罗布麻总黄酮对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨罗布麻总黄酮对过氧化氢（H2O2）所致的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用。方法：采用MTT法观察不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC增殖的影响,流式细胞仪检测不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC细胞周期变化的影响,采用比色法分别检测细胞培养液NO和SOD的活性、MDA和LDH的含量,免疫组化法测定NF-κB的表达。结果：正常细胞组比,200μmol．L—H2O2模型组细胞增殖活性下降,细胞凋亡率明显增加,G0／G1期细胞比率增加,S期细胞和G2／M期细胞比率明显降低,培养上清液中NO和SOD活性明显下降,MDA和LDH的释放量明显增加,NF—κB的表达时明显增加（P〈0．01）。不同浓度的罗布麻总黄酮作用后,与模型组比较,可明显提高细胞增殖活性,降低细胞凋亡率,降低G0／G1期细胞比率,增加S期细胞和G2／M期细胞比率;并可提高细胞上清液中NO水平和SOD活性,降低MDA和LDH的释放,可抑制H2O2引起的NF-κB的过度表达。其中,中、高剂量组有显著性差异。结论：罗布庥总黄酮对H2O2引起HUVEC损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用及调节有关NF—κB的表达有关。     

麝香保心丸对鸡胚绒毛尿囊膜及培养的血管内皮细胞的促血管生成作用

目的：探讨麝香保心丸在鸡胚绒毛尿囊膜模型及培养的微血管内皮细胞系统中的促血管生成作用。方法：分别以重组碱性成纤维细胞生长因子（bFGF,贝复济）和生理盐水为阳性和阴性对照,作用于绒毛尿囊膜（chrioallantoic membrane,CAM),通过一级、二级血管计数,初步评价麝香保心丸的促血管生成活性;并通过观察它对培养的牛肾上腺微血管内皮细胞增殖及管腔结构形成的影响,验证其促血管生成效应;同时检测麝香保心丸作用于培养的人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)的mRNA表达及其上清液中VEGF、bFGF含量,初步探索其作用机理。结果：麝香保心丸组CAM上血管数比生理盐水组明显增加;麝香保心丸组内皮细胞及管腔数目均较生理盐水组明显增多,前者细胞表达VEGF和bFGF mRNA明显增高,上清液中VEGF和bFGF含量明显增多。结论：麝香保心丸能促进CAM及培养的微血管内皮细胞的血管生成。     

丹参酮ⅡA对血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：研究丹参酮ⅡA（TanⅡA）对H2O2所致人脐静脉内皮细胞（ECV-304）损伤的保护作用。方法：MTT法检测细胞活力,比色法测定细胞培养液中超氧化物歧化酶（SOD）活性及细胞内丙二醛（MDA）含量,RT-PCR方法测定细胞内皮素1（ET-1）、过氧化物酶体增生物激活受体γ（PPAR-γ）mRNA的表达。结果：丹参酮ⅡA可剂量依赖性地抑制H2O2所致的细胞活力降低,减少MDA生成,提高SOD活性,并可抑制ET-1mRNA的表达,升高PPAR-γmRNA的表达。结论：丹参酮ⅡA对H2O2所致ECV-304损伤具有明显的保护作用。     

养心汤含药血清对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型Smad4 mRNA表达的影响

目的：观察养心汤含药血清对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型Smad4 mRNA表达的影响,从分子生物学水平探讨其可能的作用机制。方法：采用H2O2体外诱导人脐静脉内皮细胞损伤的方法,建立人脐静脉内皮细胞损伤模型。实验分为空白组、模型组、养心汤含药血清组,应用Affymetrix人基因组U133＋2.0芯片筛选出Smad4基因,采用实时定量PCR的方法观察养心汤含药血清对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型Smad4 mRNA表达的影响。结果：养心汤的含药血清可以下调过氧化氢氧化损伤内皮细胞Smad4 mRNA表达。结论：养心汤下调过氧化氢氧化损伤内皮细胞Smad4 mRNA的表达可能是其保护内皮细胞损伤,防治冠心病不稳定型心绞痛的主机制之一。     

