供者单采外周血中幼稚粒细胞检测的研究

目的 :探讨异基因外周血干细胞移植 ( Allo-PBSCT)供者经细胞集落刺激因子动员后 ,采集的外周血干细胞 ( PBSC)移植物中的幼稚粒细胞与单个核细胞 ( MNC)及 CD+ 3 4 细胞数之间相关性和移植的剂量标准。方法 :对 6例 Allo-PBSCT供者用 G-CSF或 G-CSF+GM-CSF进行动员 ,于动员前及动员后 ,对外周血及收集的MNC收集物中幼稚粒细胞及 CD+ 3 4 细胞进行检测计数 ,并计算出输给患者每公斤体重的 MNC、幼稚粒细胞及 CD+ 3 4细胞数。结果 :动员后外周血中的幼稚粒细胞与 CD+ 3 4 细胞数同步增加 ,外周血 MNC中幼稚粒细胞数与 CD+ 3 4 细胞数之间有较好的相关性。 6例患者全部植活恢复造血功能 ,并为染色体核型或血型转为供者型所证实。结论 :Allo-PBSCT供者经 G-CSF或 G-CSF+GM-CSF动员之后 ,外周血 MNC中幼稚粒细胞与 CD+ 3 4 细胞数有较好的相关性。因此 ,MNC与幼稚粒细胞数结合可作为 Allo-PBSCT的剂量标准 ,该法检测方便快速 ,稳定性好 ,便于推广     

尤文肉瘤患者外周血中肿瘤细胞的检测及其临床意义

目的 检测尤文肉瘤患者外周血单个核细胞中的EWS/FLI-1mRNA的表达并且探讨其临床意义。方法 应用巢式RT-PCR的方法检测11例尤文肉瘤患者15份标本和20例健康者外周血标本中EWS/FLI-1mRNA的表达。结果 全部健康志愿者外周血标本中均没有发现EWS/FLI-1mRNA的表达。11例尤文肉瘤患者的15份标本中,9例病人(81.8％)的13份标本中检测到有EWS/FLI-1mRNA的表达。其中6例病人(66.7％)在随访中发生转移,其EWS/FLI-1mRNA的表达水平明显高于另外3例没有发生转移的病例(P<0.05)。结论 应用巢式RT-PCR方法检测尤文肉瘤患者外周血中EWS/FLI-1mRNA的表达是一种帮助判断预后和评估治疗效果的比较好的方法。     

应用粒细胞集落刺激因子动员后异基因外周血干细胞移植供者外周血干细胞与不成熟粒细胞的相关性

 目的　探讨供者应用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员后单采外周血干细胞（PBSC）移植物中的不成熟粒细胞与CD+34 细胞及单个核细胞（MNC）之间的相关性。方法　122例异基因外周血干细胞移植（allo-PBSCT）供者用rhG-CSF 7.25～10 μg·kg-1·d-1进行动员,于动员前及动员后对外周血及PBSC收集物中的MNC和不成熟粒细胞及CD+34 细胞进行检测,并计算出输给患者的MNC、不成熟粒细胞及CD+34 细胞数。结果　动员后白细胞计数及不成熟粒细胞比值逐渐升高,至第5天达高峰;外周血MNC中不成熟粒细胞与CD+34 细胞同步增加有较好的相关性;采集后的PBSC移植物输给患者后,均全部植活并恢复造血功能,为染色体核型或血型及HLA转为供者型所证实,慢性粒细胞白血病患者Ph1染色体转阴。结论　rhG-CSF 7.25～10 μg·kg-1·d-1分两次皮下注射能有效动员PBSC;allo-PBSCT供者经rhG-CSF动员后,外周血MNC中不成熟粒细胞与CD+34细胞数同步增加有较好的相关性,不成熟粒细胞的数量可间接反映干／祖细胞的数量,故MNC与不成熟粒细胞数结合可作为allo-PBSCT的剂量阈标准。     

