丹参素对氧化低密度脂蛋白致血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 探讨丹参素( DSS)对氧化低密度脂蛋白(ox - LDL)致血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响和机制.方法 采用反复贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养成功后,采用第3～10代细胞应用于实验.收集培养的细胞种植在6孔板中的4个孔中,分为4组:①正常组;②ox - LDL(100 mg/L)干预组;③ox - LDL(1 00 mg/L)+ DSS( 50 mg/L)干预组;④ox - LDL(100mg/L)+ DSS(100 mg/L)干预组,作用12h后,收集每孔细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 丹参素可明显升高ox - LDL引起的凋亡指数升高.结论 丹参素可促进ox - LDL致血管平滑肌细胞凋亡.     

脑心通对氧化低密度脂蛋白作用下的THP-1巨噬细胞活力及炎症反应的影响

目的 观察脑心通对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作用下的人THP-1细胞活力及炎症反应的影响.方法 将THP-1源性巨噬细胞分为7个组,即对照组(不加任何干预)、OX-LDL组(50mg/L ox-LDL干预细胞24h)、脑心通1组、脑心通2组、脑心通3组、脑心通4组(分别以0.125g/L、0.25g/L、0.5g/L、1.0g/L脑心通和50mg/L OX-LDL与细胞共孵育24h)、阿托伐他汀组(1μmol/L阿托伐他汀和50mg/L ox-LDL与细胞共孵育24h).噻唑蓝(MTT)比色法检测THP-1细胞活力,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果 脑心通有轻度保护ox-LDL作用下巨噬细胞活力的作用,并抑制其引起的细胞炎症反应,上述作用均呈浓度依赖性,1g/L 脑心通作用最为明显.结论 脑心通呈浓度依赖性抑制ox-LDL引起的细胞损伤及炎症反应.     

三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究三氧化二砷联合双氢青蒿素对人急性单核细胞白血病(AML)细胞株THP-1细胞增殖、周期及凋亡的影响并探究其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测三氧化二砷、双氢青蒿素、三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞增殖的影响,流式细胞术AnnexinV/碘化丙啶(PI)双染实验检测细胞周期和凋亡的变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),裂解半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,在高内涵显微镜下观察药物作用后细胞形态的变化。结果:与空白组比较,不同浓度的三氧化二砷、双氢青蒿素对THP-1细胞的增殖均具有显著抑制作用(P0.01),且成剂量和时间依懒性;作用48 h,与同等剂量的三氧化二砷或双氢青蒿素单独应用比较,1μmol·L~(-1)三氧化二砷与2μmol·L~(-1)双氢青蒿素联合应用对THP-1细胞增殖的抑制作用显著增强(P0.01),且细胞阻滞在G1期(P0.01),并显著下调Bcl-2和Caspase-3的表达(P0.01),同时明显上调cleaved Caspase-3的表达水平(P0.05)。结论:三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞具有明显抑制增殖和诱导凋亡的作用,其作用机制可能与阻滞细胞G1期,下调Bcl-2和Caspase-3蛋白表达,上调cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对内皮细胞损伤的可能机制.方法 用不同质量浓度的ox-LDL处理体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24h,观察HUVECs的形态学变化,评价细胞增殖,观察PI染色后细胞核的形态改变.使用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 与对照组相比,100mg/L ox-LDL能够促进细胞增殖,200mg/L ox-LDL对细胞增殖无影响,400mg/L ox-LDL明显抑制细胞增殖并可明显引起细胞凋亡,与空白对照组比较差异有统计学意义.结论 ox-LDL能抑制内皮细胞增殖并引起细胞凋亡,这可能与其致动脉粥样硬化(AS)作用机制有关,可用ox-LDL刺激体外培养的内皮细胞进行AS研究.     