黄芪含药血清对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞活性的影响

目的：观察养心汤方中单味中药黄芪不同浓度含药血清对H：O：诱导人脐静脉内皮细胞（HU—VEC）氧化损伤模型细胞增殖的影响及对损伤HUVEC的保护作用,以进一步研究养心汤对冠心痛不稳定型心绞痛的确切作用机制。方法：以浓度为1．03g·mL^-1的黄芪药液灌胃大鼠1周,于末次给药后取血离心制备含药血清。将HUVEC与不同剂量浓度（2％、4％、6％）单味黄芪含药血清、基础培养液、空白血清培养液一起培养,共分5组,培养24h后加入H2O2作用2h,通过MTT法及形态学方法观察不同浓度黄芪含药血清对H2O2损伤HUVEC生长活性变化。结果：黄芪含药血清2％、4％、6％各组细胞OD值均较H2O2模型对照组明显升高,与H2O2模型组相比较均有统计学意义（P〈0．01）,且2％、4％、6％组间比差异有统计学意义（P〈0．05）。形态学方面,黄芪含药血清可使细胞体积变小,间隙变大,但彼此之间存在联系,脱落细胞较少;皱缩的程度明显改善。结论：黄芪含药血清可以促进H2O2损伤人脐静脉内皮细胞的增殖,增强HUVEC抗氧化损伤能力,逆转和改善内皮功能障碍,具有一定剂量依赖关系。     

罗格列酮对2型糖尿病大鼠心肌NADPH氧化酶亚单位表达的影响

目的：探讨罗格列酮对2型糖尿病大鼠心肌p22phox和NOX4 mRNA表达的影响,分析罗格列酮保护心脏的可能机制。方法：36只雄性Wistar大鼠,随机分为3组：健康对照组（A组,10只）,糖尿病组（B组,13只）和罗格列酮治疗组（c组,13只）,采用高糖高脂饮食小剂量链脲佐菌素（STZ）的方法诱导糖尿病模型。用免疫组织化学法检测心脏组织中CTGF和Cu-Zn-SOD的表达,用实时荧光定量PCR法测定心肌p22phox和NOX4rnRNA的表达。结果：糖尿病组（B组）大鼠大鼠心肌CTGF和NADPH氧化酶亚单位p22phox和NOX4mRNA表达水平均较正常对照组（A组）显著升高（P〈0．05）,心肌Cu-Zn—SOD显著低于A组。罗格列酮治疗后,糖尿病大鼠（c组）心肌CTGF和NADPH氧化酶亚单位p22phox和NOX4mRNA表达水平显著降低（P〈0．05）,心肌Cu-Zn—SOD显著高于B组。结论：罗格列酮抑制2型糖尿病大鼠心肌NADPH氧化酶亚单位p22phox和NOX4mRNA的过度表达,升高心肌Cu—Zn-SOD的表达水平,降低心重,体重（心脏肥大指数）和心肌CTGF表达,延缓糖尿病心肌病的进展,可能是其心脏保护作用机制之一。     

