山药提取物联合树突细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞对荷MDA-MB-231乳腺癌干细胞瘤裸鼠的治疗作用研究

目的 研究山药Dioscorea opposita提取物联合树突细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞（DC-CIK）对荷MDA-MB-231乳腺癌干细胞瘤裸鼠的治疗效果。方法 制备荷MDA-MB-231乳腺癌干细胞Balb/c裸鼠模型,随机分为4组,每组8只：对照组裸鼠尾iv生理盐水,0.2 mL/次,2次/周;DC-CIK组裸鼠在肿瘤干细胞接种4 d后尾iv 1×10⁶个DC-CIK细胞,2次/周,给药3周;山药提取物组裸鼠ig山药提取物125 mg/kg,0.2 mL/d,给药3周;山药提取物联合DC-CIK组裸鼠ig山药提取物125 mg/kg,0.2 mL/d,同时尾iv 1×10⁶个DC-CIK细胞,2次/周,给药3周。各组裸鼠在治疗3周期间每2天测量瘤体大小及裸鼠体质量,治疗结束后处死裸鼠,取出瘤体称质量;qRT-PCR法检测瘤组织中Akt信号通路中关键原癌基因c-Myc表达水平。结果 治疗结束后,各组裸鼠瘤体生长速率为山药提取物联合DC-CIK组结论 对荷MDA-MB-231乳腺癌干细胞瘤裸鼠治疗效果中,各给药组裸鼠肿瘤生长均受到明显抑制,其中以山药提取物联合DC-CIK组效果最佳。     

化浊解毒方对裸鼠人胃癌原位移植瘤VEGF与COX-2的影响

目的:研究化浊解毒方对裸鼠人胃癌原位移植瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、环氧合酶(COX)-2表达的影响。方法:BALB/c裸鼠40只,人胃癌原位移植瘤SGC-7901细胞株移植于裸鼠皮下以复制裸鼠人胃癌原位移植瘤模型,复制模型7d后,40只模型裸鼠随机分为4组,即模型(等容生理盐水,灌胃,每天1次)、中药(化浊解毒方0.4mL,灌胃,每天1次)、化疗(卡铂5mg·kg-1,腹腔注射,每3天1次)、联合用药(化浊解毒方0.4mL,灌胃,每天1次+卡铂5mg·kg-1,腹腔注射,每3天1次)组,连续4周。裸鼠每周称重2次,测量肿瘤2次。末次给药后2周末观察瘤体积与瘤重的变化,通过免疫组化法检测各组VEGF、COX-2的表达。结果:与模型组比较,中药、联合用药、化疗组抑瘤率显著增加,VEGF、COX-2的表达显著降低(P<0.05);而联合用药组优于化疗组。结论:化浊解毒方可降低模型裸鼠VEGF、COX-2的表达,联合用药疗效更佳。     

荷瘤裸鼠按时辰给予吉非替尼的药效学研究

目的:研究荷瘤裸鼠按时辰给予吉非替尼的药效学。方法:取BALB/c-nu裸鼠复制非小细胞肺癌模型后,随机分为不同时间给药的吉非替尼(4:00、8:00、12:00、16:00、20:00、24:00)组和模型组,每组10只。吉非替尼组裸鼠分别按相应时间ig给药1 mg/kg,模型组裸鼠ig给予等量的1%聚山梨酯80溶液,连续给药21 d。检测20 d内各组裸鼠的瘤体积及第21天时的瘤质量,计算抑瘤率;检测各组裸鼠肿瘤组织中表皮生长因子受体(EGFR)和细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)的m RNA及蛋白表达情况。结果:与模型组比较,各吉非替尼组裸鼠第18天时肿瘤体积均增加缓慢,除20:00组外其余各吉非替尼组裸鼠瘤质量降低、抑瘤率增加,其中4:00、8:00组裸鼠肿瘤组织中EGFR m RNA表达减弱,4:00、8:00、12:00组裸鼠肿瘤组织中ERK1/2 m RNA表达减弱,4:00、8:00、12:00、24:00组裸鼠肿瘤组织中p-EGFR蛋白表达减弱,4:00、8:00、24:00组裸鼠肿瘤组织中p-ERK1/2蛋白表达减弱,以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。与20:00组比较,4:00、8:00、12:00组裸鼠瘤质量降低,4:00、8:00组裸鼠肿瘤组织中p-EGFR蛋白表达减弱,8:00组裸鼠肿瘤组织中p-ERK1/2蛋白表达减弱,以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:吉非替尼对荷瘤裸鼠具有瘤抑制作用,并呈现时辰节律性,其中8:00给药肿瘤抑制效果最好,20:00给药抑制效果最差;其机制可能与EGFR、ERK1/2介导的传导通路有关。     