茶多酚对氧化低密度脂蛋白诱导系膜细胞TGF-β1mRNA表达的影响

目的：观察茶多酚对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1mRNA表达的影响。方法：以ox-LDL刺激体外培养的大鼠系膜细胞，不同浓度的茶多酚干预后，检查系膜细胞内总胆固醇(TC)含量，用原位杂交法测TGF-β1mRNA的表达。结果：ox-LDL与系膜细胞共同孵育后细胞内TC含量、TGF-β1mRNA表达与细胞对照比较，均明显增高；茶多酚干预后系膜细胞中TC含量下降，TGF-β1mRNA的表达下降。结论：茶多酚可抑制系膜细胞摄取氧化低密度脂蛋白和TGF-β1mRNA的表达。     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨沥水调脂胶囊血清对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导内皮细胞凋亡的影响。方法：复制氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导血管内皮细胞凋亡模型，采用流式细胞术、形态学观察、DNA片段琼脂糖凝胶电泳等方法，观察沥水调脂胶囊含药血清对氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的作用。结果：200μg/ml ox-LDL作用于培养的人脐静脉内皮细胞24h后，凋亡率明显升高，Hoechst33342染色，荧光显微镜上可观察到早、中、晚期各种典型的凋亡细胞，DNA电泳可见细胞凋亡特有的梯形条带。沥水调脂胶囊血清使内皮细胞凋亡率明显下降，DNA凋亡带减弱。结论：沥水调脂胶囊对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡有一定的抑制作用。     

糖肾汤对氧化低密度脂蛋白诱导的系膜细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达及细胞外基质分泌的影响

目的:观察糖肾汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的系膜细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达及转化生长因子-β1(TGF-β1)和细胞外基质分泌的影响,探讨其防治糖尿病肾病的机制。方法:培养大鼠系膜细胞,分为空白组、ox-LDL组、糖肾汤高、中、低剂量组和罗格列酮组,培养24h后,RT-PCR检测系膜细胞mRNA表达,ELISA技术检测细胞上清液中TGF-β1、四型胶原(ColⅣ)和纤黏连蛋白(FN)含量。结果:糖肾汤、罗格列酮含药血清均能抑制ox-LDL诱导的TGF-β1、LOX-1 mRNA表达上调,及TGF-β1、FN、ColⅣ的分泌,其中糖肾汤含药血清呈剂量依赖性作用,中浓度作用最强。结论:糖肾汤可能通过降低ox-LDL受体LOX-1的表达以减少ox-LDL摄入及由此引起的细胞因子分泌和细胞外基质产生,从而起到防治糖尿病肾病的作用。     

P38MAPK信号转导通路在大蒜素诱导THP-1细胞凋亡中的作用

目的:探讨大蒜素诱导THP-1细胞凋亡中P38MAPK及Fas基因表达的变化.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度大蒜素对THP-1细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测凋亡率的变化;免疫细胞化学法观察大蒜素处理后细胞内磷酸化P38MAPK(P-p38MAPK)表达及分布变化;Western blot检测大蒜素处理前后细胞内P-p38MAPK和Fas蛋白表达量的变化.结果:MTT显示大蒜素能抑制THP-1细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性.其72h中效浓度(IC_(50))为12.8 mg·L~(-1).Annexin V-FITC/PI检测凋亡率随大蒜素浓度增加而增加.免疫细胞化学法检测药物处理后P-p38MAPK表达增加,主要分布于细胞核与细胞浆,而阴性对照组仅弱表达.Western blot结果分析P-p38MAPK,Fas蛋白表达量随大蒜素浓度的增加而增加,呈剂量依赖性.其阴性组、72 h的1/2 IC_(50)组、IC_(50)组P-p38MAPK蛋白表达水平(相对灰度值)分别为0.259 8±0.013 2,0.361 2±0.008 3,0.505 6±0.005 5;Fas蛋白表达水平分别为0.287 4±0.008 9,0.426 8±0.007 9和0.597 1±0.010 9,差别均有显著性意义(P<0.01).结论:大蒜素可诱导THP-1细胞凋亡,其诱导凋亡机制可能是通过激活P-p38MAPK/Fas途径实现.     