麝香保心丸促血管新生的机制

目的研究麝香保心丸促血管新生的机制。方法采用随机、双盲、安慰剂对照法,在293 A细胞中研究麝香保心丸是否影响YAP磷酸化作用。对试验药物及安慰剂进行随机混合编号,对实验人员及结果统计人员设盲,按实验结果揭盲组别,统计组间差异,再揭盲药物信息。然后,进一步在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中研究麝香保心丸对Hippo-YAP信号通路的影响,Western Blot检测Hippo通路中LATS1、YAP磷酸化变化,免疫荧光检测YAP细胞质和细胞核分布,RT-PCR检测其下游靶基因CTGF、CYR61及促血管新生细胞因子VEGF、bFGF表达。慢病毒敲低HUVEC YAP表达后,观察麝香保心丸对VEGF、bFGF表达的影响。结果与安慰剂比较,麝香保心丸可明显抑制293 A细胞在无血清条件下YAP磷酸化。在HUVEC细胞中,麝香保心丸亦可显著降低无血清条件下YAP磷酸化水平,可能与抑制LATS1活性有关,表现为LATS1 T1079和T909位点磷酸化降低,使YAP S127位点磷酸化减少而呈现激活状态。激活的YAP蛋白进入细胞核,促进其下游靶基因CTGF、CYR61及促血管新生细胞因子VEGF、bFGF表达;敲低HUVEC YAP表达后,麝香保心丸上调促血管新生因子的表达作用被明显抑制。结论麝香保心丸可能通过影响内皮细胞Hippo-YAP信号通路来促进血管新生。     

心肌细胞系H9c2缺氧上清诱导人脐静脉内皮细胞ICAM-2的表达

目的探讨心肌细胞H9c2的缺氧培养上清对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）细胞间黏附分子-2（ICAM-2）表达的影响及其分子机制。方法大鼠心肌细胞系H9c2在氧浓度为1%的条件下缺氧培养24 h后收集上清,用于HUVEC培养。收集不同时间点HUVEC细胞,提取总RNA和总蛋白,RT-PCR方法检测ICAM-2 mRNA表达,Western杂交方法检测ICAM-2蛋白表达。适当浓度细胞因子孵育HUVEC 6 h,收集细胞提取总蛋白,Western杂交方法检测ICAM-2蛋白表达。ELISA方法测定H9c2缺氧培养上清和常氧培养上清的PDGF-BB和PDGF-AB浓度。结果在mRNA水平,HUVEC在H9c2缺氧培养上清孵育1 h后ICAM-2的表达明显升高,3 h后达到最高;同时在HUVEC表达ICAM-2蛋白在3 h、6 h明显增高。细胞因子刺激实验表明PDGF-BB和PDGF-AB可以使HUVEC表达ICAM-2显著增加。在缺氧上清中PDGF-BB有显著性增加（P〈0.05）,而缺氧上清中的PDGF-AB却有显著减少（P〈0.01）。结论心肌细胞系H9c2的缺氧培养上清可以诱导内皮细胞HUVEC表达ICAM-2,H9c2在缺氧条件下产生的因子PDGF-BB可能是其中起作用的物质。     

红芪总黄酮对过氧化氢致脐静脉内皮细胞损伤的抗氧化作用

目的:研究红芪总黄酮对过氧化氢(H2O2)诱导脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法:化学发光法检测红芪总黄酮对氧自由基的清除能力。建立H2O2致脐静脉内皮细胞损伤模型,化学比色法检测乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,单细胞凝胶电泳法检测对细胞DNA损伤的影响。结果:红芪总黄酮可清除氧自由基。100μmol/L H2O2诱导脐静脉内皮细胞4 h,细胞液LDH、细胞内MDA含量升高SOD活性降低,DNA损伤明显。红芪总黄酮可明显抑制MDA损伤,显著降低LDH释放及细胞内MDA含量,提高SOD活性。结论:红芪总黄酮对H2O2诱导脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高脐静脉内皮细胞的抗氧化能力有关。     

加减清营汤对H2O2损伤的血管内皮细胞存活率和SOD活力的影响

目的：观察加减清营汤对H2O2损伤的血管内皮细胞存活率和SOD活力的影响。方法：体外培养内皮细胞ECV304，用380μmol／L H2O2损伤细胞，随机分成正常组、模型组、血清对照组、丹参组、加减清营汤含药血清组。用血清药理学方法给药，继续培养后应用MTT法观察细胞存活率，检测SOD。结果表明：加减清营汤含药血清组MTT的OD值在24h点高于H2O2模型组（P〈0．01），与血清对照组无明显差异（P〉0．05），36h后与血清对照组有明显差异（P〈0．01）。加减清营汤含药血清组SOD值高于模型组、血清对照组（P〈0．01）。结论：加减清营汤可降低H2O2对ECV304的损伤程度，其机理可能与抗氧化作用有关。     