护肝布祖热方联合奥沙利铂对肝细胞癌荷瘤裸鼠的减毒增效作用及机制

目的 研究护肝布祖热方联合奥沙利铂对肝细胞癌荷瘤裸鼠的减毒增效作用及机制。方法 从40只裸鼠中选取8只作为空白组（生理盐水）,其余32只裸鼠皮下接种人肝癌Huh7细胞构建荷瘤裸鼠模型。将造模成功的32只裸鼠随机分为模型组（生理盐水,灌胃）、奥沙利铂组（10 mg/kg,腹腔注射）、护肝布祖热方组（0.69 g/kg,灌胃）和联合用药组（腹腔注射10 mg/kg奥沙利铂+灌胃0.69 g/kg护肝布祖热方浸膏）,每组8只。每天灌胃给药/生理盐水1次,连续32 d;每7天腹腔注射给药1次,共5次。实验期间,观察各组裸鼠一般情况,每4 d测量1次肿瘤体积;给药第30天,检测裸鼠热刺激缩足潜伏期;给药结束后,检测各组裸鼠的抑瘤率、脾脏系数、血常规指标以及血清中天冬氨酸转氨酶（AST）和肌酐水平,观察裸鼠肿瘤组织病理形态变化,检测肿瘤组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)、选择性自噬接头蛋白p62、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和胱天蛋白酶3(Caspase-3)的表达。结果 与模型组比较,奥沙利铂组裸鼠肿瘤体积、瘤重以及全血中白细胞、红细胞数量和脾脏系数均显著减小/...     

新型溶瘤病毒HSV-1-ab-VISTA的构建及其抗肿瘤作用

目的 探讨携带免疫检查点VISTA抗体的溶瘤病毒HSV-1-ab-VISTA在小鼠(C57BL/6J)移植瘤模型中的抗肿瘤效果。方法 利用CRIPSR-Cas9基因编辑技术制备携带VISTA分子抗体的HSV-1-ab-VISTA溶瘤病毒；琼脂糖凝胶电泳检测VISTA抗体的基因组片段大小；蛋白免疫印迹法检测VISTA抗体表达情况；构建小鼠移植瘤模型，游标卡尺测量溶瘤病毒治疗后瘤体大小的变化，且进行分析。结果 成功构建了携带免疫检查点VISTA抗体的溶瘤病毒HSV-1-ab-VISTA,和野生病毒相比，病毒增殖和裂解癌细胞的能力没有差别，HSV-1-ab-VISTA溶瘤病毒治疗显著缩小了小鼠的肿瘤大小。结论 HSV-1-ab-VISTA溶瘤病毒可抑制小鼠结直肠移植瘤的生长。     

雷公藤红素抑制可移植性人脑胶质瘤生长相关分子

目的 研究雷公藤红素在裸鼠胶质瘤动物模型治疗人脑胶质瘤的可行性.探讨雷公藤红素抑制SHG-44胶质瘤裸鼠移植瘤生长的作用机制.方法 建立BALB/c裸小鼠SHG-44胶质瘤移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为5组,采用腹腔内注射给药方法.雷公藤红素按4mg/kg、2mg/kg、1mg/kg三种浓度分组给药;阳性对照顺铂组按2mg/kg给药.定期观察肿瘤生长情况测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率.全部SHG-44裸鼠移植瘤石蜡标本用SP法免疫组化染色,检测移植瘤组织中的微血管计数(MVD)、以及bFGF、周期蛋白D1和PCNA的蛋白表达.结果 与溶媒对照组相比,雷公藤红素4mg/kg组、2mg/kg组均能抑制肿瘤生长(P＜0.05),其体积抑瘤率分别为35%和26.9%.雷公藤红素高剂量组能下调移植瘤组织中bFGF的蛋白表达(P＜0.05);MVD也随之降低(P＜0.05),呈剂量依赖关系.PCNA、周期蛋白D1在雷公藤红素高、中剂量组及阳性对照组移植瘤中的蛋白表达明显低于溶媒对照组(P＜0.05),呈剂量依赖关系.结论 雷公藤红素能明显抑制SHG-44裸鼠移植瘤生长,并存在剂量依赖性.其机制可能是下调bFGF的蛋白表达,抑制肿瘤血管生成,下调周期蛋白D1、PCNA的蛋白表达,对肿瘤细胞周期进行调控.     