茶多酚对大鼠系膜细胞摄取氧化型低密度脂蛋白的影响

目的 :探讨茶多酚抑制大鼠肾小球系膜细胞摄取氧化型低密度脂蛋白 (OX-LDL)的作用。方法 :以OX LDL刺激体外培养的大鼠系膜细胞 ,同时用不同浓度茶多酚干预 ,测系膜细胞内总胆固醇 (TC)含量 ,油红 O染色 ,光镜及电镜观察细胞形态。结果 :OX-LDL刺激下系膜细胞TC含量及油红-O染色阳性细胞比例均较无脂蛋白刺激的照系膜细胞增高 ,电镜下见泡沫细胞。随培养液茶多酚浓度由 40ng·L^-1～40mg·L^-1 递增 ,脂蛋白刺激的系膜细胞TC含量及油红-O染色阳性细胞比例递减 ,呈剂量依赖性关系 ,系膜细胞内脂滴数量减少。结论 :40ng·L^-1～40mg·L^-1 茶多酚可呈剂量依赖性抑制大鼠系膜细胞摄取OX-LDL。     

姜黄素诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的机制研究

目的:探讨姜黄素诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的机制。方法:选取SK-N-SH、SH-SY5Y细胞为研究对象,以不同浓度姜黄素(0、1.25、2.5、5、10、15μmol/L)作用于细胞,采用CCK-8法检测其增殖抑制率并计算半数抑制浓度(IC₅₀);并以1/2 IC₅₀姜黄素、IC₅₀姜黄素、2 IC₅₀姜黄素、NAC(5 mmol/L)、姜黄素+NAC(IC₅₀+5 mmol/L)作用于细胞,用CCK-8法检测抑制率;采用流式细胞术检测细胞凋亡、ROS荧光强度;采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Grp78、CHOP、Beclin-1、LC3Ⅱ、LC3Ⅰ蛋白表达。结果:姜黄素以浓度依赖性抑制SK-N-SH、SH-SY5Y细胞的增殖,其IC₅₀分别为13.251、12.387μmol/L;与空白对照组比较,1/2 IC₅₀、IC₅₀、2 IC₅₀姜黄素组SK-N-SH、SH-SY5Y细胞凋亡及ROS荧光强度显著升高,IC₅₀、2 IC₅₀姜黄素组SK-N-SH、SH-SY5Y细胞Cleaved Caspase-3、Grp78、CHOP、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达显著升高,LC3Ⅰ蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与姜黄素组比较,姜黄素+NAC组SK-N-SH、SH-SY5Y细胞增殖抑制率、凋亡率显著降低,SK-N-SH细胞Grp78、CHOP蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:姜黄素能抑制SK-N-SH、SH-SY5Y细胞增殖,其机制可能与靶向ROS影响细胞内质网应激及自噬从而诱导细胞凋亡有关。     

蛇葡萄素介导乳腺癌细胞凋亡的机制

目的探讨蛇葡萄素(AMP)体外诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡作用及可能作用机制。方法 0、5、25、50μmol/L AMP处理乳腺癌MDA-MB-231细胞24 h,MTT法检测细胞活性,Brd U法检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平,DCFH-DA检测细胞内活性氧簇(ROS)生成,Western blot法检测细胞凋亡、Nrf-2以及内质网应激相关蛋白的变化水平。结果 AMP可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的活性和增殖水平,促进细胞活性氧簇生成并诱导细胞凋亡。此外,AMP刺激可明显下调抗氧化蛋白Nfr-2在细胞质和细胞核内的表达水平,并上调内质网应激信号通路ERK蛋白的磷酸化水平以及ATF4、CHOP蛋白的表达水平。结论 AMP通过抑制Nrf-2依赖的抗氧化保护机制和激活PERK/ATF4/CHOP内质网应激反应信号通路诱导乳腺癌细胞凋亡。     