舒血宁注射液联合常规疗法治疗活动期溃疡性结肠炎患者疗效观察

目的观察舒血宁注射液对活动期溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）患者的治疗效果,初步探讨其机制。方法 91例UC活动期患者随机分为治疗组（47例）和对照组（44例）,对照组给予溃疡性结肠炎常规治疗,治疗组在此基础上予舒血宁注射液15 mL稀释后静脉注射,每天2次,共14天,治疗前后行结肠镜检查,采用Mayo评分系统及Baron内镜下UC活动度分级评定疗效,采用ELISA法检测血清IL-6、TNF-α水平,采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,采用硫代巴比妥酸比色法（thiobarbituricacid,TBA）测定MDA含量,并与20名体检健康者进行对照。结果 82例患者最终完成了本研究（治疗组42例,对照组40例）。治疗组及对照组治疗前血清IL-6、TNF-α、SOD、MDA水平Mayo评分及内镜分级评分比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。与健康组比较,治疗组及对照组治疗前血清IL-6、TNF-α、MDA水平升高（P〈0.01）,SOD水平降低（P〈0.01）。与本组治疗前比较,治疗组及对照组患者血清IL-6、TNF-α、MDA水平、Mayo评分及内镜分级评分均降低（P〈0.01,P〈0.05）。与对照组同期比较,治疗组治疗后血清IL-6、TNF-α、MDA水平、Mayo评分及内镜分级评分均降低（P〈0.01,P〈0.05）,SOD升高（P〈0.05）。血清SOD水平与血清IL-6、TNF-α水平、Mayo评分及内镜分级评分均呈明显负相关（r分别为-0.621、-0.638、-0.509、-0.787,P〈0.01）;血清MDA水平与血清IL-6、TNF-α水平、Mayo评分、内镜分级评分均呈明显正相关（r分别为0.711、0.882、0.525、0.639,P〈0.01）。结论舒血宁注射液可改善活动期UC患者炎症损伤及临床症状,其机制可能与抗氧化,清除氧自由基有关。     

化瘀祛痰方药对H2O2诱导人脐带静脉内皮细胞氧化应激保护作用的研究

目的探讨化瘀祛痰方药含药血清对H2O2诱导人脐带静脉内皮细胞（EA.hy926细胞）氧化应激的保护作用。方法体外培养EA.hy926细胞,随机分为5组。正常对照组：仅用DMEM完全培养基培养,不加任何药物;H2O2刺激组：培养液中加入终浓度为300μmol/L H2O2;含药血清低剂量组、含药血清中剂量组、含药血清高剂量组分别使用5%、10%、20%含药血清预处理24 h后加入终浓度为300μmol/L H2O2。各组细胞培养24 h后进行各项指标测定。采用MTT法检测细胞活性,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活力,2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶（LDH）活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量,硝酸还原酶法检测一氧化氮（NO）活性。采用细胞活性氧检测试剂盒,通过荧光显微镜观察细胞内活性氧水平的变化。结果与正常对照组相比,H2O2刺激后细胞活性明显下降,SOD、NO活性显著降低,而LDH活性、MDA含量则显著增加,活性氧水平明显升高。10%、20%化瘀祛痰方药含药血清可显著提高细胞存活率及SOD、NO活性,而显著降低LDH活性、MDA含量及活性氧水平。结论化瘀祛痰方药对H2O2诱导EA.hy926细胞氧化应激具有保护作用,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一。     