原发性肝细胞癌患者外周血单个核细胞中HBV-DNA含量检测的意义

目的:了解原发性肝细胞癌(PHCC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的整合情况,以揭示其在HCC发病机制中的作用。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测32例HCC患者和45例慢性乙型肝炎(CHB)患者血清和PBMC中HBV-DNA含量,引物和探针设计选择HBVC区的DNA序列。结果:HCC组和CHB组患者血清中HBV-DNA阳性率分别为62.5%(20/32)和46.7%(21/45)、HBV-DNA均值(不含阴性)分别为105.50±1.52和105.05±1.45copies/ml,PBMC中HBV-DNA阳性率分别为87.5%(28/32)和51.1%(23/45)(P<0.01)、HBV-DNA均值(不含阴性)分别为104.51±1.32和104.05±1.05copies/ml;HCC组血清和PBMC中HBV-DNA阳性率相比较有统计学差异(62.5%比87.5%,P<0.05);HCC组和CHB组血清和PBMC中HBV-DNA同时阳性时,其HBV-DNA含量均呈正相关(P<0.01)。结论:HCC患者PBMC中存在HBV-DNA整合的现象;作为临床预测HCC发生的风险指标,PBMC中HBV-DNA含量的检测与穿刺肝组织相比具有轻创或无创的优点。     

鼻咽癌患者外周血单个核细胞中P-gp和LRP的表达及其临床意义

目的通过检测鼻咽癌患者外周血单个核细胞中P-糖蛋白(P-gp)和肺耐药相关蛋白(LRP)的表达,探讨两者在鼻咽癌多药耐药中的作用及意义.方法采用流式细胞术对54例鼻咽癌患者化疗前后外周血单个核细胞中P-gp、LRP进行检测,同期选择鼻咽部非恶性肿瘤患者10例,正常健康人10例为对照组.结果 P-gp在正常人、非恶性肿瘤及鼻咽癌初治组中的表达差异无显著性,但在复发组的表达明显高于其他组,差异有显著性.LRP在初治及复发组中的表达明显高于对照组,且化疗前后差异有显著性.P-gp和LRP的表达与年龄、性别、临床分期、病理类型、淋巴结转移无显著相关.P-gp、LRP的表达与化疗疗效密切相关.结论 P-gp、LRP的表达在鼻咽癌多药耐药的产生中具有重要意义,对临床制定化疗方案具有潜在的指导意义.     

异基因外周血干细胞移植后外周血出现幼稚粒细胞与白血病复发的关系

目的了解异基因外周血干细胞移植（allo-PBSCT）后白血病复发与外周血幼稚粒细胞的关系。方法97例白血病患者经allo-PBSCT治疗,于14、30、60、90、120、180d及1年以后骨髓随访时同时观察外周血幼稚粒细胞出现情况,分析与白血病复发的关系。结果97例中,15例发生白血病复发。在30d及其以后外周出现幼稚粒细胞的57例中,复发14例,复发率24．6％,而30d及其以后外周血未出现幼稚粒细胞者的40例中仅有1例复发,复发率2．5％（P〈0．05）。复发与不复发者移植物抗宿主病（GVHD）差异无统计学薏：义（P〉0．05）。结论白血病复发与移植后外周血幼稚粒细胞有关．复发后治疗难度大,预后差。     

肺癌患者外周血树突状细胞的生物学特性研究

目的：探讨肺癌患者外周血来源的树突状细胞（dendritic cells, DC）生物学特性。方法：从肺癌患者外周血分离获得单个核细胞，用细胞因子GMCSF (100 μg/L)，IL4 (50 μg/L)体外培养诱导。凋亡肿瘤细胞负载24 h后加入TNFα（10 μg/L）或CD40激发型单抗于培养DC中，继续诱导3～4 d。分别测定DC的表型、DC摄取抗原能力；混合淋巴细胞反应（MLR）对T细胞增殖能力的测定；细胞计数和3HTdR掺入观察DC对T细胞的激发和扩增效应，并与健康志愿者外周血来源的DC进行比较。结果： 患者外周血单个核细胞和正常人外周血单个核细胞来源的DC均高表达CD1α，CD83，CD80，CD86和HLADR等DC的相关抗原和共刺激分子；患者的未成熟DC能有效摄取FITCDextran，经TNFα或CD40激发型单抗激发诱导后，成为成熟和有功能的DC,几乎完全失去对抗原的摄取能力，与健康人外周血来源DC组相比无明显差别(P>0.05)；患者单个核细胞来源的DC在体外具有激发自体和同种异体外周血T细胞增殖的能力。结论：肺癌患者的外周血来源单个核细胞可以诱导成为具有功能的成熟DC。     