骨碎补总黄酮对饥饿诱导血管内皮细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探讨骨碎补总黄酮(DTF)对血管内皮细胞功能和增殖、凋亡的影响及其机制。方法 将培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)随机分为4 组：即正常对照组(10% FBS),血清饥饿组(0% FBS),低浓度处理组(0% FBS 20 mg?L-1 DTF)和高浓度处理组(0% FBS 100 mg?L-1 DTF),处理不同时间后,以MTT 法检测细胞增殖,流式细胞术和Hoechst 33258检测细胞凋亡率和凋亡形态变化;Western blotting 检测GRP78,CHOP,Caspase-12和Cyt.c凋亡相关蛋白表达变化;JC-1染色检测线粒体膜电位变化;分光光度法检测细胞内Caspase-3,8,9 的活性,ELISA法检测内皮素(ET)和Griess法检测一氧化氮(NO)的表达变化。结果：各个浓度的骨碎补总黄酮能促进血管内皮细胞的增殖,具有时间和剂量依赖性;骨碎补总黄酮能显著降低血清饥饿诱导的内皮细胞凋亡率,抑制GRP78,CHOP,Caspase-12和Cyt.c蛋白表达和线粒体膜电位的下降;降低Caspase-3,9 的活性;并在抑制ET表达的同时增强NO的表达。结论 骨碎补总黄酮可通过阻断内质网和线粒体途径,抑制血管内皮细胞凋亡,调节血管内皮细胞功能。     

姜黄素类似物L50H8对SKOV3细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究

目的:研究姜黄素类似物L50H8对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:用MTT法检测L50H8对细胞增殖的影响;Annexin V/PI双染色流式细胞法检测L50H8对细胞凋亡的影响;Western Blot法探讨L50H8诱导细胞凋亡的机制,检测其对Bax、凋亡诱导因子AIF、线粒体Casp...     

中医中药干预内质网应激及其诱导细胞凋亡研究进展

在内质网应激及其诱导的细胞凋亡中,中医中药已经作为新的研究热点进入人们的视野。目前的研究也表明在细胞和动物模型中,无论是中药单体、中成药、复方或中医针灸,都能有效影响相关信号因子的表达。该文主要介绍当前基于内质网应激(ERS)的中医中药研究。     

四君子颗粒含药血清对棕榈酸诱导的MIN6细胞凋亡的影响

目的探讨四君子颗粒含药血清对棕榈酸诱导的MIN6细胞凋亡的影响。方法 SD大鼠灌胃给予四君子颗粒(10.5、5.25 g/kg)7 d,制备四君子颗粒含药血清。四君子颗粒含药血清预处理MIN6细胞24 h后,加入0.4 mmol/L棕榈酸孵育MIN6细胞24 h。CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测GRP78、ATF4、CHOP、p-PERK蛋白表达。结果四君子颗粒含药血清减轻了棕榈酸诱导的MIN6细胞损伤和凋亡(P<0.05,P<0.01),下调内质网应激相关蛋白GRP78、ATF4、CHOP蛋白表达,降低PERK蛋白磷酸化(P<0.05,P<0.01)。结论四君子颗粒含药血清可有效减轻棕榈酸诱导的MIN6细胞损伤和凋亡,其机制可能与抑制内质网应激相关的信号通路有关。     