全麻复合硬膜外麻醉对上腹部手术患者术中应激反应的影响

目的：探讨在全麻术中复合硬膜外麻醉对上腹部手术患者术中应激反应的影响。方法：选择174例上腹部手术患者随机分为对照组及研究组,对照组采用全身麻醉,研究组采用全身麻醉复合硬膜外麻醉,比较两组患者麻醉前、手术开始后30minN．麻醉复苏后1h心率、血压,血糖、血清肾上腺素、丙二醛及超氧化物歧化酶水平变化。结果：麻醉前两组患者心率、动脉压、血糖、血清肾上腺素、丙二醛及超氧化物歧化酶水平无显差异,手术开始后30min,研究组患者血压低于对照组,心率高于对照组,血糖及血清肾上腺素水平低于对照组,两组、丙二醛及超氧化物歧化酶水平无显差异,复苏后1h,研究组心率、血压低于对照组、血糖、血清肾上腺素、丙二醛及水平低于对照组,超氧化物歧化酶水平高于对照组。结论：全麻术中复合硬膜外麻醉能够减轻心血管应激及氧化应激反应,增加麻醉及手术安全。     

活络效灵丹拆方对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用研究

目的探讨活络效灵丹含药血清对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制。方法取体外培养的乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧心肌细胞损伤模型。实验分为正常组、模型组(H/R组)、活络效灵丹拆方组和阳性药对照组(单硝酸异山梨酯组)。用MTT比色法检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞存活率和细胞上清液中LDH漏出量的影响,优选活络效灵丹的最佳配伍组合,并测定各组细胞浆丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;用RT-PCR法检测心肌细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达。结果实验优选出活络效灵丹全方、丹参当归配伍、丹参乳香配伍、丹参当归乳香配伍为最佳配伍。与正常组比较,模型组MDA含量升高、SOD活性降低(P<0.01),细胞Bcl-2 mRNA表达降低、Bax mRNA表达增高(P<0.01);与模型组比较,优选的活络效灵丹各配伍组胞浆SOD活性增高、胞浆MDA含量减少(P<0.01),心肌细胞Bax mRNA表达减少、Bcl-2 mRNA表达增高(P<0.01)。结论活络效灵丹对H/R损伤的心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与清除氧自由基、抗脂质过氧化、上调Bcl-2 mRNA和下调Bax mRNA表达等有关。     

油茶皂苷对LO2和HK-2细胞的毒性作用研究

目的:观察油茶皂苷(SQS)对人正常肝细胞(LO2)和肾小管上皮细胞(HK-2)的细胞毒性作用,并初步探讨其毒性作用机制。方法:体外培养LO2和HK-2细胞,采用MTT法评价SQS对LO2和HK-2细胞的增殖抑制作用,观察不同浓度药物对乳酸脱氢酶(LDH)释放率的影响,并检测细胞裂解上清液超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。结果:与阴性对照组比较,各浓度的SQS均可明显抑制LO2和HK-2细胞增殖(P<0.01),且呈浓度依赖性。在50.0~200.0 mg/L范围内,SQS能明显提高LO2和HK-2细胞培养上清液中LDH活力(P<0.05或P<0.01),显著降低SOD的活力和增加MDA的含量(P<0.01)。结论:SQS对LO2和HK-2细胞有一定的细胞毒性作用,其作用机制可能是通过增加对细胞膜通透性的影响及氧化损伤而实现。     

不同比例黄连配伍肉桂对2型糖尿病大鼠糖脂代谢及氧化应激的影响

目的 观察不同比例黄连配伍肉桂对2型糖尿病大鼠糖脂代谢及氧化应激的影响.方法 采用小剂量链脲佐菌素尾静脉注射加高脂高热卡饲料喂养的方法建立大鼠2型糖尿病模型,将大鼠随机分为模型组、肉桂组、交泰丸1组、交泰丸2组,各治疗组分别予以相应药物灌胃干预,另设正常对照组.干预10周后比较各组大鼠体质量、空腹血糖（FBG）、口服葡萄糖耐量试验（OGTT）、空腹血清胰岛素（FINS）以及血脂水平,并检测血清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性以观察药物对大鼠氧化及抗氧化作用的影响.结果 与正常组比较,模型组大鼠OGTT异常,FBG、FINS升高,血脂紊乱,MDA活性升高,SOD及GSH-PX活性下降;与模型组比较,各药物干预组FBG及FINS降低,OGTT及血脂紊乱改善,MDA活性下降,SOD及GSH-PX活性升高,其中交泰丸2组降糖调脂及抗氧化应激效果最优.结论 不同比例黄连配伍肉桂对2型糖尿病大鼠糖脂代谢及抗氧化应激的影响不同,其机制可能与黄连肉桂两药配伍后影响各自降糖成分的溶出及代谢等有关.     