紫杉醇联合重组人粒细胞集落刺激因子动员 乳腺癌患者外周血干细胞的效果及影响因素

 目的研究紫杉醇联合重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员乳腺癌患者外周血干细胞（peripheral blood stem cell,PBSC）的效果及影响因素分析。方法2006年2月至2009年6月我科收治行紫杉醇动员的26例乳腺癌患者,紫杉醇（PTX,175 mg/m2 持续静脉滴注24 h）化疗后,白细胞降至1.0×109/L左右时使用rhG-CSF 5 μg /(kg·d) 动员至采集结束。并进一步分析患者年龄,化疗后白细胞最低数,采集前各类血细胞数,术后分期以及既往化疗等因素对采集单个核细胞（mononuclear cell,MNC）、CD34+细胞数的影响。结果白细胞计数于紫杉醇化疗后中位7d降至1.0×109/L 左右,皮下注射rhG-CSF中位4d进行外周造血干细胞采集,采集总MNC平均(7.89±1.45)×108/kg,采集总CD34+细胞平均(4.88±1.54)×106/kg。年龄与采集CD34+细胞数显著相关。而其他因素对MNC及CD34+细胞数均无显著影响（P>0.05）。所有患者均未出现严重不良反应。结论PTX（175 mg/m2 持续静脉滴注24h）联合rhG-CSF为转移性乳腺癌患者动员的有效安全方案。患者年龄显著影响CD34+细胞的采集数量。     

脐血CD+34细胞扩增前后端粒酶活性及微卫星遗传稳定性的研究

目的：通过检测脐血CD^ 34细胞扩增前后端粒酶活性及微卫星DNA序列，探讨其遗传稳定性。方法：用Mini MACS磁分离技术分离脐血CD^ 34细胞．体外扩增2周．PCR-ELISA方法检测扩增前后细胞的端粒酶活性；用PCR银染方法对脐血CD五细胞扩增前后5个微卫星序列进行比较分析。结果：脐血CD去细胞体外扩增过程中，端粒酶活性呈现先升后降的趋势,0天时。端粒酶活性相对值的中位数为14％，第7天明显增高，达57％，第14天回落至29％；扩增前后，BAT-25、Mfd41、D5S436、D5S396、D2S123 5个微卫星位点未见改变。结论：脐血CD^ 34细胞扩增过程中，端粒酶活性会暂时性升高，所测的微卫星位点未见改变。     

外周血CD34 +细胞计数对外周血干细胞采集时机选择及结果的影响

目的:探讨外周血造血干细胞动员过程中外周血CD34 +细胞计数的变化趋势及其对采集时机选择和采集结果的影响。 方法:收集2012年4月至2017年3月在山西省肿瘤医院行自体外周血造血干细胞动员的62例血液病患者临床资料,采用化疗联合粒细胞集落刺激因子（G-CSF）的动员方案,监测外周血及采集物中白...     

多西他赛联合重组人粒细胞集落刺激因子动员乳腺癌患者外周血干细胞的效果及影响因素分析

 目的研究多西他赛联合重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）在乳腺癌患者动员外周血干细胞 （peripheral blood stem cell,PBSC）的效果及影响因素。方法2006年2月—2009年6月我科收治的55例 行多西他赛（商品名多帕菲,TXT,120 mg/m2 持续静脉滴注3 h）动员的乳腺癌患者,化疗后白细胞降至 1.0×109/L左右时使用rhG-CSF 5 μg /(kg·d) 动员至采集结束。并进一步分析患者年龄、化疗后白细 胞最低数、采集前各类血细胞数、内脏、骨转移情况及化、放疗情况对采集单个核细胞（mononuclear cell,MNC）和CD34+细胞的影响。结果多西他赛化疗动员后中位7d白细胞降至1.0×109/L 左右,皮下注 射rhG-CSF中位3d,采集总MNC平均(5.51±1.24)×108/kg,采集总CD34+细胞平均(2.90±1.38)×106/kg 。年龄、化疗后白细胞最低数与采集CD34+细胞均显著相关（P<0.05）。化疗的周期数≤6的患者采集平均 CD34+细胞数较周期数≥6患者显著增高（P<0.05）。无1例患者出现严重不良反应。结论TXT（120 mg/m2 持续静脉滴注3 h）联合rhG-CSF为转移性乳腺癌患者动员的有效安全方案。患者年龄、既往化疗周期数显 著影响患者CD34+细胞的采集数量。患者化疗后白细胞最低数可作为采集CD34+细胞数量的预测指标。     

