降低（均P＜0.05）,经wortmannin干预24 h后的EOCs冻存细胞p-Akt表达降低而Bad和Caspase 3表达升高（均P＜0.05）。结论：50μg/L VEGF能够降低低温冻存EOCs的凋亡率,其作用可能通过PI3K-Akt-Bad信号通路来实现。     

EGCG诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡及对Survivin蛋白表达的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocat-echin-3-gallate,EGCG)对人前列腺癌细胞PC-3凋亡及对其Survivin蛋白表达的影响。方法使用不同浓度的EGCG(0、20、40、80μg/mL)处理前列腺癌细胞株PC-3,通过细胞增殖曲线实验检测EGCG对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度EGCG处理PC-3细胞48h后对细胞周期及凋亡的影响;用RT-PCR法检测各浓度EGCG作用48h后PC-3细胞中Survivin基因的表达差异,使用Western blot进行确认。结果 EGCG可以抑制PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用随EGCG浓度的增加而增强(P<0.05);Sur-vivin在PC-3细胞中高表达,EGCG促使PC-3细胞的Survivin表达下调,其表达水平随EGCG浓度的增加而减少(P<0.01)。结论 EGCG能下调PC-3细胞中Survivin蛋白的表达,这可能是EGCG抑制PC-3细胞增殖、诱导其凋亡的关键机制。     

雷公藤红素对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响 及作用机制研究

目的 探讨雷公藤红素对人卵巢癌细胞株HEYa8 增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法 采 用MTT 法检测不同浓度和时间雷公藤红素对HEYa8 细胞增殖的影响。将HEYa8 细胞随机分为：雷公藤 红素组（0.4 mg/L,培养24 h）和对照组（未处理）。检测两组细胞的生长迁移情况、细胞分裂指数及细胞 数量。利用Western blotting 检测雷公藤红素激活凋亡并抑制肿瘤细胞的现象及分子机制。结果 雷公藤红 素在浓度为0.4 mg/L 培养24 h 时效果最佳。雷公藤红素组侵袭细胞、细胞分裂指数、细胞数量及CD44 及GSDMS-N 双阳性细胞占总细胞百分比较对照组低（P <0.05）,凋亡相关蛋白相对表达量较对照组高 （P <0.05）。雷公藤红素组PI3K/Akt 信号通路关键分子的蛋白表达量较对照组低（P <0.05）。结论 雷公藤 红素能够抑制HEYa8 细胞生长并诱导细胞凋亡,其分子机制可能与PI3K/Akt 信号通路被抑制有关。