免疫细胞治疗产品扩增活化的淋巴细胞的成瘤性研究

目的 研究免疫细胞治疗产品扩增活化的淋巴细胞（EAL）是否具有成瘤性,为其临床应用提供安全性依据。方法 采用BALB/c裸鼠,分为溶媒对照组、阳性对照（Hela细胞）组、EAL低、高剂量（1×10⁷、5×10⁷/只）组,sc给药1次,观察裸鼠临床症状、注射部位有无结节或肿物形成;每周2次称动物体质量;测量肿物体积,绘制生长曲线;肿物组织取出后,HE染色,光镜下进行病理检查。结果 注射后1周内,阳性对照组注射部位均有肿物生长,随着时间的延长体积逐渐增大;自给药后20 d起,阳性对照组雌性裸鼠与溶媒对照组比较,体质量显著增加（P<0.05、0.01）,但身体明显消瘦;病理学检查发现,阳性对照组皮下肿瘤细胞灶状/巢状/团块状增生,肿瘤组织坏死伴炎性细胞浸润、伴或不伴有真皮炎性细胞浸润及出血。EAL低、高剂量组临床症状观察和组织病理学检测均未见肿瘤样病变,体质量增长趋势与溶媒对照组一致。结论 BALB/c裸鼠sc EAL不具有成瘤性。     

华蟾素对乳腺癌MCF-7移植瘤裸鼠的抗肿瘤作用及机制研究

目的研究华蟾素对人乳腺癌移植瘤裸鼠的抑制作用及作用机制。方法建立MCF-7细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为5组：模型组、顺铂阳性对照组及华蟾素3个剂量组,另设正常对照组,腹腔注射给药12 d后,取血检测血常规、肝肾功能及T淋巴细胞亚群;处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率;取脏器,计算脏器指数,检测脾淋巴细胞增殖水平。结果华蟾素可抑制乳腺癌模型裸鼠肿瘤的生长;对荷瘤裸鼠血常规及肝肾功能无明显影响;抑制胸腺增大;促进T淋巴细胞增殖。结论华蟾素既可抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长,也可提高其免疫功能。     

低氧诱导因子-1α核酶基因对裸鼠胶质瘤生长的抑制作用

目的：探讨低氧诱导因子-α（HIF-1α）核酶对裸鼠胶质瘤生长的影响。方法：构建鼠胶质瘤细胞株C6裸鼠移植瘤，将HIF-1α核酶真核表达质粒Psupe-Rz用脂质体包装后进行瘤体内多点注射，对照组注射PBS和空质粒载体。连续注射14d，测量肿瘤体积，检测瘤组织HIF-1α的生物活性，并作病理切片检查。结果：HIF-1α核酶使肿瘤组织HIF-1α活性下降，肿瘤组织血管生成减少，明显抑制了裸鼠移植瘤生长。结论：该核酶有望成为有效的HIF-1α抑制剂，在肿瘤基因治疗中发挥作用。     

大黄素对荷人K562细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的:观察大黄素对白血病K562细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2的表达水平,探讨其作用机制。方法:建立裸鼠K562细胞皮下移植瘤模型,腹腔连续给药12d,处死裸鼠,称取瘤体质量,计算抑瘤率。采用HE染色光镜和透射电镜方法观察肿瘤细胞的凋亡情况,免疫组化方法观察肿瘤组织中Bax和Bcl-2蛋白表达情况,应用RT-PCR检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2的mRNA水平。结果:各用药组抑瘤作用与阴性对照组相比差异均具有显著性(P<0.05),高浓度组与羟基脲组具有同等的抑瘤效应(P>0.05),光镜和电镜检测发现大黄素低、中、高浓度组均可见瘤细胞凋亡和坏死,其中以高浓度处理组最为显著,羟基脲处理组部分瘤细胞以坏死为主。免疫组化和RT-PCR结果表明大黄素处理后肿瘤组织中Bax蛋白和Bax mRNA表达上调,Bcl-2蛋白和Bcl-2mRNA表达下调。结论:大黄素可以明显抑制K562细胞在裸鼠体内的生长,其作用机制可能是通过调控肿瘤中Bax及Bcl-2的表达,从而促进细胞凋亡。     

黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2裸鼠移植瘤组织p53 mRNA表达的影响

目的探讨黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠的抑瘤作用及其作用机制。方法建立人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠移植性肿瘤模型,随机分为3组,分别给予生理盐水、顺铂30 mg.m-2、黄芪注射液10.40 mg.(g.d)-1,经腹腔注射给药4 wk后处死CNE2荷瘤裸鼠,测量瘤体积,取瘤体称重,计算抑瘤率和相对肿瘤增值率;采用实时荧光定量PCR法的相对定量法检测黄芪注射液对各组裸鼠移植瘤组织中p53 mRNA表达的影响。结果生理盐水组、顺铂组、黄芪注射液组的移植瘤瘤体积分别为(1.51±0.25)cm3、(0.91±0.35)cm3、(1.04±0.51)cm3,与生理盐水组相比,顺铂组和黄芪注射液组的瘤体积小(P<0.01,P<0.05);顺铂组、黄芪注射液组对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠的抑瘤率分别为72.12%、39.90%;相对肿瘤增殖率分别为50%、60%。经实时荧光定量PCR法测定,与生理盐水组相比,各组裸鼠移植瘤组织中p53 mRNA的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠移植瘤具有抑制作用,但尚不能认为黄芪注射液可影响移植瘤组织中p53 mRNA的表达。     

Protective effect of a natural carrageenan on genital herpes simplex virus infection in mice

In the present study, the protective effect of 1T1, a lambda-carrageenan extracted from the red seaweed Gigartina skottsbergii was evaluated in a murine model of herpes simplex virus type 2 (HSV-2) genital infection. Six to eight-week-old female BALB/c mice were intravaginally inoculated with a lethal dose of HSV-2 (MS strain) and pre- or post-infection treated with different doses of a 10mg/ml solution of 1T1. A single topical administration of 1T1 shortly before infection of BALB/c mice with HSV-2 protected 9 out of 10 mice from HSV-2-induced lesions and mortality, compared with only 10% survival in control mice. In addition, 1T1 produced a total blockade in virus shedding in the vaginal secretions. When 1T1 pre-treatment was reinforced with a second dose 2h after infection, total protection was observed even when the prophylactic administration had taken place at 60min before infection. The irreversible virucidal action of 1T1 against herpes virus seems to be responsible of its protective effect against virus replication and mortality following vaginal HSV-2 infection.     

帕比司他抑制卵巢癌裸鼠移植瘤上皮-间质转化和生长机制探讨

目的　探究帕比司他（LBH589）对卵巢癌裸鼠移植瘤上皮-间质转化（EMT）、生长及具有PDZ结合域的转录共刺激因子（TAZ）/表皮生长因子受体（EGFR）通路的影响。方法　将造模成功的雌性BALB/c裸鼠50只按随机数字表法分成5组（n=10）：阳性对照组（腹腔注射5 mg/kg贝伐单抗）、模型组（腹腔注射等量生理盐水）以及LBH589低、中、高（腹腔注射10、30及50 nmol/L LBH589）浓度组,干预后每3 d测量各组瘤体积,计算抑瘤率。干预14 d后,采用Western blot法检测各组瘤组织TAZ、EGFR、上皮钙黏附蛋白E（E-Cad）、波形蛋白（Vim）表达。结果　与模型组比较,3 d时阳性对照组、LBH589高浓度组小鼠皮下移植瘤体积减小（P＜0.05）,6 d、9 d、12 d时LBH589各浓度组、阳性对照组小鼠皮下移植瘤体积均减小（P＜0.05）;与阳性对照组比较,LBH589低、中浓度组小鼠9 d、12 d时皮下移植瘤体积增大,12 d时抑瘤率降低（P＜0.05）;与LBH589低、中浓度组相比,干预9 d、12 d LBH589高浓度组小鼠皮下移植瘤体积减小,12 d LBH589高浓度组抑瘤率升高（P＜0.05）;与模型组比较,阳性对照组、LBH589各浓度组移植瘤组织中E-Cad蛋白表达升高,Vim、TAZ、EGFR蛋白表达降低（P＜0.05）;与阳性对照组比较,LBH589低、中浓度组移植瘤组织中E-Cad蛋白表达降低,Vim、TAZ、EGFR蛋白表达升高（P＜0.05）;与LBH589低、中浓度组相比,LBH589高浓度组移植瘤组织中E-Cad蛋白表达升高,Vim、TAZ、EGFR蛋白表达降低（P＜0.05）。结论　TAZ/EGFR通路在卵巢癌裸鼠移植瘤生长和EMT中有重要作用,LBH589可能通过抑制TAZ/EGFR通路激活,发挥抑制卵巢癌裸鼠移植瘤生长和EMT的作用。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人甲状腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制的研究#br#