肿瘤患者血清及外周血单个核细胞培养上清TNF—α含量变化

目的：观察肿瘤患者体内ＴＮＦ－α的变化。方法：应用放射免疫测定法对４０例健康对照者，３０例非肿瘤患者及２８例肿瘤患者（其中６例肿瘤术后复查）进行了血清及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）培养上清ＴＮＦ－α含量测定。结果：对照组曲血清及ＰＢＭＣ培养上清中ＴＮＦ－α含量甚低，疾病时血清及ＰＢＭＣ培养上清中ＴＮＦ－α含量大幅度上升，显著高于正常对照组（Ｐ〈０．０１）。正常对照组中，ＰＢＭＣ增殖倍数与上清液中Ｔ     

肿瘤患者自体血浆诱导树突状细胞的实验研究

目的探讨以实体瘤患者自体血浆替代胎牛血清诱导外周血单核细胞(PBMC)来源的树突状细胞(DC)的可行性,为临床应用提供实验依据。方法以血细胞分离机分离经动员的实体瘤患者外周血单核细胞(PBMC),在自体血浆(AP)、胎牛血清(FCS)等培养条件下,加入rhGM-CSF、rhIL-4和nrhTNF-α培养7~9 d诱导成为树突状细胞,进行细胞形态、表型及刺激T细胞增殖能力分析。结果在不同血清条件下,PBMC经诱导后均出现典型的树突状细胞形态和超微结构;但流式细胞术分析显示,以自体血浆培养的DC共刺激分子CD86为(74.09±0.92)%,MHCⅡ类分子HLA-DR为(91.73±1.96)%,显著高于FCS培养的DC;并且同种混合淋巴细胞反应结果显示AP-DC具有更高效的刺激T细胞活化增殖的能力。结论以AP代替FCS,实体瘤患者PBMC可被诱导为表型更成熟的DC;该方法既可去除异种蛋白干扰,又利于DC成熟,可作为临床应用DC的培养途径。     

重组hIFN-α-2b-BCG对人外周血免疫细胞因子表达调节及抗膀胱肿瘤作用的实验研究

目的:探讨重组卡介苗(bacilli Calmette-Guérin BCG)对人外周血单个核细胞(peripheral blood monocytes,PBMC)IFN-γ、IL-12和TNF-α细胞因子表达、免疫增强及抗肿瘤效应。方法:重组BCG、野生型BCG和外源性人IFN-α-2b+野生BCG,分别与PBMC共同培养,以单纯PBMC为对照,在不同时段收集培养液上清,经ELISA法检测上清液中IFN-γ、IL-12和TNF-α的表达水平;将BCG激活杀伤细胞(bacilli Calmette-Guérin activated killercell,BAK细胞)与人膀胱肿瘤细胞EJ细胞共同培养,采用乳酸脱氢酶释放试验(LDH)检测活化免疫细胞的抗肿瘤效果。结果:重组BCG诱导PBMC产生细胞因子的表达明显高于同浓度的野生型BCG组和野生型BCG+外源性人IFN-α-2b组(P<0.05);重组BCG诱导的PBMC抗癌效应均高于对照组诱导的抗癌效果(P<0.05)。结论:重组BCG诱导人PBMC高表达IFN-γ、IL-12和TNF-α,并通过增强人PBMC细胞因子的表达来提高抗膀胱肿瘤作用。     

白细胞介素2激活外周血、脐带血和骨髓单个核细胞培养上清对人白血病细胞株

目的 探讨用白细胞介素2（IL-2）激活的外周血（APB）、脐带血（ACB）和骨髓（ABM）单个核细胞的培养上清对肿瘤细胞的作用,及其作用的可能机制。方法 应用MTT法和集落培养法在体外检测了APB、ACB和ABM培养上清对HL-60和K562细胞的作用,用ELISA法检测了各种上清中TNF-a和IFN-r的产生情况。结果 APB、ACB和ABM培养上清都可产生TNF-a和IEN-r,对HL60和K562细胞有一定抑制作用,以APB培养上清最强。结论 应用IL-2净化自体干细胞移植物中混杂的肿瘤细胞时,培养上清中的细胞因子或其它成分也可以直接抑制肿瘤细胞。     