化瘀祛痰方含药血清通过ATF6/CHOP内质网应激途径抑制ox-LDL诱导的小鼠RAW 264.7巨噬细胞凋亡

目的:巨噬细胞凋亡在动脉粥样硬化的发生发展中起重要作用,尤其对动脉粥样硬化晚期斑块的稳定性起重要作用。因此,抑制晚期巨噬细胞的凋亡对AS晚期斑块的稳定性具有重要意义。研究从体外的角度探讨化瘀祛痰方含药血清对ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡的影响,并从ATF6/CHOP内质网应激途径探讨其抗凋亡的机制。方法:实验选取小鼠RAW 264.7巨噬细胞为研究对象,分为空白对照组,ox-LDL处理组、化瘀祛痰方低、中、高处理组,通过Hoechst 33342法检测RAW 264.7巨噬细胞凋亡情况;通过免疫荧光法检测ATF6激活情况;通过免疫印迹法检测ERS通路以及下游凋亡相关蛋白CHOP、bcl-2表达情况。结果:化瘀祛痰方可有效抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡,抑制ATF6的激活,下调CHOP蛋白表达,上调bcl-2蛋白表达,并且呈剂量依赖方式。结论:化瘀祛痰方可有效抑制ox-LDL诱导的RAW 264.7巨噬细胞凋亡,其机制可能与抑制ATF6/CHOP ERS通路激活有关。     

氧化低密度脂蛋白在动脉粥样硬化中的作用机制

氧化低密度脂蛋白是动脉粥样硬化发生发展乃至不稳定斑块形成的关键因素,在动脉粥样硬化中的病理作用已得到公认。本文就氧化低密度脂蛋白在体内的来源形成、生物特性及在动脉粥样硬化中作用的研究进展做一综述。     

姜黄素类似物L50H8 对卵巢癌OVCAR3细胞增殖、侵袭与凋亡的影响及其机制研究

目的:研究姜黄素类似物L50H8对卵巢癌OVCAR3细胞增殖、侵袭与凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:MTT法检测L50H8对细胞增殖的影响;Annexin V/PI双染色流式细胞法检测L50H8对细胞凋亡的影响;Transwell法检测L50H8对细胞侵袭力的影响;Western blot法探讨L50H8影响细胞侵袭的机制:检测其对细胞侵袭相关因子细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)、基质金属蛋白酶(MMP) 2、MMP9和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响;探讨其诱导细胞凋亡的机制:检测其对内质网应激(ERS)启动因子葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)及前凋亡因子C/EBP-同源蛋白(CHOP)表达的影响。结果:L50H8能显著抑制OVCAR3细胞增殖,24 h的IC50为(3.08±0.08)μmol/L。L50H8能诱导OVCAR3细胞凋亡,其凋亡诱导效应强于姜黄素。Western blot法发现L50H8能下调CD147、MMP2、MMP9及VEGF的表达,上调GRP78及CHOP的表达。结论:L50H8能显著抑制OVCAR3细胞增殖,通过下调CD147、MMP2...     

氧化苦参碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨不同浓度的氧化苦参碱对人骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法将不同浓度的氧化苦参碱作用于培养的OS732骨肉瘤细胞,通过MTT比色法、流式细胞仪和DNA凝胶电泳、光学显微镜技术观察检测细胞凋亡,研究分析其对骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果浓度为1.77,3.55,5.32mmoL/L的氧化苦参碱对OS732骨肉瘤细胞相对抑制率分别为16.4%,29.0%,47.0%;流式细胞技术显示骨肉瘤细胞的凋亡率分别为11.8%,18.6%,27.7%;DNA电泳见DNA"梯形"图谱;显微镜显示细胞的凋亡形态。结论氧化苦参碱能显著抑制OS732细胞增殖、促进其凋亡。     

黄芩苷对氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞凋亡的防护作用

目的：研究黄芩苷抑制氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的血管内皮细胞凋亡及其介导机制。方法：应用大鼠模型,以低密度脂蛋白（LDL）体内诱导血管内皮细胞凋亡,并以黄芩苷进行干预,观察其对LDL诱导血管内皮细胞凋亡的影响。原位末端标记技术（TUNEL）法检测凋亡细胞,比色法测半胱天冬蛋白酶3（Caspase-3）的活性。结果：LDL组与氯化钠对照组比较,血管内皮细胞凋亡数显著增加,caspase-3酶活性显著增高,黄芩苷干预组与LDL组比较,凋亡细胞数显著减少,caspase-3酶活性下降。结论：LDL可能通过激活caspase-3使大鼠血管内皮细胞凋亡;黄芩苷可通过抑制caspase-3酶活性抑制LDL诱导的细胞凋亡。