目的　观察去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法　将人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞接种于16只BALB/c雌性裸鼠右前肢腋下。移植瘤模型建立后,用随机数字表法将裸鼠分为2组,实验组按照1 μg/g腹腔注射5-Aza-CdR 200 μL,每2 d给药1次,给药4周。对照组腹腔注射等体积生理盐水。末次给药后处死荷瘤鼠,观察2组裸鼠移植瘤的生长情况,HE染色观察移植瘤的病理形态学改变,采用甲基化特异性PCR检测死亡相关蛋白激酶（DAPK）基因甲基化程度,采用免疫组化染色与Western blot检测DAPK和DNA甲基转移酶（DNMTs）的蛋白表达水平。结果　经药物干预4周后,实验组移植瘤体积和质量均较对照组明显减少（P＜0.05）,相比对照组,实验组抑瘤率为45.38%。HE染色结果显示,实验组肿瘤细胞数量减少,部分区域肿瘤细胞核淡染、缩小,局部出现核固缩、核溶解。实验组DAPK基因甲基化程度低于对照组。免疫组化染色和Western blot结果显示,实验组DAPK蛋白表达量明显高于对照组,DNMT1、DNMT3A蛋白表达量低于对照组,差异有统计学意义（均P＜0.05）,2组DNMT3B的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。结论　5-Aza-CdR可通过调节裸鼠移植瘤内DNMTs来提高DAPK的表达,从而抑制甲状腺乳头状癌生长。     

Effect of the synthetic pineal peptide epitalon on spontaneous carcinogenesis in female C3H/He mice

The potential preventive effect of the synthetic pineal peptide Epitalon (Ala-Glu-Asp-Gly) on spontaneous tumorigenesis in mice was studied. One-year-old female C3H/He mice were kept for 6.5 months under standard conditions. Epitalon was injected at a dose of 0.1 microg, 5 times a week. Long-term exposure to Epitalon in small doses did not show any toxic effect. Treatment with Epitalon decreased the number of tumor-bearing mice with malignant tumors and prevented the development of metastases. Spontaneous tumors of the reproductive organs (mammary glands and ovaries) were predominant in both groups of mice (control and experimental). The mammary gland tumors were different variants of invasive ductal carcinomas. In the ovaries, granulosa-cell tumors were found. Tumors were in the minority in other organs and had benign characteristics. In control mice, metastases were found in 3 out of 9 tumor-bearing mice, all of them being from tumors of the reproductive organs. Treatment with Epitalon slowed down the development of metastases from spontaneous tumors, and no metastases were found in the experimental mice. These data highlight the antimetastatic effect of Epitalon as part of its oncostatic properties.     

单纯疱疹病毒Ⅱ型gD糖蛋白核酸疫苗的构建及免疫观察

目的：构建用于防治单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-Ⅱ）引起的生殖器疱疹的DNA疫苗。并探讨其免疫保护作用。方法：利用PCR法从HSV-Ⅱ Say株中扩增出gD糖蛋白基因的全部编码序列，将其插入pcDNA3中，构建HSV-Ⅱ gD核酸疫苗，用PCR法、酶切法和测序法进行鉴定；将重组质粒转染COS-7细胞，用原位ELISA检测表达产物；对BALB／c小鼠进行肌肉免疫，用微量细胞中和试验、ELISA、脾T淋巴细胞增殖反应和病毒攻击试验检测免疫效果。结果：构建的HSV-Ⅱ gD核酸疫苗具有良好的免疫原性，对小鼠具有保护作用。结论：本实验成功构建出了具有免疫防御效应的HSV-Ⅱ gD核酸疫苗。     

High gene expression of the mutant adenovirus vector, both in vitro and in vivo, with the insertion of integrin-targeting peptide into the fiber

In the present study, a first-generation adenovirus (Ad) vector was modified with the RGD peptide inserted into the fiber. The insertion of an integrin-targeting sequence into the Ad vector notably enhanced the luciferase expression in the Coxsackie virus and Adenovirus Receptor-deficient A2058 and B16BL6 melanoma cells. The results of an in vivo study with tumor-bearing mice also showed that Ad-RGD-Luc had enhanced gene expression in many organs and in the B16BL6 tumor compared to that induced by a conventional Ad vector after intravenous injection.