外周血CD_(34)~+细胞检测对外周血干细胞采集结果及时机选择的意义

 目的　研究外周血CD+34 细胞数对采集结果的意义,并探索可用于临床指导外周干细胞采集时机选择的参考阈值。方法　2007年1月至2009年12月共57例次自体造血干细胞移植动员采集患者,以环磷酰胺（CTX）化疗+粒细胞集落刺激因子（G-CSF）（5～10 μg／kg）动员,COBE分离仪（Spectra Version 6）行外周血造血干细胞采集,应用流式细胞术监测外周血中CD+34 细胞绝对计数。结果　采集产品单个核细胞（MNC）中位数4.6×108／kg（0.3×108／kg～10.5×108／kg）,CD+34 细胞中位数2.4×106／kg（0.16×106／kg～34.9×106／kg）,外周血CD+34 细胞数是产品MNC和CD+34 细胞总量唯一相关指标,外周血白细胞（WBC）与采集产品MNC和CD+34 细胞数无关。进一步分析提示外周血CD+34 计数≥15／μl,单次采集效率提高,CD+34 细胞采集量达1×106／kg和2×106／kg比例为81 %和60 %,采集产品MNC和CD+34 总数明显提高。提示外周血CD+34 细胞数15／μl可作为启动采集。ROC分析发现外周血CD+34 细胞 25（26.5～28.6）／μl,单次采集足量CD+34 细胞概率最大。结论　外周血CD+34 细胞计数是外周血自体干细胞采集重要的相关指标,CD+34 细胞 15／μl可作为采集时机选择的阈值。     

肿瘤患者血清及外周血单个核细胞培养上清TNF-α含量变化

目的：观察肿瘤患者体内ＴＮＦ－α的变化。方法：应用放射免疫测定法对４０例健康对照者，３０例非肿瘤患者及２８例肿瘤患者（其中６例肿瘤术后复查）进行了血清及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）培养上清ＴＮＦ－α含量测定。结果：对照组血清及ＰＢＭＣ培养上清中ＴＮＦ－α含量甚低，疾病时血清及ＰＢＭＣ培养上清中ＴＮＦ－α含量大幅度上升，显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）。正常对照组中，ＰＢＭＣ增殖倍数与上清液中ＴＮＦ－α含量间呈显著正相关（ｒ＝０．４６，Ｐ＜０．０１），但肿瘤及非肿瘤组中ＰＢＭＣ增殖倍数与上清液中ＴＮＦ－α含量间不存在相关关系。６例实体瘤患者术后一月血清及ＰＢＭＣ培养上清中ＴＮＦ－α含量均较术前明显下降（０．０１＜Ｐ＜０．０５）。结论：在各类疾病中，以肿瘤患者血清及ＰＢＭＣ培养上清中ＴＮＦ－α含量最高，且随肿瘤的切除及疾病恢复，体内ＴＮＦ－α呈逐渐下降趋势。因此ＴＮＦ－α活性测定对肿瘤患者病情变化及预后状况的判定，具有一定的参考价值。     

外周血单个核细胞甲胎蛋白mRNA表达与肝癌的研究

目的　应用ＲＴ－ＰＣＲ技术研究原发性肝癌患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）甲胎蛋白（ＡＦＰ）ｍ ＲＮＡ 表达与肝癌转移的关系。方法　原发性肝癌４８ 例。慢性肝病患者２１ 例。正常对照２０ 例。采外周血,肝素抗凝,分离单个核细胞及分离总ＲＮＡ。逆转录酶合成ｃＤＮＡ。设计扩增ＡＦＰ基因的引物,进行巢式ＰＣＲ扩增。结果　正常人ＰＢＭＣ均无ＡＦＰｍ ＲＮＡ 表达。原发性肝癌患者的ＰＢＭＣＡＦＰｍ ＲＮＡ阳性率（２８／４８,５８．３３％ ）明显高于慢性肝病组（３／２１,１４．２８％ ,Ｐ＜ ０．０１）。伴远处转移的原发性肝癌患者全部为阳性（８／８）。结论　ＲＴ－ＰＣＲ检测原发性肝癌患者ＡＦＰｍ Ｒ－ＮＡ 有可能成为反映肝癌细胞血行播散的指标。