丹参多酚酸盐对早期糖尿病肾病患者血清SOD、MDA的影响

目的：探讨丹参多酚酸盐对早期糖尿病肾病患者血清SOD、MDA的影响。方法：将血压正常的90例早期糖尿病肾病患者随机分为对照组和治疗组。对照组予以控制血糖、糖尿病教育等常规治疗;治疗组在常规治疗的基础上加用丹参多酚酸盐每日1次,静脉注射,每次100mg,均治疗两周。观察治疗前后两组患者血清SOD、MDA及尿微量白蛋白的变化。结果：经治疗2周后,治疗组患者血清MDA水平及尿微量白蛋白较治疗前明显下降（P〈0．01）;SOD较治疗前明显升高（P〈0．01）,且明显优于对照组（P〈0．05）;结论：丹参多酚酸盐能降低早期糖尿病肾病患者的尿微量白蛋白水平,改善氧化应激,对早期糖尿病肾病具有治疗作用。     

红花黄色素治疗急性肺栓塞溶栓后缺血再灌注损伤的临床研究

目的观察红花黄色素联合低分子肝素钙治疗肺栓塞溶栓后缺血再灌注损伤的临床疗效。方法将60例无溶栓禁忌证的急性大面积肺栓塞患者随机分为2组。对照组30例于诊断大面积肺栓塞后6～12h内给予尿激酶20000U／kg静脉溶栓,溶栓12h后给予脐周皮下注射低分子肝素钙5000U,每12h1次．连用7d。治疗组30例在对照组治疗基础上于溶栓后2h给予红花黄色素150mg／d静脉滴注,连用15d。观察2组溶栓前、溶栓后lO、20d氧合指数、肺动脉压变化及28d的死亡率;测定血清超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）水平。结果治疗组溶栓后氧合指数较对照组明显升高,肺动脉压明显下降;治疗组溶栓后血清SOD活性较对照组明显升高,而血清MDA水平较对照组明显下降,差异均有统计学意义（P〈0．05）;治疗组28d死亡率明显低于对照组。结论红花黄色素可以明显改善急性大面积肺栓塞患者溶栓后机体的氧化应激水平,减轻肺动脉高压,改善预后。     

超微六味地黄汤对孕期被动吸烟胎鼠脑抗氧化能力的影响

目的研究六味地黄汤超微和传统饮片对胎鼠脑发育不全的干预作用,并从抗氧化角度探讨其机制。方法采用孕鼠被动吸烟造成胎鼠脑发育不全,分别给予六味地黄汤超微和传统饮片进行治疗。脑组织匀浆后采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）,硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）。结果 SOD：与正常组比较,模型组胎鼠脑SOD下降不明显（P〉0.05）,治疗后超微六味地黄汤全量组较模型组、传统六味地黄汤组明显升高（P〈0.05）。MDA：与正常组比较,模型组胎鼠脑MDA明显升高（P〈0.05）,治疗后各组MDA均有所下降,超微六味地黄汤全量组MDA明显低于模型组和超微六味地黄汤1/3量组（P〈0.05）。结论孕期被动吸烟可以导致胎鼠脑组织MDA活性升高,SOD活性降低。六味地黄汤可降低此模型胎鼠脑组织MDA活性,升高SOD活性,超微饮片对上述指标的效果优于传统饮片。